Содержание к диссертации
Введение
1..Обзор литературы 9
1.1.Печень как орган и ее функциональное значение для организма... 9
1.2.Анатомическое строение печени сельскохозяйственных животных 13
1.3.Гистологическое строение печени сельскохозяйственных животных 19
1.4. Структурно-метаболическая характеристика печени 25
1.5.Цитологическая характеристика основных клеточных популяций 33
1.6.Возрастные аспекты цитологических изменений в печени 39
1.7.Анализ нормального роста печени 43
2. Материал и методы исследований 45
2.1.Экспериментальный материал и его фиксация. Методы анатомических исследований печени 45
2.2. Гистологические методы исследований печени 46
2.3.Гистохимические и гистоэнзимологические методы исследований 48
2.4.Цитологические и цитофотометрический методы исследований 51
3. Результаты анатомических, гистологических ицитологических исследований печени бурягскойгруюшерстнойовцы впостнатальном онтогенезе 54
3.1.Данные анатомических исследований печени овец 54
3.2. Данные гистологических исследований печени овец 58
3.3.Результаты морфометрических и цитологических исследований печени овец бурятской грубошерстной породы разного возраста 82
4. Результаты гистохимических и гистоэнзимологических исследований печени овец бурятской грубошерстной породы в постн at а льном онтогенезе 93
4.1.Данные исследований содержания гликогена в печени овец 93
4.2. Данные исследований активности сукцинатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в печени овец 98
4.3.Цитофотометрическая оценка содержания ДНК в ядрах гепатоцитов и данные о полиплоидных клетках печени овец 105
5. Анализ полученных данных 108
Выводы 121
Практические предложения 124
Список литературы 125
- Структурно-метаболическая характеристика печени
- Гистологические методы исследований печени
- Данные гистологических исследований печени овец
- Данные исследований активности сукцинатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в печени овец
Введение к работе
Актуальность темы. Среди домашних животных овца обладает самой разносторонней продуктивностью (шерсть, мясо, молоко, овчина), что обусловливает высокую рентабельность овцеводства. В Бурятии оно было развито только в виде номадного (кочевого, подвижного) животноводства. Повышение эффективности его в республике может быть достигнуто путем производства дешевой баранины, овчины и шерсти за счет возрождения генофонда аборигенных бурятских овец, которые обладают уникальными особенностями с позиций регионального природопользования.
Аборигенная бурятская овца находилась в трудных условиях содержания и кормления только за счет подножного корма. Она приобрела ряд важных качеств, в частности, способность их сопротивляться суровым зимним условиям Забайкалья и неприхотливость к кормовому режиму (К.Д. Миронов, 1986). Известно, что аборигенные бурятские овцы отличались высокой способностью к нагулу и быстрому восстановлению зимних потерь живой массы (Р.П. Пилданов, 1975). Кроме того, местные бурятские грубошерстные овцы, также как монгольские овцы, обладают особенностью большого содержания пуха в шерсти, которая считается высококачественной.
Дальнейшее успешное развитие овцеводства в Республике Бурятия и в целом в России диктует необходимость проведения разносторонних исследований морфофизиологии организма грубошерстной овцы, в частности, органов пищеварительного аппарата: печени и поджелудочной железы. Это обусловлено запросами ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы, терапии, абдоминальной хирургии и рационального использования кормов овцами указанной породы.
Представляет значительный интерес исследование крупной железы -печени, выполняющей целый ряд жизненно важных функций и являющейся биохимической лабораторией в организме.
Общеизвестно, что печени принадлежит центральное место в регуляции обмена веществ в организме млекопитающих. Она обеспечивает постоянство концентрации питательных веществ в общем кровотоке, синтезирует большинство белков плазмы крови, фосфолипиды, холестерин и контролирует постоянство уровня этих веществ в крови. Печень обеспечивает связывание и обезвреживание токсических веществ эндогенного и экзогенного происхождения. Продуцируемый ею секрет — желчь необходима для нормального пищеварения. Патология печени -органа, выполняющего разнообразные специфические функции в процессе жизнедеятельности организма животных, чрезвычайно сложна и многогранна и представляет одну из актуальных проблем современной медицины, ветеринарии и биологии. Несмотря на активное комплексное изучение целого ряда важных в теоретическом и практическом отношении вопросов патологии печени у домашних животных многое остается неясным.
Немаловажное значение для углубленного понимания морфофизиологии аборигенной бурятской грубошерстной овцы имеют особенности строения ее печени, ибо суровые климатические условия существования и характер кормового рациона не могли не оказать влияния на тонкую структурно-функциональную характеристику печени и других органов этого номадного животного.
В доступной литературе сведения об анатомических, гистологических, цитологических, гистохимических и гистоэнзимологических особенностях печени бурятской грубошерстной породы отсутствуют, что и явилось основанием для проведения исследований по настоящей теме.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение особенностей структурно-функционального состояния печени аборигенной бурятской овцы в онтогенезе: у новорожденных (1-3 дня), 5-месячных и взрослых особей (в возрасте 5 лет). Для достижения указанной цели были определены в настоящей работе следующие задачи:
определить в постнатальном онтогенезе анатомические особенности печени овцы (топографию, линейные и весовые показатели);
выявить гистологические особенности печени овец в возрастном аспекте;
дать гистохимическую и гистоэнзимологическую характеристику печени овцы в постнатальном онтогенезе;
дать цитологическую характеристику основных клеточных популяций печени овцы (наличие гипертрофированных, двухъядерных гепатоцитов) в процессе нормального роста и развития;
5) определить в постнатальном онтогенезе состояние ядерно-
цитоплазматического отношения в гепатоцитах печени овцы;
оценить морфометрические показатели печени овец;
дать цитофотометрическую характеристику ядер гепатоцитов печени овцы, количественное определение содержания в них ДНК.
Научная новизна работы. Впервые дана анатомо-гистологическая, гистохимическая, гистоэнзимологическая, морфометрическая и цитологическая характеристика печени аборигенной бурятской грубошерстной овцы в постнатальном онтогенезе. Определены линейные и весовые показатели печени и дана ее топография у овец трех возрастных групп (1-3-дневных, 4-5-месячных и взрослых), дана гистохимическая, гистоэнзимологическая, цитологическая, морфометрическая и цитофотометрическая характеристика гепатоцитов печени овцы.
В целом, полученные данные составили банк данных по анатомии, гистологии, гистохимии и цитологии печени бурятской грубошерстной овцы. Они могут быть использованы для ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы, при терапии и проведении абдоминальных операций у больных животных и для организации рационального питания овец указанной породы.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований по теме позволили получить сведения по анатомо-гистологической, структурно-метаболической (гистохимической, гистоэнзи-
7 мологической) и цитологической характеристике печени аборигенной бурятской грубошерстной овцы в онтогенезе, которые в определенной степени могут объяснить особенности обменных процессов в организме, позволяющие ей быть устойчивой к условиям нашего региона в зимний период, быть неприхотливой к кормовому режиму и обладать высокой способностью к нагулу и восстановлению в короткий срок потерь в живой массе в зимний период.
Полученные сведения по анатомии, гистологии, гистохимии, гистоэнзи-мологии и цитологии печени бурятской грубошерстной овцы, составляя банк данных по морфофизиологии сельскохозяйственных животных, могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах, при написании книг, руководств по сравнительной функциональной морфологии животных, для объяснения патогенеза и разработки лечебных мероприятий при заболеваниях печени овец указанной породы, а также при проведении ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы.
Внедрение результатов исследований. Полученные по теме данные находят применение при проведении лекций и практических занятий на кафедрах анатомии, гистологии, патологической анатомии и физиологии Бурятской и Иркутской сельскохозяйственных академий, Бурятского, Хакасского, Омского, Мордовского и Монгольского университетов. Кроме того, полученный материал может быть использован при написании учебно-методического пособия по анатомии сельскохозяйственных животных.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на:
научно-производственных конференциях Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2001, 2002 г.г.);
научно-практической конференции Благовещенской государственной сельскохозяйственной академии (Благовещенск, 2002);
- Международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию профессора В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2003).
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
выявлены особенности анатомо-гистологической, гистохимической и гистоэнзимологическои характеристики печени бурятской аборигенной овцы в процессе нормального роста и развития в постнатальном онтогенезе;
установлена зависимость цитологической характеристики клеточных популяций печени бурятской аборигенной овцы от периодов ее постнаталь-ного онтогенеза;
дана цитофотометрическая характеристика ядер гепатоцитов с количественным определением содержания ДНК.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 140 страницах компьютерного текста, состоит из введения и 5 глав, включающих обзор литературы, материал и методы исследований, материал собственных данных, анализ полученных результатов, выводы, практические предложения и список литературы, включающий 230 отечественных и иностранных источников. Работа иллюстрирована 11 таблицами, 34 рисунками, макрофотографиями и микрофотографиями.
Структурно-метаболическая характеристика печени
Печень представляет собою массу паренхиматозных клеток, которая пронизана кровеносными синусоидами. Гепатоциты образуют анастомози-рующие пластинки из одного ряда клеток, тесно контактирующих с лабиринтом синусоидов. В структуре печени гепатоциты составляют 84,2%, эндо-телиоциты — 10,4, клетки Купфера - 4,3, эпителиоциты желчных протоков — 0,6, клетки кровеносных сосудов - 0,3, соединительнотканные клетки - 0,2% (Блюгер А.Ф., Новицкий И.Н., 1984). На основании изучения печени в разных условиях различают три структурные ее единицы: классическая и портальная дольки и ацинус, которые не исключают одна другую, а отражают лишь многогранность строения и функций этого жизненноважного органа.
Классическая долька представляет собой полиэдрическую призму паренхимы печени, ограниченную соединительнотканными септами. Долька содержит кровеносные и лимфатические сосуды, желчные протоки (Kiernan F., 1833). Гистологически долька имеет вид шестиугольника, в центре которого расположена центральная вена, а по углам - портальные тракты, где располагаются ветви воротной вены, печеночной артерии, желчный проток, нервы, лимфатические сосуды.
Концепция о портальной дольке разработана F.P. Malle (1906) и основывается на том, что в печени значительно больше терминальных веточек воротной вены, чем терминалий печеночных вен. Желчь от гепатоцитов оттекает в протоки, расположенные в портальных зонах. Схематически портальная 26 долька имеет форму треугольника, сторонами которого являются линии, соединяющие центральные вены трех соседних классических гексогональных долек, а центром - портальный тракт.
В основе концепции об ацинарном строении печени лежит поиск такой структурно-функциональной единицы, в которой обозначена связь между гистоархитектоникой паренхимы, ангиоархитектоникой и функциональной гетерогенностью гепатоцитов различной локализации. Простой печеночный ацинус (Rappaport A.M., 1958) микроскопически представляет собой единую по кровоснабжению небольшую массу паренхимы неправильной формы, располагающуюся вокруг приносящих питающих микрососудов — термиа-нальной портальной венулы, печеночной артериолы, а также желчного протока, лимфатических сосудов и нервов, локализующихся по оси приносящих сосудов. Принцип построения печеночного ацинуса как совокупности специализированных паренхиматозных клеток, имеющих осью приносящие питающие микрососуды, полностью соответствует современным представлениям о функциональном элементе (Коваленко Н.Я., 1984; Чернух A.M., 1977).
В функциональном элементе печени — ацинусе - в зависимости от топографического расположения по отношению к приносящим терминальным микрососудам различают три циркуляторные зоны (Rappaport A.M., 1958; 1976; 1980). Гепатоциты, располагающиеся вокруг приносящих терминальных микрососудов, образуют центральную зону 1. Эти клетки непосредственно контактируют с хорошо оксигенированнои кровью, поступающей в терминальное русло органа по печеночным артериолам и капиллярам, и первыми соприкасаются с питательными веществами, содержащимися в портальной крови. В синусоидах только этой зоны осуществляется процесс смешивания артериальной и портальной крови при помощи системы артериоло-портальных анастомозов. Зона 2 простого ацинуса топографически занимает промежуточное положение, в то время как клетки зоны 3 располагаются наиболее удаленно от приносящих терминальных сосудистых ветвей. Омывающая их кровь содержит продукты метаболизма, выделенные в процессе транскапиллярного обмена клетками зон 1 и 2. Следует отметить, что принятый в литературе термин «центролобулярная» зона соответствует зоне 3 аци-нуса. Термин «перипортальная» зона идентичен зоне 1 ацинуса,
МорфометрическиЙ анализ гепатоцитов белых крыс показал, что средний размер перипортальных, интермедиальных и перивенулярных клеток соответственно равен 20,2+0,2, 20,8+0,3 и 21,0+0,3 мкм (Loud L.V., 1968). В перипортальных зонах показано преобладание полиплоидных и двухъядер-ных гепатоцитов (Жирнова А.А., Рыжавский Б.Я. и Васильев Е.В., 1986; Павлов А.В., 1978; Harizanova Z.A. et al., 1979), а также большая величина отношения ядра к цитоплазме (Гепатоцит: функционально-метаболические свойства, 1985).
При количественном анализе электронограмм гепатоцитов было отмечено, что перивенулярные гепатоциты содержат больше профилей аграну-лярной эндоплазматической сети, чем перипортальные (Jones A.L., Schmicker DX., Mooney J.S, et aL, 1978; Loud L.V., 1968), но это распределение меняется в течение дня (Chedid A., Nair V., 1972).
Сведения о распределении гранулярной эндоплазматической сети, лизо-сом, митохондрий в гепатоцитах различных зон ацинуса противоречивы. По-видимому, это связано с тем, что лизосомы существуют в виде нескольких форм, включая первичные и вторичные лизосомы, микровезикулярные и остаточные тельца. Разноречивость данных о содержании митохондрий в гепатоцитах в зонах ацинуса может быть связана со значительными суточными колебаниями размеров и формы митохондрий (Deane H.W., 1944; Noel R., 1923).
В литературе имеются данные, свидетельствующие о разнице в количестве и объеме пероксисом гепатоцитов в различных зонах ацинуса (David Н., 1980).
В гепатоцитах зоны 1 комплекс Гольджи имеет большую объемную долю и суммарную площадь поверхности мембран (Лихачев Л.М., 1974; Jones 28 A.L., Schmikcer D.L., Mooney J.S. et al., 1976; Jones A.L., Schmicker D.L., Mooney J.S. et al., 1978; Jones A.L., Schmicker D.L., Mooney J.S. et al., 1979).
Различия ультраструктурной организации клеток различных зон ацинуса находят свое отражение и при светооптическом исследовании печени крыс: светлые гепатоциты в перивенулярной зоне и темные - в перипортальной (Секамова СМ. и Бекетова Т.П., 1975; Серов В.В., 1986).
Морфологические особенности гепатоцитов различных зон ацинуса находят отражение и на их функциональной специализации.
В частности, при гистохимическом исследовании в криостатных срезах печени крыс белки, связывающие галактозу, располагаются преимущественно вокруг терминальных печеночных венул (Hardonk M.J., Scholtens Н.В., 1980).
При иммуногистохимическом исследовании установлена преимущественная локализация ангиотензиногена в гепатоцитах зоны 3 (Morris B.J., Jwamoto H.S., Reid J.А., 1979).
Гистологические методы исследований печени
Окраска срезов печени барана гематоксилин-эозином Эта методика окраски - наиболее распространенный метод, позволяющий выявлять все клеточные и неклеточные структуры. Эта окраска является двойной: гематоксилин - основной краситель - окрашивает ядра клеток, эозин - кислый краситель — красит цитоплазму клеток и в меньшей степени - различные неклеточные структуры. Эозин - искусственная краска. Гематоксилин (СбНігОб) представляет собой экстракт древесины кампешевого дерева, произрастающего в Америке. Красящим веществом является не сам гематоксилин, а продукт его окисления - гематеин (СбНпОб). Для окисления гематоксилина в гематеин, т.е. «созревания краски» требуется определенное время. По мере созревания краски возрастает ее красящая способность (Елисеев В.Г. и соавт., 1967; Меркулов Г.А., 1969).
Методика окраски. 1. Подготовка срезов печени барана сводилась к кратковременной (не более 3-5 минут) обработке спиртом. 2. Из спирта срезы органа переносили обратно в дистиллированную воду. 3. Вначале производили окрашивание срезов гематоксилином Эрлиха. Их из воды переносили в раствор красителя. 4. Затем срезы печени из раствора гематоксилина переносили в дистиллированную воду на 3-5 минут. При удачной окраске срезов ядра клеток имели интенсивный красновато-фиолетовый цвет, в них отчетливо видны ядрышки и глыбки хроматина, цитоплазма клеток не окрашена. 5. Для ослабления окраски срезы из воды переносили на несколько (3-5-30) секунд в 1% раствор соляной кислоты на 70 спирте. 6. Из солянокислого спирта срезы переносили на несколько минут в дистиллированную воду. 7. Далее следовала промывка срезов в воде с небольшим количеством щелочи. В такой воде срезы синеют через 20-30 секунд. Затем срезы дополнительно промывают в течение 10-15 минут в водопроводной воде, которая содержит следы щелочноземельных металлов и потому является слабощелочной средой. После промывания срезов в водопроводной воде цвет ядер становится интенсивно синим. 8. В дальнейшем промытые в водопроводной воде срезы переносили в дистиллированную воду на 3-5 минут. 9. Вторым этапом явилась окраска цитоплазмы клеток раствором эозина в течение 0,5-2 минут. При удачной окраске срезы имели равномерный желтовато-розовый цвет. 10. Из раствора эозина срезы переносили на 0,5-1 минуту в дистиллированную воду. 11. Затем срезы обезвоживали в 96 спирте (1-2 минуты), переводили в карбол-ксилол (0,5-1 минута), ксилол (0,5-1 минута), заключали в канадский бальзам, покрывая срезы на предметном стекле покровным стеклом. Окраска срезов печени барана по методу ван Гизона
Этот метод окраски соединительной и мышечной тканей широко применяется в гистологической практике. Этим способом коллагеновые волокна окрашиваются в ярко-красный цвет (Елисеев В.Г. и соавт., 1967; Меркулов ГЛ., 1969).
Для окрашивания по методу ван Гизона использовали железный гематоксилин Вейгерта и пикрофуксин. Последний представляет сложную кислую смесь, состоящую из раствора пикриновой кислоты (150 мл) и раствора кислого фуксина (3-5 мл). Методика окраски проводится в несколько этапов: 1)срезы печени барана, взятые из воды, интенсивно окрашивали в свежеприготовленном гематоксилине Вейгерта (3-5 минут); 2)основательно прополаскивали их в двух порциях водопроводной воды; 3)окрашивали в растворе пикрофуксина (3-5 минут); 4)затем промывали в воде (5-10-15 секунд); 5)быстро проводили обезвоживание срезов в 96 спирте (1-2 минуты); 6)просветляли их в карбол-ксилоле, обрабатывали ксилолом и заключали в канадский бальзам; 7)покрывали срезы печени на предметном стекле покровным стеклом. Гистохимические и гистоэнзимологические методы исследований
Для оценки морфофункционального состояния печени овец трех возрастных групп использовали некоторые гистохимические и гистоэнзимологиче-ские методы. В частности, в свежезамороженных срезах печени, полученных на микротом-криостате (МК-25), выявляли содержание гликогена ШИК-реакцией. Уровень содержания гликогена оценивали в условных единицах по Г.Г. Автандилову (1990).
Выявление гликогена ШИК-реакцией (Шифф-йодная кислота) Реакция позволяет выявить гликоген, кислые и нейтральные мукополи-сахариды (ШИК-положительные соединения). С целью контроля ШИК-реакции осуществляли обработку срезов печени барана бурятской грубошерстной породы амилазой, что позволяло отдифференцировать гликоген от других ШИК-положительных соединений. Приготовление рабочих растворов. 1.Раствор перйодата натрия: 2,5 г перйодата натрия растворяли в 100 мл дистиллированной воды. 2.Реактив Шиффа (фуксинсернистая кислота): 1 г растертого парафуксина (С Н ЫзСЬНгО) заливали 200 мл кипящей дистиллированной воды и растворяли при постоянном помешивании в течение 5 минут. Затем раствор охлаждали до 50, фильтровали в банку с притертой пробкой и добавляли 20 мл нормального раствора соляной кислоты. Раствор охлаждали до 25 и всыпали 1 г химически чистого бисульфита натрия (NaHSCb). Полученный раствор оставляли в темноте на сутки. Сохраняется реактив Шиффа в хорошо закупоренной стеклянной посуде в течение 4-6 недель.
Данные гистологических исследований печени овец
Гистологическое строение печени новорожденных ягнят Печень снаружи покрыта висцеральным листком и очень тонкой волокнистой капсулой Глиссона (рис. 4), от которой вглубь органа отходят прослойки из соединительной ткани, разделяющие орган на дольки, представленные едва заметными ниточками и наиболее отчетливо выявляемые вокруг центральной вены.
Паренхима печени имеет дольчатое строение. Долька имеет многогранную форму. В центре каждой дольки расположена центральная вена, в стенке которой выявляется соединительная ткань (рис. 5). Дольки отграничены друг от друга расположением портальных трактов, где находятся ответвления воротной вены и печеночной артерии (междольковые артерии и вена) и желчного протока, которые составляют печеночную триаду. На гистологических срезах печени вместо 5 или 6, как это имеет место у взрослых особей хорошо заметны лишь 2 или 3 портальных тракта, расположенных по периферии дольки (рис. 6).
Паренхиму дольки составляют клетки (гепатоциты), которые окружают центральную вену. Гепатоциты образуют анастомозирующие друг с другом печеночные пластинки (балки). Они при окраске гематоксилин-эозином имеют розовато-фиолетовый, а по ван Гизону — темно-серый цвет, располагаются неправильными рядами. Непосредственно вокруг центральных вен эти ряды расположены несколько радиально (рис. 7), а далее в средней и периферической частях долек этот порядок нарушается, и в расположении ге-патоцитов не удается отметить определенной закономерности. Встречаются дольки, где нет никакого порядка в расположении клеток (рис. 8, 9). Есть участки в паренхиме печени, где дольки можно отделить одну от другой по упорядоченному расположению гепатоцитов по периферии дольки (терминальная, пограничная пластинка) (рис. 10). Предполагается, что в ней находятся камбиальные элементы для гепатоцитов и клеток желчных протоков.
Гепатоциты в дольке неодинакового размера. В середине дольки они несколько увеличены, чем по периферии. Некоторые авторы (Иванов И.Ф., Ковальский П.А., 1976; Хэм А., Кормак Д., 1983) связывают это явление с функциональным состоянием гепатоцитов. Среди гепатоцитов встречаются двухъядерные клетки и очень редко - трехъядерные и полиплоидные гепатоциты, чем компенсировалось размножение клеток, которое тормозится в постэмбриональном периоде (онтогенезе), что подтверждалось отсутствием митотического деления клеток в дольке. Ядра в клетках имели округлую форму и содержали от 1 до 3 ядрышек. Хроматин располагается чаще всего по периферии ядра. В печеночных клетках новорожденных ягнят обнаруживались небольшие включения жиров и липидов. Эти включения не соответствовали патологическим явлениям жирового перерождения, а, видимо, были характерны для определенных физиологических состояний печеночных клеток. Иногда в цитоплазме отмечалось наличие пигментов липофусцина и гемосидерина или других продуктов распада эритроцитов и образования желчи (рис. 11).
Между печеночными балками располагаются синусоидные капилляры, которые образуют анастомозирующую сеть. У новорожденных ягнят синусоидные капилляры несколько растянуты и поэтому печеночные балки дальше отстоят друг от друга, чем обычно. Часто в капиллярах отмечалось присутствие эритроцитов (рис. 12). Синусоидные капилляры выстланы узкими вытянутыми с уплощенным ядром эндотелиальньши клетками. Таких клеток -большинство в выстилке синусоидов. Между эндотелиальньши клетками располагаются более крупные распластанные по внутренней поверхности синусоидов клетки Купфера. Эти клетки вдаются в просвет синусоидов. Клетки Купфера обладают высокой фагоцитарной активностью и имеют мощный лизосомный аппарат. Другие синусоидные клетки, в частности, жиронакап-ливающие клетки (клетки Ито) не обнаруживались.
Из синусов кровь собирается в центральную вену. Далее вливается в поддольковые вены, которые располагаются в междольковой соединительной ткани (вне триад).
Полученные данные свидетельствуют о том, что печень новорожденных ягнят бурятской грубошерстной породы сформировалась анатомически, а гистологически находится на стадии дальнейшего развития. Гистологическое строение печени овец в возрасте 4-5 месяцев.
Капсула печени овец в этом возрасте представляет собой волокнистую структуру, характеризующуюся неупорядоченным расположением волокон. Основу капсулы составляют коллагеновые волокна. Капсула трудно растяжима вследствие того, что пучки коллагеновых волокон располагаются в определенном порядке в несколько слоев друг над другом (рис. 13). В каждом слое волнообразно изогнутые пучки коллагеновых волокон идут параллельно друг другу. Отдельные пучки волокон переходят из одного слоя в другой, связывая их между собой. От капсулы внутрь органа отходят прослойки коллагеновых волокон (рис. 14).
Печень овец этого возраста построена из долек, имеющих форму усеченной пирамиды. В центре дольки располагается центральная вена, к которой ра-диально сходятся печеночные балки, состоящие из печеночных клеток, расположены капилляры (синусоидные), в которых течет смешанная кровь (рис. 15). Стенки капилляров образованы ретикулоэндотелиальными клетками. Клетки и синусы отграничены друг от друга неотчетливо тонкими прослойками соединительной ткани, в которых расположены триады, состоящие из междольковой артерии, междольковой вены и желчного протока, собирающего желчь из внутридольковых желчных капилляров и несущих ее в жел-чевыводящие пути. Гепатоциты составляют подавляющую часть клеток печени и выполняют основную часть свойственных ей функций. Они и имеют многоугольную форму, одно или два ядра. Ядра крупные, сферические с преобладанием эухроматина и с одним — двумя ядрышками. Цитоплазма зернистая воспринимает кислые и основные красители. Функциональная активность гепатоцитов проявляется в их участии в захвате, синтезе, накоплении и химическом преобразовании разнообразных веществ.
Таким образом, в результате проведенных нами морфологических исследований установлено, что печень четырех-пятимесячных баранов, взятых для изучения в осенний период, соответствует по анатомическому, гистологическому строению и функциональной активности печени взрослой овцы этой породы; клетки печени имеют одно или два ядра, доля полиплоидных клеток нарастает с возрастом. Гистологическое строение печени взрослых овец в возрасте 3-5 лет
Плотный и утолщенный слой волокнистой ткани покрывает печень 3-5-летних баранов.
Данные исследований активности сукцинатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в печени овец
Целью настоящего раздела работы явилась оценка клеточной энергетики в печени барана бурятской грубошерстной породы в онтогенезе. Подопытные животные были распределены по трем возрастным группам: 3 новорожденные ягнята (1-3-дневные), 3 - баранчики в возрасте 4-5 месяцев, 3 -взрослые животные в возрасте 3-5 лет.
В печени животных трех возрастных групп определяли активность следующих окислительно-восстановительных ферментов: сукцинатдегидрогена-зы и лактатдегидрогеназы по Нахласу (Э. Пирс, 1962; Р. Лилли, 1969). Активность указанных ферментов выявляли в свежезамороженных срезах печени, полученных на криостате. Оценку уровней активности указанных ферментов окислительно-восстановительного ряда в печени животных проводили по распределению оптической плотности диформазана на микропрепаратах (Стефанов СБ., Кухаренко Н.С., 1988).
Препараты распределяли по оптической плотности: «м» - малая плотность, «с» - средняя плотность, «б» - большая плотность.
Данные по оптической плотности гистоэнзимологической реакции на сукцинатдегидрогеназу в срезах печени баранов сведены в таблицу 10. Из этих данных видно, что в печени взрослых баранов преобладает средняя плотность («с») гранул диформазана 5,0±0,32, (рис. 27), которая превышает таковую у баранов младших возрастов в 1,3 раза. У баранчиков 4-5-месячного возраста гранулы диформазана имеют большую плотность («б»), равную 4,3+0,43, (рис. 28), в то время как эти же показатели меньше у взрослых особей в 1,7, а у новорожденных - в 1,5 раз
В целом, в печени животных всех трех возрастных групп малая плотность («м») гранул диформазана была примерно одних величин. У животных 4-5-месячного возраста и новорожденных отмечена средняя плотность («с») на одном уровне.
Распределение гранул диформазана при гистоэнзимологической реакции на сукцинатдегидрогеназу в дольках печени было различным у овец раз-ных возрастных групп. У взрослых животных активность сукцинатдегидрогеназы была выше в гепатоцитах по периферии долек. У баранчиков в возрасте 4-5 месяцев гранулы диформазана обнаруживались равномерно во всех клетках долек печени и чаще встречались гепатоциты с большой плотностью («б») гранул диформазана
Результаты исследований активности лактатдегидрогеназы в печени овец разных возрастов приведены в таблице 11. Полученные данные свидетельствуют о том, что распределение гранул диформазана при выявлении активности лактатдегидрогеназы в печени испытуемых животных по интенсивности оптической плотности гистоэнзимологическои реакции однотипно с таковым в печени баранов при выявлении активности сукцинатдегидроге-назы. В целом, активность лактатдегидрогеназы в печени у взрослых особей была несколько ниже, чем таковая в печени у баранов 4-5-месячного возраста. В печени новорожденных ягнят активность указанного фермента была значительно ниже, чем таковая в печени 4-5-месячного животного
По данным Н.Т. Райхлина (1967), гранулы диформазана в нормальных печеночных клетках округлой формы, мелкие.
В печени новорожденных ягнят и баранчиков 4-5-месячного возраста гранулы были мелкие и округлой формы. В печени взрослых баранов последние были несколько крупнее. Цитофотометрическая оценка содержания днк в ядрах гепатоцитов и данные о полиплоидных клетках печени овец
Исследование морфофункциональных особенностей печени овцы бурятской грубошерстной породы представляет значительный теоретический и практический интерес, ибо этот вид номадного животного обитает в суровых условиях Забайкалья, отличается неприхотливостью к кормовому режиму, питаясь круглогодично подножным кормом. Известно, что аборигенные бурятские овцы отличались высокой способностью к нагулу и быстрому восстановлению зимних потерь живой массы (Р,П. Пилданов, 1975).
В целом, вышесказанное свидетельствует о хорошей приспособляемости и возможности овец этой породы в экстремальных условиях существования сохранять гомеостаз в организме. Немаловажную роль в восстановлении гомеостаза играет печень — самая крупная железа у животных.
Целью настоящего раздела работы явилась цитофотометрическая оценка печени овец бурятской грубошерстной породы трех возрастных групп: трех новорожденных ягнят в возрасте трех суток, трех особей в возрасте 4-5 месяцев и трех взрослых особей в возрасте 3-5 лет.
Результаты исследований ядер гепатоцитов по классам плоидности показали, что у 3-дневных баранов наблюдается равное содержание клеток с диплоидным, тетраплоидным и промежуточным (2п—»4п) набором хромосом (рис. 32). По сравнению с показателями баранов других возрастных групп отмечается большее содержание гепатоцитов с высокой плоидностью (4п, 8п106 и 16n) (32,6%o) и наличие клеток с промежуточным набором хромосом (4п— 8п, 8п— -16п), чья доля составила 1 &% от общего числа клеток.
В возрасте 4-5 месяцев у баранчиков происходит увеличение числа диплоидных гепатоцитов на 31,4% по сравнению с таковыми у 3-дневных ягнят и снижение количества гепатоцитов с высокой и промежуточной плоидно-стью, которые в этот срок составляют 30,5% от общего числа.
У 3-5-летних баранов клетки представлены в основном диплоидным классом, гепатоциты с высокой плоидностью составляют 23,2%о.
При изучении общего содержания ДНК в ядрах гепатоцитов баранов его наибольшее значение отмечается у новорожденных ягнят. Оно превышает аналогичный показатель 4-5-месячных баранчиков и 3-5-летних баранов на 47 и 61,4%) соответственно
