Содержание к диссертации
Введение
Глава 1: Обзор литературы 10
Глава 2: Материалы и методы исследования .34
2.1. Отбор проб и методы исследования .34
2.1.1. Метод Васильковой-Гефтер 35
2.1.2. Метод Романенко и его модификация Аляутдиной 36
2.1.3. Метод Долбина 37
2.2. Объем исследований 38
2.3. Обработка результатов 40
Глава 3: Сравнительный анализ методов исследования .41
3.1. Анализ заболевания геогельминтозами в Российской Федерации по данным статистических и аналитических материалов Роспотребнадзора .41
3.2. Разработка экспериментальной модели, воспроизводящей контаминацию окружающей среды яйцами гельминтов 46
3.3. Сравнительный анализ методов санитарно-паразитологического исследования почвы 50
Глава 4: Разработка нового метода исследования 68
4.1. Поиск возможных точек для модификации существующих методов санитарно-паразитологического исследования почвы на примере метода Романенко .68
4.2. Исследование методов на модели и их сравнение .74
4.3. Подтверждение эффективности новой методики .76
Заключение .78
Выводы 81
Список литературы .
- Метод Васильковой-Гефтер
- Анализ заболевания геогельминтозами в Российской Федерации по данным статистических и аналитических материалов Роспотребнадзора
- Сравнительный анализ методов санитарно-паразитологического исследования почвы
- Исследование методов на модели и их сравнение
Метод Васильковой-Гефтер
Гельминты, передаваемые через почву (геогельминты), по-прежнему представляют серьезную угрозу для здоровья. По данным ВОЗ, около двух миллиардов людей в мире заражены кишечными паразитами, причем у 450 миллионов, большинство из которых составляют дети, инвазия сопровождается тяжелыми осложнениями [139]. Кроме того, у 44 миллионов зараженных беременных возникают серьезные осложнения из-за анемии, связанной с анкилостомидозами, что увеличивает материнскую смертность. Согласно оценкам ВОЗ, ежегодно геогельминтозы становятся причиной примерно 135 000 смертей; главным образом они вызваны анкилостомидозами (из-за анемии), аскаридозом (из-за кишечной непроходимости) и трихоцефалезом (хронической диареи). Если оценивать по числу потерянных лет жизни, скорректированных с учетом нетрудоспособности - DALY (disability adjusted life years - годы жизни с учетом нетрудоспособности) [115, 116, 117], геогельминтозы представляют собой проблему, сопоставимую с малярией или туберкулезом [145].
В России ежегодно регистрируется около 1 млн. больных паразитарными болезнями. Первым по распространению геогельминтозом в Российской Федерации является аскаридоз, который для большинства субъектов является эндемичным паразитозом [21, 22].
Ещ в конце 1930-х прошлого столетия в России была начата планомерная работа по борьбе с аскаридозом, тениаринхозом и анкилостомидозами. Мероприятия по разработки и организации борьбы с геогельминтозами, в первую очередь с аскаридозом и анкилостомидозами, вошли в перечень первоочередных задач по борьбе с гельминтозами, предложенных еще в 1937 году К.И.Скрябиным.
Массовые обследования населения, которые проводились в те годы, позволили обоснованно планировать объем лечебных, профилактических и других мероприятий, а также оценивать их эффективность. С целью поддержки этой работы с 1940 года был введен государственный учет больных гельминтозами и отчетность о проделанной работе по борьбе с ними. И уже в 1947 году был выпущен ряд методических документов по борьбе с гельминтозами, а практические действия были направлены на снижение пораженности населения аскаридозом и гименолепидозом. В результате, к 1950 году в ряде территорий пораженность гельминтозами удалось значительно снизить, а число ежегодно обследуемых лиц довести до нескольких миллионов. В ряде городов центральных районов РСФСР, например, в результате плановой дегельминтизации и санитарно-просветительной работы пораженность населения аскаридозом была в 1953 году в 1,6 – 3,4 раза ниже по сравнению с 1950 годом [19]. Накопленный к 1960 году опыт позволил разработать стратегию организации и осуществления дифференцированных комплексов профилактических и оздоровительных мероприятий в очагах гельминтозов.
Одной из проблем, связанных с борьбой с гельминтозами, были и остаются в настоящее время, выявляемость и регистрация случаев заболевания. В качестве примера можно привести следующее – по данным на 1991 год в странах бывшего Советского Союза ежегодно официально регистрировалось 70 000 случаев аскаридоза, тогда как по оценке экспертов эта цифра должна быть в районе 350 000, а в отношении трихоцефалеза соответственно – 2500 и 44 000 случаев [35]. Тем не менее, на основе данных официальной статистики можно проследить четкие тенденции в отношении заболеваемости на протяжении ряда лет. На сегодняшний день в структуре паразитозов на долю гельминтозов приходится - 79 %, протозоозов –21 %.
В 2013 г. заболеваемость аскаридозом снизилась на 17,77 % по сравнению с 2011 г. и составила 21,85 на 100 тыс. населения. Серьезной проблемой, особенно в крупных городах, является заболеваемость населения токсокарозом. В 2013 г. зарегистрировано 3 035 случаев токсокароза (2,12 на 100 тыс. населения), по сравнению с 2012 г. Отмечено снижение заболеваемости на 9,02% (в 2012г. – 3325 случаев (2,33 на 100 тыс. населения)) [22].
В странах Европейского региона ВОЗ более четырех миллионов детей нуждаются в массовом медикаментозном лечении геогельминтозов [145]. Поэтому остро стоит вопрос о своевременной профилактике, что невозможно без точных и эффективных методов исследования объектов окружающей среды.
В связи с тем, что в распространении геогельминтозов, относящихся к повсеместно распространенным паразитозам, наряду с социальными, большую роль играют климатические факторы, уровень инвазированности геогельминтозами населения разных регионов заметно отличается, а некоторые из них, такие как анкилостомидозы, приурочены только к тропическим и субтропическим климатическим зонам.
Основными причинами широкого распространения геогельминтозов в городах считается стихийность процесса урбанизации, отставание темпов строительства от темпов прироста городского населения, крайне низкий уровень санитарной культуры большинства горожан, особенно недавно приехавших мигрантов, а также в общей бедности городского населения [40].
Широкому распространению геогельминтозов в развивающихся странах способствуют, помимо благоприятных социальных и климатических факторов, и экологические условия, без которых независимая циркуляция возбудителя была бы невозможной. Дело в том, что яйца и личинки геогельминтов должны обязательно попасть на почву и пройти в ней цикл своего развития для приобретения инвазионных свойств. Почва может быть конечным фактором передачи, посредством которого яйца геогельминтов попадают в организм человека, или выполнять роль промежуточного фактора, способствующего обсеменению яйцами геогельминтов овощей, фруктов, воды, пыли, загрязненных рук и др. Температурный диапазон, в пределах которого яйца паразитов во внешней среде (почве) развиваются и сохраняются разнообразен, у аскарид он составляет от 120–130 С до 360 С. При температуре ниже порога развития яйца геогельминтов, не созревая, могут сохранять жизнеспособность. Длительное замораживание (3 месяца) яиц аскариды на стадии не начавшегося развития при температуре –120…– 130 С не убивает их, хотя и оказывает неблагоприятное воздействие, проявляющееся в том, что в дальнейшем для сохранения жизнеспособности таких яиц требуется значительно большая сумма тепла. При температуре – 300 С все яйца аскариды гибнут очень быстро. В естественных условиях яйца геогельминтов могут переносить низкие температуры зимы под снежным покровом. Температура выше оптимальной переносится яйцами паразитов в меньших пределах, чем температура ниже оптимальной.
Анализ заболевания геогельминтозами в Российской Федерации по данным статистических и аналитических материалов Роспотребнадзора
В начале 20 века появились первые данные о сроках развития и выживаемости яиц гельминтов в окружающей среде, роли предметов обихода в эпидемиологии паразитозов, обсемененности почвы, водоемов и сточных вод яйцами гельминтов. В работах Громашевского Л.В. (1926) впервые была дана оценка полей орошения как одного из способов очистки сточных вод населенных пунктов с санитарно-гельминтологической точки зрения [21, 29].
Это и послужило началом для нового научного направления в паразитологии – санитарной гельминтологии, которое в дальнейшем, объединив несколько направлений, сформировалось в санитарную паразитологию. Ее образование шло на основе применения новых методов познания (санитарно-паразитологического). Специфика объектов изучения обуславливали необходимость разработки новых подходов и методов изучения [29, 30]. В течение следующих десятилетий и вплоть до сегодняшнего дня накапливались сведения о совершенствовании методик исследования почвы и самих паразитов.
Способы определения яиц гельминтов в почве стали возможны только в начале 20 века, когда была открыта физическая закономерность, обеспечивающая всплытие яиц к поверхности – флотация. Но и она не могла бы помочь без определения другой важной составляющей – удельной плотности яиц самих гельминтов, без знания которой невозможно было бы подобрать нужную плотность для флотационного раствора, чтобы полностью использовать его потенциал.
Первые работы по определению плотности яиц гельминтов появились в 20 годы 20 века. Так, Mhaskar в 1923 году, используя 4 разных флотационных раствора с разной удельной плотностью, определил предел колебания плотности яиц Ancylostoma dyodenale. Постепенно добавляя определенное количество воды для уменьшения плотности каждого из растворов, он смог определить, что 7% яиц обладали плотностью в 1,03-1,06; 80% - 1,07-1,20; 10% - 1,20-1,29; 3% - 1,30-1,34 [110].
Через 6 лет Savitz с соавторами определил удельную плотность яиц Necator americanus, используя раствор сульфата цинка различных концентраций. Плотность яиц оказалась 1,055. В 1942 году используя такую же технику, он определил удельную плотность 5 других видов нематод: у Enterobius vermicularis – 1,115; Trichuris trichiura и T. Vulpis – 1,150-1,160; Ancylostoma caninum – 1,055; у оплодотворенных яиц Ascaris lumbricoides 1,110-1,130, у неоплодотворенных – 1,20 [140,141].
В 1972 году Magat определил удельную плотность неоплодотворенных яиц Ascaris suum и этих же яиц после оплодотворения. Он использовал растворы сахара с градиентом концентрации 2-30% и 15-60%, созданных с помощью градиентного смесителя. Растворы центрифугировали и оставляли отстаиваться на ночь. Удельную плотность подсчитывали, используя рефрактометрический анализ и коэффициенты рефракции. Для оплодотворенных яиц удельная плотность составила 1,0592, для неоплодотворенных – 1,1036 [99].
В 1978 году Коломысов описал более простой и быстрый способ определения удельной плотности яиц гельминтов. Его технология была основана на идеях, предложенных ранее Mhaskar и Savitz. Используя четыре раствора нитрата аммония различных концентраций, он установил нижнюю границу плотности яиц цифрой удельной плотности того раствора, в котором все яйца гельминтов всплыли к поверхности, а верхнюю границу – к удельной плотности того раствора, где яйца сконцентрировались на дне. Полученные им результаты были таковы: Toxocara mystax, 1,075-1,120; T. canis 1,070-1,120; Toxocara leonina 1,080-1,120; Trichuris vulpis 1,150-1,185; Ascaris suum 1,130-1,180 [17].
Первые разработанные методы гельминтологического изучения почвы были основаны на двух принципах: изоляции яиц гельминтов от приставших к ним частиц почвы и подъем к поверхности яиц из смеси почвы с насыщенными растворами различных солей, используя флотационный механизм. Трудность такого исследования заключалась в том, что тяжелые частицы почвы, плотно прилипавшие к яйцам, мешали их всплытию, а обнаружить яйца в осадке было невозможно из-за обилия в поле зрения частиц почвы, растений, пузырьков воздуха. Паразитологи предлагали различные варианты решения этой проблемы. Например, Ackert (1922) обрабатывал почву антиформином для освобождения яиц от почвы, а для их всплытия – двухромовым натрием [5, 8, 55]. Caldwell (1928) модернизировал методику, использовав для всплытия яиц раствор сахара (удельный вес 1.23) [55]. Затем Spiendler (1929) детализировал методику Ackert (1922), предложив в своем улучшенном варианте помешивать раствор с почвой и антиформином, пока раствор отстаивался 1 час [146].
Здродовский в 1929 году применял аппарат Бермана для исследования почвы, используя свойство личинок гельминтов к гидротермотропности. Образец почвы равномерно размещался на сите с отверстиями 1 мм3. Сито вставляется в воронку, предварительно наполненную водой, подогретой до 460С. Нижняя поверхность не доходит до воды на 1-1,5 дюйма. В таком виде оставляется на полчаса. Затем воронка наполняется подогретой водой, чтобы ее уровень превышал уровень почвы, помещенной на сите. Почву в аппарате оставляли на ночь. Личинки в силу своей гидротермотропности мигрируют через сито в воду. Для исследования забирают пробу воды, добавляют 5 капель 7,5% раствора едкого натра и смесь центрифугируют. В осадке ищут личинки под микроскопом. Эта методика описана в МУК 4.2.2661-10, как метод Бермана (1942) с незначительными изменениями и рекомендуется для исследований почвы на личинки гельминтов. Эффективность метода достигает 65%. Однако следует учитывать, что опытными экспериментами установлено, что эта методика работает лишь в случае с рыхлой почвой, а из глинистой почвы личинки перемещаться не могут и поэтому процент обнаружения очень низок [8, 18, 69, 70, 134].
В 30-ые годы 20 века метод Spiendler широко применялся за рубежом и показывал положительные результаты. Так Brown (1929), Cort, Otto, сам Spiendler (1930) и Headlee (1936) обнаруживали сотни яиц гельминтов в нескольких граммах почвы, собранной с дворов, интенсивно загрязненных нечистотами [5, 146]. К сожалению, сейчас невозможно узнать насколько точным и действенным на самом деле был этот метод, так как никто не проверял его на контаминированных паразитарными агентами моделях, чтобы точно определить его эффективность.
Сравнительный анализ методов санитарно-паразитологического исследования почвы
Borg и Woodruff в 1973 году предложили для диагностики яиц токсокары свою санитарно-паразитологическую методику. Они промывали исследуемый образец почвы в воде, затем центрифугировали его, операцию снова повторяли. В качестве флотанта использовался раствор сульфата цинка (ZnSO4) с плотностью 1,18, после чего пропускали поверхностную пленку через фильтр и исследовали ее [160]. Эффективность этой методики неизвестна.
Dubin с соавторами в 1975 году вели разработку метода с использованием раствора Tween 60 для выявления яиц токсокары в почве. Образец промывался водой в колбе Эрленмейера, затем добавлялся раствор Tween 60 (полиоксиэтилен сорбитан моностеарат). После фильтрования через фильтрующую сетку добавлялся раствора нитрата натрия (NaNO3), и содержимое пробирок центрифугировалось. Далее раствора нитрата натрия (NaNO3) доливался до краев, пробирку накрывали поверхностным стеклом, и затем исследовали его на яйца [74]. Эффективность метода авторами не указывалась. Sewell и Urquhart в 1976 году использовали для определения яиц гельминтов в почве 1% раствор Tween 80, которым заливали образец, отстаивали его в течение часа и затем трижды центрифугировали. Полученную поверхностную пленку пропускали через сито с микропорами, которые задерживали яйца [143]. Sewell и Urquhart, однако, не указывали каких-либо дальнейших манипуляций с образцами, что также ставит под сомнение эффективность методики.
Theis и его коллеги в 1978 году исследовали образцы почвы по следующему плану: образец почвы промывали водой, затем раствор пропускали через сито с различными порами, проводя его очистку от крупных частиц почвы. Полученный фильтрат центрифугировался, надосадочную жидкость сливали, а к осадку добавлялся раствор сульфата цинка (ZnSO4) с плотностью 1,18 или 10% раствор формалина. Образец повторно центрифугировали, забирая затем аликвотную пробу, которую и исследовали под микроскопом [148]. Эффективность метода автором не указывалась.
В 1980 году Quinn с соавторами провели обширную работу по сравнению сразу нескольких флотационных растворов для определения наилучшего для определения яиц токсокары в почве. После первых этапов пробоподготовки они использовали: 33% раствор сульфата цинка (ZnSO4) с плотностью 1,09, насыщенный раствор сульфата цинка (ZnSO4) с плотностью 1,27, 33% раствор сульфата магния (MgSO4) с плотностью 1,07, 50% раствор сульфата магния (MgSO4) с плотностью 1,14, насыщенный раствор сульфата магния (MgSO4) с плотностью 1,275 и насыщенный раствор хлорида натрия (NaCl) с плотностью 1,205. В итоге, ими были получены такие результаты: 1,75%, 27,5%, 26,75%, 72%, 82,5% и 51,25% соответственно. В последующих исследованиях, используя уже только насыщенный раствор сульфата магния (MgSO4) с плотностью 1,275, показавший наилучший результат в 82,5%, они добавили к нему 5% раствор йодистого калия (KI) и сравнили эффективность с уже полученными результатами. Последний способ, с добавления иодида калия оказался еще эффективнее [129]. Этот последний вариант рекомендовал в финальной версии своего метода и Н.А. Романенко в 1996 году для выявления яиц токсокары в образцах почвы, так как нитрат натрия недостаточно эффективен для них [28, 31].
В 1988 году Pessoa и Martins предложили свой улучшенный вариант одной из первых методик Caldwell и Caldwell (1928). Они использовали 4% раствор гипохлорита натрия и последующую фильтрацию через фильтрующую сетку для отмывания яиц от частиц почвы, а в качестве флотанта раствор дихромата натрия. Его доливали до краев пробирки, накрывали предметным стеклом и оставляли отстаиваться, а затем микроскопировали [42, 56, 60, 80, 86, 102, 104, 105, 106, 108, 118, 119, 123, 124, 125]. И хотя эффективность этого метода, как и многих других не указывалась, но при обзоре зарубежной литературы упоминания о его использовании встречено не единожды, что позволяет предположить, что он весьма эффективен и популярен при санитарно-паразитологических исследованиях в странах Южной Америки, например, в Бразилии.
В 2005 году Mizgajska-Wiktor предложила свой метод для исследования почвы на яйца токсокар и других геогельминтов. Для отмывания яиц от частиц почвы используется 5% раствор гидроксида натрия, затем образец промывают водой, а в качестве флотанта используется насыщенный раствор нитрата натрия. Метод схож по основным пунктам пробоподготовки и используемым фильтрационным и флотационным растворам с методом Романенко. Эффективность методики также не указывается [75, 81, 95, 98, 111, 112, 130].
Из недавних изменений следует отметить модификацию метода Романенко Аляутдиной Л.В. в 2010 году. Эта методика была улучшена всего лишь одним изменением в процессе пробоподготовки. Ею было предложено использовать 3% раствор поверхностно-активного вещества (ПАВ), входящего в состав моющих средств, в частности, моющего средства «Прогресс» вместо 3% раствора натриевой щелочи на этапе первого промывания и центрифугирования почвы. Благодаря высоким моющим, смачивающим, эмульгирующим и диспергирующим свойствам ПАВ, происходит лучшее освобождение яиц гельминтов от частичек почвы, уменьшается количество операций по отмыванию пробы. ПАВ, являясь консервантом, предотвращает разрушение и деформацию яиц, что, способствует повышению их выявляемости в исследуемых пробах почвы. Применение модифицированного метода Романенко Н.А. позволило практически в два раза увеличить производительность труда при операциях промывания почвы, особенно наиболее трудомких для пробоподготовки глинистых, суглинистых и чернозмных почв, улучшить безопасность труда, заменив высоко опасный 3% раствор натриевой щелочи на умеренноопасные и малоопасные вещества, составляющие ПАВ. [2, 3]
Исследование методов на модели и их сравнение
При разработке нового метода мы руководствовались целью создать быстрый и точный метод определения яиц геогельминтов в почве без сложных приборов и конструкций, в перспективе, с возможностью работать прямо на месте забора проб. Для этого мы проанализировали все имеющиеся методы исследования в ретроспективе, начав с самого раннего, который нам удалось обнаружить. Так как схема практически у всех методов, использующих флотационный механизм, одинакова, ее мы и использовали, взяв за основу последовательность исследования из унифицированного метода Романенко, рекомендуемого к использованию при санитарно-паразитологических исследованиях в лабораториях Роспотребнадзора, мы многократно изменяли порядок применения различных компонентов, меняли сами растворы в ключевых точках исследования или убирали их полностью для получения лучшего результата. Впоследствии, испробовав все известные нам возможности и изменения, мы не получили необходимых результатов.
После чего обратились к механизму работы флотационных растворов, а именно поднятию яиц к поверхности раствора. При обзоре литературы нами было встречено упоминание о том, что в шестидесятые года прошлого века отечественные паразитологи, Исаев Л.М. с соавторами (рис. 3) и, независимо от них, Василькова З.Г. и Гефтер В.А. (рис. 4) предлагали использовать воздух, подаваемый под давлением в специальную камеру, где находилась водная взвесь, для очистки яиц геогельминтов от частиц почвы для их последующего удобного просмотра. Для этого каждый из них использовал специальные приборы. Это позволяло, и ускорить процесс, и увеличить эффективность выявления паразитарных агентов, а также значительно упростить работу исследователя.
Проанализировав эти данные, а также имеющиеся на сегодняшний день растворы, имеющие похожий механизм, мы использовали для разработки новой методики перекись водорода. Первоначально мы использовали ее в качестве замены различным компонентам в имеющихся на сегодняшний день методах, в частности, методе Романенко. Но необходимого результата также не получили. Впоследствии мы решили испробовать раствор перекиси отдельно, и сила взаимодействия раствора с пробами песка/почвы выносила необходимые нам для исследования компоненты ближе к поверхности, но был и побочный эффект – огромное количество пузырьков воздуха, которые очень сильно затрудняли просмотр препарата на заключительном этапе. После чего мы произвели подбор концентрации для определения наилучшей, которая позволила бы изучить препарат без затруднений. Результат представлен в таблице 8. Таблица 8 - Подбор концентрации перекиси водорода
По результатам эксперимента со временем адгезии установлено, что для метода перекисной дисперсии достаточно 3 дней для успешной работы. Однако, так как разработанный метод не требует каких-либо переливаний в процессе пробоподготовки, то процесс можно было бы произвести сразу после заражения чистой культурой, но в таком случае, результаты эксперимента были бы некорректны, потому что не сцепленные яйца гельминтов с частицами почвы было бы гораздо проще обнаружить, поэтому основную часть экспериментов проводили через неделю после введения в почву пропагативных стадий гельминтов.
Итоговая схема исследования выглядит так: к 25г образца почвы, помещнного в большую центрифужную пробирку, добавляют 25 мл 1,4 – 1,6 % перекиси водорода. Содержимое перемешивают маленькими стеклянными палочками и отстаивают в течение 4 - 6 минут. Перемешивание повторяют дважды. Затем пробирку оставляют отстаиваться на 20 - 25 минут. В процессе реагирования почвы и перекиси водорода, почва поднимается выше уровня жидкости и оседает на стенках пробирки. Е смывают небольшим количеством раствора перекиси водорода, также смывают частички почвы с палочки, которую используют для перемешивания образца, с целью недопущения возможных потерь в пробе. В процессе отстаивания на линии соприкосновения перекиси водорода с верхней границей образца почвы формируется зона, отличающаяся по цвету от основной массы исследуемого образца, из которой пипеткой забирается материал для микроскопирования на предметном стекле. Для обнаружения яиц геогельминтов, которые могут находиться в образце, достаточно микроскопировать не более трх предметных сткол. Полученные препараты просматривают под увеличением x 10.
Определив необходимую концентрацию, мы приступили непосредственно к исследованиям проб почвы/песка на моделях, зараженных яйцами D. spp. Было проведено сто экспериментов с почвой и сто с песком. При исследованиях, в 98% случаев было обнаружено хотя бы одно яйцо паразитарного агента при просмотре трех предметных стекол.
Выбрав из представленных методик, метод Романенко в качестве контрольного, мы приступили к сравнению его с только что разработанным методом. Уже первоначальные испытания выявили преимущество только разработанной методики. Ее применение позволяет за время, необходимое для пробоподготовки по методу Романенко, провести 2-3 полных исследования, включая и ее пробоподготовку. Если учитывать также и время, затраченное на подготовку и производство раствора нитрата натрия для метода Романенко, то за это время можно провести 5-6 исследований. Новый метод также избавил нас от необходимости переливания и промывок, что позволяет не терять ни процента исследуемого образца. Новый метод дает возможность использовать лишь один раствор для выявления пропагативных стадий геогельминтов. Используемая перекись водорода в концентрации 1,5% относится к 4 классу опасности, что улучшает безопасность труда, заменив высоко опасный 3% раствор натриевой щелочи на умеренноопасные и малоопасные вещества. При просмотре предметного стекла, если даже препарат засох, что происходит лишь через 30 минут после его приготовления, его все равно можно изучать без усилий, приготовленный препарат по методу Романенко уже через 15 минут не может быть просмотрен из-за его полной кристаллизации. Использование новой методики также обходится без дорогостоящего и громоздкого оборудования, и не требует для проведения исследования центрифужного оборудования. Для того, что осуществить процесс, необходима лишь пробирка, перекись водорода в концентрации 1,5%, стеклянные палочки, часы и микроскоп. В этом случае возможно исследование прямо на месте забора проб почвы при наличии мобильных лабораторий.
