Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Литературный обзор 6
1.1 Нафтохиноны и их биологическая активность 6
1.2 Природные аминокислотные конъюгаты хинонов и вторичных метаболитов 12
1.3 Модификация нафтохинонов путем конъюгации с углеводами 18
1.4 Модификация нафтохинонов путем конъюгации с аминокислотами 25
Глава 2. Обсуждение результатов 32
2.1 Взаимодействие 2-хлортриалкилнафтазаринов с L-цистеином 32
2.2 Взаимодействие N-ацетил-ь-цистеина с триалкилнафтазаринами 34
2.3 Взаимодействие N-ацетил-ь-цистеина с хлоралкилнафтазаринами 36
2.4 Взаимодействие 2-гидрокси-З-замещенных 6,7-дихлорнафтазаринов с N-ацетил-ь-цистеином 38
2 5 Взаимодействие N-ацетил-ь-цистеина с полихлорированными нафтазаринами 40
2.6 Синтез 3-метилфлавиолина и его метиловых эфиров 42
2 7 Синтез 3-гидроксиметил-, 3-хлорметил-, 3-метоксиметил-, и 3-ацетоксиметилпроизводных 2,7-диметоксиюглона 45
2 о Разработка метода тиометилирования замещенных 2-гидрокси 1,4-нафтохинонов N-ацетил-ь-цистеином и параформальдегидом 49
Взаимодействие метиловых эфиров флавиолина и 3-метилфлавиолина с N-ацетил-ь-цистеином и параформальдегидом. Синтез фибро статинов В, С, D и их аналогов 52
2.10. Взаимодействие метиловых эфиров 3-гидроксиметил-, 3-хлорметил-, 3-ацетоксиметил-, и 3-метоксиметилфлавиолина с N-ацетил ь-цистеином и параформальдегидом 54
2 11 Синтез водорастворимых бисглутатионильных конъюгатов гидроксиалкилнафтазаринов 56
Изучение питотоксической и антирадикальной активности вновь полученных N-ацетил-ь-пистеинильных и глутатионильных конъюгатов ряда нафтазарина 57
Глава 3. Экспериментальная часть 63
Выводы 104
Список используемых сокращений 105
Список литературы
- Природные аминокислотные конъюгаты хинонов и вторичных метаболитов
- Модификация нафтохинонов путем конъюгации с аминокислотами
- Взаимодействие 2-гидрокси-З-замещенных 6,7-дихлорнафтазаринов с N-ацетил-ь-цистеином
- Взаимодействие метиловых эфиров 3-гидроксиметил-, 3-хлорметил-, 3-ацетоксиметил-, и 3-метоксиметилфлавиолина с N-ацетил ь-цистеином и параформальдегидом
Природные аминокислотные конъюгаты хинонов и вторичных метаболитов
Аминокислотные производные хинонов относительно редко встречаются в природных объектах [70]. Большая их часть была выделена из бактерий рода Streptomyces, а также морских и пресноводных губок отряда Dictyoceratida [71-74]. Чаще всего такие соединения образуются в процессе обработки сырья природного происхождения при нарушении целостности клеток, так как в живых системах вещества этих классов (аминокислоты и хиноны) находятся в различных клеточных структурах [70].
Хиноны являются очень реакционноспособными соединениями [75], поэтому в живых системах встреча хинонов с аминокислотами или пептидами практически всегда приводит к их взаимодействию и образованию конъюгатов [70]. На модели природного гетероциклического галенохинона 20 было показано, что аминокислоты, содержащие в своём составе N- и S-нуклеофильные фрагменты, по-разному реагируют с хиноном 20. Так реакция хинона 20 с N-ацетил-ь-цистеином протекает с образованием конъюгата 21_ - продукта 1,4-присоединения тиола по хиноидной части, в то время как Na-ацетил-ь-лизин - аминокислота с незащищенной аминогруппой, реагирует с фурановым фрагментом молекулы с раскрытием гетероцикла и образованием конъюгата 22 [76].
Многие химические и физиологические явления, такие как энзиматическое потемнение пищи, изменение цвета различных растений в процессе обработки, аллергические контактные дерматиты и кожные воспаления, бактерицидная активность и цитотоксичность связаны с образованием и активностью аминокислотных конъюгатов хинонов [70]. Установлено, что при обработке кофейных зёрен [77] происходит окисление кофейной кислоты 23 в 1,2-бензохинон 24, который легко присоединяется к аминокислотам с образованием окрашенных хинон-аминокислотных конъюгатов 25, отвечающих за коричневый цвет кофе (схема 2).
Организмы, продуцирующие метаболиты хиноидной природы, имеют специфическую защитную систему от их токсического действия. Так, например, для актиномицетов и грибов установлены две основные системы защиты, обеспечивающие их устойчивость к своим собственным вторичным метаболитам. Первая система защиты основана на изменении чувствительности бактерий (грибов) к этим метаболитам, а вторая - на изменении токсичности нафтохинонов, которая реализуется путем их фосфорилирования или ацетилирования [20].
Характерными примерами природных хинон-аминокислотных конъюгатов являются разнообразные соединения сесквитерпенового ряда 26-29, выделенные из морских и пресноводных губок отряда Dictyoceratida, содержащие а-аминокислотные остатки в 1,4-бензохиноидном ядре [71,72]. Проведенные исследования показали наличие у соединений 26-29 фунгицидной, противовирусной, питотоксической активности, а для соединений 28 и 29 -способности селективно ингибировать экспрессию онкогена Her-2/Neu, повышенная экспрессия которого приводит к развитию злокачественных новообразований [78]. Следует отметить, что это единственные соединения природного происхождения, способные ингибировать данный онкоген [72].
Богатым продуцентом аминокислотных конъюгатов низкомолекулярных полициклических соединений являются бактерии семейства Streptomyceaceae. Сотрудники японской фармацевтической корпорации Такеда в 1987 году впервые выделили из культуральной жидкости почвенных микроорганизмов Streptomyces catenulae subsp. griseospora конъюгаты 1,4-нафтохинона и N-ацетил- L-цистеина, названные ими фибростатинами A-F 30-35 [73,79]. Интересной особенностью фибростатинов A-F 30-35 является S-конъюгация аминокислоты цистеина 36 (в виде N-ацетильного производного 37) через метиленовый мостик боковой цепи.
Исследование свойств этих соединений показало, что фибростатины A-F эффективно ингибируют in vitro пролилгидроксилазу куриных эмбрионов [73,79]. Поскольку известно, что в тканях животных с различными экспериментальными и патологическими фиброзами активность пролилгидроксилазы увеличена [80], то способность фибростатинов ингибировать активность этого фермента может стать основой при создании лекарственных средств для лечения фиброзов.
N-Ацетил-ь-цистеин 37 является нетоксичным водорастворимым лекарственным препаратом, который применяют как муколитический агент [81], детоксикант, используемый при передозировке популярного жаропонижающего препарата парацетамола [82], а также как предшественник в биосинтезе глутатиона - серусодержащего трипептида - у-ь-глутамил-ь-цистеинилглицина [83], отвечающего в организме за детоксикацию чужеродных соединений.
Интересным природным 1Ч-ацетил-ь-цистеинильным конъюгатом, необратимо ингибирующим протеолитическую активность 20S протеасом и нашедшим широкое применение в молекулярной биологии, является антибиотик лактацистин 39, продуцируемый стрептомицетами и впервые выделенный группой Омура [84]. Позднее Кори и сотрудники осуществили его полный синтез [85]. NHAc но2с. Представителями природных конъюгатов вторичных метаболитов с N-ацетил-ь-цистеином, выделенными из стрептомицетов японскими учеными [86], являются тетрациклический конъюгат WS 009 А 40, его метиловый эфир 41 и гидроксилированный аналог WS 009 В 42. Конъюгат WS 009 А 40 при низкой токсичности (LD50 300 мг/кг, мыши) в дозах 10" - 10" М в экспериментах in vitro проявлял свойство антагонистов эндотелиновых рецепторов.
Позднее, из штамма Streptomyces MI 384-DF12 были выделены другие карбоциклические конъюгаты N-ацетил-ь-цистеина - цисфлуоретин 43 и его метиловый эфир 44. В этих соединениях остаток N-ацетил-ь-цистеина присоединен к ядру через метиленовый мостик, подобно упомянутым ранее фибростатинам 30-35 [87]. Цисфлуоретин 43 был нетоксичен для мышей в дозах до 100 мг/кг при интраперитональном введении, а в дозах 9.4 мкг/мл ингибировал in vitro глутатион-S-трансферазу из печени крыс.
Модификация нафтохинонов путем конъюгации с аминокислотами
Организмы, продуцирующие метаболиты хиноидной природы, имеют специфическую защитную систему от их токсического действия. Так, например, для актиномицетов и грибов установлены две основные системы защиты, обеспечивающие их устойчивость к своим собственным вторичным метаболитам. Первая система защиты основана на изменении чувствительности бактерий (грибов) к этим метаболитам, а вторая - на изменении токсичности нафтохинонов, которая реализуется путем их фосфорилирования или ацетилирования [20].
Характерными примерами природных хинон-аминокислотных конъюгатов являются разнообразные соединения сесквитерпенового ряда 26-29, выделенные из морских и пресноводных губок отряда Dictyoceratida, содержащие а-аминокислотные остатки в 1,4-бензохиноидном ядре [71,72]. Проведенные исследования показали наличие у соединений 26-29 фунгицидной, противовирусной, питотоксической активности, а для соединений 28 и 29 -способности селективно ингибировать экспрессию онкогена Her-2/Neu, повышенная экспрессия которого приводит к развитию злокачественных новообразований [78]. Следует отметить, что это единственные соединения природного происхождения, способные ингибировать данный онкоген [72].
Богатым продуцентом аминокислотных конъюгатов низкомолекулярных полициклических соединений являются бактерии семейства Streptomyceaceae. Сотрудники японской фармацевтической корпорации Такеда в 1987 году впервые выделили из культуральной жидкости почвенных микроорганизмов Streptomyces catenulae subsp. griseospora конъюгаты 1,4-нафтохинона и N-ацетил- L-цистеина, названные ими фибростатинами A-F 30-35 [73,79]. Интересной особенностью фибростатинов A-F 30-35 является S-конъюгация аминокислоты цистеина 36 (в виде N-ацетильного производного 37) через метиленовый мостик боковой цепи.
Исследование свойств этих соединений показало, что фибростатины A-F эффективно ингибируют in vitro пролилгидроксилазу куриных эмбрионов [73,79]. Поскольку известно, что в тканях животных с различными экспериментальными и патологическими фиброзами активность пролилгидроксилазы увеличена [80], то способность фибростатинов ингибировать активность этого фермента может стать основой при создании лекарственных средств для лечения фиброзов.
N-Ацетил-ь-цистеин 37 является нетоксичным водорастворимым лекарственным препаратом, который применяют как муколитический агент [81], детоксикант, используемый при передозировке популярного жаропонижающего препарата парацетамола [82], а также как предшественник в биосинтезе глутатиона серусодержащего трипептида - у-ь-глутамил-ь-цистеинилглицина [83], отвечающего в организме за детоксикацию чужеродных соединений.
Интересным природным 1Ч-ацетил-ь-цистеинильным конъюгатом, необратимо ингибирующим протеолитическую активность 20S протеасом и нашедшим широкое применение в молекулярной биологии, является антибиотик лактацистин 39, продуцируемый стрептомицетами и впервые выделенный группой Омура [84]. Позднее Кори и сотрудники осуществили его полный синтез [85]. но2с. Представителями природных конъюгатов вторичных метаболитов с N-ацетил-ь-цистеином, выделенными из стрептомицетов японскими учеными [86], являются тетрациклический конъюгат WS 009 А 40, его метиловый эфир 41 и гидроксилированный аналог WS 009 В 42. Конъюгат WS 009 А 40 при низкой токсичности (LD50 300 мг/кг, мыши) в дозах 10" - 10" М в экспериментах in vitro проявлял свойство антагонистов эндотелиновых рецепторов.
Позднее, из штамма Streptomyces MI 384-DF12 были выделены другие карбоциклические конъюгаты N-ацетил-ь-цистеина - цисфлуоретин 43 и его метиловый эфир 44. В этих соединениях остаток N-ацетил-ь-цистеина присоединен к ядру через метиленовый мостик, подобно упомянутым ранее фибростатинам 30-35 [87]. Цисфлуоретин 43 был нетоксичен для мышей в дозах до 100 мг/кг при интраперитональном введении, а в дозах 9.4 мкг/мл ингибировал in vitro глутатион-S-трансферазу из печени крыс.
Представителем конъюгатов N-ацетил-ь-цистеина и тетрациклических метаболитов, в котором аминокислота присоединена к полициклическому ядру, является сеонгомипин 45 - минорный метаболит, продуцируемый Streptomyces murayamaensis [88]. NHAc Примером аминокислотных конъюгатов, в которых остаток N-ацетил-ь-цистеина присоединен к хиноидному ядру, являются нафтохиноны 46, 47 [74], выделенные из культуральной среды бактерий Streptomyces sp. Примечательно, что соединение 46 представлено двумя изомерными конъюгатами с ь- и D-конфигурацией аминокислотного остатка, в то время как диметиловый эфир 47 был выделен в виде изомера с ь-конфигурапией ацетилцистеинильного радикала.
При исследование свойств N-ацетил-ь-цистеинильных конъюгатов 46, 47 было установлено, что эти соединения игибируют фосфатазу cdc25A, участвующую в процессе клеточного деления. Авторы полагают, что повышенная экспрессия фосфатазы cdc25A может вызывать трансформацию нормальных клеток в опухолевые [74].
Штамм Streptomyces sp. К04-0144 продуцирует сесквитерпеноидный N-ацетилцистеинильный конъюгат цислабдан 48, который эффективно потенцирует активность известных антибиотиков в отношении метициллин-резистентных штаммов Streptococcus aureus [89], Следует отметить, что родственный сесквитерпен, не имеющий аминокислотного остатка, не проявляет антимикробных свойств. Н Н Штамм морской бактерии Streptomyces griseus, выделенный из глубоководных осадков, собранных у Канарских островов, продуцирует необьшный гетероциклический конъюгат бензоксацистол 49, который ингибирует активность киназы-Зр гликоген-синтазы [90]. Недавно, американские микробиологи выделили из штамма бактерий Streptomyces, собранных на образцах почвы из горящих угольных месторождений в Аппалачских горах, группу полициклических антибиотиков, названных френолицинами [91]. Одно из этих соединений - френолицин С 50, является конъюгатом пиранонафотохинона с ІЧ-ацетил-ь-пистеином.
Взаимодействие 2-гидрокси-З-замещенных 6,7-дихлорнафтазаринов с N-ацетил-ь-цистеином
Для формирования структуры фибростатинов Е 34 и F 35 нам потребовалось разработать методы синтеза производных флавиолина, несущих -СН2-ОН группу в положении 3 хиноидного ядра. Данный заместитель может быть введен двумя способами: прямым гидроксиметилированием в положение 3 хиноидного ядра, либо косвенно - путем формирования галоидметильного заместителя -СН2На1 с последующей конверсией СН2-На1 в СН2-ОН группу. Гидролиз галогена в галоидметильной группе может быть также осуществлен и после тиометилирования N-ацетил-ь-цистеином в положение 6 исходного нафтохинона.
На первом этапе мы планировали получить 3-гидроксиметильные производные флавиолина из соответствующих метиловых эфиров 172 и 173. Известным методом введения гидроксиметильной группы является радикальное гидроксиметилирование радикалами СН2ОН, которые образуются из метанола под действием персульфата аммония при нагревании в присутствии солей переходных металлов [140]. Данная реакция была хорошо изучена на различных производных пиридина и хинолина [141]. Мы не нашли в литературе сведений о применении такого подхода в ряду 1,4-нафтохинонов. Поэтому, на первом этапе реакция гидроксиметилирования нафтохинонов была опробована нами на простом и доступном 2-гидрокси-1,4-нафтохиноне (лаусоне) 1. Так как было известно, что 2-гидрокси-З-гидроксиметильные производные 1,4-нафтохинонов легко отщепляют воду с образованием соответствующих о-хинон-метидов [142], в нашей работе использовали метиловый эфир лаусона 174, в котором такая дегидратация затруднена (схема 28). При кипячении раствора хинона 174 в смеси метанол-ацетонитрил ( 1:1) в присутствии персульфата аммония, по данным ТСХ, никаких изменений в реакционной смеси не происходило. После добавления нитрата серебра наблюдали образование нового полярного соединения желтого цвета.
В ЯМР H спектре нового вещества отсутствовал характеристический синглет хиноидного протона при 6.19 м.д., и появился синглет при 4.39 м.д. с интенсивностью 2Н, при сохранении сигналов соответствующих ароматических протонов Н -Н , что позволило приписать данному продукту строение 3-гидрокси-метил-2-метокси-1,4-нафтохинона 175. Присутствие в ИК-спектре соединения 175 полосы поглощения гидроксильной группы при 3490 см" и полос поглощения хиноидных карбонилов при 1677 см" находится в согласии с предложенной структурой. Наличие пика молекулярного иона [М-Н]" с массой 217.0496 окончательно подтвердило предложенную структуру 3-гидроксиметил- 2-метокси-1,4-нафтохинона 175. Из реакционной смеси кроме целевого хинона 175 (выход 24%) был выделен исходный хинон 174 с выходом 23%. Низкий возврат исходного хинона 174, по-видимому, обусловлен заметным осмолением реакционной смеси.
С целью оценки возможностей этого методики помимо метилового эфира лаусона 174 в реакцию радикального гидроксиметилирования ввели 2-метокси-нафтохиноны группы юглона 94, 172 и нафтазарина 178 (таблица 2). Из 2-метоксиюглона 94 с низким выходом был получен соответствующий гидроксиметилхинон 176 (17%). Реакция монометилового эфира флавиолина 172 в аналогичных условиях с выходом 48% привела к гидроксиметилхинону 177. В ЯМР Н спектре соединения 177 отсутствовал характеристический синглет хиноидного протона и наблюдался синглет при 4.33 м.д. с интенсивностью 2Н.
Ввиду плохой растворимости 2,7-диметоксиюглона 173 в метаноле и ацетонитриле непосредственное гидроксиметилирование хинона 173 провести не удалось. Требуемый 2,7-диметокси-З-гидроксиметилюглон 180 был получен О-метилированием соответствующего монометилового эфира 177 диазометаном.
Таким образом, реакция радикального гидроксиметилирования замещенных 2-метоксипроизводных 1,4-нафтохинонов метанолом, хотя и протекала с выходами от низких до умеренных, но тем не менее, ввиду своей простоты, позволила нам наработать препаративные количества соответствующих 3-гидроксиметильных производных нафтохинонов в одну стадию с выходами 24-52% (табл. 2).
Для реализации второго варианта схемы синтеза фибростатинов Е и F с использованием галогенметильных предшественников требовалось ввести галогенметильную группы в хиноидное ядро 2-гидрокси- 1,4-нафтохинонов. В ряду фенольных соединений наиболее распространенными методами введения галогенметильного заместителя (-СН2-На1) являются: конденсация фенолов с формальдегидом и галогеноводородом [143], или радикальное галогенирование уже имеющейся -СН3 группы [144]. Было установлено что длительное кипячение флавиолина 162, параформа и концентрированной соляной кислоты не приводит к хлорметилированию хинона 162. Взаимодействие флавиолина 162 с параформом в растворе НВг/АсОН при катализе серной кислотой также сопровождалось сильным осмолением реакционной смеси и возвратом исходного хинона 162 (45%). Поскольку введение галогенметильной группы с использованием галогеноводородов и параформа не дало нужного результата, синтез хлорметилхинона 181 выполнили путем конверсии полученного нами ранее 3-гидроксиметильного производного 180.
Для этого монометоксихинон 177 избирательно метилировали диазометаном без затрагивания гидроксильной группы при С-5 и с выходом 66% получили диметиловый эфир 180. Последующая обработка соединения 180 тионилхлоридом с добавкой пиридина в растворе дихлорметана с выходом 63% дала целевой 3-хлорметилхинон 181 (схема 29).
Хлорметилнафтохинон 181 при нагревании до 60 С в растворе ледяной уксусной кислоты быстро реагировал с ацетатом серебра с образованием 3-ацетоксиметильного производного 182 (выход 80%), в то время как взаимодействие хинона 181 с метанольным раствором метилата натрия протекало уже при комнатной температуре, и приводило к 3-метоксиметильного продукту реакции 183 с выходом 82% (схема 30).
Взаимодействие метиловых эфиров 3-гидроксиметил-, 3-хлорметил-, 3-ацетоксиметил-, и 3-метоксиметилфлавиолина с N-ацетил ь-цистеином и параформальдегидом
К раствору 5-гидрокси-3-гидроксиметил-2,7-диметокси-1,4-нафтохинона 180 (89 мг, 0.336 ммоль) в дихлорметане (15 мл) при перемешивании в течение 15 минут прикапывали попеременно тионилхлорид (0.12 мл, 1.65 ммоль) и пиридин (0.15 мл, 1.86 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 17 минут, контролируя ход реакции методом ТСХ в системе Е. По окончании реакции реакционную смесь перенесли в делительную воронку, прилили воду (10 мл), НС1 (2N, 5 мл) и экстрагировали хлороформом. Экстракт высушили над сульфатом натрия, упарили, из полученного остатка методом препаративной ТСХ в системе F выделили продукт реакции желтого цвета с R/= 0.79.
Фракция с Rf= 0.79 (Е), 5-гидрокси-2,7-диметокси-3-хлорметил-1,4-нафто-хинон 181. Выход 60 мг (63 %), оранжевые кристаллы, т.пл. 151-153 С. Спектр ЯМР 1Я (300 МГц, CDC13): 5 = 3.89 (с, ЗН, ОСН3), 4.29 (с, ЗН, ОСН3), 4.55 (с, 2Н, АгСН2), 6.66 (д, J= 2.5 Гц, Ш, АгН), 7.15 (д, J= 2.5 Гц, Ш, АгН), 12.31 (с, Ш, а-ОН).
Спектр ЯМР 13С (75 МГц, CDC13): 5 = 32.92, 55.94, 61.84, 106.71, 108.27, 108.31, 128.06, 132.81, 158.58, 163.80, 165.45, 180.66, 186.82. ИК-спектр (КВг): 3484, 2947, 1675, 1632, 1606, 1488, 1444, 1385, 1305, 1227, 1205, 1163, 1093, 1033, 966, 953, 940, 807 см"1. Масс-спектр высокого разрешения: m/z 281.0229 [М-Н]". Вьшислено для Сі3Н10О5С1 281.0222. Опыт 28. Взаимодействие 5-гидрокси-2,7-диметокси-3-хлорметил-1,4-нафто-хинона 181 с ацетатом серебра
К раствору 5-гидрокси-2,7-диметокси-3-хлорметил-1,4-нафтохинона 181 (46 мг, 0.162 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (5 мл) при перемешивании внесли ацетат серебра (54 мг, 0.325 ммоль). Реакционную смесь нагревали на глицериновой бане (110С) с обратным холодильником в течение 1 час, контролируя ход реакции методом ТСХ в системе Е. Реакционную смесь перенесли в делительную воронку, прилили воду (20 мл), НС1 (2N, 5 мл), и экстрагировали этилацетатом. Экстракт промыли водой, высушили над сульфатом натрия, упарили, из остатка препаративной ТСХ в системе Е выделили продукт реакции желтого цвета cR/= 0.55.
Продукт реакции с R/ = 0.55 (Е), 3-ацетоксиметил-5-гидрокси-2,7-диметокси- 1,4-нафтохинон 182. Выход 40 мг (80 %), желтые кристаллы, т.пл. 132-136 С.
Спектр ЯМР Н (700 МГц, CDC13): 5 = 2.07 (с, ЗН, СОСН3), 3.90 (с, ЗН, ОСН3), 4.22 (с, ЗН, ОСНз), 5.09 (с, 2Н, СН2), 6.66 (д, J= 2.5 Гц, Ш, АгН), 7.15 (д, J= 2.5 Гц, Ш, АгН), 12.34 (с, Ш, а-ОН).
Спектр ЯМР 13С (176 МГц, CDC13): 5 = 20.86, 54.54, 55.99, 61.82, 106.86, 108.09, 108.50, 126.05, 133.00, 159.77, 163.86, 165.48, 170.57, 180.90, 187.94. ИК-спектр (КВг): 3440, 2953, 1737, 1679, 1637, 1603, 1573, 1487, 1470, 1434, 1395, 1376, 1302, 1266, 1242, 1211, 1154, 1090, 1030, 978, 791 см"1.
Масс-спектр высокого разрешения: m/z 329.0630 [M+Na]+. Вьшислено для C15H1407Na 329.0632.
Опыт 29. Взаимодействие 5-гидрокси-2,7-диметокси-3-хлорметил-1,4-нафто-хинона 181 с метилатом натрия
К суспензии 5-гидрокси-2,7-диметокси-3-хлорметил-1,4-нафтохинона 181 (57 мг, 0.2 ммоль) в метаноле (5 мл) при перемешивании прилили раствор MeONa в МеОН (1.06N, 0.3 мл, 0.318 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником и хлоркальциевой трубкой на глицериновой бане в течение 10 минут, контролируя ход реакции методом ТСХ в системе Е. Реакционную смесь нейтрализовали смолой КУ-2 (Н+) до образования прозрачного желтого раствора, смолу отфильтровали, фильтрат упарили, из остатка препаративной ТСХ в системе Е выделили продукт реакции желтого цвета с R/= 0.64.
Продукт реакции с Rf = 0.64 (Е), 5-гидрокси-2,7-диметокси-3-метокси-метил-1,4-нафтохинон 183. Выход 46 мг (82 %), желтые кристаллы, т.пл. 96-98 С. Спектр ЯМР 1Я (700 МГц, CDC13): 5 = 3.43 (с, ЗН, ОСН3), 3.89 (с, ЗН, ОСН3), 4.21 (с, ЗН, ОСНз), 4.43 (с, 2Н, АгСН2), 6.65 (д, J= 2.5 Гц, Ш, АгН), 7.14 (д, J= 2.5 Гц, Ш, АгН), 12.43 (с, Ш, а-ОН).
Спектр ЯМР 13С (176 МГц, CDC13): 5 = 55.95, 58.91, 61.79, 61.84, 106.83, 107.83, 108.66, 127.98, 133.03, 159.60, 163.83, 165.40, 181.21, 188.77 .
ИК-спектр (КВг): 3445, 2939, 1680, 1635, 1590, 1459, 1455, 1392, 1306, 1258, 1221, 1190, 1107, 1094, 959, 946, 803 см"1. Масс-спектр высокого разрешения: m/z 277.0719 [М-Н]\ Вычислено для СиН Об 277.0718. Конденсация 2-гидрокси-1,4-нафтохинонов 1, 4, 5, 64,150,162,187,188 с параформальдегидом и N-ацетил-ь-цистеином (общая методика, таблица 3)
К раствору 2-гидрокси-1,4-нафтохинона 1, 4, 5, 64, 150, 162, 187, 188 (0.25 ммоль) в ацетоне (15 мл) при перемешивании внесли порошок параформальдегида (30 мг, 1.00 ммоль), N-ацетил-ь-цистеин (60 мг, 0.37 ммоль), и прибавили НСООН (85%, 0.2 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником при перемешивании в течение 4-8 час, до полной конверсии исходного хинона, контролируя ход реакции методом ТСХ (система Е). Реакционную смесь упарили в вакууме, из остатка препаративной ТСХ в системе В выделили две окрашенные фракции - полярную фракцию N-ацетил-L-цистеинильного конъюгата с R/= 0.10-0.12 (продукты реакции 185, 189,191,193, 195, 197, 199, 201), и малополярную фракцию 3,3 -метиленбис(2-гидрокси-нафталин-1,4-дионов) с Ру= 0.92-0.82 (продукты реакции 186, 190, 192, 194, 196,
![Синтез и свойства тетразоло[1,5-b][1,2,4]триазинов](/i/i/4386/289117.png "Синтез и свойства тетразоло[1,5-b][1,2,4]триазинов Шестакова Татьяна Сергеевна")