Введение к работе
. Актуальность проблемы. Анализ современной эпидемической ' и эпизоотической ситуации дает основание отнести ледтоспирозы к числу наиболее распространенных лриродноочзгозых зоонозов в' Российской Федераций. Наметившаяся в предшествующее десятилетие тенденция роста заболеваемости этими инфекциями к началу 90-х годов приобрела весьма выраженный и усгоЯчйзнЯ характер. Об этом свидетельствует не только прогрессирующее увеличение числа спорадических случаев, но и регистрация на отдельных территориях эпидемических всгыяек (Ю.й.Федоров, В.В.ГоршенйО, 1990).
По тянести клинического течения и показателям летальности, достигаючим в эндеиичннх регионах 10-30$, лептоспирозн занимавт одно гз первых кест з инфекционной патологии. Медико-социальнзя значимость проблемы обусловлена также вероятностью развития отдаленных клинических последствий, з частности, неврологических у переболевших тяжелыми фораами икфенции ( u.saouit , 1982; 3.А.Гольдекштейн, 1989). Этио-патогенез этих состояний практически не изучен, что является основним препятствием для разработки средств и методов их диагностики-и терапии. -. -
Несмотря на достаточно детальную и всестороннюю изученность закономерностей циркуляции сатогеших лептоспар з. природных и траясфоруированних экосистемах (В.В.Ананьин, Е.В.Карасева, 1961; В.С.Киктеако, 1985; Ю.Г.Чернуха, 1988; Ю.А.Маяахоз, 1988; Е.П.Бернасозская,- 1987 и др..) ., не все клинико-эпидемиологичэские факты находят доланое объяснение в свете иыеюцмхся представлений. К нал относятся наблюдения
о выраженных отличиях в степени эпидемической реализации... некоторых.широко.распространенных среди диких и селькохозяй-
СТЗЄНШІХ ЖИВОТНЫХ СерОВарОЗ лаТОГеННЫХ ЛеЛТОСПИр ( copenbsgeai, ротісаа, Ьахьвао,УІ,МтЛіо,роі. .),__ХаракТЄре КЛИНИЧЕСКОГО ТЄЧЄНИЯ
инфекции при различных_этиологических формах лептоспирозов к. др.-В значительной ыере зто сбуслозлено ограниченностью сведений по сравнительной экологии лептоспир, представляющих различные внутривидовые таксоны серовары). Б частности, практически не изучены факторы, обусловливающие свойственнур патогенный лептоспираи специфическую взаимосвязи с.хозяином (гссталъкую специфичность), особенности кх органной персистен-дии, степень внутривидовой вариабельности патогенных свойств и их свлаГо с эпидемической активностью очагов.
Обоснование экологического :-; сшеобрадип возбудитзлей.: отдзльных.внутривидовых таксоноЕ^ішеет принципиальное значение, как для решеЕия^тсорзтическкх_вопросов систематики лептоспир „(проблема вида), терминологических разногласий в среде лелто-спирокогоз ("лептоспироз" ичи "лептоспирозы"), так и для разработки тактики дифференцированного подхода к контролю различных этиокогичесяих форм инфекции.
Дель исследования» В сзязи с излотэянкм цйеью работы явилось экспериментальное изучение особенностей экологии
ПаТОГеЛНЫХ ЛеШ.'ОС'Пйр ( Lepfcjspirft interrogans ), ОТНОСЯЩИХСЯ К
различных внутривидовым таксонаь, и анализ характера за влияния пэ эпидеиичзское я критическое проявление лептоспи-рознсй инфекции.
Основные1 задачи исследования:
- Дать оценку сравнительной таксономической эффективности
имыуносерологических методов внутривидовой дифференциации
лептоспир (иішуноабсорбционного и монофакторного анализа
антигенной структуры, реакции кикроагглвтинации с панелями
моноклональных антител).
-_ ИзуЧИТЬ ГЄНОМНКЙ ПОЛИИОрфИЗМ Представителей рода Leptospira
методой геномной дактилоскопии с использованием ДНК фага MI3
в качестве молекулярного зонда. _ - .
- Определить таксоноыическое^ЕОЛОжение и вирулентность лепто
спир, в тон числе и ранее неизвестных возбудителей, циркулирую
щих в природных и антропургических очагах с различный
уровнем эпидемической активности.
- ' Исследовать особенности гостальной и органной персистенции
лептоспир отдельных серо'варов на экспериментальных и природ-
ных моделях. . ..
Изучить возможность персистенции лептоспир в тканях центральной нервной системы млекопитающих, обладающих различ-гой степень» восприимчивости и чувствительности к лептоспи-родной инфекции. - ..
Определить латоисрфолсгическае последствия персистенции лептоспир в гхевях головного и спинного иозга золотистых хомяков. - ._ -и
- Разработать питательную среду для выделения.и культивирова
ния лептоспир нового сероьара ЬапЬа в серологической . ,
Группе Javanica.
- На оскоеє результатов собственных исследований и данных
литера-туры провести сравнительный анализ особенностей экологии лептоспир различных сероваров в паразитической и . сапрсфитической фазах существования и дать оценку характера их влияния на эпидемическое и клиническое проявление лепто-спирозной инфекции.
Научная новизна. Установлена способность патогенных лептоспир персисти-ровать з тканях центральной нервной систеш млекопитающих восприимчивых гидов, обладающих различной степенью чувствительности к леятоспирозной инфекции. Показана зависимость нейротропности возбудителей от их серовариаатной принадлежности и вирулентности.
Определены патоморфологические последствия персистенцпи лептоспир в тканях голозного и спинного ысзга эксперийенталь-.них животных, выракающиеся в изиенеквях перьично-деотруктиз--ного характера по типу спонгиозных энцефалопатии ( status epoogioaua .)i ранее не описанных при спирсхегсзах.
В опытах на.природных и лабораторных моделях (полевых ішшах, золотистых хоияках) показано, что свойственная патогенные лептоспирам отдельных сероваров гостальная специфичность обусловлена, как видовыми, так и популяционпыш различиями в зосщмиычивоста,их теплокровных хозяез, а такзе конкурентными взаимоотношзаиями между возбудителями на тканевой уровне, в частности, конкурентным исключением.
С ромощьв гибридизационного теста с ДНК фага МІ5 установлено ааличие гапервариабельпых последовательностей з''хромосомной ДНК лептоспир непатогекнкх зидэз а одного чз
СерОЛарОБ Leptospira interrcgpjas - grippotyphosa. Показана возможность использования метода геномной дактилоскопии з целях видовой дифференциации лелтослир, контроля микробных коллекций и, вероятно, оценки их способности к длительному существованию в сапрофиткчеїхой фазе.
Установлена высокая таксономическая эффективность реакции иинроагтлотйн&ции с панелями мононлональиых антител, позволяющей проводить дифференциацию лептоспнр на субсеро-вариантноы уровне.
Выделен И ИДеНТИфИЦИроВаН НОВЫЙ СерОВЗр Ьэ-nJsa. в
СерОЛОГИЧеСКОЙ Группе JaTaalca - раіІЄЄ НЗИЗЗеСТНЫЙ В03-
будитель, циркулирующий э Приморском крае з популяциях полевых шшей и отличающийся от других представителей патогенного вида сзоеобрзг:...аи питательными потребностями и низкой вирулентностью. .. ..."
Попучеки доказательства кконального происхождения штааиа
10 (серОВЙр Ъуав ), рзнее ЗиПЗЛеННОГО Scizaid et а!.. КЄК НОВЫЙ
вид ( Linadai ), и _штаумоз-контьыияантов, выделенных ааыи из коииерческой питательной среды, что послужило-основанием для Международного подкомитета по таксономии исключить его
ИЗ ЧИОЛа Species incertaa aedis .
Представлено обоснование экологического своеобразия патогенных лептоспир различных внутривидовых таксонов по признакам гостальяой, органной, тканевой специфичности, относительной роли паразитической я салрофитичесной ..фаз . существования, з значительной мере обусловливающих характер эпидемического и клинического проявления инфекции при различных этиологических фориах леятоспирозов.
Практическая ценность работа.
ИЗ ЧИСЛа "ГИПерБИрулеНИШх" ИТаЫМОВ СерОВара Copenhagen!
отобраны два выср-коишуногенных, используемых с 1987 г. в Ставропольском НПО "Аллерген" для производства лептоспироэной вакцина.
. _ На основании результатов определения чувствительности лептоспир к.лептоопироцидной активности нормальных сывороток животных из ^коллекции сапрофигов отобран штаны, используемый в производстве рсдоспецифичевхого лептоспирозного диагностику^ для реакции слайд--агглвтинации.
Разработана питательная среда для выделения и культи- ,
ВИрОВаИИЯ ДепіООПИР НОВОГО СерОВара hanka (СерОГруШіа Ja-ranica).
Рекомендовано использовать итаыы Калз» лри проведении диагностических исследований в Дальневосточном регионе с целью снижения вероятности гилодиагностикк лептрспврозов. "
В прэктику здравоохранения внедрены."Методические указания до эпидемиологии, клинике, диагностике и профилактика-лептсслироза',' Минздрава СССР (1979) и Минздрава РСФСР (1987).
Мотериазы работы отрааены в учебной пособии "^ептоспи-
розы" для организаторов здравоохранения из развизавдзхсн
стран (1Ь>82 г) j учебном кинофильме "Наблюдение за очагаьи
лептоспирсаов", снятом ьа Центрнаучфильые пс .заказу ЕСЗ/
ЮНЕП (1933 г.) иск участи» агтора, а .тагяе. внедрены в учеб
ный процесс на кафедрах аикро.биолоі-ии, эпидемиологии и энто
мологии -ДОЛИУ врачз, -
Полученные результата* могут быть использованы .при разработке дифференцированной системі эпвднадзора и контроля (включая зтиотропную т?рапкк) яеп^оспирозрв различных
отологических фору.
Апробация работы. Материалы диссертации долокекы: на конференции "Лабораторные животные з медицинских кссдедова-яиях"(Москва, 1974), УІ Всесоюзной конференции по лелтоспи-розу (Баку, 1975), Симпозиуме но актуальный проблемам лепто-спнроза (Москва, IS79), УІІ Всесоюзной конференции по лепто-спирсзам (Киев, 1979), УІІІ Всесоюзной конференции по лепто-спирозам (Тбилиси, І983),__Езропейской научной конференция по лептоспирозам ( Англия, Херефорд, 1986), I Всесоюзной конференции "Проблемы патологии и экологической взаимосвязи болезней диких теплокровных и сельскохозяйственных яизотных" "(Новосибирск, 1388); Всесоюзной конференции "Эпизоотология, эпидемиология,-средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней обцих для человека, и-животных"_ (Львов,-1988), Мекдународном конгрессе по зоонозам (ЧСФР, Брно, IS88), Всесоюзной конференции по природной очаговости болезней (Новосибирск, 1989), УІІ Европейской я IX Всесоюзной конференции по лептоспирозам (Москва, І99Ї), заседании сектора "Инсектология" при Бюро Отделения профилактической медицины РАМН (1992), з таюге паучнах конференциях отделов медицинской микробиологии и инфекций с природной очаговостью (1938,1992). _ .
Публикации. 'По теаэ'диссертации опубликовано '54 ."боты, 5 методических материалов (инструкции, рекомендации, .регламенты производства), получены 3 авторских свидехельсвза. Их список приводится в конце автореферата.
Структура и объем диссертации. Диссертация написала в ііонограаачєскої: стиле и включает введение, Ч главы результатов собственных исследований и их обсуждения, общее заключение по работе и выводы. Список литературы содержит 223 наименования. Работа излогена на 187 страницах ыаикнопкеного текста и иллюстрирована 28 таблицами, . 28 рксуккаки а фотографиям.
Осноенкє результаты, представленные в дисеестацви.педу-чены лячно авгороы. Исследования по отдельный разделан работы проводились в комплексе с лабораторией генной инженерии патогенных кикроорганигмоз (руковохлктель - докт.бйод.наук А.Л.Гкнцбург, ведущий научи,сотрудник, хакд.мед.наук Я.А.їІагккйк), лабораторией микробиологии латентних инфекций (руководитель - лро$. .докт.ыед.наук В.А.Зуев, ведуцлй ваучк. сотрудник, докт.ьед.наук - А..У.Харитонова) ЕИЙЙІ им. 'К.С.Гамалеи РАМН, а также лабораторией по контролю иепюспирозных препаратов ВГККИ ветлрепаратов (руководитель - дскт.вет.наук, профессор Ю.А.Малахов).
