Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Распространённость эймериоза среди животных и его клиническая картина 9
1.2. Характеристика метаболизма у животных, больных эймериозом 18
1.3. Лекарственные препараты в лечении эймериоза .27
Глава 2. Материалы и методы исследований 34
Глава 3. Распространённость эймериоза кроликов и возрастная динамика специфических функций печени 41
3.1. Распространённость эймериоза кроликов в Саратовской области 41
3.2. Характеристика мочевинообразовательной функции печени 52
3.3. Состояние глюконеогенной функции печени 56
3.4. Изменение белково-азотистого обмена у здоровых и больных эймериозом кроликов под влияние глицериновой нагрузки 64
Глава 4. Влияние днтрима на показатели азотистого обмена и глюконеогенную функцию печени кроликов больных эймериозом 71
4.1. Состояние азотистого обмена 72
4.2. Состояние глюконеогенной функции печени после лечения 83
Глава 5. Влияние пробиотических препаратов на распространение эймериоза и изменение функций печени у больных кроликов 89
5.1. Действие эффективных микроорганизмов (ЭМ) 89
5.1.1. Сдвиги азотистого обмена 90
5.1.2. Изменение глюконеогенной функции печени 93
5.2. Действие ветома-1.1 97
5.2.1. Характеристика азотистого обмена 98
5.2.2. Состояние глюконеогенной функции печени 106
Заключение 111
Выводы 120
Список использованных литературных источников 122
- Характеристика метаболизма у животных, больных эймериозом
- Характеристика мочевинообразовательной функции печени
- Состояние глюконеогенной функции печени после лечения
- Сдвиги азотистого обмена
Введение к работе
Актуальность темы. Эймериоз (кокцидиоз) широко распространен среди сельскохозяйственных животных и птицы. Частота эймериоза, например, у взрослых кур составляет 57,3%, у цыплят до 100% [136], а у кроликов - 93%-100% [55, 97]. Значительные потери в животноводстве от этой болезни происходят за счет высокой смертности, которая у кроликов может достигать 85% , а у цыплят - 100 %. Кроме того, больные животные существенно отстают в росте и развитии, а потеря живой массы у них составляет 12-30% [55, 97].
В процессе развития эймериоза у животных развивается дисбаланс белковых фракций крови, изменяется всасывание аминокислот, активность ферментов крови и желудочно-кишечного тракта, нарушается обмен липидов, своеобразные изменения претерпевает картина периферической крови [31, 79,97,146,].
Для лечения эймериоза с переменной эффективностью используются препараты следующих групп: сульфаниламиды (норсульфазол, сульфадимезин, сульфамонометоксин), нитрофураны (фурацилин, фуразолидон, фурак-лин), антибиотики (канамицин, тетрациклин, хлорамфеникол). Подобный значительный арсенал лекарств косвенно свидетельствует о ещё недостаточной изученности этиологии, патогенеза и клиники эймериоза. Действительно, в литературе, например, отсутствуют данные о влиянии эймериоза на такие специфические функции печени как глюконеогенная и мочевинообразова-тельная, которые интегрируют обмен аминокислот, углеводов и липидов. Нет сведений о влиянии лекарственных препаратов, применяемых для лечения эймериоза, в частности кроликов, на указанные функции печени. Между тем выяснение функционального состояния печени позволит, на наш взгляд, наметить новые пути патогенетически обоснованной коррекции обмена ве-
5 ществ и терапии животных больных эймериозом, что является весьма актуальной задачей современной ветеринарии.
Цель работы состояла в изучении влияния препаратов химиотерапев-тического и пробиотического генеза на динамику белково-азотистого, углеводного обмена, глюконеогенной и мочевинообразовательной функций печени кроликов разного возраста, больных эймериозом.
Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить в возрастном аспекте сдвиги белково-азотистого и углевод
ного обмена у здоровых и больных эймериозом кроликов разного возраста.
2. Изучить состояние мочевинообразовательной и глюконеогенной
функций печени у здоровых и больных эймериозом кроликов разного возрас
та.
3. Оценить эффективность лечения кроликов больных эймериозом хи~
миотерапевтическим (дитрим), и пробиотическими (ветом-1.1 и «Байкал
ЭМ1») препаратами по состоянию метаболизма, глюконеогенной и мочеви
нообразовательной функций печени.
Научная новизна. Установлено, что эймериоз кроликов вызывает существенные нарушения обмена азотистых соединений и мочевинообразовательной функции печени. С возрастом в крови у больных животных возрастает содержание мочевины, усиливается распад аргинина, повышается активность аланинаминотрансферазы и аргиназы, что свидетельствует об усилении орнитинового цикла мочевинообразования. Впервые установлено, что у кроликов больных эймериозом для детоксикации аммиака в большей степени, чем в норме используется система глутаминовая кислота-глутамин.
У кроликов разного возраста, больных эймериозом, значительно усиливается глюконеогенная функция печени. Это проявляется в увеличении скорости глюконеогенеза, приросте глюкозы* образовавшейся из глицерина, снижении толерантности периферических тканей к глюкозе глюконеогенного генеза.
Установлено, что под влиянием химиотерапевтического препарата дит-рим у больных животных разного возраста улучшается клиническое состояние, что прямо коррелирует с уменьшением числа ооцист в фекалиях. Препарат способствует нормализации белково-азотистого обмена и уменьшению интенсивности глюконеогенной и мочевинообразовательной функций печени. В результате лечения кроликов, больных эймериозом, пробиотическим препаратом ветомом-1.1 в фекалиях у них полностью исчезают ооцисты, значительно улучшается клиническое состояние, восстанавливается нарушенный обмен азотистых и углеводных соединений, а также глюконеогенная и мочевинообразовательная функции печени. Полученные данные свидетельствуют о том, что ветом-1.1 является более эффективным средством для лечения эймериоза, чем дитрим. В то же время данные копрологического исследования и результаты биохимических исследований показали неэффективность препарата «Байкал ЭМ1» для терапии кроликов, больных эймериозом.
Практическая значимость. Материалы диссертационной работы значительно расширяют, углубляют и дополняют сведения о патогенезе и лечении эймериоза кроликов разного возраста, больных эймериозом. Результаты исследований, изложенные в диссертации, рекомендуются для использования в учебном процессе при изучении дисциплин «Биохимия», «Клиническая биохимия», «Паразитология»; на курсах по повышению квалификации ветеринарных врачей, а также при написании учебников и учебных пособий.
Из трёх исследованных препаратов (дитрим, ветом-1.1, эффективные микроорганизмы) наиболее оправданным для терапии кроликов больных эймериозом является пробиотический препарат, полученный из Bacillus subtilis, что позволяет рекомендовать его хозяйствам для лечения указанного заболевания.
7 Основные положения, выносимые на защиту:
У кроликов разного возраста эймериоз вызывает значительные нарушения белково-азотистого обмена, а также глюконеогенной и мочевинооб-разовательной функций печени.
Химиотерапевтический препарат дитрим у кроликов, больных эйме-риозом, восстанавливает нарушенный метаболизм, специфические функции печени, существенно уменьшает число ооцист в организме.
Лечение эймериоза кроликов пробиотическим препаратом ветом-1.1 полностью избавляет кроликов от ооцист эймерий, нормализует обмен бел-ково-азотистьгх соединений, синтез глюкозы de novo и мочевинообразова-тельную функцию печени.
Апробация работы. Основные материалы исследований были представлены на: Всероссийских научно - практических конференциях «Актуальные проблемы ветеринарной, патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных» (г. Саратов, 2007 и 2008 г.г.); Всероссийских научно -практических конференциях «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (г. Саратов 2006, 2007 и 2008 г.г.); Всероссийской научно-практической конференции, .посвященной 119-й годовщине со дня рождения Н.И. Вавилова (г. Саратов, 2006г.); Международной научно-практической конференции, посвященной 120-й годовщине со дня рождения Н.И. Вавилова (г. Саратов, 2007 г.); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы развития АПК» (г. Саратов, 2006 г.); научно-практической конференции молодых учёных Приволжского федерального округа «Роль молодых учёных в реализации национального проекта «Развитие АПК» (г. Саратов, 2007г.); Международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию Саратовского госагроуниверситета (г. Саратов, 2008 г.); Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию со дня основания биотехнологического факультета «Актуальные проблемы зоотехнии, биотехнологии, аквакультуры и биоэкологии» (г. Саратов, 2009г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ из них одна статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, заключения, выводов и списка использованных литературных источников, включающего 217 наименования, из них 64 иностранных. Работа иллюстрирована 17 таблицами, 26 рисунками и изложена на 140 страницах компьютерного текста.
Характеристика метаболизма у животных, больных эймериозом
Для понимания механизмов взаимосвязей микро- и макрообъектов важное значение имеют результаты исследований о влиянии паразита на биохимические процессы и иммунологические реакции организма хозяина. В этом отношении своеобразные изменения претерпевает картина периферической крови. Установлено, например, что в крови цыплят больных эймериозом уменьшается число эритроцитов и содержание гемоглобина. Причём у неиммунизированных цыплят, заражённых Е. tenella, содержание гемоглобина, число эритроцитов и процент гематокрита, число лимфоцитов и базофи-лов в крови понижаются, начиная уже с пятого дня после заражения, достигают максимума к седьмому дню и приближаются к норме к девятому дню от начала заражения. Общее число лейкоцитов, а также моноцитов и эозинофи-лов у таких цыплят увеличивается с девятого дня после заражения. Второй подъём количества эозинофилов отмечается к четырнадцатому дню от начала заражения [7,146, 201].
У больных эймериозом кроликов в крови снижается число эритроцитов, содержание гемоглобина, гематокрит при одновременном возрастании общего числа лейкоцитов. Отмечено также нарушение окислительно-восстановительных процессов, о чём свидетельствует снижение активности каталазы. При своевременном лечении кроликов эти показатели восстанавливаются до нормы [97]. При эймериозе молодняка овец уже с первых дней после заражения отмечается постепенное снижение количества эритроцитов и гемоглобина. У них развивается лейкоцитоз, эозинофилия, наблюдается нейтрофильный сдвиг влево [79, 80]. Итак, под влиянием эймерий в организме животных разных видов развивается анемия, появляются сдвиги характерные для аллергических состояний, по-видимому, ослабляются гуморальные звенья иммунитета.
Одним из показателей ответной реакции организма животного на внедрение паразита является изменение белков крови. Установлено, что при экспериментальном кокцидиозе цыплят, вызванном Е. tennella (доза 3 тыс. ооцист) на 5-й день инвазии содержание общего белка в крови значительно снижается, а на 7-й день, напротив, оно резко увеличивается. К этому сроку отмечено возрастание всех глобулиновых фракций крови. При кокцидийной инвазии цыплят гипопротеинемия может быть следствием кровопотери. Действительно, за период болезни цыплята могут терять 40-63% общего объёма крови [145, 146, 147]. Наиболее важной причиной кровопотерь при цекаль-ном кокцидиозе являются деструктивные изменения в стенках кишечника. В самом деле, при воздействии Е. tennella поражёнными оказываются слизистая, подслизистая оболочки и даже мышечная ткань. Кроме того, шизонты и мерозоиты второй генерации содержат большое количество мукополисахо-ридов, роль которых в возникновении кровотечений может быть решающей. Гипопротеинемии способствует также увеличение проницаемости капилляров почек, кишечника и других органов [54, 167, 178].
Значительные изменения белковых фракций при печёночной форме эймериоза происходят и у кроликов. В препатентный период и период клинического развития болезни в крови у них уменьшается абсолютное содержание альбуминов и бета-глобулинов. В то время как содержание альфа — и гамма-глобулинов, напротив, увеличивается [1]. У больных ягнят также наблюдается уменьшение концентрации альбуминов в сыворотке крови [79, 80]. При экспериментальном заражении поросят Е. debliecki в дозе 5x10 спо-рулированных ооцист происходят глубокие изменения в белковом составе сыворотки крови, проявляющиеся в виде диспротеинемии. Причиной снижения уровня альбуминовой фракции при эймериозе поросят, по-видимому, является, наряду с поражением кишечника, увеличение проницаемости капилляров почек, ведущее к потере высокодисперсных альбуминов. Увеличение содержания альфа-глобулинов, видимо, связано с выработкой защитных соединений в результате токсического раздражения РЭС, а гамма — глобулинов — с выработкой антител и нейтрализацией токсических продуктов, выделяемых эймериями в процессе жизнедеятельности [31]. Сравнительное изучение всасывания некоторых аминокислот (лизина, глицина, метионина) в кишечнике позволяет считать, что этот важнейший процесс зависит в основном от биологии кокцидий: локализация в кишечнике, различная степень патогенности и др. Наибольшие нарушения всасывания аминокислот обнаружены в острый период кокцидиозной инвазии. Причём абсорбция лизина, метионина и глицина у цыплят при эймериозе, вызванном E.tenella повышена, а при инвазировании E.acervulina и Е.maxima всасывание этих же аминокислот, напротив понижено. Это, например, у больных телят сопровождается усилением выделения азотистых веществ [7, 145,146].
До 12-го дня после заражения ягнят эймериями имеет место увеличение в сыворотке крови активности как щелочной (ЩФ) так и кислой фосфа-тазы (КФ). Затем, в т.ч. и до конца опыта, активность указанных фосфатаз резко падает [78]. Активность аспартатаминотрансферазы (ACT) крови кроликов резко повышается, начиная с третьего дня после заражения, Она находится на высоком уровне до восьмого дня (в. два раза выше, чем до заражения), а затем снижается до исходных величин. Активность аланинами-нотрансферазы (АЛТ) также повышается, начиная с третьего дня, но не столь значительно, как ACT. Однако уже к восьмому дню после заражения активность этого фермента резко возрастает (почти в семь раз). Эти данные с большой долей вероятности свидетельствуют о вовлечение печени в патологический процесс [1].
В связи с тем, что большинство видов кокцидий развивается в кишечнике, особый интерес представляют сведения об изменении активности кишечных ферментов. Показано, что у ягнят с фекалиями выделяется большое количество энтерокиназы - до 100 ед/г. Причём, активность этого фермента изменяется волнообразно, т.е. периоды повышения сменяются периодами некоторого снижения. Так, активность энтерокиназы в фекалиях начинается повышаться к 8-14 дню после заражения и достигает 150-225 ед/г. Затем активность фермента снижается, не достигая, однако, исходного уровня. Следующий подъём активности энтерокиназы наблюдается к 13-21 дням экспе 21 римента, до 422-682 ед/г. Выделение энтерокиназы с фекалиями у большинства ягнят приходит к норме на 26-й день [78].
У большинства больных ягнят выделение ферментов с фекалиями, сопровождается обострением болезни и связано со стадиями эндогенного цикла развития эймерий. Так, в химусе двенадцатиперстной и начальной части тощей кишки у павших ягнят активность щелочной фосфатазы была в 18,5-24,4 раза ниже, чем у здоровых животных, а энтерокиназы - в 1,5-7,1 раза ниже. В слизистой этих отделов пищеварительного канала активность щелочной фосфатазы была меньше в 13-14 раз, а энтерокиназы — в 9,6 раза, по сравнению со здоровыми животными [78, 80].
После заражения E.tenella слизистая оболочка поражённого участка кишечника цыплят утрачивает активность щелочной фосфатазы, особенно при развитии шизонтов 2-й генерации [7, 145, 146, 185]. Это связано с совпадением локализации эндогенных стадий развития паразита с местом секреции фермента и обусловлено двумя факторами: поражением большого числа эпителиальных клеток тонкого отдела кишечника, продуцирующих щелочную фосфатазу, и подавлением активности уже синтезированного фермента продуктами жизнедеятельности кокцидий.
Характеристика мочевинообразовательной функции печени
Для оценки состояния белково-азотистого обмена и мочевинообразовательной функции печени у здоровых и больных эймериозом кроликов мы изучили в возрастном аспекте динамику в крови общего белка, ферментов трансаминирования, а также метаболитов орнитинового цикла и системы глутаминовая кислота-глутамин. Некоторые из полученных результатов представлены в таблице 3. Как видно из таблицы 3 в крови у здоровых кроликов к шестому месяцу несколько возрастает содержание общего белка, мочевины, аммиака, глутамина и орнитина соответственно на 3,7; 2,7; 10,0; 50,0; и 4,6% по сравнению с двухмесячными животными. У здорового поголовья кроликов с возрастом повышается и активность ферментов трансаминирования. Так, активность ACT у шестимесячных кроликов была выше на 17,2%, а АЛТ - на 31,8%, чем у двухмесячных животных. Причём у всех здоровых кроликов активность ACT всегда превышала активность АЛТ.
Исходя из этого коэффициент де Ритиса (отношение АСТ/АЛТ) для здоровых кроликов 2, 3 и 6 мес. составил соответственно 1,44±0,02; 1,49±0,02 и 1,29±0,01. В противоположность этому активность лактатдегидрогеназы у здоровых кроликов с возрастом несколько снижается. Так, у молодняка в возрасте двух месяцев она была равна 1787±15,30 U/L, не изменялась у трёхмесячных и снижалась всего на 3,5% у шестимесячных. Полученные данные отражают онтогенетическую интенсивность становления обмена веществ у здоровых животных.
Что касается больных кроликов, то в крови у них с возрастом по сравнению с контролем уменьшается содержание общего белка, особенно значи тельно у 6 месячных (Р 0,001) и, напротив, повышается уровень глутамина (2-3 месячные кролики) и мочевины (взрослые животные).
Весьма существенно, что у больных животных всех возрастов содержание орнитина в крови всегда оказывалось статистически достоверно более низким (0,02 Р 0,001), чем в контрольных группах кроликов, находившихся на частном подворье и у которых эймерии в фекалиях отсутствовали.
Данные об изменении активности аргиназы, как конечного фермента орнитинового цикла мочевинообразования, у обследованных кроликов представлены на рисунке 10. Полученные нами результаты свидетельствует о том, что у здоровых кроликов с возрастом повышается активность аргиназы. Иными словами, у них возрастает распад аминокислоты аргинина и как следствие, в крови возрастает содержание мочевины и орнитина. Ещё более яркая картина в этом отношении оказалась характерной для кроликов больных эй-мериозом. В самом деле, активность аргиназы крови у них с возрастом повышалась более значительно, чем в норме. Так, активность аргиназы у двух— и трёхмесячных больных кроликов была выше соответственно на 36,6% (Р 0,05) и 81,8% (Р 0,001), а у взрослых животных - на 16,6% (Р 0,05) по сравнению с контрольными животными.
Эти данные прямо согласуются с увеличением в крови больных кроликов содержания мочевины (6 мес.) и орнитина. Действительно, если у трёх— и шестимесячных здоровых кроликов концентрация орнитина в крови, по сравнению с группой двухмесячных кроликов, увеличилась всего на 1,0-1,04 %, то у больных животных аналогичных групп — на 1,12-1,15%.
Неоднозначные данные были получены при определении в сыворотке крови содержания аммиака и глутамина. Так, у больных эймериозом кроликов статистически достоверных изменений содержания аммиака в крови мы не наблюдали. В то же время у молодняка больного эймериозом повышалось содержание глутамина на 50% (Р 0,05), и оставалось без изменения у взрослых животных. Анализируя полученные данные можно предположить, что для детоксикации аммиака у больных животных используется в большой степени, чем в норме система глутаминовая кислота-глутамин.
У больных животных своеобразным образом изменялся спектр ферментов, который характеризуют степень цитолиза в различных органах. Установлено, что активность ACT у больных кроликов была практически на том же уровне, что и у контрольных животных. В то же время активность АЛТ у больных животных всех возрастных групп была существенно выше, чем в контроле: у двухмесячных - на 106,8%, у трёхмесячных - на 127,3%, у взрослых - на 63,8%). (рис. 11). В результате этого коэффициент де Ритиса у 2, 3 и 6-месячных больных кроликов был равен соответственно 0,71±0,05, 0,72±0,02, 0,78±0,02, т.е. по сравнению с нормой он уменьшился соответственно на 50, 51,7 и 39,5% (рис. 12). Как известно, аланинаминотрансфераза наиболее адекватно характеризует функциональное состояние печени. Повышение активности этого фермента у больных кроликов с большой долей достоверности свидетельствует о распаде гепатоцитов.
Весьма существенно, что именно в печени при аутопсии нами обнаружено наибольшее число ооцист эймерий. Что же касается активности ЛДГ, то у больных животных с возрастом она снижалась и оказывалась ниже, чем у контрольных кроликов. У двухмесячных кроликов с эймериозом активность ЛДГ в крови снизилась на 37,2%, у трёхмесячных - на 84,4%, а у шестимесячных на - 3,7% (рис. 13). Полученные нами данные свидетельствуют о глубоких, в т.ч. метаболических, нарушениях функций органов у кроликов разного возраста, поражённых эйме-риями.
Состояние глюконеогенной функции печени после лечения
Теперь рассмотрим данные о состоянии глюконеогенной функции печени у кроликов после лечения дитримом. После лечения у кроликов всех возрастных групп уровень глюкозы натощак снижается. Причём если у двухмесячных на 1,1%, то у 3-х и 6-ти месячных на 7,5 и 7,6% соответственно. Через 1 час после введения глицерина концентрация глюкозы в крови повысилась у опытных животных всех возрастных групп: у двухмесячных - на 17,0% (Р 0,025), у трёхмесячных - на 9,4%(Р 0,025), а у взрослых - на 13,6% (Р 0,025). Через два часа после введения глицерина данные об уровне глюкозы в крови у кроликов до лечения и после лечения принципиально отличались. Если у больных кроликов всех возрастных групп данный показатель повышался, то после применения препарата концентрация глюкозы снижалась. У двухмесячных кроликов по сравнению с предыдущей пробой на 3,6% (Р 0,025) у трёхмесячных - на 5,2% (Р 0,025), а у шестимесячных - на 4,3% (Р 0,025). Через три часа после введения глицерина уровень глюкозы в крови продолжал снижаться, оказываясь лишь незначительно более высоким, чем в тощаковых фракциях (рис. 21).
Полученные результаты свидетельствуют о том, что дитрим, по данным гликемических кривых, оказал отчётливое позитивное влияние на обмен углеводов животных с эймериями.
Далее были рассчитаны показатели, характеризующие глюконеогенез. Полученные данные представлены в таблице 13. Из таблицы 13 следует, что прирост новообразованной глюкозы у животных после лечения значительно снижался. Этот показатель оказался ниже, чем до лечения у двухмесячных кроликов в 2,5 раза (Р 0,001), а у трёх- и шестимесячных животных соответственно в 2,9 (Р 0,001) и 5,1 раза (Р 0,001). Аналогичные данные были получены нами при расчёте скорости глюконеогенеза. Показано, что у двухмесячных кроликов после лечения дитримом скорость глюконбогенеза снизилась по сравнению с больными животными в 2,6 раза, у трёхмесячных кроликов и взрослых животных - в 4,1 раза. Иными словами, дитрим отчётливо снижал избыточно повышенную глюконеогенную функцию печени у кроликов больных эимериозом, отражая нормализацию превращения важнейших соединений, в первую очередь аминокислот, в глюкозу.
Что касается толерантности периферических тканей к глюкозе (табл. 13), то после лечения дитримом она оказывалась всегда ниже, чем у больных животных всех возрастных групп. Так, у двухмесячных леченых животных данный показатель оказался ниже на 47,9% (Р 0,001), а у трёх- и шестимесячных - на 50% (Р 0,001). Следовательно, дитрим эффективно инициировал транспорт глюкозы в периферические ткани. Это отражает более полное использование глюкозы в тканях больных кроликов.
Далее мы сравнили данные полученные нами при изучении глюконеоген-ной функции печени у здоровых кроликов и животных после лечения дитримом. Установлено, что почасовые изменения концентрации глюкозы в крови после нагрузки глицерином у кроликов обеих групп оказались одинаковыми. А именно, уровень глюкозы в крови и у контрольных и у кроликов после лечения через один час после нагрузки повышался, а в последующие два часа снижался. Прирост новообразованной глюкозы в крови у больных животных после лечения дитримом существенно снижался. Тем не менее, этот показатель оставался по-прежнему выше контроля: у двухмесячных кроликов на 55,1% (Р 0,001), а у трёх- и шестимесячных животных соответственно на 60,75 (Р 0,001) и 38,5% (Р 0,001). Близко к этим данным по смыслу находится и скорость глюконеоге-неза. Данный показатель у животных после лечения снижался, но всё же оставался выше контрольных значений на 56,3% (Р 0,001), у трёхмесячных - на 66,7% (Р 0,001), а у взрослых - на 50,0% (Р 0,001). Кроме того, через три часа после введения глицерина у подопытных животных мы не наблюдали ещё возврата к тощаковому уровню глюкозы в крови. Значит, толерантность периферических тканей к глюкозе у таких животных оставалась, несмотря на лечение более высокой, чем у контрольных животных. Можно предположить, что это связано с токсическими продуктами распада или жизнедеятельностью эймерий, которые остаются в организме кроликов после лечения и препятствуют проникно-вению глюкозы в периферические ткани.
Таким образом, дитрим эффективен для лечения эймериозов кроликов различных возрастных групп. Причём, наибольший терапевтический эффект отмечается у двухмесячных кроликов. Это выражается в значительном улучшении клинического состояния животных, нормализации аппетита, физической активности. Шерсть у них блестящая, а кал сформированный. Жел-тушность слизистых оболочек не наблюдается. Болезненность при пальпации в области печени отсутствует.
Позитивные клинические сдвиги коррелируют со сдвигом обмена веществ. Об этом свидетельствуют данные биохимического исследования сыворотки крови животных после лечения. Причём, необходимо отметить, что азотистый обмен восстанавливается несколько хуже, чем углеводный. Так, большинство исследованных биохимических показателей, по которым можно судить о состоянии белково-азотистого обмена под влиянием дитрима, по сравнению с больными животными не претерпели значительных изменений. В большей степени дитрим оказал позитивное влияние на активность исследованных ферментов. Что же касается глюконеогенной функции печени, то у больных кроликов до лечения прирост новообразованной глюкозы и скорость глюконеогенеза значительно превышали контрольные значения. После применения препарата наблюдается отчётливая тенденция к их снижению, свидетельствуя о значительном улучшении углеводного обмена.
Сдвиги азотистого обмена
Результаты, полученные нами при исследовании сыворотки крови леченых кроликов натощак, а также после глицериновой нагрузки представлены в таблице 14. Из таблицы 14 следует, что после применения препарата эффективных микроорганизмов у больных животных в сыворотке крови су-щественно не изменялся уровень общего белка, орнитина и аммиака. В то же время у подопытных животных повысилось содержание мочевины и глута-мина. Так, концентрация первого метаболита повышалась на 10 и 20 день эксперимента соответственно на 12,4 и 9,8 %, а на 30-ый день — на 15,7%. А концентрация глутамина на 10 день исследований была на 50% (Р 0,001) выше, чем у больных животных и оставалась на том же уровне и к 30-му дню опыта. По нашему мнению, полученные результаты свидетельствуют о способности эффективных микроорганизмов повышать в организме подопытных кроликов активность системы, направленной на снижение уровня аммиака в крови.
Примечание: числитель -тощаковые значения, знаменатель - через три часа после введения глицерина. При определении активности ACT и ЛДГ в сыворотки крови леченых кроликов мы не обнаружили существенных изменений по сравнению с их активностью у нелеченых кроликов в возрасте двух месяцев. В то же время активность АЛТ под влиянием ЭМ-препарата была выше, чем у больных эйме-риозом кроликов до лечения: на 10-ый день исследований на 20,7% (Р 0,025), а на 20-ый и 30-ый день - на 13,0 и 17,4% соответственно. Коэффициент де Ритиса в свою очередь на протяжении всего опыта оказывался ниже, чем у больных кроликов, которым не задавали препарат. Наибольшее изменение активности аргиназы мы наблюдали на 20-ый день применения «Байкала ЭМ1». Данный показатель оказался выше, чем у больных нелеченых животных на 25% (Р 0,025).
Представим теперь данные, полученные нами через три часа после нагрузки глицерином. Установлено, что у животных, которым задавали препарат эффективных микроорганизмов, глицериновая нагрузка статистически достоверно не изменяла в сыворотке крови содержание общего белка, орни-тина и аммиака. Однако у этих животных уровень мочевины повысился по дням эксперимента на 16,9, 8,4 и 15,7%. Повысилась в сыворотке крови и концентрация глутамина. Через 10 дней после начала опыта уровень данного метаболита повысился на 50% (Р 0,001) и не изменялся в последующие дни. Что же касается активности ферментов то наибольшие изменения, по сравнению с больными нелечеными животными, мы наблюдали в отношении аргиназы. Активность данного фермента оказалась выше на 10, 20 и 30 дни исследования соответственно на 18%, 8,25 и 12,5%. Активность АЛТ у подопытных кроликов повысилась через 10 дней на 11,5%, а в последующие дни на 3,1 и 4,2%. Активность ACT и ЛДГ в сыворотке крови подопытных кроликов по сравнению с данными полученными до лечения после нагрузки глицерином существенно не изменялась.
Итак, данные полученные при исследовании сыворотки крови кроликов после применения «Байкала ЭМ1» подтверждают отсутствие терапевтического эффекта при лечении эймериоза кроликов. В самом деле, болыпинст 93 во биохимических показателей не отличалось от данных полученных при исследовании сыворотки крови больных животных. Весьма существенно, что в ходе эксперимента повышалась активность АЛТ, что может свидетельствовать об отсутствии влияния ЭМ-препарата на восстановление нарушенных функций печени. Нагрузка глицерином дополнительно проявила существенное нарушение метаболизма у подопытных кроликов, которым вводили ЭМ-препарат.
Для изучения влияния ЭМ-препарата на состояние глюконеогенной функции печени, как и в предыдущих исследованиях, мы использовали глицериновую нагрузку. Изменения концентрации глюкозы после глицериновой нагрузки у больных кроликов, получавших ЭМ-препарат, представлены на рисунке 22. Из рисунка 22 следует, что в течение всего периода применения ЭМ-препарата концентрация глюкозы в крови подопытных кроликов значительно не изменялась. У подопытных кроликов, как и у больных, нелеченых животных, уровень глюкозы в крови повышался через 1 час после нагрузки глицерином. Через два часа после введения глицерина уровень глюкозы во все дни исследования повышался в среднем на 14,3%. Через три часа после нагрузки глицерином, уровень глюкозы также соответствовал результатам, полученным при исследовании сыворотки крови нелеченых животных. Следовательно, препарат эффективных микроорганизмов не нормализовал состояние гликемических кривых у кроликов больных эймериозом.
Что же касается показателей глюконеогенеза, то они у подопытных животных оказались выше, чем у больных кроликов, которым не задавали препарат (таб. 15). Так, прирост глюкозы через 10 дней после начала эксперимента был выше у леченых кроликов на 18,6%), а через 20 и 30 дней - на 34,1 и 20% (Р 0,05) соответственно. Скорость глюконеогенеза в те же дни исследований оказалась выше соответственно на 13,7%, 11,4 и 20,5% (Р 0,05).
