Введение к работе
Ларвальные цестодозы, к числу которых относится эхинококкоз и тенуикольный цистицеркоз, являются широко распространенными гельминтозами мирового масштаба, наносящими ощутимый экономический ущерб животноводческим хозяйствам. Помимо этого, ларвальный эхинококкоз представляет значительную социальную проблему, которая с годами не только не уменьшается, а наоборот ухудшается, поскольку, по мнению многих исследователей, количество больных пистным эхинококкозом становится больше и больше (Н.Е. Муранов, А.Я. Сапунов, 1994; НА. Романенко и др., 1994; А.В. Стреляев и др., 2012; G. Grosso et al., 2012; G. Nimnari et al., 2012).
Ущерб от цестодозов, как впрочем и других гельминтозов, складывается из падежа, вынужденного убоя, снижения количества и качества продукции, недополучения приплода, значительных материальных затрат на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий и т.д. (Г.М. Маруашвили и др., 1989; Р.Т. Сафиуллин, 1997; Л.Е. Мельникова, 2008).
Что касается тенуикольного цистицеркоза, то сложилось мнение о безвредности Cysticercm tenuicollis и отсутствии существенного патогенного воздействия возбудителя на организм животных. Ошибочность такого суждения была доказана экспериментальными исследованиями Ю.К. Студенцова (1974), который показал, что у ягнят 2-2,5-месячного возраста эта инвазия не только проявляется клинически с гематологическими и биохимическими нарушениями, но часто приводит к смертельному исходу. Нарушения, происходящие в организме инвазированных животных, подтверждены работами других авторов (В.П. Федотов, 1979; Ф.И. Василевич с соавт., 1980; A.M. Матчанов, 1990; A Yildirimetal.,2006).
О широком распространении этих цестодозов в Южном Федеральном округе и, в частности, в хозяйствах Кабардино-Балкарской Республики, имеются сообщения А.М. Биттирова (1996); AM. Атаева (1997); В.М. Шамхалова (1998); AM. Биттирова и др. (2009); 3.3. Елкановой (2010).
Поскольку паразитологическая диагностика этих гельминтозов у животных не представляется возможной и установить их зараженность можно только при убое, то серологический мониторинг с использованием соответствующих антигенов цестод может дать конкретную информацию по степени проявления реакции, что в конечном итоге позволит в определенной степени охарактеризовать эпизоотологическую ситуацию.
Исходя из этих соображений и учитывая отсутствие конкретных целенаправленных исследований по серологическому мониторингу ларвального эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза в плане использования полученных данных в оценке эпизоотологической ситуации по этим паразитозам, мы поставили цель:
Провести серологический мониторинг при ларвальном эхинококкозе и тенуикольном цистицеркозе овец в хозяйствах Кабардино-Балкарской Республики и сопоставить данные иммунотеста с зараженностью животных этими гельминтами.
Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: S определить уровень зараженности овец эхинококками и тенуикольными
пистицерками в хозяйствах разных зон республики; S установить экстенсивность и интенсивность инвазии собак Е. granulosus и
Т. hydatigena; S приготовить антигенные препараты из протосколексов Е. granulosus,
Е. multilocularis, С. tenuicollis и провести их физико-химическую
характеристику; S оценить диагностическую эффективность приготовленных антигенных
препаратов; S собрать банк сывороток убойных овец, инвазированных Е. granulosus,
С. tenuicollis и условно здоровых, из хозяйств разных природно-климатических зон республики; S провести серологический мониторинг ларвального эхинококкоза и
тенуикольного цистицеркоза иммуноферментной реакцией; S сопоставить результаты серологического мониторинга с данными вскрытия
убойных овец. Научная новизна. Впервые проведен серологический мониторинг ларвального эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза овец иммуноферментной реакцией (ИФР) с использованием гомологичных антигенов паразитов, результаты которого подтверждены данными послеубойного вскрытия тестированных животных.
Показано, что серологический мониторинг является важным критерием оценки эпизоотологической ситуации по этим паразитозам. Сопоставимость иммуноферментного анализа сывороток овец при ларвальном эхинококкозе с результатами послеубойной оценки их зараженности эхинококками составила в среднем 90,3%, а тенуикольными пистицерками - 86,5%.
Выявлены незначительные различия в экстенсивности и интенсивности инвазии овец эхинококками и тенуикольными цистицерками как в зональном аспекте, так и в зависимости от породы животных; более устойчивыми к заражению Е. granulosus были овцы карачаевской породы.
Впервые получен диагностический антиген при тенуикольном пистицеркозе культивированием клеток протосколексов С. tenuicollis в искусственной питательной среде RPMI-1640 и проведена его физико-химическая характеристика электрофорезом в полиакриламидном геле.
Получено фракционированием соматического экстракта протосколексов С. tenuicollis 8 диагностически эффективных белковых компонентов с минимальным содержанием перекрестно-реагирующих белков с Е. granulosus и высокими сорбционными свойствами, повышающие чувствительность и специфичность иммуноферментной реакции.
Практическая значимость. По материалам исследований разработаны: «Технологический регламент получения диагностического антигена при ларвальном эхинококкозе из протосколексов С. tenuicollis» и «Методические положения по диагностике тенуикольного цистицеркоза клеточным антигеном», одобренные секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной
медицины Россельхозакадемии, 23.09.2011 г., протокол № 3 и 27.09.2012 г., протокол № 4.
Предложена иммуноферментная реакция на основе антигенов протосколексов Е. granulosus, Е. multilocularis и С. tenuicollis для проведения серологического мониторинга при пистном эхинококкозе и тенуикольном пистицеркозе овец.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены и доложены на заседаниях Ученого совета ВИГИС 2008-2011 гг.;
на научных конференциях ВОГ «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями человека и животных» (г. Москва, 2010; 2011; 2012).
секции «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии.
Личный вклад. Представленная диссертационная работа является результатом 4-летних научных исследований автора. Работа по получению инвазионного материала, сывороток крови убойных животных, приготовлению и характеристике диагностических антигенов из Е. granulosus, Е. multilocularis и С. tenuicollis, проведению серологического мониторинга иммуноферментной реакцией выполнены самостоятельно под руководством доктора биологических наук, профессора Бережко В.К., которая оказывала научно-методическую помощь в проведении исследований, анализе и обобщении полученных результатов. Статьи, написанные в соавторстве, включают более 80% материалов исследований соискателя.
Основные положения, выносимые на защиту: S получение и физико-химическая характеристика антигенов из эхинококков и
тенуикольных пистицерков; S диагностическая эффективность антигенов из протосколексов Е. granulosus, Е. multilocularis и С. tenuicollis при пистном эхинококкозе и тенуикольном пистицеркозе овец; S распространение пистного эхинококкоза и тенуикольного цистицеркоза в разных природно-климатических зонах Кабардино-Балкарской Республики, зараженность собак разного назначения гельминтами семейства Taeniidae; S проведение серологического мониторинга при пистном эхинококкозе и тенуикольном пистицеркозе овец, сопоставление полученных результатов с данными вскрытия животных.
Публикации. По материалам исследований опубликовано 10 статей, в которых изложены основные положения и выводы, 5 из них в рекомендованных ВАК РФ изданиях.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы и собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты, обсуждение, выводы, практические предложения. Список литературы включает 325 источников, в том числе 192 отечественных и 133 иностранных. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 8 рисунками. Приложение на 26 страницах.
