Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современное состояние проблемы 15
1.1. Определения антиканцерогенных веществ и профилактики рака 15
1.2. Экспериментальное изучение антиканцерогенных веществ 16
1.3. Клиническое изучение антиканцерогенных веществ 21
1.4. Применения пищевых веществ и фитопрепаратов для профилактики рака 27
1.5. Вещества, изученные в диссертационном исследовании 29
1.5.1. Синтетические химические соединения 29
1.5.2. Комплексные природные вещества 42
1.6. Мастопатия и другие факторы риска рака молочной железы 53
1.7. Предраковые состояния и изменения желудка 57
ГЛАВА 2. Материал и методы 61
2.1. Экспериментальное изучение антиканцерогенной активности веществ 61
2.1.1. Животные и материалы 61
2.1.2. Модели канцерогенеза 62
2.1.3. Синтетические химические соединения 67
2.1.4. Комплексные природные вещества 72
2.2. Предварительное клиническое изучение профилактических средств у больных из групп повышенного онкологического риска 80
2.2.1. Методика обследования больных из группы риска рака молочной железы 81
2.2.2. Методика обследования больных из группы риска рака желудка 83
ГЛАВА 3. Экспериментальное изучение антиканцерогенной активности синтетических химических соединений 86
3.1. Витамины А, Е, С и Вг 86
3.2. Каротиноиды: р-каротин 90
3.3. Селенит натрия 93
3.4. Соли глюкаровой и глюкуроновой кислоты: глюкарат кальция и глюкуронат калия 95 3.5. Комбинация витаминов А, Е, Вг, селенита натрия и глюкуроновой кислоты 97
3.6. Комбинация р-каротина, витаминов Е и С, и порошка чеснока - БАД«Каринат»...99
3.7. Ретиноиды: 13-цис-ретиноевая кислота 100
3.8. Нестероидные противовоспалительные средства: ортофен и индометацин 104
3.9. Комбинация ортофена и сс-токоферола ацетата 107
3.10. Ингибиторы синтеза полиаминов: сс-дифторметилорнитин 110
3.11. Метилксантины: теофиллин и пентоксифиллин 114
3.12. Ингибиторы протеаз: є-аминокапроновая кислота 118
3.13. Органические кислоты: фумаровая кислота 120
3.14. Фенольные антиоксиданти: фенозан 122
ГЛАВА 4. Экспериментальное изучение антиканцерогенной активности комплексных природных веществ 128
4.1. Пептидные биорегуляторы: тималин, эпиталамин, кортексин, энцефалин, тимоген 128
4.2. Полисахариды 133
4.2.1. Отруби пшеницы 133
4.2.2. Биостимулятор торфяной 134
4.3. Морепродукты 135
4.3.1. Концентрат ламинарии омыленный 135
4.3.2. Экстракт ламинарии 140
4.3.3. Экстракт фукусный 141
4.3.4. Рыбий жир «Полиен» 142
4.4. Комплекс хвойный натуральный 143
4.5. Лекарственные растения 148
4.5.1. Биотехнологические препараты корня Panax ginseng: «Биоженьшень», «Панаксел», «Панаксел-5» 148
4.5.2. Экстракты Eleutherococcus senticosus и Rhaponticum cartamoides 153
4.5.3. Экстракты Filipendula ulmaria, Betula pendula, Urtica dioica, Plantago major и Glycyrrhiza glabra 157
Глава 5. Создание, экспериментальное изучение специфической активности и оценка возможной токсичности средств, содержащих антиканцерогенные вещества 164
5.1. Лекарственный препарат «Мамоклам» 164
5.1.1. Разработка и характеристика 164
5.1.2. Изучение специфической активности 165
5.1.3. Изучение общей и специфической токсичности 166
5.2. БАД «Кламин» и «Альгиклам» 170
5.2.1. Разработка и характеристика 170
5.2.2. Изучение антиканцерогенной активности 170
5.3. БАД «Феокарпин» 171
5.3.1. Разработка и характеристика 171
5.3.2. Изучение острой и хронической токсичности 172
5.3.3. Изучение антиканцерогенной активности 172
ГЛАВА 6. Предварительное клиническое изучение средств, содержащих антиканцерогенные вещества, у больных из группы риска рака молочной железы 175
6.1. Лекарственный препарат «Мамоклам» 175
6.2. БАД «Кламин» 178
6.3. БАД «Каринат» 183
ГЛАВА 7. Предварительное клиническое изучение средств, содержащих антиканцерогенные вещества, у больных из группы риска рака желудка 189
7.1. БАД «Кламин» 189
7.2. БАД «Феокарпин» 193
7.3. БАД «Каринат» 197
ГЛАВА 8. Обсуждение результатов исследований 203
8.1. Экспериментальное изучение синтетических химических соединений 203
8.2. Экспериментальное изучение комплексных природных веществ 214 8.3. Сравнение антиканцерогенной эффективности изученных веществ 226
8.4. Предварительное клиническое изучение средств, содержащих антиканцерогенные вещества, у больных из группы риска рака молочной железы 235
8.5. Предварительное клиническое изучение средств, содержащих антиканцерогенные вещества, у больных из группы риска рака желудка 240
Заключение 250
Выводы 252
Практические рекомендации 257
Литератураq
- Применения пищевых веществ и фитопрепаратов для профилактики рака
- Предварительное клиническое изучение профилактических средств у больных из групп повышенного онкологического риска
- Нестероидные противовоспалительные средства: ортофен и индометацин
- Концентрат ламинарии омыленный
Введение к работе
Актуальность проблемы
В России и во многих других странах мира в последние годы наблюдается рост онкологической заболеваемости [Чиссов В.И. и др. (ред.), 2004]. В то же время в большинстве развитых стран снижаются стандартизованные по возрасту заболеваемость и смертность от многих форм рака, что удалось добиться за счет активного использования научно обоснованных мер профилактики злокачественньж опухолей [Заридзе Д.Г., 2004, Boyle P. etal., 2003]. Продолжающийся рост онкологической заболеваемости в России связан в первую очередь с плохим состоянием профилактики рака [ИльницкийА.П., 2003, Чиссов В.И. и др., 2002].
Наиболее перспективными направлениями профилактики злокачественньж опухолей сегодня признаются борьба с курением, нормализация питания, своевременное выявление и лечение предраковых состояний и изменений и ранних форм рака, химиопрофилактика [Заридзе Д.Г., 2004, Boyle P. et al., 2003, IARC, 1996-2003]. Химиопрофилактику рака определяют как использование фармакологических или натуральных агентов с целью предотвращения возникновения рака [IARC, 1996]. Приоритет идеи о возможности химиопрофилактики рака с помощью приема антиканцерогенньж веществ принадлежит отечественным ученым [Лазарев Н.В., 1965, Шабад Л.М., 1979]. В настоящее время химиопрофилактика рака признается одним из актуальных направлений противораковой борьбы, и данному направлению посвящается большое число исследований в развитых странах [IARC, 1996-2003].
Средства для профилактики рака должны отвечать следующим основным требованиям: 1)
доказанная эффективность - способность предупреждать возникновение злокачественньж
опухолей; 2) возможность применения в течение длительного времени; 3) отсутствие токси
ческих свойств или минимальная токсичность; 4) желательные дополнительные благоприят
ные свойства; 5) лекарственные формы - только пероральные или для местного применения
[IARC, 1996]. На сегодняшний день в экспериментальных исследованиях обнаружен ряд ве
ществ, способных тормозить развитие опухолей, в клинических испытаниях фазы II регрес
сию предраковых состояний и изменений в различных органах вызывали несколько десятков
средств, в клинических испытаниях фазы Ш около 20 средств предупреждали развитие зло
качественньж опухолей [Keloff, 2000, Tsao et al., 2004]. Однако, большинство известных ан
тиканцерогенов не отвечают всем требованиям, предъявляемым к средствам для профилак
тики рака, и в клинической практике пока применяются единичные препараты.. Пои .—____
антиканцерогенных веществ, имеющих высокую эффективность, широкий спефр jgj*-"" w*'"1"
gww{
при этом безопасных при длительном применении является актуальной «роблемШ'*1*!
1 08 "
Изучение средств для профилактики рака является одним из самых сложных и долговременных в медицине, которое должно проходить следующие этапы: оценка антиканцерогенной активности и токсичности в экспериментах на животньж, предварительное клиническое изучение у больных из групп повышенного онкологического риска, клиническое интервенционное исследование с оценкой частоты и смертности от рака [Александров ВА, 1997]. Масштабные, длительные и дорогостоящие клинические интервенционные исследования следует проводить со средствами, проявившими наиболее высокую эффективность и безопасность в экспериментах на животньж и предварительных клинических испытаниях.
В России на 1-м месте в структуре онкологической заболеваемости и смертности женщин находится рак молочной железы; в структуре общей онкологической заболеваемости и смертности соответственно на 3-м и 2-м месте находится рак желудка [Чиссов В.И. и др. (ред.), 2004]. Вопросы профилактики рака молочной железы [Семиглазов В.Ф. и др., 2001] и желудка [Баранская Е.К., Ивашкин В.Т., 2002] являются актуальными для нашей страны. Клиническое изучение профилактических средств у больных из групп риска рака молочной железы и желудка может помочь в разработке мер профилактики рака данньж локализаций.
Диссертационная работа посвящена актуальным вопросам профилактики рака: экспериментальному изучению и отбору эффективных синтетических и природных антиканцерогенных веществ, предварительному клиническому изучению профилактических средств у больных из групп риска рака молочной железы и желудка.
Цель исследования
Экспериментальное и предварительное клиническое изучение синтетических и природных антиканцерогенных веществ, отбор эффективных и безопасных антиканцерогенов, перспективных для профилактики злокачественных опухолей.
Задачи исследования
-
Разработать комплекс экспериментальных моделей опухолей у лабораторньж животньж для выявления и оценки эффективности антиканцерогенных веществ.
-
Изучить влияние синтетических и природных веществ, потенциально обладающих антиканцерогенным действием, а также известньж антиканцерогенов, на развитие опухолей различных локализаций и гистогенеза, индуцированных у лабораторньж животньж химическими канцерогенами, ионизирующей радиацией и развивающихся спонтанно.
-
В экспериментах на животных сравнить антиканцерогенное действие синтетических и природных веществ, отобрать наиболее эффективные антиканцерогены.
-
Разработать новые средства, содержащие эффективные и безопасные антиканцерогенные вещества.
-
Разработать комплекс клинических исследований для предварительной оценки эффективности профилактических средств у больньж из групп повышенного риска рака молочной железы и желудка.
-
Провести предварительное клиническое изучение средств, содержащих антиканцерогенные вещества, у больньж из групп риска рака молочной железы и желудка.
-
На основе результатов экспериментальных и предварительных клинических исследований отобрать наиболее перспективные и безопасные вещества для дальнейшего изучения и внедрения в качестве средств для профилактики рака.
Научная новизна
-
Разработан новый комплекс для выявления и оценки эффективности антиканцерогенных веществ из 10 моделей опухолей различных органов и гистогенеза, индуцированных у лабораторньж животных химическими канцерогенами, ионизирующей радиацией или развивающихся спонтанно.
-
В экспериментах на животных изучено антиканцерогенное действие 46 синтетических и комплексных природных веществ различных групп и механизмов действия. Из них 33 вещества впервые изучены или мало изучались в качестве антиканцерогенов. Для описанных в литературе антиканцерогенов расширен спектр антиканцерогенной активности.
-
Разработаны новые средства, содержащие антиканцерогенные вещества: лекарственный препарат и три биологически активные добавки к пище (БДД).
-
Разработан новый комплекс клинических исследований для предварительной оценки эффективности профилактических средств у больньж из групп повышенного риска рака молочной железы и желудка.
-
В предварительных клинических исследованиях впервые изучены новые средства с антиканцерогенными веществами у больньж, страдающих фиброзно-кистозной мастопатией и хроническим атрофическим гастритом.
-
Диссертационная работа явилась новым вкладом в проблему профилактики рака. В результате исследования решена крупная научная проблема онкологии: выявлены на экспериментальных моделях опухолей эффективные синтетические и природные антиканцерогенные
вещества, проведена предварительная клиническая оценка средств, содержащих антиканцерогенные вещества, у больных из групп риска рака молочной железы и желудка.
Практическая значимость
1. Разработанный комплекс экспериментальных моделей опухолей у лабораторных животных позволяет вьшвлять антиканцерогенные вещества и оценивать их действие на развитие новообразований различных органов и гистогенеза.
-
В экспериментах на животных выявлены эффективные антиканцерогенные синтетические и природные вещества.
-
Разработан и зарегистрирован лекарственный препарат «Мамоклам» для лечения фиб-розно-кистозной мастопатии. На основе эффективных и безопасных антиканцерогенных веществ разработаны и зарегистрированы в качестве БДЦ три средства: «Кламин», «Алыик-лам», «Феокарпин».
-
Разработанный комплекс клинических исследований позволяет предварительно оценивать эффективность и безопасность профилактических средств у больных из групп повышенного риска рака молочной железы и желудка.
-
Предложены перспективные и безопасные профилактические средства для дальнейшего изучения и внедрения в качестве средств для профилактики рака.
Основные положения, выносимые на защиту
-
Разработанный комплекс экспериментальных моделей опухолей различных органов и гистогенеза у лабораторных животных, индуцированных химическими канцерогенами, ионизирующей радиацией, и развивающихся спонтанно, позволяет вьшвлять и характеризовать антиканцерогенные вещества.
-
Из синтетических химических соединений канцерогенез в различных органах тормозят витамины, каротиноид, ретиноид, антиоксиданты, органические кислоты и их соли, нестероидные противовоспалительные средства, ингибиторы синтеза полиаминов и протеаз, метилк-сантины, иммуностимулятор. Наиболее эффективными антиканцерогенами являются фе-нольный антиоксидант фенозан, глюкуронат калия и теофиллин.
-
Из комплексных природных веществ канцерогенез в различных органах тормозят пептидные биорегуляторы, полисахариды, морепродукты, экстракты лекарственньж растений. Наиболее эффективными антиканцерогенами являются концентрат ламинарии омьшенный (КЛО), комплекс хвойный натуральный (КХН) и биоженьшень.
-
КЛО, КХН, а также лекарственный препарат и БДЦ на их основе, обладают выраженным антиканцерогенным действием, широким спектром антиканцерогенной активности, при этом не имеют токсических свойств.
-
Разработанный комплекс клинических исследований у пациентов из групп риска рака молочной железы и желудка позволяет предварительно оценивать эффективность и безопасность профилактических средств.
-
Средства, содержащие эффективные и безопасные антиканцерогенные вещества — лекарственный препарат «Мамоклам», БДЦ «Кламин», «Феокарпин» и «Каринат», нормализуют различные патологические сдвиги у больных из групп риска рака молочной железы и/или желудка и не проявляют клинически значимой токсичности.
Апробация диссертации
Основные результаты работы обсуждались 6 апреля 2004 г. на научной конференции НИИ онкологии им. проф. Н.Н. Петрова Минздрава РФ с участием отдела канцерогенеза и онкоге-ронтологии, группы химиопрофилактики рака, группы химических канцерогенных агентов, лаборатории одкоэкологии, лаборатории эндокринологии, лаборатории органического синтеза, онкофармакологии и токсикологии, лаборатории молекулярной онкологии, патологоана-томической лаборатории, цитологической лаборатории, отделения опухолей молочной железы, отделения эндоскопии, группы химиотерапии рака.
Основные результаты работы были представлены на отечественных и международньж научньж форумах: IV и V Всероссийских съездах онкологов (Ростов-на-Дону, 1995, Казань, 2000); III съезде онкологов и радиологов СНГ (Минск, 2004); П, VII, X, XI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 1995, 2000, 2003, 2004); IV международном съезде «Актуальные проблемы создания новьж лекарственных препаратов природного происхождения» (Великий Новгород, 2000); IV и V международньж симпозиумах «Биологически активные добавки к пище: XXI век» (Санкт-Петербург, 2000) и «Биологически активные добавки к пище и проблемы здоровья семьи» (Красноярск, 2001); IX Российской научно-практической конференции «Эффективность применения БАД в различных областях медицины» (Москва, 2002); X научно-практической конференции «Клиническая эффективность нелекарственньж оздоровигельньж продуктов» в рамках ХШ международной специализированной выставки «Здравоохранение 2003» (Москва, 2003); Третьем международном конгрессе «Парэнтеральное и. энтеральное питание» (Москва, 1999); 2-й межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека» (Санкт-Петербург, 2004); 6-м Международном Славяно-Балтийском научном форуме
«Санкт-Петербург - Гастро-2004»; Belarus-Japan Symposium «Acute and Late Consequences of Nuclear Catastrophes: Hiroshima-Nagasaki and Chernobyl» (Minsk, 1994); 7th International Symposium on Metal Ions in Biology and Medicine (Saint Petersburg, Russia, 2002); International Symposium on Cancer Chemoprevention of INS AM (Ginseng) (Seoul, Korea, 2001).
Все основные результаты и положения диссертационного исследования полностью отражены в публикациях. По теме диссертации опубликовано 66 научных работ. Из них в периодических изданиях, выпускаемых в РФ, в которых ВАК Минобразования России рекомендует публикации результатов по диссертации на соискание ученой степени доктора наук, опубликовано 33 статьи; получено также 12 патентов РФ.
Внедрение результатов работы в практику
Результаты и рекомендации диссертационной работы используются научными работниками, изучающими проблемы профилактики рака, и в практике врачей онкологов. Результаты диссертационного исследования внедрены в практику ГУН НИИ онкологии им. проф. Н.Н. Петрова Минздрава РФ, городского и областного онкологического диспансеров Санкт-Петербурга и Ленинградской области, городского маммологического диспансера комитета здравоохранения г. Москвы и других медицинских учреждений России.
Структура и объем диссертации
Диссертация содержит введение, обзор литературы, главу с материалами и методами, пять глав с результатами собственных исследований, главу с обсуждением результатов, заключение, выводы, практические рекомендации, список использованной литературы, 6 приложений. Текст диссертации изложен на 289 страницах, приложения - на 21 страницах. Диссертация содержит ПО таблиц и 35 рисунков. Список литературы включает 330 наименований.
Применения пищевых веществ и фитопрепаратов для профилактики рака
В России в последние годы наблюдается рост онкологической заболеваемости; в 2002 г. было выявлено 453256 новых случаев злокачественных опухолей, что на 10,7% больше по сравнению с 1993 г.; «грубый» показатель заболеваемости на 100000 населения составил 317,2, прирост за 10-летний период - 16,4%; это истинный рост, так как наблюдается на фоне убыли численности населения [Злокачественные..., 2004]. «Грубый» показатель смертности населения России от злокачественных новообразований в 2002 г. составил 203,2 на 100000 населения, за 10-летний период данный показатель достоверно не изменился [Злокачественные..., 2004]. С учетом демографической ситуации, в России прогнозируется дальнейший рост онкологической заболеваемости [Напалков, 2004]. В то же время, в развитых странах удалось переломить негативные тенденции онкологической заболеваемости и смертности [Заридзе, 2004]. В США с 1992 года стандартизованные показатели заболеваемости раком снижаются на 0,9-1,6% в год, а показатели смертности от рака - на 1,5% в год для мужчин и 0,6% - для женщин [Jemal et al., 2003]. В странах Европейского Союза в целом смертность от рака за период с 1985 по 2000 снизилась у мужчин на 10%, у женщин - на 8% [Boyle et al., 2003b]. Этого удалось добиться прежде всего за счет активного использования научно обоснованных мер профилактики злокачественных опухолей [Заридзе, 2004, Boyle et al., 2003а].
Одним из перспективных направлений в онкологии является профилактика злокачественных опухолей с помощью применения антиканцерогенных веществ или химиопрофи-лактика. Антиканцерогенными веществами называют агенты, способные предупреждать возникновение и развитие злокачественных новообразований на этапах инициации, промоции и ранней прогрессии. Химиопрофилактику рака в настоящее время определяют как использование фармакологических или натуральных агентов с целью предотвращения возникновения инвазивного рака путем блокирования повреждений ДНК, инициирующих канцерогенез, или путем задержки и обратного развития прогрессии пренеопластических клеток с поврежденной ДНК [Principles..., 1996]. По аналогии с профилактикой рака вообще химиопрофилактику делят на первичную - использование профилактических препа 16 ратов у практически здоровых людей, вторичную - у пациентов с предраковыми состояниями и изменениями, и третичную - у онкологических больных в период ремиссии после радикального лечения [Greenwald, 2002].
Средства для профилактики рака должны отвечать следующим основным требованиям: 1) доказанная в клинических испытаниях эффективность - способность предупреждать возникновение и развитие злокачественной опухоли определенной локализации или ряда локализаций; 2) возможность применения в течение длительного времени - многолетнего или даже постоянного в течение всей жизни; 3) отсутствие токсических эффектов или минимальная токсичность, чтобы риск возможных осложнений был допустимым в сравнении со снижением риска возникновения рака; 4) желательные дополнительные благоприятные свойства, достигаемые в более короткие сроки; 5) лекарственные формы должны быть только пероральными, в некоторых случаях - местными для нанесения на кожу и слизистые оболочки [Principles..., 1996]. Большинство известных сегодня антиканцерогенных веществ не удовлетворяют всем вышеназванным требованиям.
По современным представлениям рак - это длительный многостадийный процесс, состоящий из 3 основных фаз: инициации, промоции и прогрессии. В период инициации происходит экспозиция к канцерогенным факторам, абсорбция и формирование канцерогенов, реакция с клеточными мишенями, повреждение ДНК, мутагенез. В период промоции происходит селекция и рост клонов генетически поврежденных клеток, в период прогрессии - рост клонов трансформированных клеток и манифестация опухоли [Канцерогенез, 2000]. В соответствии с данными представлениями о канцерогенезе антиканцерогенные вещества делят на два класса: 1) ингибиторы инициации - предупреждающие абсорбцию и формирование канцерогенов, блокирующие агенты; 2) ингибиторы промоции или подавляющие агенты [Greenwald, 2002]. Потенциальные химиопрофилактические средства выявляются в эпидемиологических исследованиях; в лабораторных экспериментах с использованием моделей спонтанного и индуцированного канцерогенеза у животных, трансгенных животных и клеточных линий; в клинических испытаниях.
Экспериментальное изучение антиканцерогенных веществ До настоящего времени нет стандартизованных методов отбора антиканцерогенов. В экспериментальных исследованиях для тестирования и оценки эффективности антиканцерогенных веществ чаще всего используются модели опухолей, индуцированные в различных органах-мишенях у животных с помощью химических канцерогенов [Greenwald, 2002, Kelloff et al., 2000], перечень которых приведен в таблице 1.1.
Предварительное клиническое изучение профилактических средств у больных из групп повышенного онкологического риска
Проведено клиническое изучение БАД «Кламин» у больных с фиброзно-кистозной мастопатией и другими факторами риска рака молочной железы. Тип исследования: открытое рандомизированное, фаза П. Кламин использован производства фирмы «Фитолон» и ОАО «Ай Си Эн Октябрь, Санкт-Петербург. Для исследования были набраны 38 пациенток в возрасте от 27 до 48 лет, в основном, позднего репродуктивного возраста. Проводилась рандомизация по блокам из 2 пациенток: одной назначали кламин, другая попадала в контрольную группу. До конца исследования прослежено 34 пациентки. В основной группе 18 больных получали кламин по 1 таблетке 3 раза в день до еды в течение 3 мес. В контрольной группе 16 больных не получали лечения. Больным также проводили пункци-онную биопсию одного и того же участка молочных желез и цитологический анализ био-псийного материала с оценкой пролиферативной активности и атипии клеток; забор крови из вены натощак и радиоиммунный анализ уровня гормонов в сыворотке крови. Цитологические мазки фиксировали 96% спиртом, окрашивали гематоксилином и эозином и анализировали при световой микроскопии. Гормоны определялись в сыворотке крови радиоиммунологическим методом с использованием коммерческих наборов: тироксин (Т4), трийодтиронин (ТЗ), эстрадиол - наборы СП «Белорис» (Беларусь), 1-125; тиреотропный гормон - наборы МП «Диас» (Россия), 1-125; инсулин - наборы ОП ИБОХ (Беларусь), I-125; лютеинизирующий гормон, фолликулостимулирующий гормон, пролактин - наборы Orion Diagnostica (Finland), 1-125.
Проведено клиническое изучение БАД «Каринат» у больных с фиброзно-кистозной мастопатией и другими факторами риска рака молочной железы. Тип исследования: двои 83 ное слепое рандомизированное плацебо-контролируемое, фаза П. Каринат и плацебо использовали производства фирмы «ИНАТ-Фарма», Москва. Для исследования были набраны 72 пациентки. Сведения о больных и данные обследований направлялись третьей стороне, где проводилась рандомизация, каждой больной присваивался код рандомизации. Согласно коду рандомизации всем больным выдавался исследуемый препарат. Препарат назначался по 1 таблетке 2 раза в день после еды, перерыв между приемами не более 12 часов, курс лечения 6 мес. До конца исследования прослежено 66 больных. По окончании исследований и открытия кодов рандомизации в основную группу (прием карината) попали 33 пациентки, в контрольную (прием плацебо) - 33.
Обследования проводили по схеме, разработанной автором и рекомендованной Минздравом РФ для обследования больных с предопухолевыми заболеваниями желудка: анамнез, оценка клинической симптоматики, фиброгастроскопия с забором желудочного сока и участков слизистой оболочки желудка, определение рН желудочного сока, тест на активность пепсиногена-пепсина в желудочном соке и слизистой оболочке, выявление инфекции Helicobacter pylori, цитологический и гистологический анализ биопсийного материала [Беспалов и др., 1998]. Больные приходили на прием к врачу 1 раз в мес.
Сведения, собираемые во время анамнеза, количественная оценка клинической симптоматики, эндоскопических признаков хронического гастрита, цитологические и пато-морфологические исследования проведены по протоколу, приведенному в Приложениях -П-5. Фиброгастроскопическое обследование выполняли с помощью видеоэндоскопа фирмы «Olympus» (Япония). Во время фиброгастроскопии у больных забирался желудочный сок и не менее 4 биоптатов, обязательно из антрального отдела желудка, а при наличии выраженных изменений - из тела желудка - 2-4 кусочка. Непосредственно после получения биоптатов с одним кусочком ткани из антрального отдела проводился быстрый уреаз-ный тест на Helicobacter pylori с помощью Хелпил-теста (ООО «Ама», Санкт-Петербург).
Функциональную активность желудка оценивали по выработке соляной кислоты (нормальная рН желудочного сока 1,6-1,8) и пепсиногена-пепсина (нормальная активность в желудочном соке - 100-120 мг/100 мл, в слизистой желудка -100-120 мг/г ткани. Значение рН желудочного сока измеряли в разведении 1:10 на рН-метре, используя для калибровки стандартные буферные растворы. Анализ уровня пепсиногена-пепсина в слизистой и желудочном соке проводили по методике с помощью фотопленок [Хансон и др., 2004].
Материал для цитологического исследования получали с помощью мазков-отпечатков с поверхности участков слизистой оболочки желудка, взятых при биопсии. После фиксации 96% спиртом 2 мазка окрашивали гематоксилином и эозином, а 2 других - азор-эозином по методу Лейшмана для выявления Н. pylori. При цитологическом исследовании по специально разработанной количественной шкале оценивали наличие кишечной метаплазии (рис. П-13), дисплазии эпителия, наличие лимфоцитов и плазматических клеток, обсемененность Н. pylori (рис. П-14).
Исследование гистологических препаратов гастробиопсий проводилось при окрашивании их гематоксилином и эозином, при необходимости использовались специальные окраски - альциановым синим и др. По визуально-аналоговой шкале согласно Сиднейской системе классификации гастрита [Аруин и др., 1998] оценивали наличие и характер кишечной метаплазии, степень лимфо-плазмоцитарной инфильтрации, лейкоцитарной инфильтрации и атрофии слизистой оболочки желудка. Подсчитывали число поперечно-срезанных желудочных желез в поле зрения большого увеличения, оценивали пролифера-тивную активность эпителия путем подсчета числа митозов в 10 полях зрения, выявляли и количественно оценивали дисплазию слизистой оболочки желудка.
Диагноз хронического гастрита формулировался в соответствии с модифицированной Сиднейской системой. Диагноз хеликобактериоза ставился больному только после обнаружения бактерий Н. pylori при цитологическом анализе мазков-отпечатков и положительном уреазном тесте.
Проведено клиническое изучение БАД «Кламин» у больных с хроническим атрофиче-ским гастритом. Тип исследования: открытое рандомизированное, фаза II. Кламин использован производства фирмы «Фитолон» и ОАО «Ай Си Эн Октябрь», Санкт-Петербург. Для исследования были набраны 34 больных - женщины и мужчины в возрасте от 31 до 74 лет. Проводилась рандомизация по блокам из 2 пациентов: одному назначали кламин, другой попадал в контрольную группу. До конца исследования прослежено 30 пациентов. В основной группе 15 больных получали кламин по 2 таблетки 3 раза в день до еды в течение 6 мес. В контрольной группе 15 больных не получали лечения.
Проведено клиническое изучение БАД «Феокарпин» у больных с хроническим атрофи-ческим гастритом. Тип исследования: открытое рандомизированное, фаза II. Феокарпин использован производства фирмы «Фитолон» и ОАО «Ай Си Эн Октябрь», Санкт-Петербург. Для исследования были набраны 54 больных - женщин и мужчин в возрасте от 37 до 78 лет. Проводилась рандомизация по блокам из 2 пациентов: одному назначали феокарпин, другой попадал в контроль. До конца исследования прослежено 50 больных. В основной группе 26 больных получали феокарпин по 2 таблетки 3 раза в день до еды в течение 6 мес. В контрольной группе 24 больных не получали лечения.
Проведено клиническое изучение БАД «Каринат» у больных с хроническим атрофиче-ским гастритом. Тип исследования: двойное слепое плацебо-контролируемое рандомизированное, фаза П. Каринат и плацебо использовали производства фирмы «ИНАТ-Фарма», Москва. Для исследования было набрано 69 пациентов - женщин и мужчин в возрасте от 39 до 65 лет. До конца исследования прослежено 66 пациентов. Сведения о больных и данные обследований направлялись третьей стороне, где проводилась рандомизация. На каждого больного получен индивидуальный код рандомизации. Согласно коду рандомизации всем больным выдавался исследуемый препарат. Препарат назначался по 1 таблетке 2 раза в день после еды, перерыв между приемами не более 12 часов, курс лечения 6 мес. По окончании исследований и открытия кодов рандомизации в основную группу (прием карината) попали 34 больных, в контрольную (прием плацебо) - 32.
Статистическую обработку результатов экспериментальных и клинических исследований проводили общепринятыми статистическими методами [Руководство..., 2000] с использованием критериев х2 точного метода Фишера, t (Стьюдента). Математическая обработка результатов проводилась на персональном компьютере IBM, с использованием программ Statistica, Mstat и Excel.
Нестероидные противовоспалительные средства: ортофен и индометацин
По сравнению с контролем биоженьшень статистически достоверно уменьшал общую частоту и множественность опухолей соответственно на 19 и 43,1%, головного мозга - на 23,7 и 48,2%, множественность опухолей спинного мозга - на 52,5%. Панаксел и панак-сел-5 статистически достоверно снижали общую множественность опухолей соответственно на 33 и 28,3%, множественность новообразований головного мозга - на 39,9 и 30,6%; панаксел также уменьшал множественность опухолей почек на 55,6% (табл. 4.25).
Канцерогенез молочной железы. Крысам-самкам ЛИО произвели интрамаммарные иньекции МНМ. В опытных группах вводили препараты P. ginseng. В интактном контроле крыс не подвергали никаким воздействиям. Крыс забивали через 28 нед от начала опыта.
Биоженьшень по сравнению с контролем статистически достоверно уменьшал частоту и множественность опухолей молочной железы соответственно на 43,3 и 62,2%; панаксел - на 47 и 60,3%; панаксел-5 - только множественность данных опухолей на 33,3%. Биоженьшень, панаксел и панаксел-5 также по сравнению с контролем статистически достоверно уменьшали частоту и множественность опухолей почек соответственно на 18,8 и 86,4, 18,4 и 81,8, 18,5 и 81,8% (табл. 4.26).
Радиационный канцерогенез. Крысам-самкам ЛИО произвели общее однократное у-облучение. В опытной группе давали биоженьшень. Крыс из интактного контроля не под 151 вергали никаким воздействиям. Наблюдение за крысами вели в течение 16 мес, после чего оставшихся в живых забивали. Биоженьшень тормозил развитие опухолей, индуцированных радиацией. Антиканцерогенное действие проявилось, в основном, в отношении опухолей молочной железы, эндокринных и репродуктивных органов (табл. 4.27). Таблица 4.27. Влияние биоженьшеня на радиационный канцерогенез
ЭРО - эндокринные и репродуктивные органы. По гистологической структуре: эндо-метриальные железисто-фиброзные полипы - 2, эндометриальный фиброзный полип, ба-зофильная аденома гипофиза; папилломатоз преджелудка, злокачественная лимфома тимуса; в аденокарциномы - 15, фиброаденомы - 20, фиброма; эндометриальные железисто-фиброзные полипы - 5, эндометриальные фиброзные полипы - 4, аденомы гипофиза -5: из них базофильные - 2, эозинофильные - 2 и хромофобная; гранулезоклеточная опухоль яичника, ганглионеврома надпочечника, аденомы щитовидной железы - 3: из них фолликулярные - 2 и сосочковая; плоскоклеточный рак влагалища;д мезенхимальная опухоль почки, аденокарциномы толстой кишки - 2, аденомы толстой кишки - 2, кавернозная гемангиома печени, папилломатозы преджелудка - 4, папилломатоз мочевого пузыря, подкожная фибросаркома, плоскоклеточный рак кожи, лимфоидный лейкоз; аденокарциномы - 5, фиброаденомы - 15; эндометриальные железисто-фиброзные полипы - 3, эндометриальный фиброзный полип; 3 мезенхимальная опухоль почки, светлоклеточная аденокарцинома почки, аденомы толстой кишки - 2, злокачественная фиброзная гистио-цитома брыжейки кишечника, папилломатозы преджелудка - 2, аденокарцинома желудка
В интактном контроле у 22,7% крыс развивались опухоли матки, гипофиза, преджелуд-ка, тимуса, по гистологическому типу большинство опухолей были доброкачественными. Развитие данных новообразований характерно для спонтанного опухолевого фона крыс использованной линии. По сравнению с интактным контролем, при облучении в контрольной группе общая частота и множественность опухолей были статистически достоверно выше соответственно на 47,3 и 548%; частота и множественность опухолей молочной железы - на 52,5 и 900%; множественность новообразований эндокринных и репродуктивных органов - на 177,8%, множественность прочих органов - на 288,9%. По сравнению с интактным контролем, в облученном контроле спектр новообразований был шире, удельный вес злокачественных опухолей существенно больше. Биоженьшень по сравнению с облученным контролем статистически достоверно снижал общую частоту и множественность опухолей соответственно на 24,6% и 58,9%, частоту и множественность опухолей молочной железы - на 23 и 50%, частоту и множественность новообразований эндокринных и репродуктивных органов - на 20,9 и 82%. Биоженьшень значительно сужал по сравнению с облученным контролем спектр индуцированных опухолей, в данной группе вообще не развивались опухоли гипофиза, яичников, надпочечников, щитовидной железы, кроветворной ткани и некоторых других органов, наблюдаемые у контрольных животных. При воздействии биоженьшеня также меньше развивалось злокачественных опухолей по сравнению с облученным контролем (табл. 4.27).
Канцерогенез шейки матки и влагалища. Самкам мышей SHR вводили внутривла-галищно ДМБА 2 раза в нед в течение 6 нед. В опытных группах вводили биоженьшень, панаксел или панаксел-5. В интактном контроле 20 мышей-самок не подвергали никаким воздействиям. Мышей забивали через 11 мес от начала эксперимента. Все 3 препарата Р. ginseng не влияли достоверно на показатели развития опухолей шейки матки и влагалища и других локализаций (табл. 4.28).
По сравнению с контролем, экстракт Е. senticosus статистически достоверно уменьшал общую множественность опухолей, множественность новообразований головного и спинного мозга соответственно на 27,7, 36,3 и 34,4%; экстракт R. cartamoides - общую множественность опухолей на 25,2%, частоту и множественность новообразований головного мозга - соответственно на 22,2 и 44,4% (табл. 4.29).
Канцерогенез толстой кишки. Крысам-самкам ЛИО произвели интраректальные инсталляции МНМ. В опытных группах давали с питьевой водой экстракты Е. senticosus или R. cartamoides. Крыс забивали через 12 мес от начала инстилляций МНМ. Экстракт Е. senticosus тормозил, а экстракт R. cartamoides не влиял на развитие аденокарцином и аденом толстой кишки, индуцированных МНМ у крыс (табл. 4.30).
Концентрат ламинарии омыленный
Недостатком глюкарата кальция является наличие в соединении кальция. Противопоказанием к приему кальция является повышенная свертываемость крови, тромбофлебиты, далеко зашедший атеросклероз [Абрамов и др., 2004]. Глюкарат кальция не растворяется в воде, что затрудняет его всасывание в желудочно-кишечном тракте, не позволяет производить некоторые лекарственные формы. Эффективность глюкуроната калия в опытах автора было более выраженным, чем у глюкарата кальция. Вероятно, это связано с синергизмом антиканцерогенного действия глюкуроната и калия. В эпидемиологических исследованиях повышенное потребление калия с пищей или повышение уровня калия в крови ассоциировалось со снижением риска рака, в экспериментах соединения калия тормозили канцерогенез [Jansson, 1996]. Глюкуронат калия является перспективным для дальнейшего изучения и внедрения в качестве средства для профилактики рака. В сравнении с аналогом - глюкаратом кальция, глюкуронат калия имеет преимущества: более высокая антиканцерогенная активность, отсутствие токсических эффектов и противопоказаний, более простые методы химического синтеза, растворимость в воде, более высокая биодоступность.
Комбинация витаминов А, Е, В2, селенита натрия и глюкуроновой кислоты в качестве антиканцерогена изучена впервые. Важно подчеркнуть, что суточные дозы отдельных антиканцерогенных веществ в составе комбинации были в 5-10 раз меньше, чем обычно используются в экспериментальных исследованиях по данным литературы, а также в проведенных собственных опытах. Антиканцерогенное действие комбинации (рис. 3.1) было сильнее в сравнении с ретинолом ацетатом и рибофлавином на 49,6 и 35,7% (р 0,05), сс-токоферолом ацетатом, селенитом натрия и глюкуронатом калия - на 13,7, 9,3 и 9,8% (р 0,05). Спектр антиканцерогенной активности комбинации (рис. 3.1) был больше в сравнении с ретинолом ацетатом и селенитом натрия на 70,8 и 58,3% (р 0,05), сс-токоферолом ацетатом, рибофлавином и глюкуронатом калия - на 28,8, 50 и 16,6% (р 0,05). Можно сделать вывод о суммировании или синергизме антиканцерогенного дейст вия отдельных агентов при их применении в составе комбинации. Ретинол ацетат, селенит натрия могут оказывать токсическое действие. При использовании их в меньшей дозировке вероятность токсических эффектов уменьшается, в комплексе возможны взаимные антитоксические эффекты. Комбинация витаминов А, Е, Вг, селенита натрия и глюкуроно-вой кислоты является перспективным средством для профилактики рака.
Комбинация Р-каротина, витаминов Е и С, и порошка чеснока - БАД «Каринат» -впервые изучена в качестве антиканцерогена. Ранее было показано, что БАД «Каринат» тормозит рост штамма рака молочной железы человека, трансплантированного иммуно-дефицитным мышам [Шеренешева и др., 2000]. В исследовании автора каринат тормозил развитие индуцированных опухолей шейки матки и влагалища, легких, а также - спонтанных опухолей молочной железы. Механизмы антиканцерогенного действия Р-каротина, витаминов Е и С описаны выше. Чеснок и его сернистые соединения ингибируют ферменты, вызывающие биоактивацию канцерогенов, подавляют формирование нитрозаминов, стимулируют активность ферментов фазы II, детоксифицирующих химические канцерогены; обладают антимутагенным действием, тормозят формирование аддуктов ДНК и экспрессию онкогена p21(H-ras); тормозят пролиферацию клеток, вызывают апоптоз опухолевых клеток; увеличивают активность естественных клеток-киллеров и другие реакции Т-клеточного иммунитета [Эджаз и др., 2003]. В сравнении с отдельно изученными антиоксидантами в эксперименте с каринатом доза р-каротина была меньше на 17%, токоферола - в 6 раз, аскорбиновой кислоты - в 33 раза. Коэффициент ингибирования канцерогенеза и спектр антиканцерогенной активности у карината (рис. 3.1) был выше р-каротина и а-токоферола ацетата соответственно на 12,2 и 50%, 11,4% и 45,5% (р 0,05). Можно предположить синергизм антиканцерогенного действия компонентов карината.
Цис-ретиноевая кислота. Исследования автора расширили спектр антиканцерогенной активности ЦРК. Впервые выявлено, что ЦРК тормозит развитие индуцированных опухолей молочной железы, толстой кишки, шейки матки и влагалища. Механизмы антиканцерогенного действия ЦРК проявляются, главным образом, на стадии промоции канцерогенеза. Она индуцирует дифференцировку и апоптоз, тормозит пролиферацию опухолевых клеток; редуцирует генотоксические повреждения, вызываемые канцерогенами и мутагенами; активирует ферменты цитохрома Р450; обладает антиоксидантным действием и ингибирует липоксигеназную активность; регулирует экпрессию генов [IARC, 1999]. Автором впервые выявлено, что ЦРК стимулирует канцерогенез пищевода. Анализ литературы и собственных результатов позволяет заключить, что ЦРК способна тормозить развитие злокачественных опухолей различных локализаций, но в некоторых органах она может и промотировть канцерогенез. ЦРК - довольно токсичный агент. При использовании в терапевтических дозах ЦРК вызывает эритему, сухость, зуд, шелушение кожи, конъюнктивиты, блефариты, хейлиты, кератиты, боли в суставах; нарушает функцию печени, повышает активность трансаминаз, нарушает липидный обмен [IARC, 1999]. Учитывая высокую токсичность ЦРК, а также способность промотировать канцерогенез в некоторых органах, ее использование для профилактики рака требует осторожности и дальнейшей разработки показаний и противопоказаний.
Ортофен и индометацин. В экспериментах автора ортофен и индометацин тормозили развитие индуцированных опухолей нервной системы и почек, молочной железы, пищевода и преджелудка, шейки матки и влагалища. Для ортофена впервые установлена способность тормозить развитие опухолей всех данных локализаций. Для индометацина расширен спектр антиканцерогенной активности: впервые выявлена способность тормозить канцерогенез нервной системы и почек, шейки матки и влагалища. Механизмы антиканцерогенного действия НПВС объясняются их способностью ингибировать активность фермента циклооксигеназы, который превращает арахидоновую кислоту в простагланди-ны, стимулирующие канцерогенез и опухолевый рост [Rao, Reddy, 2004]. Циклооксигена-за включает два изофермента. Циклооксигеназа-1 приводит к синтезу простагландинов, защищающих клетки желудочно-кишечного тракта. Циклооксигеназа-2 индуцируется онкогенами ras, scr и другими цитокинами, которые стимулируют клеточное деление, ангио-генез и тормозят апоптоз; в раковых клетках наблюдается избыточная экспрессиия цикло-оксигеназы-2. Циклооксигеназа-2 также способствует превращению проканцерогенов в канцерогены, продуцирует воспаление и нарушает иммунные функции [Thun et al., 2002]. НПВС, подавляя активность изоферментов циклооксигеназы, индуцируют апоптоз опухолевых клеток, подавляют их деление и ангиогенез.
