Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1 .Краткая климато-географическая характеристика Московской области 9
1.2. Историческая справка о возбудителе и распространении болезни 10
1.3.Эпизоотология бабезиоза собак в Нечернозёмной зоне 14
1.4.Морфология и биология Babesia canis 18
1.5.Симптомокомплекс и течение болезни 25
І.б. Патогенная роль возбудителя бабезиоза в организме собак 30
1.7.Иммунитет при бабезиозе у собак 36
1.8.Патологоморфологические изменения 43
1.9.Лечебно-профилактическиемероприятия 47
2.Собственные исследования 53
2.1.Материалы и методы 53
2.1.1. Характеристика опытных животных , > 53
2.1.2. Методы исследований 53 2.2.Результаты исследований 61
2.2.1.Эпизоотология бабезиоза собак в условиях г.Москвы и Московской области 61
2.2.1.1 .Распространение бабезиоза собак 61
2.2.1.2. Сезонная и возрастная динамика заболевания 77
2.2.2.Заражение доноров и условия, влияющие на тяжесть переболевания и выраженность паразитемии 87
2.2.3.Патогенная роль Babesia canis при экспериментальном бабезиозе собак 95
2.2.3.1.Симптомокомплекс,у интактных и спленэктомированных собак при экспериментальном заражении возбудителем бабезиоза 95 2.2.3.2.Изучение морфологии крови у собак при разной тяжести течения экспериментального бабезиоза 107
2.2.3.3. Биохимические показатели крови у больных животных 116
2.2.3.4.Патологоморфологические изменения при экспериментальном бабезиозе 137
2.2.4.Методы выделения Babesia canis из крови больных бабезиозом собак и приготовление антигена 154
2.2.5.Сравнительное изучение активности антигенов, приготовленных разными методами 156
2.2.6. Динамика сывороточных антител у экспериментально заражённых собак к возбудителю бабезиоза 159
2.2.6.1. Динамика комплементсвязывающих антител при исследоваии в РДСК 159
2.2.6.2. Динамика накопления антител, выявляемых с помощью ИФА 162
2.2.7.Испытание верибена при бабезиозе у собак 177
2.2.7.1. Сравнительное испытание верибена в дозах
2,5-4,2мг/кг по ДВ 177
2.2.7.2. Лечебно-профилактическая эффективность верибена 191
3.Обсуждение полученных результатов 196
4. Выводы 212
5.Сведения о практическом использовании полученных автором научных результатов 214
6.Рекомендации по использованию научных выводов 215
7. Список литературы
- Историческая справка о возбудителе и распространении болезни
- Патогенная роль возбудителя бабезиоза в организме собак
- Сезонная и возрастная динамика заболевания
- Биохимические показатели крови у больных животных
Введение к работе
Собака-это животное, которое можно поставить рядом с лошадью в историческом развитии человечества. Она была первым животным, приручённым человеком 15-20 тыс. лет тому назад.
Безусловно, собака имеет много общего с волком, шакалом и их гибридами, что интересно в практическом отношении с учётом наличия у них ряда общих паразитов.
Необходимо указать, что ранее в протозоологической практике, собак использовали как лабораторный объект, в связи с чем их заражали возбудителем Babesia canis и на примере бабезиоза собак изучали некоторые вопросы биологии, иммунитета, мер борьбы и профилактики, подразумевая их идентичность при ряде пироплазмидозов животных.
Однако в настоящее время общепризнанно, что при всех кровепаразитар-ных болезнях, включая и бабезиоз собак, существуют особенности патогенеза и иммунитета, свойственные определённым заболеваниям и видам животных, что исключает единый унифицированный подход к изучению этих вопросов, а тем более приравнивание данных, полученных при бабезиозе у собак, например, к бабезиозу крупного рогатого скота.
Нужно отметить, что на нынешнем этапе люди(особенно население города) собаке придают особое значение. К сожалению, болезни собак инфекционной, инвазионной и незаразной этиологии до сих пор наносят значительный экономический ущерб служебному собаководству и частным владельцам собак.
В этой связи отметим, что среди паразитарных болезней собак особое место занимает бабезиоз - трансмиссивное заболевание, вызываемое беспигментным эндоглобулярным простейшим Babesia canis из семейства Babesii-dae, клинически характеризующееся лихорадкой, анемией и желтушностью конъюнктивы, склеры, видимых слизистых оболочек, гемоглобинурией, расстройствами функций сердечно-сосудистой, дыхательной и пищеварительной систем, оканчивающиеся, как правило, при несвоевременном лечении, гибелью животных.
Переносчиками возбудителя бабезиоза собак в условиях центральных областей Нечерноземья являются клещи рода Dermacentor: D.pictus и D. mar-ginatus, распространённые повсеместно, что и обуславливает широкое распространение бабезиоза..
Заболевание встречается в Средней зоне Европейской части России, в Киевской, Московской, Саратовской, Омской, Новосибирской и других областях, на Урале, в Крыму, на Кавказе (Марков А.А., 1957 и др.).
В последнее время имеется тенденция к возрастанию экстенсивности инвазии. Одним из факторов, обуславливающих поддержание эпизоотических очагов является длительное, до 1 года носительство бабезий в организме однократно переболевших собак(Иванюшин Б.И., 1973, Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Шумилов Б.В., 1973.), во время которого возможны рециди-Bbi(Sergent, Donatien, Parrot, Lestoguard,1930). Кроме того, для Babesia canis свойственна трансовариальная циркуляция в клещах рода Dermacentor, что создаёт условия для длительной сохраняемости возбудителя в организме переносчиков. Этому способствует также и продолжительная-до дв гх лет-диапауза инвазированной фазы клеща, что лишний раз доказывает большое эпизоотологическое значение клещей как резервентов инвазии в природе.
К возбудителю, кроме собак, восприимчивы: Canis aureus(inaKan), Canis latrans(KofioT), Canis Іирш(волк), Canis(Thos) аёи8ПД8(шакал полосатый), Canis (Thos) те8оте1а8(шакал чепрачный), Nyctereutes procyonoides (собака енотовидная), Vulpes vulpes(nncHHa), которые играют весьма важную роль в поддержании клещевых очагов, тем самым способствуя сохранению возбудителя в природе(Степанова Н.И., Казаков Н.А., Заблоцкий В.Т.,1982, Крылов MB., 1996 и др.).
К настоящему времени относительно хорошо изучены морфобиологиче-ские особенности Babesia canis, клинические признаки и течение болезни, некоторые аспекты эпизоотологии бабезиоза собак, предложен ряд химиоте-рапевтических препаратов для лечения(Якимов В.Л., 1931; Иванюшин Б.И., Шумилов Б.В., 1971; Колабский Н.А.,1960,1971;Гайдуков А.Х., 1957,1960; Никольский С.Н.,1990; Лебедева В.Л., 1992; Popovic N.A., Ristic М., 1970, 1981; Schetters ТН., 1991, 1993; JacobsonL.S.,1994 и др.).
Однако проблема борьбы с бабезиозом ещё далека от разрешения, что объясняется, главным образом, недостаточностью знаний сущности патологии, возникающей в ответ на взаимоотношение паразита и хозяина. Кроме того, недостаточно изучены механизмы, подавляющие рост и развитие возбудителя в организме, обуславливающие тем самым не только индивидуальные различия проявления заболевания как при первичном заражении так и при реинвазиях, но и благодаря которым организм становится невосприимчивым к возбудителю.
Кроме того, до сих пор в нашей стране нет средств специфической про-филактики бабезиоза. Что же касается химиопрофилактики, то она также не достаточно разработана. Поэтому в настоящее время единственно доступным способом профилактики является уничтожение или предупреждение нападения клещей на животных как механическими, так и химическими способами.
Одним из основных факторов защиты организма являются специфические антитела. Тем не менее, выявить их наличие и проанализировать значение гуморального фактора иммунитета стало возможным лишь только после того, как была доказана принципиальная возможность использования серологических реакций при пироплазмидозах (Schindler R., Dennig Н.К., 1960; Ristic M.,1981; Schetters Th. P.M.,1991,1993; Adachi K, Ueno Ch., Makimura S.,
1993 и др.).
Несмотря на то, что изучением механизмов возникновения и проявления иммунитета при бабезиозе собак и носительства отечественные исследователи занимались в течение ряда лет (Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Тар-вердян Т.Н., 1963; Гайдуков А.Х.,1957; Ли П.Н.,1976; Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Шумилов Б.В.,1973; Никифоренко В.И.,1976) некоторые важные вопросы, касающиеся сроков сохранения возбудителя в организме собак после переболевания, характера иммунологической перестройки организма и взаимоотношений паразита и хозяина требуют дальнейшего изучения.
За рубежом проблеме иммунологического статуса при бабезиозе у собак уделяется гораздо больше внимания(МаШегЬе W.D.,1956; Ristic М., 1981; Molinar Е., et.al.1982; Schetters Th. P.M., Kleuscens J., 1991; Adachi K., 1993 и др) В настоящее время общеизвестно, что при бабезиозе собак иммунные реакции являются общефизиологической защитной функцией организма, основу которой составляют клеточные и гуморальные факторы. В ответ на внедрение паразита происходит иммунологическая перестройка макроорганизма, что указывает на необходимость использования иммунологических методов изучения патогенеза и механизмов развития иммунитета, для ранней диагностики заболевания и, особенно, носительства, протекающего длительное время без выраженных признаков болезни. На сегодняшний день в нашей стране серологические методы диагностики бабезиоза собак не разработаны. Более того, нет отработанных методик, позволяющих получить высокую степень паразитемии у собак с целью приготовления антигена. Соответственно, нет и разработанной технологии изготовления антигена. В 1972 г. Иванюшиным Б.И. был получен антиген от больных бабезиозом собак, использованный автором_б реакции диффузной преципитации в геле, применение которой, однако, не вышло за рамки лабораторных испытаний. Кроме того, в литературе мы не обнаружили данных, касающихся динамики паразитемии в связи с синтезом антител при бабезиозе собак.
Всё вышеизложенное свидетельствует о необходимости изучения особенностей эпизоотологии заболевания, некоторых вопросов биологии возбудителя, а также разработки методов приготовления высокоактивного и специфичного антигена для серологической диагностики бабезиоза собак. Если учесть широкое распространение бабезиоза в различных регионах страны, а также недостаточность знаний в области биологии возбудителя и вызываемой им патологии в организме животных, а также эпизоотологии заболевания и мер борьбы, то изучение данной темы, безусловно, является актуальным. Цель и задачи исследования:
В процессе выполнения настоящей работы перед нами была поставлена цель-изучить некоторые аспекты биологии возбудителя Babesia canis и особенности эпизоотологии заболевания в условиях г.Москвы и Московской области; изучить иммунологический статус организма при бабезиозе и тем самым усовершенствовать меры борьбы с бабезиозом собак.
Для этого следовало решить следующие задачи:
-воспроизвести бабезиоз у собак в экспериментальных условиях;
-изучить эпизоотологические особенности бабезиоза собак в условиях г.Москвы и Московской области;
-изучить клинико-гематологические и биохимические показатели при различном течении бабезиоза в динамике инвазии;
-изучить патологоморфологические изменения в организме при бабезиозе;
-определить условия, влияющие на тяжесть переболевания и степень пара-зитемии у заражённых животных;
-отработать методику выделения возбудителя Babesia canis из крови спле-нэктомированных доноров и приготовить антиген;
-изучить активность полученного антигена, динамику сывороточных антител у больных животных и паразитоносителей с использованием серологических реакций-реакций длительного связывания комплемента (РДСК) и иммуноферментного анализа (ИФА);
-определить лечебно-профилактическую эффективность верибена при экспериментальном бабезиозе.
Научная новизна.
Изучены и обобщены сведения о распространении, сезонной и возрастной динамике бабезиоза собак в условиях г. Москвы и Московской области.
Отработаны методы, позволяющие воспроизвести бабезиоз в экспериментальных условиях.
Изучены клинико-гематологические и биохимические показатели при разной тяжести течения экспериментального бабезиоза в динамике инвазии.
Разработаны условия для получения высокой паразитемии у доноров с целью приготовления антигена.
Разработан метод приготовления антигена для серологической диагностики бабезиоза собак. Впервые изучена динамика антителообразования у экспериментально заражённых В.canis животных с помощью двух серологических реакций-РДСК и ИФА и показана её взаимосвязь с динамикой паразитемии. Выявлено, что ИФА является более чувствительным серологическим тестом при бабезиозе собак, чем РДСК. Практическое значение работы.
1. Установлены первичные сроки заражения, особенности распространения и развития инвазии в сезонно-возрастном аспекте в условиях г.Москвы и Московской области.
2.Разработаны методы воспроизведения бабезиоза у собак в экспериментальных условиях.
3.Решение поставленных задач позволяет определить глубину патологии и разработать научно-обоснованные методы специфической и патогенетической терапии бабезиоза у собак.
4.Изучены динамика антителообразования, а также причины, определяющие тяжесть переболевания и степень паразитемии.
5.Разработанный метод приготовления антигена имеет практическое значение для ранней диагностики заболевания и паразитоносительства.
6. Определена высокая диагностическая достоверность ИФА при бабезиозе собак.
7.Испытание верибена дало возможность предложить препарат в дозе 3,1 мг/кг по ДВ с лечебной и профилактической целью при бабезиозе собак.
Апробация полученных результатов.
Материалы диссертационной работы доложены на совещаниях кафедры паразитологии и инвазионных болезней животных МГАВМиБ им. К.И.Скрябина в 1998-1999г.г.; на 7 международной конференции по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных, 1999г.; на конференции, посвященной 80-летию МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, 1999г.; на конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. И.В. Орлова; на объединённой сессии Координационного совещания по ветеринарной гельминтологии, Центрального совета Общества гельминтологов России и секции "Инвазионные болезни животных" РАСХН, 2000г.
Основные материалы диссертации отражены в четырех научных статьях.
Основные положения, выносимые на защиту диссертации.
1. Результаты изучения распространения, сезонной и возрастной динамики бабезиоза собак в условиях г. Москвы и Московской области.
2.Результаты экспериментального заражения собак Babesia canis и условия, влияющие на тяжесть течения болезш выраженность паразитемии.
3.Результаты изучения морфологических и биохимических показателей крови, а также патологоморфологических изменений при различной тяжести течения бабезиоза.
4.Результаты изучения динамики антителообразования методами РДСК и ИФА при экспериментальном бабезиозе у собак.
5.Результаты испытания различных доз верибена при бабезиозе собак с лечебной и профилактической целями.
Историческая справка о возбудителе и распространении болезни
Babesia canis была обнаружена впервые в Милане (Ріала и Galli-Valerio, 1895) у собаки с высокой температурой, желтухой и гемоглобинурией. R.Koch в 1898 г. в Восточной Германской Африке наблюдал у собак маля-риеподобное заболевание и обнаружил при этом паразитов, более или менее сходных с паразитами малярии человека. В последующем подобное заболевание было описано в 1899 г. в Южной Африке(НШ:спеоп, 1899). Возбудитель бабезиоза собак был описан в этой же стране учёными Carrington, Purvis и Carwright-Reed.
В Южной Африке это заболевание наблюдали: Spreul, 1894; Robertson, 1902; Theiler,1903. Celli изучал его в Ломбардии и в Римской провинции (1900). В этом же году Marchoux установил у собак этого возбудителя в Сенегале и, следуя номенклатуре, предложенной Kaveran, назвал его Piroplasma canis (1900). Leblanc (1900), а затем Almy и Nocard (1901) обнаружили его во Франции у больной собаки в клиниках Альфорской ветеринарной школы.
В последующем подобные образования в мазках крови больных туземных и английских собак были описаны в HHflHH(Delgetty,1904;Lingard и Jennings, 1904; James, 1905; Webb, 1905; Christophers, 1907).
О широком распространении бабезиоза собак в Индии, особенно среди импортированных, свидетельствуют данные Pease и Gunn(1908). В 1910 г. Patton идентифицировал возбудителя в Мадрасе с новым паразитом P.gibsoni.
Имеются многочисленные сведения об обнаружении возбудителя и вызываемой им болезни в различных весьма отдаленных местностях. В Венгрии его описал Wetzl (1904), в этом же году Martinez описал возбудителя в Пор-то-Рико, Memmo, Martoglio и Adani (1905) - в Эритрее, Wilbert (1905) - во Французской Западной Африке.
В Китае (Шантунг) бабезиоз был описан Martini (1907), a Leutpold (1908) наблюдал высокую смертность собак в немецких владениях восточной Африки.
Eggerbrecht (1908) установил заболевание у собаки в Tsingtau, a Mathis (1909) обнаружил возбудителя в крови у местных и импортированных собак в Тонкине.
В последующие годы бабезиоз собак был описан в Багдаде и Алеппо (Wenyon, 1911), на Золотом Берегу (Macfie, 1915), в Панаме (Clare, 1918).
На территории России возбудитель бабезиоза собак впервые был выявлен и описан Якимовым В.Л.(1909) в Петербурге у собаки, привезенной с Северного Кавказа и почти одновременно с ним Любинецким В.Л.(1909) в Киеве. Затем заболевание было диагностировано Джунковским А. И. и Лу-сом К. К. в 1909 г. в Закавказье.
Кроме этих открытий, появились сообщения об обнаружении заболевания в Сибири-Оболдуев Г.А., 1910; Орлов Н.П.,1926;в Саратове-Виноградов К.Н.; в Пятигорске-Белавин B.C. В Уральске заболевание было описано Якимовым В.Л., Аманжуловым, Белицером А.В. и Марковым A.A., 1929( цит. по Якимову В.Л., 1931).
Имеющиеся литературные данные прошлых лет свидетельствуют о том, что возбудитель бабезиоза собак был представлен следующими видами: от пироплазмы собак Piroplasma canis, найденной Ріала и Galli-Valerio (1895), были отделены паразиты собак в Южной Америке- Rangelia vitalii, в Индии -Achromaticus gibsoni и в Британской Восточной Африке - Rossiella rossi.
В 1910 г. Nuttall Q.H. описал у шакалов в Восточной Африке внутриэрит-роцитарных паразитов как новый вид и назвал Piroplasma rossi. В дальнейшем он дал о нем дополнительную информацию и заменил родовое имя Piroplasma именем Rossiella. Однако Neitz и Steyn (1947), сличившие африканского и европейского паразитов, указали на идентичность весьма существенных морфологических признаков, что дало основание считать их за один вид, каковым и в том и в другом случае должен быть Babesia canis.
В дальнейшем явилось очевидным, что существуют несколько локальных штаммов, передающихся клещами рода Dermacentor в Европе, клещами Rhipicephalus sanguineus в тропических, субтропических и южных регионах и клещами Haemaphysalis leachi в Африке и определяющих, при прочих равных условиях, неодинаковую тяжесть болезни(1Н1епЬе G.,1989;Itoh N. et al.,1989).
Помимо этого, по данным иностранной литературы, различия между штаммами обуславливаются специфичностью переносчиков возбудителей, их ареалом и, что самое главное, отсутствием перекрестного HMMyHHTeTa(Ishibashi Т., Sunaga F.,1995).
Reichenow Е.(1935) выделил в качестве самостоятельных видов паразитов, передающихся клещами R. sanguineus и рода Dermacentor и отметил, как весьма характерную особенность более крупные размеры первого паразита и дал ему видовое название Babesia major. Поскольку это название уже было дано паразиту крупного рогатого скота (Sergent Ed. et al, 1926), он впоследствии заменил его именем Babesia vogeli (1937). Собаки, иммунные к B.canis, остаются чувствительными к В.gibsoni, а собаки, зараженные
B.vogeli, не резистентны к инвазии В.сашХКрылов М.В.,1996). Тем не менее, некоторые авторы (Poisson, 1953) считают B.vogeli синонимом B.canis.
Возбудитель бабезиоза собак в Австралии был впервые обнаружен в г. Таунсвилл у щенков и взрослых собак (Hill and Bolton, 1966). Авторы описали болезнь и крупных грушевидных возбудителей, располагающихся в эритроцитах и, кроме того, экспериментально доказали возможность его переноса посредством клещей Rhipicephalus sanguineus. В дальнейшем это заболевание было описано Callow(1984)y щенков дикой собаки динго(цит. по Irwin P.J., Hutchinson G.W., 1991).
В настоящее время накопившиеся экспериментальные материалы по изучению морфологических и биологических свойств возбудителя бабезиоза собак (Крылов М.В., 1978,1996) дают основание считать Achromaticus gibsoni синонимами В.gibsoni, a E.rossi, Rossiella rossi, Piroplasma canis - синонимами Babesia canis (Patton, 1910), B.major - синонимом B.vogeli (Reichenow E., 1935).
Положение возбудителя бабезиза собак в системе простейших.
Положение пироплазмид в системе простейших долгое время оставалось спорным. Франса (1910) помещал семейство Piroplasmidae вместе с семейством Plasmodidae в класс Sporozoa, в порядок Coccidiomorpha, в подпорядок Haemosporidia.
Исходя из работ Киношита (Kinoshita, 1907), Брейна и Хиндла (Brein, Hin-dle, 1908), которые описали якобы жгутиковые стадии при развитии в позвоночном хозяине у B.canis, Дю-Туа (Duoit P.J., 1918) относил пироплазмид к Flagellata(inrT. по Степановой Н.И. и др., 1982).
Однако последующие исследования показали полное отсутствие жгутиков у различных форм пироплазмид как в позвоночном, так и беспозвоночном хозяевах, а, между тем, наличие жгутиков и для большинства эластичной оболочки-кутикулы, которая определяет постоянную, обычно удлиненную форму тела, являются критериями для отнесения организмов в класс Flagel-lata. Таким образом, отсутствие этих признаков у пироплазмид делает невозможным включение их в класс Flagellata.
По классификации, предложенной Веньоном (Wenyon СМ., 1926) возбудителя бабезиоза собак вместе с другими возбудителями пироплазмидозов в начале 30-х годов относили к Типу Protozoa (Goldfuss, 1820)
Патогенная роль возбудителя бабезиоза в организме собак
В основе патогенеза пироплазмидозов лежат патофизиологические сдвиги, связанные с генерализованной воспалительной реакцией, возникающей в ответ на поступление в кровяное русло пирогенных веществ экзогенной природы, нарушением проницаемости стенок кровеносных сосудов, уменьшением альбуминов в крови, изменением водно-солевого баланса, отеком тканей и другими патологическими процессами.
Ответная реакция организма-хозяина в ответ на внедрение бабезий, в первую очередь, зависит от его генетического, физиологического и иммунологического статуса.
С другой стороны, воздействие возбудителя на организм зависит от его патогенности, которая для простейшего является видовым генетическим признаком и вирулентности, являющейся степенью патогенности и подверженной изменчивости.
Так, можно ослабить вирулентность B.canis путем пассажирования его на ранней стадии развития, в то время как пассажирование возбудителя бабе-зиоза на высоте инвазии приводит к усилению его вирулентных свойств (Гайдуков А.Х., 1957). Кроме того, мелкие бабезий более вирулентны, чем крупные (Крылов М.В., 1996); также южно-африканские штаммы более вирулентны, чем австралийские. Природа изменчивости вирулентности возбудителей бабезиозов вообще и у собак в частности до сих пор полностью не выяснена, за исключением B.bovis, который в течение длительного времени являлся предметом всестороннего пристального изучения.
Нельзя отрицать, что вирулентность зависит и от физиологического состояния хозяина, о чем говорят данные по спленэктомии собак (Иванюшин Б.И., 1971). Кроме того, по данным Колабского Н.А.,Иванюшина Б.И.(1971), при облучении иммунных к бабезиозу собак летальными дозами (600 рт) наблюдалось увеличении паразитемии. Дуранов В.С.(1966), Абрамов И.В., Дуранов В.С.(1969), Баранников В.Д.(1970) отмечают, что лучи Рентгена в дозах 7500,10000,15000 рент. Ослабляют вирулентность Babesia canis.
Сведения о вирулентности B.canis представлены в работах Якимова В.Л., Навроцкого Н.Н., Бекенского П.В., Титова А.А., Гидаспова Ф.В., Белицера A.B.,Nocard, Motas, Bumann, Hieschulz, Wawo-Roentol, Regendanz P., Reiche-now E. и др.( цит. по Гайдукову А.Х.,1957), Крылова М.В. (1996).
Паразиты, являясь белковыми субстанциями, а также вследствие их антигенной вариабельности, воздействуя на защитные механизмы хозяина, вызывают хроническую воспалительную реакцию, сопровождающуюся инфильтрацией в ткани мононуклеарных лейкоцитов, фибробластов, макрофагов. Генерализованный воспалительный процесс проявляется активизацией калликреин-кининовой системы и высвобождением (выделением) вазоактив-ных компонентов - кининов. В организме кинины образуются из кининоге-нов - неактивных предшественников белковой природы, при воздействии на них протеолитических ферментов - калликреинов, находящихся в плазме крови и тканях в виде прекалликреинов - неактивных предшественников. Плазменные калликреины образуют брадикинин, а тканевые - каллидин. Наиболее полно роль кининов и калликреина при кровопаразитарных заболеваниях, а особенно при бабезиозах, была описана Wright, 1979,1981(цит. по Тимофееву Б.А., 1981).
Кининовая система связана с системами фибринолиза и свертывания. Так, превращение прекалликреина в активный калликреин катализируется фактором XII (Хагемана), который, в свою очередь, активизируется под влиянием разнообразных физических, химических и биологических факторов, а также плазмином.
Кроме того, калликреин играет важную роль в развитии шока, имеющего место при бабезиозе собак (Bland-van den Berg, 1992; Button С, 1976; Freeman M.J., Kirby B.M. et al, 1994; Malherbe W.D., 1965,1976).
Привлекает внимание и наличие в крови животных, больных пироплазми-дозами, криофибриногенных комплексов, являющихся одним из факторов, вызывающих нарушение кровообращения. Действие брадикинина, каллиди-на и криофибриногенных комплексов взаимосвязано с другими биологическими веществами организма, в котором имеют место разрушение клеток и выделение гистамина из фармакологически неактивного его соединения с гепарином и другими биологическими катионообменниками, 5-гидроксит-риптамина и протеолитических ферментов. Медиаторы клеточного воспаления, помимо церебрального воспаления и почечного синдрома, определяют развитие коллапса и шока.
Вероятно, наиболее пагубным патофизиологическим поражением в организме при бабезиозе является стаз в микроциркуляторной системе в результате аггрегации пораженных эритроцитов, которые слипаются не только друг с другом, но также и с эндотелием, что особенно имеет место в капиллярах мозга, почек и скелетной MycKynaTypbi(Wright I.G., 1972, 1973; Wright I.G., Goodger B.V., McKenna R.V., Mahoney D.F., 1979).
Появление в крови брадикинина сопровождается выделением катехолами-нов, в частности, адреналина и норадреналина, которые, уменьшая проницаемость кровеносных сосудов, препятствуют выпотеванию жидкости и белка. Так, по данным Тимофеева Б.А.(1981), введение норадреналина больным бабезиозом щенкам, находящимся в глубокой депрессии, резко улучшает их состояние.
Необходимо отметить, что имеющие место при бабезиозе гемолизис, повреждение эндотелия сосудов, ацидоз, гипоксия, сосудистый стаз, шок ведут к развитию синдрома классической диссеминированной интраваску-лярной коагуляции, которая, являясь системной реакцией, часто доминирует в общей картине заболеванияфаіе J., 1984; Guelfi J.F.,Dubois F.,1984; Onishi Т.,1990,1993; Taylor J.H.,1991,1993; Namikawa K., 1994).Патогенез ДВС-синдрома схематично можно представить следующей последовательностью патологических нарушений: активация системы гемостаза со сменой фаз гипер-и гипокоагуляции-внутрисосудистое свёртывание крови; агрегация тромбоцитов и эритроцитов-микротромбообразование сосудов и блокада микроциркуляции в органах с их дисфункцией и дистрофией; истощение компонентов свёртывающей системы крови и фибринолиза, снижение содержания тромбоцитов в крови, повреждение на большой площади эндотелия сосудов эндотоксинами, иммунными комплексами, компонентами комплемента. Большое токсическое влияние оказывают и продукты белкового распада, скапливающиеся в большом количестве как в крови, так и в органах в результате резкой активации протеолитических систем(свёртывающей, калликреинкининовой, фибринолитической, комплемента и др.), нарушения кровоснабжения, гипоксии и некротических изменений в тканях, частого ослабления дезинтоксикационной и выделительной функций печени и почек.
Сезонная и возрастная динамика заболевания
Изучение сезонной динамики заболеваемости собак бабезиозом показало, что заболевание встречается в течение весенне-летнего и частично осеннего периода, однако количество заболевших собак значительно варьирует в зависимости от сезона года.
Результаты изучения сезонной динамики заболеваемости собак бабезиозом в г.Москве и Московской области за период 1995-1999г.г. представлены в таблице 11.
Из таблицы 11 следует, что в 1995г. первые случаи заболевания были зарегистрированы в конце третьей декады апреля, что составило 2,7% от общего числа больных бабезиозом собак за текущий год. В мае отмечали повышение заболеваемости собак до 40,7%, в то время как в последующие два месяца данный показатель значительно снизился, вплоть до полного отсутствия больных животных в июле. Единичные случаи заболевания - 4,0% регистрировали в последних числах августа (24-31.08.95), однако в сентябре установили повышение указанного параметра до 27,3%. На октябрь приходилось до 10,0%) всех случаев больных бабезиозом собак за указанный год, а в ноябре наблюдали лишь единичный случай бабезиоза.
В 1996г. первые случаи бабезиоза мы регистрировали в первых числах мая. В дальнейшем заболеваемость собак повысилась и составила в указанном месяце 52,6% от общего числа больных бабезиозом собак за текущий год. В июне количество больных ЖИВОТНЫХ СНИЗИЛОСЬ ДО 8,67%) и в июле регистрировали минимальную заражённость-0,93%) от общегодового числа заболевших бабезиозом собак. В сентябре отмечали второй пик заболеваемости, на который приходилось 23,5% больных бабезиозом собак. В октябре и ноябре регистрировали 8,67% и 2,48%о случаев от общегодового количества больных бабезиозом собак.
По наблюдениям за 1997-1998 г. г. единичные случаи бабезиоза регистрировали уже в последних числах марта (27.03.97 и 30.03.98), что составило 0,08% и 0,07%) от общегодового числа заболевших соответственно и было обусловлено ранней и теплой весной.
В апреле число случаев заболевания возрастало и в мае оно составляло 34%о в 1997г. и 36,3%) в 1998г. Пик инвазии отмечали в июне: в 1997г. -48,6%о, а в 1998г. - 47,5% от общегодового числа больных бабезиозом собак. Однако в июле заболеваемость начинает уменьшаться и в августе 1997 и 1998 г. г. она составляет уже 3,28% и 2,79% соответственно. На сентябрь приходилось 7,24%) и 6,78% всех случаев заболеваний в 1997г. и 1998г. соответственно. К началу третьей декады октября заболеваемость собак начинает спадать, а в ноябре бабезиоз встречался вообще в единичных случаях. Так, если на октябрь приходилось 2,13% и 1,99% случаев бабезиоза, то на ноябрь уже 0,45% и 0,27% в 1997 и 1998 г.г. соответственно.
Как видно из таблицы 11, в 1999г. первичные случаи заболевания начали регистрировать в начале третьей декады апреля, однако в мае, в связи с резким похолоданием в первых числах месяца до 5 С, отмечали резкий спад заболеваемости до 19,6% по сравнению с предыдущими годами. К концу первой - началу второй декады июня число случаев бабезиоза снизилось до 5,9%, а в конце месяца и в июле заболевание не наблюдалось. В последней декаде августа количество заболевших собак начинает увеличиваться и в сентябре оно составило 37,3% от общегодового показателя.
Как правило, характерным является то, что весенняя вспышка бабезиоза сопровождается наибольшим количеством больных собак, а осенью количество заболевших обычно небольшое. Однако, как видно из вышеизложенного, в 1999г. мы наблюдали обратное явление с максимумом заболеваемости собак в конце первой - второй декаде сентября. Вероятно, это связано, в первую очередь, с климатическими факторами, играющими ведущую роль в биологии и этологии клещей-переносчиков возбудителя бабезиоза.
Таким образом, изучение сезонной динамики бабезиоза у собак показало, что за период 1995-1999 г. г. заболеваемость имела характер двухвершинной кривой с пиками инвазии: в 1995-1996 г. г. - в конце первой - второй декаде мая и первой-второй декадах сентября; в 1997-1998 г. г. - в первой-второй декадах июня и в первой-второй декадах сентября; а в 1999г. максимум инвазии отмечали в конце первой - второй декаде сентября (рис 6).
Первичное заражение собак возбудителем бабезиоза происходит, в основном, в конце второй - начале третьей декады апреля, в связи с чем и первые клинические признаки мы обычно регистрировали уже в конце третьей декады апреля - в первых числах мая. В единичных случаях бабезиоз регистрировали в последних числах марта.
Высокую зараженность отмечали в мае, причем число заболевших быстро нарастало к середине месяца (10-15 мая). В мае 1995-1996г.г. регистрировали не только наибольшее число больных собак, но также и наибольшее количество пунктов, где отмечалось заболевание. В июне 1995-1996г. г. число случаев заболевания начинало спадать, в то время как в 1997-1998 г.г., наоборот, регистрировали повышение заболеваемости собак. Однако к концу первой - началу второй декады июля заболеваемость собак имела тенденцию к снижению, вплоть до полного отсутствия больных животных в отдельные годы.
К началу третьей декады августа число случаев бабезиоза увеличивалось и в сентябре отмечали второй пик заболеваемости животных, на который приходилось от 6,78 до 37,3% всех случаев общегодового количества заболевших. К концу второй- началу третьей декады сентября число случаев заболевания начинало уменьшаться, продолжая спадать в октябре, а в ноябре бабезиоз регистрировали вообще как очень редкое явление. симости от активности клещей-переносчиков. Последняя в свою очередь обусловлена природно-климатическими факторами. Исходя из этого было проведено сопоставление данных заболеваемости собак бабезиозом и средних показателей температуры и относительной влажности по месяцам за период 1995-1999г. г. Из рисунка 7 видно, что высоким процентам заболеваемости собак соответствуют температуры окружающей среды в диапазоне от 12-13 до 21 С. Из этого следует, что они являются наиболее оптимальными для нападения клещей-переносчиков на животных. Однако некоторые колебания температуры ±1,5-2С как в сторону снижения, так и повышения допустимы.
В таблице 12 показаны средние данные температуры воздуха и относительной влажности за 1995-1999 г.г. по г.Москве и Московской области.
С точки зрения наших исследований является интересным то, что повышение температуры в середине апреля до + 10ч- + 12С и влажность способствуют активизации перезимовавших клещей в стадии имаго, являющихся фазой, передающей возбудителя восприимчивому животному. Кроме того, среднемесячные показатели температуры по годам незначительно отличаются друг от друга, что не может не влиять на сезонность инвазии и первичные сроки заражения животных. В третьей декаде апреля температура окружающей среды достигает 10С, а в мае до 18С. Так как основным экологическим фактором, лимитирующем активность клещей является дефицит тепла весной и осенью, то повышение температуры до 10С и выше говорит об их активности в конце апреля, а в отдельные годы и в конце третьей декады марта, что было отмечено в 1997 и 1998г. г.
Говорить о том, что собаки в июле не подвергаются заболеванию, вероятно, рискованно, т.к. мы регистрировали в это время единичные случаи бабе-зиоза в 1996г.-0,93%; 1997г-2,44% и 1998-2,72%, хотя, конечно, процент заболеваемости здесь ниже, чем в остальные сезоны года. Основная причина этого заключается в том, что половозрелые клещи нападают на животных, вероятно, не одномоментно, а постепенно, в результате чего часть напитавшихся самок приступает к яйцекладке, обуславливая, тем самым, паразити-рование в летние месяцы личинок и нимф, а другая часть половозрелых клещей еще продолжает нападать, однако активность их резко спадает под воздействием высоких температур июля.
Биохимические показатели крови у больных животных
Изучение содержания общего белка и белковых фракций Кровь относится к тканям внутренней среды организма, одной из характерных особенностей которой является то, что многие ее составные компоненты не образуются в ней самой, а поступают из органов и тканей, в связи с чем кровь наиболее полно отражает как различные физиологические процессы, имеющие место в организме, так и патологические состояния.
Одним из биологически важных компонентов сыворотки крови являются белки - высокомолекулярные биологические полимеры, которые, находясь в составе всех видов живых организмов, составляют основу их структурной организации и выполняют разнообразные функции.
Так, в составе ферментов белки выполняют функцию биологических катализаторов, обеспечивая определенную направленность, последовательность течения и высокую скорость химических реакций, обуславливая взаимосвязь биохимических процессов организма. В качестве специфических белков крови - антител, а также белков, участвующих в процессах свертывания крови, они выполняют защитную роль. Кроме того, белки поддерживают постоянство онкотического давления, рН крови, участвуют в регуляции водного обмена, в синтезе многих гормонов, осуществляют дыхательную, а также энергетическую роль в живой системе и т.д.
По химическому составу белки разделяют на простые, состоящие только из аминокислот и сложные, в состав которых, кроме аминокислот, входят различные вещества небелкового характера. В частности, к простым белкам относятся альбумины и глобулины, однако в составе а-глобулинов имеются специализированные углеводсодержащие белки, а у Р-глобулинов выражена способность к комплексообразованию с липидами.
В настоящее время известно не менее четырех фракций сывороточного альбумина, около пятнадцати-двадцати фракций сывороточного глобулина, однако вместе с этим белки представляют собой единый комплекс, внутри которого могут иметь место определенные изменения в результате воздействия ряда факторов.
Альбумины, характеризуемые относительно низкой вязкостью, обладают повышенной электрофоретической подвижностью. Они содержат незначительные количества углеводов и липидов, а также глицин, изолейцин, триптофан; хорошо растворимы в воде, образуя растворы малой вязкости. С фракцией альбуминов связаны такие ферменты как холинэстераза, пептида-зы, дегидрогеназы, активатор пероксидазы гемоглобина, глутамино-аспарагиновая аминотрансфераза.
Сывороточные альбумины, благодаря способности к образованию биохимических комплексов с липидами, витаминами, минеральными веществами и т.д. выполняют в организме транспортную функцию.
Кроме этого, за счет образования с кислотами и щелочами легко диссоциирующих солей, альбумины играют важную роль в поддержании кислотно-щелочного равновесия и онкотического давления в организме.
Альбумины имеют большое значение и как резервный белок, осуществляющий связь между белками плазмы и тканей. Адсорбируя свободные аминокислоты, альбумины облегчают их проникновение через мембранные барьеры в ткани, а также, находясь в комплексе со многими биологически активными веществами, оказывают регулирующее влияние на метаболические процессы в организме.
Что касается глобулинов, то они представляют собой крайне неоднородную группу плазменных белков и подразделяются на три основные фракции - а-, Р- и у-глобулины.
Альфа-глобулины при электрофорезе разделяются на подфракции (альфа-1 и альфа-2) и включают в себя часть липопротеидов, глюкопротеидов и гемо-глобулинов. oci-глобулины связывают билирубин, стероиды, каротиноиды, а а2-глобулины соединяются, в основном, с углеводами и солями бария.
Бета-глобулины при электрофорезе занимают промежуточное положение между а- и у-глобулинами и соединяются с жирами, образуя липопротеиды, а также связывают железо и медь. С р-глобулинами связана основная часть тромбина, в связи с чем им придается важное значение в процессах свертывания крови.
По данным некоторых авторов (Суравкина М.С.), увеличение количества Р-глобулинов является характерным для воспалительных процессов, другие авторы (Кон, Кантаров) отмечают увеличение их количества при токсических явлениях. В литературе есть сообщения, что р-глобулины соответствуют чаще всего антитоксинам(цит. по Шумилову Б.В., 1971).
Наиболее важной фракцией глобулиновых белков сыворотки крови являются у-глобулины, в составе которых, наряду с неспецифическими, содержатся специфические белки-антитела.
Известно, что главное место образования плазменных белков - печень, из чего следует, что нарушение баланса сывороточных белков является следствием заболеваний печени, для которых типично резкое уменьшение альбуминов и увеличение суммы всех глобулинов. Поражение печеночных клеток приводит к снижению синтеза альбуминов и фибриногена, в то время как возбуждение ретикуло-эндотелиальной системы в случае инфекции, интоксикации и других воздействий приводит к гиперглобулинемии, которую рассматривают как проявление мобилизации защитных сил организма. Уменьшение количества альбуминов в сыворотке крови при гемоспоридиозах отмечено в работах Тареева Е.М.(1932), Аблакумовой 3.Б. (1947), Цель-нер(1949), Кантарова(1950), Али-Заде М.А.(1952)(цит. по Шумилову Б.В., 1971).
Popper et al (1949), Минасян А.М.(1950), Якубчик Ф.М.(1951) подчеркивают, что при всех заболеваниях, до тех пор, пока не нарушена функция печени, содержание белков в сыворотке крови сохраняется в пределах нор-мы(цит. по Шамрай Е.Ф., Пащенко А.Е.,1970).
Необходимо отметить, что, несмотря на то, что при незаразных болезнях изменения белковой формулы сыворотки крови не носят специфического характера, они, тем не менее, являются отражением степени тяжести заболевания и реакцией организма на патогенное воздействие.
В наших исследованиях с целью изучения влияния бабезий на показатели общего белка и белковых фракций, а также выяснения изменения белкового профиля, нами были проведены исследования 143 проб сыворотки крови с использованием электрофоретического фракционирования белков в динамике процесса при остром и подостром течении бабезиоза в экспериментальных условиях.
Результаты исследований общего белка и белковой формулы сыворотки крови собак при остром течении бабезиоза в динамике процесса представлены в таблице 26.
Анализируя данные таблицы 26, можно отметить, что на 1 и 2 сут с момента заражения у собак опытной группы достоверной разницы в исследуемых показателях не обнаружено по сравнению с таковыми у контрольных животных.
На 3-е сут после заражения у животных опытной группы отмечали повышение уровня общего белка до 7,05±0,12 г%, что было достоверно выше исходных и контрольных показателей, составляющих 6,5±0,18г% и 6,43± 0,18 г% соответственно.
Количество альбуминов в крови животных достоверно снизилось по сравнению с исходным - 53,48+0,21% и составило 51,8+0,21%. Однако, достоверную разницу в уровне альбуминов у животных опытной и контрольной групп мы не регистрировали.
Одновременно установили достоверное увеличение количества ос-глобулинов до 13,45+0,21% и Р-глобулинов до 20,35+0,12% по сравнению с таковыми у контрольных животных - 12,82±0,19%(Р 0,05) и 13,13+0,17% (Р 0,05) соответственно. Уровень а- и р-глобулинов в этот период был также выше исходных данных, составлявших соответственно 10,62+0,18% и 18,35±0,13%.
