Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. Этиология и патогенез при хронической почечной недостаточности 11
1.1.1. Этиология хронической почечной недостаточности 11
1.1.2. Морфологические изменения в почках животных при хронической почечной недостаточности, обусловленной хроническим токсическим поражением 14
1.1.3. Патогенез эндогенной интоксикации при хронической почечной недостаточности 18
1.1.4. Структурно-функциональные изменения внутренних органов при хронической почечной недостаточности 20
1.1.5. Вторичные поражения почек при заболеваниях печени 26
1.2. Методы диагностики хронической почечной недостаточности и оценки степени тяжести поражения почек 28
1.2.1. Лабораторная диагностика функционального состояния почек 28
1.2.2. Методы определения тяжести морфологических повреждений почек на основе диагностики нарушений метаболизма при хронической почечной недостаточности 30
1.3. Методы коррекции состояния организма при хронической почечной недостаточности 31
1.4. Применение природных источников кобальта и селена в качестве кормовых добавок с лечебными свойствами 33
1.5. Заключение 35
2. Собственные исследования 38
2.1. Материалы и методы исследования 38
2.2. Результаты исследований 49
2.2.1. Результаты комплексного обследования песцов с хронической почечной недостаточностью 49
2.2.1.1. Динамика функциональных изменений в организме песцов с хронической почечной недостаточностью 49
2.2.1.2. Характеристика структурных изменений в почках песцов при хронической почечной недостаточности у песцов по результатам гистологического и электронно-микроскопического исследований 57
2.2.1.3. Структурные изменениями в органах и тканях при разных формах хронической почечной недостаточности у песцов 71
2.2.1.3.1. Морфофункциональные изменения в печени 71
2.2.1.3.2. Морфофункциональные изменения в коже песцов 82
2.2.2. Динамика морфофункциональных изменений в органах и тканях крыс с моделью дисметаболической нефропатии 89
2.2.2.1. Результаты клинико-лабораторных исследований 90
2.2.2.2. Результаты морфологических исследований органов крыс с моделью дисметаболической нефропатии 93
2.2.3. Клинические и морфологические показатели животных, получавших лечебно-профилактические препараты растительного происхождения 107
2.2.3.1. Результаты клинико-лабораторных исследований 107
2.2.3.2. Результаты морфологических исследований
2.3. Обсуждение результатов исследований 118
Выводы 131
Практические предложения 133
Использованная литература 134
Приложения
- Этиология хронической почечной недостаточности
- Методы диагностики хронической почечной недостаточности и оценки степени тяжести поражения почек
- Динамика функциональных изменений в организме песцов с хронической почечной недостаточностью
- Результаты морфологических исследований органов крыс с моделью дисметаболической нефропатии
Введение к работе
Пушное звероводство является одной из ведущих отраслей сельского хозяйства. Тем не менее, в настоящий момент оно переживает тяжелейший кризис. Значительная часть звероводческих хозяйств разорилась, оставшиеся - едва справляются с конкуренцией иностранных производителей. Связано это с высокой- себестоимостью производства пушнины в нашей стране. Чтобы поправить ситуацию, предпринимаются попытки снизить затраты на производстве продукции. Как наиболее простой вариант - применяют корма с низкой себестоимостью. В периодических изданиях последних лет активно пропагандируются дешевые источники питательных веществ - например; отходы рыбного, птичьего производства, и даже тушки забитых зверей: Недостаток необходимых компонентов кормов рекомендуется заменять БАДами, имеющими направленное действие. К сожалению, ценность рекомендуемых добавок для организма зверя- сводится в основном к улучшению внешнего вида и товарного качества шкурок. Их применение оказывается неэффективным в случае заболевания животного. Вместе с тем, изменившийся рацион, а также несоблюдение норм приготовления и хранения кормов, могут неблагоприятным образом сказаться на состоянии здоровья животных (Слугин B.C., 2004).
Заболевания почек относятся к наименее изученным заболеваниям пушных зверей. Основной причиной развития болезней почек незаразной этиологии у пушных зверей является несбалансированное кормление, неф-ротоксичное воздействие многих препаратов, применяемых для профилактики заболеваний и повышения продуктивности животных (антигельминт-ные и инсектицидные средства, антибиотики группы аминогликозидов и цефалоспорина, статинов, стероидов и др.), а также длительное поступление с кормом в организм токсических веществ (например, солей тяжелых металлов, пестицидов) (Kopczewski A. et al., 1988; Поспишиль Ю.А., 1995; Майоров М.А., 2001; Nowakowicz-Debek В. et al., 2007). Эти заболевания
, отрицательно влияют на продуктивные свойства, вызывают задержку
1 линьки и могут привести к гибели зверя. Как правило, указанная патология
развивается у 2-3-летних самок пушных зверей маточного поголовья и 6-7-месячных самцов. В связи с этим возрастают потери при производстве пушной продукции.
На сегодняшний- день подробного изучения патоморфологических форм и функциональных изменений в организме пушных зверей" при подобных поражениях почек не проводилось. В патогенезе большинства заболеваний одно из центральных звеньев принадлежит синдрому интоксикации (токсикозу) (Мишнев О.Д.-и др.,2003; Новочадов В.В., 2005). Особое значение имеет эндогенная.интоксикация, или эндотоксикоз, при котором происходит накопление в тканях и биологических жидкостях организма избытка продуктов нормального или извращенного обмена веществ и клеточного реагирования. Источниками эндогенной интоксикации могут быть очаги воспаления в организме, зоны ишемии или деструкции тканей любой другой природы. Процесс усугубляется при нарушении выведения токсических веществ из организма в случае поражения почек и печени как центральных органов детоксикации. В свою очередь, накопившиеся эндогенные токсины влияют на структуру и функцию, ткан ей органов, тем самым, усугубляя патологический процесс. При развитии хронической почечной недостаточности (ХПН) в организме накапливаются вещества средней молекулярной массы (ВСММ), продукты расщепления пластического материала (продукты деградации белков, глико- и липопротеидов, фосфолипи-дов) и другие токсины (Смирнов А.В., 1997; Суворова Т.С., Вольвич К.В., 2000). Многие лабораторные исследования подтверждают негативное влияние этих веществ на функциональное состояние, морфологическое строение внутренних органов животных (селезенку, печень, желудочно-кишечный тракт, легкие, костный мозг) и кожный покров, особенно дерму (Родионова А.А., 1970; Уша Б.В., 1979; Гончаров Н.А., 1983; Шахбазян С.Н., 1983; Абдуллаев СП., 1989; Клечиков В.В., Вереснева О.Н., 1993; Богдан
Г.М., 1994; Школа Т.С., 2000; Рорр J.-P., 1993). Известно, что при воздействии всех видов нефротоксичных веществ патологические изменения происходят прежде всего в почечных интерстиции и канальцах (Тареева И.Е., 1998, 2002; Шулутко Б.И.,2002). В свою очередь, тубулоинтерстициальные процессы являются ведущим фактором в прогрессировании заболевания, развитии нефросклероза и как клинического проявления - хронической почечной недостаточности (Нестеров Д.В., 1997; Команденко Н.С., Шостка Г.Д., 2002; Байнбридж Д., Эллиот Д., 2003).
В терапии животных-компаньонов (кошек, собак) разработаны достаточно эффективные методы коррекции нарушений метаболизма при ХПН и лечения заболеваний, их вызвавших. Однако все эти приемы требуют наличия дорогостоящего оборудования, применения лекарственных средств с высокой себестоимостью и желательного нахождения животного в условиях стационара под непрерывным наблюдением ветеринарного врача (Байнбридж Дж., Элиот Дж., 2003). Соблюдение этих требований при лечении пушных зверей в условиях зверохозяйства практически невозможно. Поэтому на сегодняшний день весьма актуальна разработка доступных методов восстановительной терапии, направленной на коррекцию метаболических нарушений при различных формах заболевания. Наиболее перспективным направлением в лечении и профилактике хронической почечной недостаточности является использование биологически активных добавок в рационе животных сорбционного и антиоксидантного действия растительного происхождения (Лоншакова К.С., 1999). В этом аспекте представлялось интересным выявить возможные варианты метаболических реверсий при нефропатиях токсического характера и оценить влияние природных лечебных факторов на ведущие морфологические нарушения при данных патологических состояниях.
Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилось изучение морфофункциональных изменений в органах и тканях при хронической почечной недостаточности, обусловленной эндотоксикозом пушных
зверей, а также определение степени обратимости этих изменений при применении смеси препарата «Бефунгин» и бобовой культуры нута.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
Изучить цитологические, гистологические и гистохимические особенности изменений, происходящих в почках, печени и коже песцов с хронической почечной недостаточностью, обусловленной токсическим поражением почек.
Выявить зависимость между показателями эндогенной интоксикации и морфофункциональным состоянием органов у животных при хронической почечной недостаточности.
Определить воздействие кормовой добавки, состоящей из смеси препарата «Бефунгин» и нута на организм животных при хронической почечной недостаточности и возможность её применения для коррекции метаболических нарушений.
Научная новизна. Впервые приведены морфометрические параметры и цитологические изменения на световом и электронно-микроскопическом уровнях тканей почек, печени и кожи у песцов с хронической почечной недостаточностью латентной и интермиттирующеи стадий вследствие хронического токсического поражения почек. Изучено состояние белково-жирового обмена и показателей эндогенной интоксикации при данной патологии.
Установлена роль изменений соотношения фракций холестерина и уровня веществ средней молекулярной массы в развитии ранних стадий эндогенной интоксикации при токсическом поражении почек у песцов.
Научно доказана возможность коррекции обменных нарушений при хронической почечной недостаточности, при применении кормовой добавки с лечебно-профилактическим действием, состоящей из смеси бобовой культуры нут и препарата «Бефунгин».
Практическая значимость работы.
1. Обоснованы подходы к лабораторной диагностике хронической
почечной недостаточности на основе измерения уровня показателей эндо
генной интоксикации. Показано их значение в диагностике латентной ста-
. дии хронической почечной недостаточности у песцов.
Полученные морфометрические характеристики тканевых и клеточных структур органов песцов5 использованы в научных работах.
Доказана эффективность применения смеси на основе нута и «Бе-фунгина» в коррекции метаболических нарушений при комплексной терапии токсических поражений почек, сопровождающихся хронической почечной недостаточностью.
Основные положения, выносимые на защиту.
Морфофункциональные изменения в почках пушных зверей при хронической почечной недостаточности.
Морфологические и биохимические изменения в организме животных при хронической почечной недостаточности.
Эффективность применения комплекса на основе нута и «Бефунги-на» в коррекции морфофункциональных изменений при хронической почечной недостаточности.
Связь исследований с научной программой. Тема работы являлась частью научно-исследовательского направления кафедры незаразных болезней «Разработка методов диагностики, лечения и групповой профилактики внутренних незаразных болезней животных с целью повышения качества и количества животноводческой продукции» (код 68.41.63)
Апробация работы.
Материалы исследования доложены на Всероссийской научной конференции Актуальные проблемы ветеринарной медицины, ветеринарно-
санитарного контроля и биологической безопасности с.-х. продукции (М., МГУ lib, 2004); V и VII Международных научных конференциях студентов и молодьк ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М, МГУПБ, 2004,2008).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 2 статьи в журналах входящих в список ВАК.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 151 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований и практические предложения, выводы, приложения. Диссертация содержит 14 таблиц и 49 рисунков. Список использованной литературы включает 176 источников, в том числе 124 отечественных и 52 иностранных авторов.
Этиология хронической почечной недостаточности
Хроническая почечная недостаточность (ХПН) - это симптомоком-плекс, возникающий при- продолжительном снижении скорости клубочко-вой фильтрации в результате различных нарушений гломерулярного фильтра и тубулоинтерстициальной системы, приводящих к потере массы нефронов, в результате которых в организме накапливаются продукты обмена белков - мочевина, креатинин и т.п. (уремия), нарушается водно-электролитный баланс, кислотно-щелочное равновесие, и, как следствие, изменяется деятельность всех систем организма (9, 13, 31, 37, 42, 86, 93).
К развитию ХПН приводят как врожденные, так и приобретенные (первичные и вторичные) заболевания. ХПН возникает при всех формах гломерулонефрита, тубулоинтерстициальных болезнях (пиелонефрит и ин-терстициальный нефрит), системных заболеваниях с поражением почек, дисметаболических болезнях (амилоидоз, диабетическая нефропатия и подагра), сосудистых заболеваниях (гипертоническая болезнь, атеросклероз) и обструктивных поражениях (при опухолях и внутренних или внешних обструкциях мочеточников). ХПН наблюдается также при токсических поражениях почек (лекарственная нефропатия, свинцовая, кадмиевая и кремниевая нефропатии, хроническое диффузионное поражение почек, вызванное двуокисью германия, соединениями ртути, фунгицидами, органическими веществами) (93, 120, 123).
Все эти морфологические формы могут привести к развитию склероза клубочков и интерстиция почек, который и обуславливает возникновение ХПН. При этом многие из вышеперечисленных заболеваний длительное время могут протекать латентно или не вызывать значительного ухуд шения состояния, и только в терминальной стадии, когда развивается ХПН, появляются выраженные признаки ухудшения состояния животного.
В настоящее время считается, что азотемия и нарушение баланса электролитов начинают развиваться при потере 75-90% массы нефронов и снижении клубочковой фильтрации до 40% и ниже. Ранняя стадия ХПН наблюдается при снижении СКФ до 50%, когда регистрируют незначительный подъем мочевины и креатинина крови и нарушение концентрирующей способности почек (проявляется снижением дневного диуреза и никтурией) (7, 31, 73).
В результате снижения массы действующих нефронов в плазме крови задерживается мочевина, т.е. повышается ее осмоляльность и соответственно, понижается осмоляльность мозгового слоя почек, что приводит к подавлению канальцево-клубочкового механизма обратной связи. Следствием этого является повышение СКФ в сохраненных нефронах благодаря повышению клубочкового давления, развивается осмотический диурез. Повышенное давление в клубочках приводит к их склерозированию и про-грессированию ХПН (13, 37, 48). В результате функциональных и структурных нарушений в канальцах, а также увеличения тока жидкости в канальцах, нарушается концентрирующая способность почек, снижается реабсорбция воды, что спасает организм от обводнения в результате повышения осмоляльности плазмы (93). Указанные изменения в нефронах являются приспособительными и направлены на поддержание гомеостаза организма в процессе развития ХПН. В процессе развития ХПН значительно изменяется обмен электролитов. Наблюдается повышенное выделение натрия. Это связано с понижением его реабсорбции в канальцах. Особенно сильно снижается реабсорбция натрия при пиелонефрите (55). В связи с этим развивается гипонат-риемия. В терминальной стадии экскреция натрия снижается. Потеря натрия сопровождается внеклеточной дегидратацией (Hamburger, 1965, цит. no (31)). Одновременно с натрием почками выделяется повышенное количество хлора. Экскреция калия почками нарушается в тех случаях, когда почки теряют 90% структурной и функциональной паренхимы (164). Гипокалиемия характерна для полиурической фазы. При олиго- или анурии может развиваться гиперкалиемия. Нарушение экскреции магния связывают со снижением его фильтрации и повышением реабсорбции. При ХПН наблюдается развитие гипокальциемии и гиперфосфатемии.
Нарушение кислотно-основного равновесия выражается в развитии почечного ацидоза, который связывают с задержкой мнимокислых анионов - фосфатов, сульфатов, органических кислот — с последующим замещением гидрокарбонатных радикалов (клубочковый ацидоз), а также нарушением секреции -ионов (канальцевый ацидоз) (32).
Методы диагностики хронической почечной недостаточности и оценки степени тяжести поражения почек
Исследование мочи. Включает оценку физико-химических показателей и исследование мочевого осадка (11). К физико-химическим показателям относятся органолептические (цвет, запах, прозрачность), реакция мочи, относительная плотность (или осмоляльность). Из химических веществ в моче определяют белок, сахар (глюкоза), гемоглобин, электролиты. Определение физико-химических показателей позволяет дать предварительное заключение о состоянии фильтрационного аппарата, концентрирующей способности (гипостенурия, глю-козурия при поражении канальцев), так и мочевыводящих путей (макрогематурия) (5). Например, при повышении проницаемости почечного фильтра в моче появляются сывороточные белки, а развитие дистрофических и воспалительных процессов в почках и мочевыводящих путях приводит к появлению в моче тканевых белков (113).
Мочевой осадок состоит из органической (эпителий, эритроциты, лейкоциты, цилиндры) и неорганической (кристаллы солей) частей. Микроскопическим исследованием мочевого осадка можно выявить воспалительные процессы в мочевых путях, микрогематурию, цилиндрурию, связанную с различными паренхиматозными заболеваниями (112). Оценка функционального состояния почек. Проводится с помощью определения показателей гомеостаза организма, изучения состояния внут-рипочечных процессов и оценки резервных способностей поддержания гомеостаза. Среди показателей гомеостаза организма для оценки почечной функции имеет значение определение азотовыделения (содержание моче -вины и креатинина в плазме крови), осмотического давления крови и мочи, содержание ионов крови (К+, Na+, Са"", Mg++, СГ, НР04", и т.д.). и кислотно основного состояния. (105).
Что касается определения уровня креатинина и мочевины, повышение их наблюдается только во вторую стадию развития ХПН. В латентную (субклиническую) стадию их концентрация не превышает пороговых значений нормы. Это не позволяет применять данные показатели для диагностики ранних стадий ХПН (78).
При изучении состояния внутрипочечных процессов определяют парциальные функции (секреция, фильтрация и реабсорбция) (7, 41). Для этого используют такие показатели, как эффективный (кортикальный) почечный плазмоток (показатель почечной гемодинамики), скорость клубоч-ковой фильтрации (определяется по клиренсу вещества, полностью проникающего из плазмы в просвет канальца и не подвергающемуся реабсорбции в канальцах). Для определения функционального состояния проксимальных канальцев проводят исследование секреции по ПАГ или диотра-сту и реабсорбции по глюкозе (10). Для оценки функционального резерва почек (ФРП) используют пробы с депривацией (ограничение питья), водной нагрузкой, белковой нагрузкой. Прижизненное морфологическое исследование (биопсия). Позволяет наиболее точно определить характер патологического процесса, степень выраженности морфологических изменений (146, 160, 167, 176). В связи с отсутствием возможности проведения биопсии почек в условиях хозяйства, на первый план выходят клинико-лабораторные методы диагностики тяжести морфофункциональных повреждений почек, в связи с чем мы попытались установить корреляцию между результатами лабораторных исследований и морфологическими процессами в почках на разных стадиях ХПН. Г.2.2. Методы определения тяжести морфологических повреждений почек на основе диагностики нарушений метаболизма при хронической почечной недостаточности.
Определение степени морфологического поражения почек, и, как следствие, нарушения выполняемых ими функций, имеет двоякое значение. Нарушение функций почек при нарушении их структуры, с одной стороны, приводит к различным изменениям нормального обмена. С другой стороны, почки перестают выполнять одну из жизненно важных функций — выведение продуктов обмена или веществ экзогенного происхождения, которые могут обладать более или менее выраженными токсическими эффектами. И первое, и второе имеет безусловную ценность при оценке состояния организма животного. В связи с этим, при диагностике степени повреждения органа необходимо выделять лимитирующие факторы, охватывающие оба критерия.
В первом случае принято проводить скрининг основных показателей обмена, а именно жирового, белкового, минерального (85). Известно, что для отдельных эндотоксинов и накопившихся продуктов обмена имеется свой морфологический эквивалент повреждающего воздействия на органы. При этом тяжесть повреждения, индуцируемого каким-либо из накопившихся продуктов обмена, не всегда коррелирует с распространенностью определения его значения в качестве скринингового теста при оценке степени тяжести состояния животного при ХПН. Например, на настоящий момент уже доказано невысокая токсичность для организма креатинина и мочевины, которые принято называть уремическими токсинами, хотя они входят в набор базовых показателей при определении биохимического состава крови в клиниках мелких животных.
Динамика функциональных изменений в организме песцов с хронической почечной недостаточностью
С помощью клинического обследования у 47 песцов из 220 установлены небактериальные поражения почек в виде ХТИН (21,3%), сопровождающегося латентной (12,7%) или интермиттирующей ХПН (8,6%), у 15 — (8,6%), v 15 - пиелонефрит (o,8 Уо). v yj — наличие жиоовои дистпснш» — чеки Г42.3?4 Ггт с/24 При ежедневной оценке клинического состояния животных с признаками ХТИН отмечены угнетение, малая подвижность, снижение аппетита, у единичных особей (2-3 головы) задержка линьки, при пальпации почек у животных 1-й группы выраженная болезненность в начале эксперимента. В течение всего стэока эксперимента было проведено 188 исследований крови песцов по гематологическим и биохимическим показателям и 361 исследование мочи. Липидоз печени; / 42,30% Без заболеванийпечени и почек;29,60% ХТИН, латентная Х стадия ХПН; 12,70% ХТИН, г интермиттирующая стадия ХПН; 8,60% — Пиелонефрит 6,80% Рис. 3. Доля заболеваний печени и почек в обшей патологии песцов.
Результаты гематологических и биохимических исследований крови песцов с .YOT/.Гематологические исследования в течение эксперимента проводили 4 раза. Наиболее характерные изменения по группам отмечали в конце эксперимента (табл.2). Установлено достоверное уменьшение количества эритроцитов у песцов подопытных групп по сравнению с контролем, что связано с нарушением функции почек, которое сопровождается хроническим кровотечением, дефицитом белка в организме или обусловлено скрытой эндогенной интоксикацией, хронической гиперазотемией, хроническим воспалительным процессом, голоданием. Так, в начале эксперимента количество эритроцитов в периферической крови со ставило 8,0±035х10,2/л У животных 1-й опытной группы и 6,8±0,5хЮ,2/л - у песцов 2-й группы (р 0,05). К 45-м суткам эти значения находились на уровне 7,4±0,5хЮ12 /л в 1-й (р 0,05) и 6,1±0,5х1012 /л во 2-й (р 0,001) группах. Во всех группах исследованных песцов отмечено увеличение количества лейкоцитов по сравнению с контролем -до 8,4±131хЮ9/л в 1-й и 10,2±1,0хЮ9/л во 2-й группе к концу эксперимента (р 0,001). Это свидетельствовало о лейкоцитозе вследствие эндогенной интоксикации и реактивного возбуждения лейкопоэза при уремии.
В ходе исследований установлено достоверное уменьшение количества белка в плазме крови животных опытных группах по сравнению с животными контрольной группы (табл. 2). Концентрация белка составила 68,0±Г,2 г/л у песцов 1-й и 64,1 ±2,0 г/л у песцов 2-й группы в начале эксперимента и 61,2±1,5 г/л, 59,2±1,9 г/л соответственно к концу эксперимента. Отмечалась абсолютная гипопротеинемия, которая была обусловлена прежде всего потерями белка плазмы крови с мочой при нарушении реабсорбции белка в канальцах у больных животных. При этом снижение А/Г коэффициента свидетельствовало, что гипопротеинемия обусловлена прежде всего гштоальбуминемией.
Достоверное увеличение концентрации мочевины и креатинина относительно контроля в начале эксперимента наблюдалось только у песцов 2-й опытной группы (табл. 2). Так, уровень мочевины у них имел значение 12,8±1,3 ммоль/л, креатинина- 150±21 мкмоль/л. К концу эксперимента эти отличия были достоверными в обеих опытных группах. Значительное повышение количества мочевины крови связано с поражением почечных клубочков, что приводит к нарушению азотовыделительной функции почек.
Повышение активности АлАТ, АсАТ и ЩФ, а также уровня билирубина в обеих опытных группах свидетельствуют о развитии гепатореналь-ного синдрома. Во 2-й группе животных мы наблюдали падение уровня АлАТ и АсАТ к концу эксперимента, ниже уровня аналогичных показателей у животных контрольной группы. Таблица 2 Изменение показателей крови подопытных песцов в течение эксперимента, М±ш
Примечание: р 0,05; р 0,001 достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы. Мы наблюдали достоверные различия в содержании веществ средней молекулярной массы (ВСММ) у животных обеих опытных групп относительно контроля. Как показали исследования сыворотки крови, у песцов наблюдалось выраженное повышение ВСММ с самого начала эксперимента (рис.4). В 1-й опытной группе отмечено повышение уровня ВСММ до 0,27±0,02 усл.ед в начале и 0,32±0,05 усл.ед. в конце эксперимента, во 2-й - 0,30±0,02 усл.ед. в начале и 0,45±0,08 усл.ед. в конце, против аналогичного показателя для контрольной группы 0,24±0,01 усл.ед.
Как видно на рис. 5, у животных обеих групп наблюдается повышение количества ОХ, более выраженное к концу эксперимента. На 45-е сутки его уровень составил 7,21±0,33 ммоль/л в 1-й и 7,92±0,34 ммоль/л во 2-й опытных группах песцов. Анализ липидных фракций показал, что это происходит за счёт холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛПНП), в то время как содержание холестерина липопротеидов высокой (ХС ЛПВП) и очень низкой (ХС ЛПОНП) падает (рис. 5). Так, уровень ХС ЛПНП в крови животных 1-й группы к концу эксперимента находится в пределах 3,36±0,15, 2-й группы - 4,73±0,18 ммоль/л. В контрольной группе эти значения находятся на уровне 2,82±0,08 ммоль/л. Концентрация ХС ЛПВП изменена следующим образом: в начале эксперимента определен уровень в пределах 4,19±0,07 ммоль/л у животных 1-й группы и 3,85±0,11 ммоль/л у животных 2-й группы. На 45-е сутки содержание ХС ЛПВП составило 3,77±0,14 и 3,15±0,20 ммоль/л соответственно в крови песцов 1-й и 2-й опытных групп. Уровень ХС ЛПОНП оставался на протяжении всего эксперимента в пределах 0,08±0,01 ммоль/л у животных 1-й и 0,07±0,01 ммоль/л - 2-й групп, в контрольной группе -0,09±0,01 ммоль/л. Количество триглицеридов (ТГ) также снижается и составляет к концу эксперимента 0,36±0,08 в 1-й и 0,35±0,07 ммоль/л во 2-й группе против контрольных значений 0,48±0,05 ммоль/л (достоверные отличия обнаружены только во 2-й группе к концу эксперимента). Коэффициент атерогенности (КА) резко повышен. К концу эксперимента он составляет 0,91±0,11 в 1-й и 1,51±0,23 во 2-й экспериментальных группах, в контрольной группе - 0,36±0,05. В связи с тем, что ХС ЛПОНП участвует в транспорте эндогенных ТГ (43), уменьшение его может привести к жировой инфильтрации печени с последующей дистрофией, что подтверждается в нашем случае морфологическими исследованиями.
Результаты морфологических исследований органов крыс с моделью дисметаболической нефропатии
При вскрытии крыс контрольной группы не обнаружено видимых изменений в размере, цвете и консистенции внутренних органов. Макроскопически почки животных контрольной группы (интактные крысы) на всем1 протяжении-экспериментаимели правильную бобовидную форму, гладкую упругую поверхность, кровоизлияний" на поверхности и под капсулой не обнаружено, капсула легко снимается. На разрезе корковый, слой немного темнее мозгового, граница между корковым и мозговым слоями- заметна. Стенка лоханки гладкая, упругая, не утолщенная, без кровоизлияний, сгустков и конкрементов не обнаружено.
У опытных животных мьь наблюдали следующие изменения макроскопических характеристик органов: Почки крыс на 30-е сутки моделирования выглядели отекшими, у некоторых животных наблюдались точечные кровоизлияния под капсулу. Граница между мозговым.и корковым слоями ярко выражена. На, 60-е сутки происходило уменьшение размеров и относительной массы.почек (табл. 9), оттенок их становился более бледным, граница между корковым и мозговым слоями еле заметна. К 90-м суткам макроскопически почки не отличались от состояния на 60-е сутки, относительная масса органов была достоверно-ниже контроля (р 0.001), что свидетельствовало о снижении функциональной способности. Измерение относительной массы печени показало тенденцию к увеличению в начале эксперимента, к 90-м относительная масса органа снижалась. Селезенка у экспериментальных животных была резко увеличена, что свидетельствовало об иммунном характере происходящих процессов.
К концу моделирования относительная масса сердца была увеличена, что свидетельствовало о развитии вторичной гипертрофии сердца в связи с развитием гипертензии ренального происхождения.
Гистологические и цитологические изменения почек крыс в процессе развития патологии. Гистологическое исследование препаратов почек животных контрольной группы показало сохранность всех структурных элементов нефронов, сосудистого и стромального компонентов органов (рис.32). Гистохимическое и цитологическое исследования эндотелия капиллярных клубочков, базальных мембран и эпителиальных клеток почечных телец, канальцев, перитубулярных капилляров и интерстиция свидетельствовали об активности фильтрации, реабсорбции и кровоснабжения.
Гистологическая структура почек крыс на 30-е сутки моделирования, дисметаболической нефропатии претерпевала изменения, затрагивающие, прежде всего, систему кровоснабжения, а именно сосуды микроциркуля-торного русла. На гистологических препаратах, окрашенных гематоксилином, и эозином, наблюдается выраженное кровенаполнение капиллярных клубочков почечных телец, застой и резкая гиперемия? вторичной периту-булярной-капиллярной сети. Застойные явления отмечены1 также в венозном русле. Вместе с тем, не наблюдается никаких изменений слоев стенки междольковых артериол (рис. 33).
Интерстициальное пространство расширено вследствие отёка. Наблюдается просветление матрикса, разрыхление волокон, интерстиция. В интерстиции имеются очаговые скопления клеток воспалительного характера, преимущественно, макрофагов (рис.33). Окраска препаратов пикрофуксином показала отсутствие излишнего образования элементов соединительной ткани — фибрина и эластина во всех элементах ткани почек. В капиллярных клубочках почечных телец основные изменения были связаньг с расширением полости капсулы Шумлянского-Боумена. В части почечных телец это явление сопровождалось спадением и деформацией капиллярных петель клубочков. По-видимому это происходило вследствие увеличения давления в субкапсулярном пространстве при увеличении объема первичного фильтрата. При проведении ШИК-реакции выявлена гетерогенность реакции гликопротеидного слоя почечного фильтра каждого клубочка. На электронограммах видно, что приносящие артериолы сильно спазмированы. Структура и количество подоцитов, эндотелиоцитов, мезан-гиоцитов и клеток наружного листка капсулы клубочков на световом уровне соответствовали таковым животных контрольной группы. С помощью ультраструктурного исследования выявлена некоторая отечность гиалоплазмы подоцитов. Ножковые отростки чётко определялись.
Эпителиальные клетки почечных канальцев мозгового слоя находились в состоянии гидропической дистрофии. Щёточная каёмка проксимальных канальцев местами слущена и заполняет мочевое пространство. Наблюдался пикноз ядер проксимальных и дистальных канальцев (рис. 34).
Электронно-микроскопическое исследование показало наличие выраженных изменений в эпителиоцитах. В одном случае канальцы эндо-плазматичексой сети расширены, в цитоплазме выявляется большое количество вакуолей и лизосом. В некоторых клетках происходит деформация ядра вакуолями. Ядра большинства клеток содержат большое количество эухроматина, т.е. находятся в состоянии повышенной синтетической активности. В другом случае в цитоплазме выявляются капли жира (жировая дистрофия эпителия) (рис.35). Микроворсинки щёточной каёмки проксимальных канальцев сильно удлинены и истончены.
На 60-е сутки в почках нарастает отёк и атрофические явления. Капиллярные петли примерно половины почечных клубочков коллабирова-ны, мочевое пространство таких клубочков резко расширено (рис. 36). В остальных клубочках выражена дольчатость сосудистого пучка и высокое кровенаполнение капилляров. В интерстиции наблюдаются скопления фибробластов и макрофагов. Заметно чрезмерное образование соединительной ткани в интерстиции, при этом волокна располагаются перитубулярно и перигломерулярно (рис. 36). Выявлена сильная десквамация щеточной каёмки, а также эпителия проксимальных и дистальных канальцев. На электронограммах клеток почки выявлены изменения, аналогичные происходящим на 30-е сутки, но большей степени выраженности. Уменьшается количество мембранных органелл эпителиоцитов проксимальных и дистальных канальцев. Митохондрии клеток имеют трубчатую структуру матрикса. Большое количество ядер находятся в состоянии кариопикноза. В просвете части канальцев находится большое количество детрита, состоящего из слущенного эпителия и мембранных органелл (рис. 37).
