Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Материалы и методы 46
1.1. Определение параметров острой токсичности фезола 51
1.2. Методика изучения терапевтической эффективности фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней 52
1.3. Методика изучения влияния фезола на организм животных 62
1.3.1. Испытание фезола па перепосішость на свиньях .62
1.3.2. Изучение влияния фезола на морфологические и физико-химические свойства крови и мочи свиней 63
1.3.3. Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств фезола на беременных крысах 64
ГЛАВА 2. Изучение терапевтической эффектив ности фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней 72
2.1. Определение терапевтической дозы фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней 72
2.2. Производственное испытание фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней 82
2.3. Комиссионное испытание фезолапри аскариозе и эзофагостомозе свиней 83
ГЛАВА 3. Изучение влияния фезола на организм животных 90
3.1. Оценка острой токсичности фезола 90
3.2. Оценка влияния фезола на организм свиней 91
3.3. Результаты изучения эмбриотоксических и тератогенных свойств фезола на белых беспородных крысах 99
ГЛАВА 4. Определение сроков выведения остаточных количеств фезола из организма свиней 108
4.1. Методика определения остаточных количеств фенбендазола в организме свиней, обработанных препаратом фезол 109
4.2. Результаты определения сроков выведения фезола из организма свиней 113
ГЛАВА 5. Определение экономической эффек тивности применения фезола в свиноводстве 122
Выводы 132
Практические предложения 133
Список литературы 134
Отечественная 134
Иностранная 151
Приложение 162
- Методика изучения терапевтической эффективности фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней
- Производственное испытание фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней
- Оценка влияния фезола на организм свиней
- Результаты определения сроков выведения фезола из организма свиней
Введение к работе
Актуальность работы. За последние пятнадцать лет в пашей стране произошло значительное снижение производства промышленных товаров и продуктов питания. В девяностые годы много колхозов и совхозов было преобразовано в акционерные общества различного типа. В одних хозяйствах развал производственной базы и снижение оборотных средств привело к полному прекращению хозяйственной деятельности, в других -до сих пор эксплуатируется устаревшее оборудование и оставшееся поголовье, однако в некоторых хозяйствах наблюдается увеличение мясной и молочной продукции.
Экономический кризис на российском продовольственном рынке характеризуется сочетанием резкого сокращения производства товарной продукции с трудностью реализации отдельных ее видов из-за затоваривания по причине дисбаланса потребительского спроса и предложения товаров, острой конкуренции отечественных и зарубежных товаропроизводителей. Сложившаяся ситуация подрывает экономическую безопасность страны. Крупномасштабные закупки продуктов питания и сырья для их производства ограничивают возможность использования валютных ресурсов на другие нужды, являясь причиной роста внешней задолженности. Страна все в большей степени вынуждена расплачиваться за продовольственный импорт экспортом не возобновляемых природных ресурсов (ГИ. Макин, 1998).
На сегодняшний день, на фоне преобладания импортной свинины в потребительской корзине россиян, преимущественное значение в увеличении производства мяса и получения сырья животного происхождения должно иметь развитие отечественного свиноводства. В этой традиционной отрасли животноводства ощутимый экономический ущерб причиняют различные гельминтозы. Вред, наносимый свиноводству, складывается из надежа животных, снижения их упитанности, задержки роста и развития молодняка. Происходит уменьшение количества получаемого мяса и ухудшения его качества, выбраковка мяса и мясных продуктов на убойных и мясоперерабатывающих предприятиях. Наряду с этим повышается расход кормов, связанный с плохой усвояемостью их у больных животных, снижается также плодовитость и качество получаемого потомства (Л.П. Погребняк, 1956; Е.И. Малахова, 1971; Р.Т. Сафиуллин, 1976, 1984, 1987, 1990; Т.В, Stewart, О.М. Hale, 1985; T.J. Kennedy et al., 1988).
При массовом применении антгельминтных средств в ветеринарии, их успешное применение возможно только при наличии у них определенных качеств. Кроме эффективности, антгельминтный препарат должен быть экономичным, удобным в применении и не обладать побочным действием и отдаленными последствиями.
В нашей стране для лечения и профилактики нематодозов свиней применялись различные препараты: сантонин, фтористый и кремнефтористый натрий (Р.С. Шульц, 1931; И.А. Щербович, 1935; Б.А. Тахистов, 1956; A.M. Рубцова, М.В. Носонова, 1957 и др.), соединения кадмия и хлорофоса (М.А. Воробьев, 1962), соли шшеразина (О.Я. План, 1962; B.C. Ершов, и др., 1963; М.А. Воробьев, 1963; И.Г. Солоненко и др., 1983), нилверм и тиабендазол (В.А. Матузенко, и др., 1971; В.М. Никитин, 1977; М.А. Петрухин, 1984), мебендазол (М.А. Петрухин, 1984), гигромицин, террамицин (B.C. Ершов, Е.И. Малахова, М.Н. Федотова, 1967; Е.И. Малахова, 1972, 1974), бенашш (B.C. Любавин, 1976), фенбендазол (панакур) (B.C. Любавин, И.Г. Солоненко, А.Д. Утепов, 1983), фенбендазол и тивидин (Р.Т. Сафиуллин, 1985, 1986) и др.
Однако в последние годы произошла разбалансированность отечественного производства лекарственных субстанций. В частности, если в 1992 году общий объем производимых в нашей стране субстанций составлял более 18,5 тыс. тонн (11,5 - несинтетические лекарственные средства; 3,8 - витамины и более 3 - антибиотики), то в 2003 г. произвели б менее З тыс. тонн (1,2; 850 и 900 тонн, соответственно). Практически отсутствует производство пестицидов. Разумеется, в такой ситуации их место заняли аналогичные препараты зарубежных фирм (Б.А. Тимофеев, 2005).
В настоящее время производные бензимидазола (фенбендазол, мебендазол, албендазол и др.) продолжают играть ведущую роль в борьбе с гельминтозами (Н.В, Демидов, 1981Д982; Н.В. Демидов и др., 1988; Р.Т. Сафиуллин, 1990). Фенбендазол широко применяется при нематодозах свиней (аскариозе, эзофагостомозс и трихоцефалезе), О его эффективности свидетельствуют и многие зарубежные авторы (С. Baeder et al., 1974; D. Duwel, 1977, 1980; R. Kircsch, 1978; K. Romaniuk et ai., 1978, 1981; M.K. Bali etal., 1980; D.G. McBeath, 1981; T.B. Stewart et al., 1981).
Согласно инструкции при аскариозе свиней препарат применяют в дозе 10 мг/кг двукратно в течение 1 дня в смеси с кормом. При высокой зараженности - в дозе 15 мг/кг двукратно в течение 1 дня. При эзофагостомозе свиней препарат применяют по той же схеме. При трихоцефалезе препарат назначают в дозе 33 мг/кг двукратно в один день с кормом.
В ВИГИСЕ д.в.н. Диденко П. П. на основе фенбендазол а создан комплексный препарат, получивший название «Фезол», который в отличие от фенбендазола образует с водой взвесь и коллоидный раствор. Создание новой формы аитгельмшпика позволило повысить его биодоступность и снизить терапевтическую дозу в 2,5 - 3 раза. Препарат был испытан при стронгилятозах крупного и мелкого рогатого скота (отчеты ВИГИС за 1999-2005 гг.).
Исследования отечественных и зарубежных ученых показывают, что не вес синтезируемые лекарственные вещества безопасны для организма человека и животных. Поэтому обязательным условием для внедрения препаратов в практику является изучение эмбриотоксического и тератогенного действия. Это позволяет применять их у животных в различные сроки беременности, а также обеспечивать население безвредными продуктами питания.
Цель и задачи работы. Целью настоящей работы явилось изучение антгельминтных свойств нового отечественного препарата фезол а при нематодозах свиней и определения его терапевтических доз. Была поставлена также задача по изучению его влияния на организм свиней и крыс, определение эмбриотоксических и тератогенных свойств, определение остатков препарата в органах и тканях послеубойных животных.
Конкретно в задачи исследования входило:
- определить терапевтическую дозу фезола при аскариозе свиней;
- определить терапевтическую дозу фезола при эзофагостомозе свиней;
- изучить общую токсичность фезола, эмбриотоксические и тератогенные свойства;
- определить остатки фезола в органах и тканях послеубойных животных;
- определить экономическую эффективность фезола в свиноводстве.
Научная новизна, Определена терапевтическая доза препарата для лечения нематодозов свиней при введении фезола per os в смеси с кормом. Впервые проведена оценка антгельминтных и эмбриотропных свойств нового отечественного препарата фезол. Изучена безопасность применения препарата у больных и беременных животных. Определены сроки выведения препарата из организма животных.
Практическая ценность работы. Установлена высокая антгельминтная активность нового отечественного препарата фезола в малых дозах. Определена его терапевтическая доза при аскариозе и эзофагостомозе свиней.
Низкая токсичность, отсутствие эмбриотропного действия и небольшие сроки выведения его из организма животных дают основания рекомендовать его для внедрения в практику борьбы с аскариозом и эзофагостомозом свиней. Сравнительно небольшая терапевтическая доза препарата положительно характеризует его с точки зрения экологической безопасности.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и одобрены на заседаниях Ученого Совета ВИГИС (2003, 2004, 2005 гг.), научной конференции ВОГ (2005), научной конференции ВНИТИБП (Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов) 26-27 мая 2005 г.
Основные положения выносимые на защиту:
1. Нсматодоцидная активность нового препарата фезол и применение его для лечения аскариоза и эзофагостомоза свиней.
2. Характеристика общего токсического действия фезола на организм свиней и крыс при энтеральном введении.
3. Оценка фезола на эмбриотоксическое и тератогенное действие на крысах.
4. Определение сроков выведения фезола из органов и тканей свиней при энтеральном введении терапевтической и повышенной дозы препарата.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных статей.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 161 листе машинописного текста. Содержит 21 таблицу и 27 рисунков (в том числе - авторские фотографии). Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований с заключениями, обсуждения, общих выводов и практических предложений. Список литературы включает 288 источника, из них 187 отечественных и 101 зарубежный автор.
Методика изучения терапевтической эффективности фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней
Испытание химиотерапевтических препаратов проводится как на спонтанно инвазированных животных в период пика инвазии, так и экспериментально. По классификации Всемирной ассоциации за прогресс ветеринарной паразитологии (ВАПВП) антгельминтики разделяются по эффективности на следующие категории: высокоэффективные - имеющие активность свыше 98%, эффективные (90-98%), умеренно эффективные (80-89%) и неэффективные (ниже 80%). Препараты должны дозироваться строго на кг массы тела животных. При испытании важно правильное формирование и содержание подопытных групп животных, их мечение, дозирование препаратов и оценка эффективности (И.А. Архипов, М.Б. Мусаев, 2004). Изучение антгельминтной активности фезола и определение терапевтической дозы препарата при аскариозе свиней осуществлялось по рабочей программе, утвержденной на научном совете ВИГИС от 18 ноября 2002 г. Испытание феїізола в разных дозах проводилось на поросятах 2-4х месячного возраста на базе ЭКХ «Кленово-Чегодаево». Вместе с тем сравнивалось антгельминтное действие фенбендазола и фезола. Для этого отбиралось несколько групп животных, естественно инвазированных и выделенных из общего поголовья гельминтоовоскопическими исследованиями фекалий по методу Фюллеборна, Котельникова-Хренова (Н.В. Демидов, СВ. Березкина, 1986). Для изучения антгельминтной активности препарата подбирались животные с более высокой интенсивностью инвазии (рисунки 2, 3, 4). Испытание препарата проводили с учетом возрастной динамики гельминтозов на животных 2 - 4-месячного возраста, инвазированных аскарисами, и 6 - 8-месячного возраста, которые были наиболее сильно заражены эзофагостомами (Р.Т. Сафиуллин, 1986). Животным подопытных групп назначался фезол в различных дозировках в смеси с кормом двукратно в течение суток. Препарат смешивали с концентрированным кормом по следующей схеме. Сначала из препарата готовили суспензию. Определенное количество корма делили на 8 частей. Смешивание препаратов с кормом проводили в последовательности: с 1/8, 1/4, 1/2 и со всем кормом. Отдельной группе назначался фенбендазол в дозе 10 мг/кг (по инструкции) в смеси с кормом двукратно в течение суток. Во время проведения группового скармливания препаратов обычный суточный рацион был уменьшен вдвое (Е.И. Малахова, 1971). До назначения антгельминтика исследуемую дозу препарата по ДВ пересчитывали на дозу по препарату. В каждом опыте учитывали общее количество антгельминтика, назначаемое на одну группу. Так, например в первой группе из первого опыта десяти поросятам по 34 кг живой массы назначали но 2,5 мг/кг фезола. Из этого следует, что на всю группу назначали 850 мг препарата по ДВ. Учитывая 70%-нос содержание действующего вещества, производили перерасчет: (850х 100) / 70 = 1214,3 мг по препарату.Животные контрольной группы препаратов не получали.
Эффективность препаратов определяли методом «критического теста», подсчитывая число яиц в одном грамме фекалий до лечения и через 10 - 12 суток после применения антгельминтиков, а также сравнивая с контрольной группой. Для оценки терапевтического действия использовали показатель экстснсэффективности (ЭЭ) -количество животных в % от числа леченых, полностью освобожденных от гельминтов, а также показатель интенеэффективности. Интенсэффективность определяли по формуле:Н - среднее количество яиц гельминтов в 1 г фекалий животных до назначения препарата;Л среднее количество яиц гельминтов в 1 г фекалий леченых животных (через і 1-12 дней после назначения препарата).
В первом опыте изучались различные дозы фезола при аскариозе у поросят 2-4 - месячного возраста. Есгественно инвазированных животных разделили на 5 групп по І0 голов в каждой. Средняя интенсивность инвазии составила 196,34±30,84 яиц нематод в I г фекалий. 1, 2, 3 и 4-ой группам назначался фезол в дозах 2,5; 3,0; 3,5 и 4,0 мг/кг по ДВ. 5-я группа являлась контрольной и препарата не получала. Средняя масса тела поросят по группам составила 34±1,02; 28±0,75; 36,5±0,91; 32±1,04 и 34,5+1,14 кг соответственно. Групповое назначение антгельмшггика проводили из расчета 0,8 кг концентрированного корма на голову.
Во втором опыте продолжилась работа по определению терапевтической дозы фезола. При этом изучались разные дозы фезола при аскариозе у поросят 3-4х месячного возраста в сравнении с базовым препаратом фенбендазолом. Естественно инвазнрованных животных разделили на 5 групп по 10 голов в каждой. Средняя интенсивность инвазии составила 298,49±40,17 яиц нематод в 1 г фекалий. I, 2 и 3-ей группам назначался фезол в дозах 4,0; 4,5 и 5,0 мг/кг по ДВ. Животным 4-ой группы назначался фенбендазол в дозе 10,0 мг/кг по ДВ (согласно инструкции). 5-я группа являлась контрольной и препарата не получала. Средняя масса тела поросят по группам составила 42+0,88; 46±1,04; 42,5+0,79; 39±0,55 и 37±0,77 кг соответственно. Групповое назначение антгельминтика проводили из расчета 0,9 кг концентрированного корма на голову.
В третьем опыте проводились испытания фезола при аскариозе у поросят 4-месячного возраста с целью уточнения терапевтической дозы. Из общего поголовья отобрали естественно инвазнрованных животных в количестве 40 голов. Поросят разделили на 4 группы по 10 голов в каждой. Средняя интенсивность инвазии составила 372,77±69,81 яйца в 1 г фекалий. 1, 2 и 3-ей группам назначали фезол в дозах 4,0; 4,5 и 5,0 мг/кг по ДВ. 4-я группа являлась контрольной и препарата не получала. Средняя масса тела поросят по группам составила 44+0,88; 46+0,68; 40+0,80 и 36+0,75 кг соответственно. Групповое назначение антгельминтика проводили из расчета 0,9 кг концентрированного корма на голову.
В четвертом опыте определялась эффективность фезола при однократном применении. Двум равноценным группам животных, естественно инвазированным аскаридами, был назначен препарат в
Производственное испытание фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней
В результате проведения производственного опыта установлено, что через 11 дней после назначения препарата из 68 леченых свиней яйца аскарид были выявлены у трех животных, яиц эзофагостом не обнаружено. Таким образом, фезол в смеси с кормом в дозе 4,5 мг/кг по ДВ показал ЭЭ = 90% и ИЭ (снижение общего кол-ва яиц гельминтов) 97% при аскариозе свиней (с 306,70±29,04 до 9,46±9,71), и 100%) эффективность при эзофагостомозе (при зараженности 234,34±20,55 яйца нематод в 1 г фекалий). При групповом назначении препарата с кормом отмечена его хорошая растворимость в воде и поедаемость. Препарат оказался удобным для обработки большого количества свиней. Побочных явлений у животных не наблюдали (табл. 8). По данным этой работы получен акт производственного испытания (см. приложение).
В период комиссионного испытания подопытные свиноматки поедали лечебные корма с фезолом и фебталом охотно и быстро, в течение 15-20 минут. Побочных явлений в период назначения препаратов и после него не отмечено. По данным общеклинических наблюдений свиноматки, получавшие испытуемую дозу фезола, инструктивную дозу фебтала и контрольные - практически не отличались друг от друга, что дает нам основание заключить о хорошей переносимости фезола.
Результаты копроовоскопических исследований, проведенных через 10-12 дней после лечения показали, что из 10 свиноматок первой группы все 10 были свободны от эзофагостом. Отсюда, эффективность фезола в дозе 4,5 мг/кг массы животного по ДВ в смеси с кормом двукратно в течение суток составила 100%.
Во второй группе от эзофагостом освободились 8 животных из 10. Экстенсэффсктивность составила 80%, а интенеэффективность по снижению количества яиц гельминтов в 1 г фекалий - 93,6%. Об этом свидетельствуют следующие данные: если до лечения среднее количество яиц эзофагостом в 1 г фекалий животных второй группы равнялось 631,2 ± 89,16, то после лечения фебталом - 40,2 ± 27,12 экз. Ипвазированность свиноматок контрольной группы оставалась без существенных изменений. Во втором опыте наблюдения, проведенные в день назначения препаратов и в последующие три дня спустя показали, что поросята поедали лечебные корма с предлагаемой дозой фезола и рекомендованной инструкцией дозой фебтала охотно и быстро. Через 30 мин. наблюдалась полная поедаемость кормов. Оценка общего состояния подопытных животных, получавших фезол и фебтал и контрольных показала отсутствие каких-либо отклонений от нормы.
При обследовании животных через 10-11 дней после лечебного назначения фезола от аскарид освободились 6 животных, экстенс-эффективность составила 60%. Среднее количество яиц аскарнсов у животных первой группы до лечения равнялась 823,3 + 150,98, а после лечения фезолом - 13,2 ± 6,32 экземпляров, отсюда иитенеэф-фсктивность составила 98,4%. В тоже время, у поросят второй группы от аскарнсов освободилось 7 голов из 10, экстенеэффективность составила 70%. Среднее количество яиц гельминтов в 1 г фекалий было 489,6 ± 115,75 до лечения и 4,8 ± 2,66 экземпляров после дачи фебтала и интепеэффективность составила 99,02%. Зараженность поросят контрольной группы оставалась на прежнем уровне. Проведенные гельминтологические вскрытия подтвердили полученные результаты.
Так, при вскрытии поросенка, леченого фезолом аскарисы не І обнаружены, а у контрольного животного в топком отделе кишечника найдено 10 аскарнсов (рисунки 13, 14). Отмечалось большое количество эозинофильных гранулем в печени обоих поросят. Полученные результаты по комиссионному испытанию отражены в табл. 9. Акт комиссионного испытания представлен в приложении. В результате испытания нового антгельминтика фезола на 176 поросятах в возрасте от 2 до 8 месяцев и 36 свиноматках, естественно ннвазпрованных нематодами, определена терапевтическая доза фезола при аскариозе и эзофагостомозе свиней. В общей сложности было проведено пять опытов, в ходе которых новый антгельминтик назначался в дозах 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5 и 5,д мг/кг по ДВ. Животным подопытных групп назначали фезол в различных дозировках в смеси с кормом двукратно в течение суток. Сначала из препарата готовили суспензию. Далее его смешивали с концентрированным кормом но следующей схеме. Определенное количество корма делили на 8 частей. Смешивание проводили в последовательности: с 1/8, 1/4, 1/2 и со всем кормом. Отдельной группе животных назначался фенбендазол в дозе 10 мг/кг (по инструкции) в смеси с кормом двукратно в течение суток. Во время проведения группового скармливания препаратов обычный суточный рацион был уменьшен вдвое. Животные контрольной группы препаратов не получали.
Эффективность антгельминтиков определяли методом критического и контрольного тестов, подсчитывая число яиц в одном грамме фекалий до лечения и через 10-12 суток после применения, а также сравнивая подопытные и контрольные группы.
Экспериментальная работа показала, что доза 4,5 мг/кг по ДВ с кормом двукратно в течение одного дня является достаточной для эффективного лечения аскариоза и эзофагостомоза. Опыт с однократным назначением антгельминтика показал, что это неприемлимо для эффективного лечения нсматодозов (ИЭ=88%). Дозу в 6,43 мг/кг массы тела животного (4,5 мг/кг по ДВ) с кормом двукратно приняли за терапевтическую. Эффективность данной дозы фезола подтвердилась и в ходе производственных испытаний на 320 головах молодняка свиней 3 - 4-мссячного возраста и комиссионных испытаний на 30 подсосных свиноматках и 30 поросятах 3 - 4-месячного возраста. В результате проведения производственного опыта установлено, что из 68 леченых свиней яйца аскарид выявлены у трех животных, яиц эзофагостом не обнаружено. Таким образом, фезол в смеси с кормом в дозе 4,5 мг/кг по ДВ показал ЭЭ = 90% и ИЭ (снижение общего кол-ва яиц гельминтов) 97% при аскариозе свиней, и 100% эффективность при эзофагостомозе. Результаты копроовоскопических исследований в рамках комиссионных испытаний, проведенных через 10-12 дней после лечения показали, что из 10 свиноматок первой группы все 10 были свободны от эзофагостом. Следовательно, эффективность фезола в дозе 4,5 мг/кг массы животного по ДВ в смеси с кормом двукратно в течение суток составила 100%. Во второй группе (назначали фебтал) от эзофагостом освободились 8 животных из 10. Экстенсэффективиость составила 80%, а интенсэффективность -93,6%. В опыте на поросятах после лечебного назначения фезола от аскарид освободились 6 животных, экстенсэффективиость составила 60%, а интенсэффективность - 98,4%. В то же время, у поросят второй группы от аскарисов освободилось 7 голов из 10, экстенсэффективиость составила 70%.
Во все время назначения кормов с антгельминтиками отмечалась их хорошая поедаемость, препарат не вызывал отклонений в общем состоянии животных.
Оценка влияния фезола на организм свиней
Исследования острой токсичности фезола показали, что препарат в дозе 5 г/кг хорошо переносится крысами. Сведения об опыте приведены в таблице 10. Отсутствие гибели крыс не позволило установить максимально переносимую дозу препаратов (ЛДо). У животных получавших более 10 мл раствора эитерально (дозы 10 и 15 г/кг) отмечали снижение аппетита в течение первых суток. Доза в 15 г/кг условно принята как ЛДэо этих препаратов у крыс, так как в большей дозе их ввести энтерально не возможно. Общее состояние всех животных оставалось в норме, крысы сохраняли подвижность, адекватно реагировали на внешние раздражители (рис, 15).
В ходе данного опыта было установлено, что все животные хорошо переносили назначение фезола в различных дозах. Свиньи охотно поедали корма. Терапевтическая и повышенные дозы антгельминтика не вызывали видимых признаков токсикоза, не влияли на аппетит животных и не изменяли показатели температуры тела, пульс и частоту дыхания (рис. 19).
Ниже приведены сравнительные графики ТПД подопытных и контрольных групп. Отдельно показаны графики клинических показателей животных, получавших фезол в 20-кратной терапевтической дозе.
Показатели гематологических и урологических исследований у животных подопытных и контрольной групп существенно не отличались, что отражено в таблице И, Исходные данные по показателям крови (за 2 дня до назначения препарата) в контроле и во всех подопытных группах были следующими: количество эритроцитов варьировало от 5,96 до 6,60 млн./мкл; количество лейкоцитов - от 17,10 до 19,10 тыс./мкл; гемоглобин - от 8,98 до 10,14 г/%; удельный вес - от 1,043 до 1,049; рН - от 7,34 до 7,36; СОЭ - от 26,8 до 30,6 мм/ч; в лейкоцитарной формуле юные нейтрофшты, базофилы отсутствовали, содержание эозинофилов составляло 2,4 - 3,8 клеток; палочкоядерпых нейтрофилов 2,6 - 5,0; сегментоядерных - нейтрофилов 37,0 - 47,0; моноцитов 1,6 - 3,2; лейкоцитов 45,6 - 52,6 клеток в мазке.
В первой подопытной группе, где фезол применяли в терапевтической дозе 4,5 мг/кг по ДВ через сутки, через 3 суток и через десять суток были получены следующие результаты: количество эритроцитов варьировало от 6,22 до 6.52 млн./мкл; количество лейкоцитов - от 18,30 до 18,54 тыс./мкл; гемоглобин - от 9,46 до 10,72 г/%; удельный вес - от 1,046 до 1,053; рН - от 7,32 до 7,40; СОЭ - от 26,0 до 28,8 мм/ч; в лейкоцитарной формуле юные нейгрофилы, базофилы отсутствовали, содержание эозинофилов составляло 2,6 - 4,6 клеток; иалочкоядерных нейтрофилов 2,0 - 3,2; сегментоядерных -нейтрофилов 36,2 - 41,0; моноцитов 2,0 - 2,8; лейкоцитов 49,2 - 55,6 клеток в мазке.
Во второй подопытной группе, где фезол назначали в дозе 13,5 мг/кг по ДВ через сутки, через 3 суток и через десять суток были получены следующие результаты: количество эритроцитов варьировало от 6,12 до 6,18 млн./мкл; количество лейкоцитов - от 16,94 до 18,94 тыс./мкл; гемоглобин - от 9,32 до 10,02 г/%; удельный вес - от 1,045 до 1,046; рН - от 7,32 до 7,36; СОЭ - от 27,2 до 30,8 мм/ч; в лейкоцитарной формуле юные нейтрофилы, базофилы отсутствовали, содержание эозинофилов составляло 3,6 - 3,8 клеток; палочкоядерных нейтрофилов 3,4 - 5,6; сегментоядерных - нейтрофилов 38,4 - 40,4; моноцитов 2,0 -2,2; лейкоцитов 48,6 52,4 клеток в мазке.
В третьей подопытной группе, где фезол назначали в дозе 45 мг/кг по ДВ через сутки, через 3 суток и через десять суток были получены следующие результаты: количество эритроцитов варьировало от 6,22 до 6,60 млн./мкл; количество лейкоцитов - от 15,98 до 17,00 тыс./мкл; гемоглобин - от 9,66 до 10,56 г/%; удельный вес - от 1,046 до 1,050; рН - от 7,32 до 7,38; СОЭ - от 27,2 до 29,4 мм/ч; в лейкоцитарной формуле юные нейтрофилы, базофилы отсутствовали, содержание эозинофилов составляло 2,8 - 3,0 клеток; палочкоядерных нейтрофилов 4,4 - 5,4; сегментоядерных - нейтрофилов 39,0 - 41,2; моноцитов 1,8 -2,6; лейкоцитов 49,8-50,6 клеток в мазке.
Лейкоцитарная формула всех животных, получавших антгельминтики не показала значительных изменений. Профиль периферической крови животных характеризуется отсутствием аллергических или иных реакций организма свиней на введение фезола.
Анализ показателей мочи свидетельствует о том, что во всех пробах установлен светло-желтый цвет, прозрачность, удельный вес варьировал от 1,017 до 1,021; рН -от 6,10 до 6,40; белок-от 0,06 до 0,14 г/л. В качественных реакциях установлено отсутствие нитритов, кетоновых тел, билирубина, лейкоцитов, крови и гемоглобина; глюкоза и уробилиноген - в рамках нормы. Осадка не обнаружено.
Опенка морфологических признаков и показателей смертности в подопытных и контрольных группах не выявила принципиальных различий. Данные всех испытаний сведены в таблицы 12-16. Фезол в терапевтической и в 3 раза повышенной дозе не проявил эмбриотоксических и тератогенных свойств (рисунки 20-25). У всех самок крыс обнаружены здоровые репродуктивные органы, что свидетельствует о нормальном течении беременности. Ни в одной из опытных групп не обнаружено значительного различия в размерах и уродств плодов.
Результаты определения сроков выведения фезола из организма свиней
Для проведения качественного и количественного анализа полученных экстрактов применяли процедуру градуировки хроматографических данных в компьютерной программе «Мультихром vs 1.5». Для построения графика корелляции площади пика и концентрации использовали ряд стандартных разведений фенбендазола и оксфендазола 10; 5; 2,5 и 1 мкг/см3, приготовленных по схеме, приведённой выше. Результаты, полученные при определении корелляции «площадь пика / концентрация» представлены в таблице 17.
Уравнения, полученные для линий тренда фенбендазола и оксфендазола, и в частности, величины достоверности аппроксимации (R2), приближённые к единице, свидетельствуют о высокой степени линейной зависимости площади пика от концентраций компонентов и, следовательно, о высокой достоверности получаемых результатов.
Содержание фенбендазола и оксфендазола (Y) в экстрактах расчитывали по уравнению калибровки, полученному с помощью программы «Мультихром vs 1.5». Полученные значения корректировали с учётом уровня извлечения фенбендазола и оксфендазола из плазмы крови, печени, почек, сердца, поджелудочной железы, лёгких, селезёнки, мышечной ткани, жировой ткани, лимфоузлов, матки, тонкого и толстого кишечника, а также коэффициента концентрирования проб.
Определение уровня извлечения фенбендазола и оксфендазолапроводили на контрольных пробах. В плазму крови объёмом 2 см , а также гомогенаты проб органов и тканей массой 5 г внесли по 1 см3 us стандартного раствора фенбендазола и оксфендазола с концентрацией 5 мкг/см . После внесения стандартных растворов пробы тщательно перемешали. Пробоподготовку проводили по отработанной методике. Объём конечных экстрактов модельных проб составлял 1 см3.
Пределы детектирования фенбендазола и оксфендазола в экстрактах определяли хроматографированием модельных проб плазмы крови, печени, почек, сердца, поджелудочной железы, лёгких, селезёнки, мышечной ткани, жировой ткани, лимфоузлов, матки, тонкого и толстого кишечника с внесёнными стандартными образцами различной концентрации.
В результате получили следующие значения пределов детектирования фенбендазола и оксфендазола в экстрактах:
При помощи процедуры градуировки, выполненной в соответствующем разделе компьютерной программы «Мультихром vs 1.5», определили относительные коэффициенты отклика детектора для анализируемых экстрактов и получили следующие формулы расчета концентраций фенбендазола и оксфендазола в экстрактах;
Полученные данные свидетельствуют о том, что наиболее активный в антипаразитарном отношении метаболит фенбендазола - фенбевдазол сульфоксид (оксфендазол) создаёт достаточно высокие концентрации в тканях печени, почек и мышц при обработке животных как в дозе 13,5, так и в дозе 4,5 мг/кг массы тела. Кроме того, оксфендазол показал выраженную способность к депонированию в жировой ткани, что, в свою очередь, опосредованно влияет на общую длительность его нахождения в организме животных. В других органах и тканях присутствие оксфсндазола регистрировали в основном на третьи сутки и частично на пятые сутки. Через 9 суток после обработки остаточные количества фенбендазола и его метаболита - оксфендазола во всех исследовашгых органах и тканях не обнаружены. Таким образом, убой животных на мясо после назначения препарата (время ожидания) разрешается на 10-й день.Изучение остатков антгельминтика в органах и тканях, полученных от 16 животных, позволило установить сроки ожидания для фезола.
Препарат назначали в терапевтической и в 3 раза увеличенной дозах. В ходе исследований изучались пробы плазмы крови, печени, почек, сердца, поджелудочной железы, лёгких, селезёнки, мышечной ткани, жировой ткани, лимфоузлов, матки, тонкого и толстого кишечника. Последующий убой подопытных животных в различные сроки и изучение экстрактов препарата позволило установить, что действующее вещество (фенбендазол) присутствует в органах и тканях, в основном, в начальные сроки (1-3 сутки после обработки) в гораздо меньших количествах по сравнению с метаболитом (оксфендазол ом). На 10-й день после назначения препарата его остаточные количества и метаболиты не обнаружены ни в одних органах и тканях, отобранных для исследований. Анализ полученных результатов дает основание считать, что полное выведение фезола из организма свиней происходит через 9 дней. Таким образом, убой животных на мясо после назначения препарата (время ожидания) разрешается через 9 дней.
