Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 9
1.1. Формирование микробного ценоза влагалища женщин 9
1.1.1.Лактобактерии как сочлен микробного ценоза влагалища 9
1.1.2 Изменения микроценоза влагалища в зависимости от уровня гормонов в организме женщины 20
1.1.2.1 Влияние уровня гормонов на лактобактериальное звено микроценоза влагалища 20
1.1.2.2 Влияние гормонального фона на присутствие ДПГ рода Candida в составе микроценоза влагалища 22
1.1.3 Адгезины лактобактерий и их взаимодействие с клеточными рецепторами 25
1.2 Гормонозависимая активация клеточных рецепторов 33
1.2.1 Изменение уровня эндогенных эстрогенов в зависимости от фазы МЦ, во время беременности и в постменопаузе. 33
1.2.2 Рецепторы эстрогенов и их функции 37
1.3 Фитоэстрогены, как альтернатива эстрогенсодержащим препаратам для коррекции микроценоза влагалища 44
Глава II. Материалы и методы 49
2.1. Материалы 49
2.1.1 Характеристика коллекции микроорганизмов 49
2.1.2. Питательные среды 51
2. 1. 3. Препараты и реагенты 51
2. 1. 4. Реагенты 52
2. 1. 5. Биологический материал и биообъекты 53
2. 1. 6. Оборудование и инструменты 54
2.2. Методы 55
2.2.1 Изучение адгезивных свойств микроорганизмов 55
2. 2. 2 Определение сухого веса вещества в спиртовом экстракте препарата № 181 фракция b 56
2.2.3.Определение биологического действия препарата № 181 фракция b 56
2.2.4 Овариоэктомия 58
2.2.5 Изучение действия на микроценоз влагалища препарата № 181 фракция b 58
2.2.6 Статистическая обработка полученных данных. 59
Глава III. Результаты исследований 60
3.1 Исследование адгезии L. acidophilus NК l, L. fermentum 90 TS-4 и С. albicans 605 В на эпителии влагалища женщин детородного возраста 60
3.2 Исследование адгезии L. acidophilus NK l, L. fermentum 90 TS-4 и С. albicans 605 В на эпителии влагалища беременных женщин и пробандов в постменопаузе 63
3.3 Биологическая модель для выбора препаратов, содержащих фитоэстрогены, коррегирующие микробный ценоз влагалища 70
3.4 Действие препарата № 181 фракция b на экспрессию эстрогензависимых рецепторов 71
3.5 Изменение микробного ценоза влагалища под действием фитоэстрогена (препарата № 181 фракция b) 74
Обсуждение результатов 78
Выводы 85
Список литературы
- Изменения микроценоза влагалища в зависимости от уровня гормонов в организме женщины
- Характеристика коллекции микроорганизмов
- Определение сухого веса вещества в спиртовом экстракте препарата № 181 фракция b
- Исследование адгезии L. acidophilus NK l, L. fermentum 90 TS-4 и С. albicans 605 В на эпителии влагалища беременных женщин и пробандов в постменопаузе
Введение к работе
Актуальность проблемы
Дисбиотические состояния в организме женщины и, в частности, возникновение дисбактериоза влагалища, характеризуются резким снижением количества лактофлоры и бурным размножением условно-патогенных микроорганизмов. Это приводит к развитию в данной микроэкологической нише вагинитов и вагинозов, а во время беременности может стать причиной инфицирования плода и его оболочек, являясь тем самым причиной серьёзных осложнений в гинекологической и акушерской практике.
По материалам Министерства Здравоохранения и Социального Развития РФ у 60- 70% женщин репродуктивного возраста определяется дисбактериоз влагалища во время беременности, тогда как в постменопаузе он может достигать 90-95% (Минздравсоцразвития, 2008).
Начинать лечение подобных состояний в практике принято с коррекции гормонального фона организма.
Наиболее распространёнными для этих целей гормональными препаратами являются синтетические аналоги половых гормонов, а также субстанции полученные из растительного сырья и по своему действию сходные с эстрогенами (фитоэстрогены) (Barret J. R., 1996). Помимо положительных эффектов на ткани органов-мишеней эстрогены оказывают и ряд нежелательных эффектов, таких как гипертрофия, отёк и пролиферация тканей. Данный факт побуждает к поиску новых препаратов, которые обладают необходимыми свойствами гормона при отсутствии нежелательных эффектов, к таковым относятся и фитоэстрогены. Необходимо отметить, что данные вещества избирательно взаимодействуют с рецепторами для половых гормонов, а поскольку адгезия основных сочленов микробного ценоза является гормонозависимой, использование фитоэстрогенов открывает широкие возможности для индивидуального подбора пробиотических препаратов и модуляторов эстрогензависимых рецепторов при лечении дисбиотических процессов во влагалище.
Цель и задачи исследования
В связи с вышесказанным цель настоящей работы заключалась в изучении гормонозависимой адгезии и возможности коррекции микробного ценоза влагалища фитоэстрогенами.
По ходу достижения цели последовательно решались следующие задачи:
Определялась гормональная зависимость L. acidophilus NK 1, L. fermentum 90 TS-4, С. albicans 506 В на эпителии влагалища женщин репродуктивного периода в разные фазы менструального цикла (МЦ).
Определялась гормональная зависимость L. acidophilus NK 1, L. fermentum 90 TS-4, С. albicans 506 В на влагалищном эпителии беременных женщин (группа с высоким содержанием эстрогенов) и женщин в постменопаузе
(группа с низким содержанием эстрогенов).
Выявлялось корригирующее действие препарата Климадинон, содержащего фитоэстроген, на адгезию L. acidophilus NK 1, L. fermentum 90 TS-4, С. albicans 506 В к эпителиоцитам влагалища от группы женщин в постменопаузе.
Определялось и сравнивалось действие на рецепторы клеток матки крыс линии Sprague-Dawley препарата Климадинон и предлагаемого чилийской стороной препарата № 181 фракция Ь, полученного из местного растительного сырья.
Изучалось действие на микробный ценоз влагалища крыс линии Sprague-Dawley, препарата № 181 фракция Ь.
Научная новизна
Впервые показано, что использование различных модуляторов эстрогензависимых рецепторов изменяет адгезивную активность эпителия влагалища к определённым видам лактобактерий и позволяет производить адекватный подбор пробиотических препаратов, а также соответствующих им модуляторов эстрогензависимых рецепторов.
Впервые установлено, что влияние гормонального фона на адгезию различных микроорганизмов видоспецифично.
Впервые выявлено, что адгезивная активность С. albicans 506 В на эпителиоцитах влагалища женщин, имевших в анамнезе хронический кандидоз, увеличена, однако адгезия референс-штаммов лактобактерий на клетках мишеней от тех же пробандов не изменена.
Впервые показано, что применение препарата Климадинон в постменопаузе усиливает адгезию L acidophilus NK 1 и L. fermentum 90 TS-4 на эпителиоцитах влагалища женщин, но не влияет на адгезивную активность С. albicans 506 В в опытах с теми же клетками мишенями.
Впервые установлено, что препарат № 181 фракция Ь, содержащий фитоэстроген, вызывает гипертрофию миоцитов и отёк эндометрия матки крыс линии Sprague-Dawley, проявляя тем самым эстрогеноподобное действие, однако при совместном подкожном введении с 17 Р-эстрадиолом снижает колонизацию влагалища крыс лактобактериями, т.е. фактически проявляет антиэстрогенное действие.
Практическая значимость
Экспериментальное изучение адгезивной активности сочленов микробного ценоза, при воздействии селективных модуляторов эстрогензависимых рецепторов открывает перспективы для индивидуального подбора пробиотических штаммов, а также соответствующих модуляторов эстрогензависимых рецепторов в лечении вагинального дисбактериоза.
Разработанная экспериментальная модель на животных может быть использована для отбора селективных модуляторов эстрогензависимых рецепторов.
При коррекции дисбиотических сдвигов в клинической практике может быть предложено сочетание соответствующих фитоэстрогенов и определённых пробиотических штаммов лактобактерий.
Положения выносимые на защиту 1. Адгезивная активность L. acidophilus NK 1 и L. fennentum 90 TS-4 на
клетках мишенях зависит как от циклических изменении эстрадиола, так и от степени постоянно высоких уровней гормона.
Адгезивная активность клинического изолята С. albicans 506 В не зависит от циклических гормональных изменений и постоянно высокого уровня эстрогенов.
Препарат Климадинон, содержащий фитоэстроген и применяемый в постменопаузе в качестве заместительной гормональной терапии, увеличивает адгезивную активность L. acidophilus NK1 и L. fermentum 90 TS-4, но не влияет на таковую С. albicans 506 В.
Адгезия L. fermentum 90 TS-4 в постменопаузе усиливается синтетическим аналогом эстрадиола, содержащимся в препарате Климонорм (2,0 мг эстрадиола валериат; 0,15 мг левоноргестрел).
В модели на неполовозрелых животных, предложенный чилийской стороной, фитоэстроген, содержащийся в препарате № 181 фракция Ь, влиял на экспрессию рецепторов влагалищных эпителиоцитов аналогично 17р-эстрадиолу.
В модели на овариоэктомированных животных препарат № 181 фракция b усиливал колонизацию лактобактериями влагалища, его совместное введении с 17р-эстрадиолом интактным животным снижало обсеменённость влагалища лактобактериями, т. е. проявлял антиэстрогенные свойства, поскольку не влиял на степень колонизации эпителиоцитов влагалища лактобактериями.
Апробация работы
Результаты работы докладывались и обсуждались:
- на международной научной конференции «Фестиваль науки в РУДН»
(Москва, 2011);
-на научной конференции «Эндемичные растения Чили и их использование в практической медицине» (Сантьяго де Чили, 2010);
- на заседании кафедры микробиологии и вирусологии медицинского
факультета РУДН (Москва, 2011).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 2 статьи в журналах рекомендованных перечнем ВАК РФ.
Структура и объём работы
Диссертация изложена на страницах машинописного текста,
содержит таблиц и рисунков. Работа состоит из введения, обзора
литературы и собственных результатов, заключения, выводов и списка
цитируемой литературы, который включает отечественных и
иностранных источников.
Изменения микроценоза влагалища в зависимости от уровня гормонов в организме женщины
Нормальную жизнедеятельность организма человека невозможно представить без его микрофлоры, которая является неотъемлемой частью для макроорганизма и заселяет последний в первые часы жизни. Формирование и становление микробного ценоза находится в тесной связи с гормональным фоном в различные периоды жизни женщины. Микрофлора влагалища формируется у девочек через 12-24 часа после рождения [11]. К концу первых суток жизни влагалище колонизируют лактобактерии, затем его обитателями становятся стрептококки, стафилококки, энтерококки и коринебактерии. Через несколько дней эпителий, выстилающий влагалище, накапливает гликоген – идеальный субстрат для размножения лактобактерий, формирующих микрофлору влагалища новорожденной на данный момент. Лактобактерии расщепляют гликоген с образованием молочной кислоты, что позволяет поддерживать рН среды влагалища на уровне 3,8 -4,5. В это время материнские эстрогены стимулируют рецепторную активность эпителиоцитов во влагалище. Через 3 недели после рождения у девочки происходит полное разрушение материнских эстрогенов, вследствие чего эпителий становится тонким и легко ранимым, в нём резко уменьшается содержание гликогена, что приводит к снижению количества лактобактерий и повышаению рН влагалищной среды до 7,0-8,0. В этих условиях во влагалище девочек доминируют строгие анаэробы [38]. В пубертатном возрасте (с 9 до 12 лет) лактобактерии вновь становятся доминирующими и в последующем сохраняют это положение на протяжении всего репродуктивного периода. Метаболизм лактобактерий способствует стабильному сдвигу рН среды влагалища в кислую сторону до 3,8 — 4,5. Микрофлора влагалища в этот период подвержена циклическим изменениям и представлена доминирующим пулом перекись-продуцирующих лактобактерий. Общее микробное число в этот период варьирует в пределах 105- 107 КОЕ/мл. В 60 % случаев оно определяется лактобактериями, среда секрета влагалища остаётся кислой, на уровне рН 4,0 — 4,5.
В репродуктивном возрасте концентрация различных компонентов вагинальной среды колеблется в зависимости от дня МЦ, однако среди флоры продолжают доминировать лактобактерии. Общая микробная обсеменённость влагалища здоровой женщины репродуктивного возраста достигает 10 - 10 КОЕ/мл [3, 9]. Как и другие микробиоценозы, вагинальная флора включает постоянных сочленов (облигатных, автохтонных, резидентных, индигенных) и транзиторных (аллохтонных), представленных случайно занесёнными из окружающей среды условно-патогенными и/или патогенными микроорганизмами [10, 24, 60, 61]. Гормональные изменения в постменопаузе способствуют резкому снижению количества лактобактерий во влагалищной флоре, что открывает «входные ворота» развития восходящей инфекции мочеполового тракта [24, 82, 159].
Большое количество работ отечественных и зарубежных авторов посвящено изучению состояния нормальной флоры влагалища [3, 7, 9, 30, 35, 127, 146, 172]. В этих исследованиях детально изучается количественный и качественный состав микрофлоры влагалища у женщин разных возрастных групп в различные фазы МЦ. Сравниваются микробные ценозы здоровых и больных женщин. Исследуется изменение флоры в зависимости от изменения гормонального фона организма в период беременности и постменопаузы.
У здоровых женщин репродуктивного возраста все авторы в 100% случаев определяют лактобактерии, как основной компонент микробного ценоза влагалища. По данным Лабинской А. С. с соавт. несмотря на строгую индивидуальность, постоянная микрофлора влагалища на 90-95% представлена лактобактериями, относящимися к микроанаэрофилам, уровень которых в 1 мл влагалищного секрета достигает 10 - 10 КОЕ/мл [36, 39, 61]. Соколова К. Я. и соавт. приводят немного отличные от вышеупомянутых исследователей данные, указывая, что у 38% обследованных женщин репродуктивного возраста лактобактерии встречаются в количестве 10 -10 мкл/мл, а у 46% 10 - 10 мкл/мл [77]. У здоровой женщины влагалище может быть колонизировано 1-4 видами из 18 существующих видов Lactobacillus, но какой-либо характерной их комбинации до настоящего времени выделено не было. Zoetendal E. G. с соавт. [217] в своей работе отмечают, что существует некоторая многоликость остова микрофлоры и она специфична для каждого индивида. По данным Magliano E. M. с соавт. [152] 88,8% всех лактобактерий, выделенных из данной микроэкологической ниши, относятся к виду Lactobacillus acidophilus. Видовой состав микробного ценоза во многом зависит от гормонального фона, который в свою очередь определяет экспрессию рецепторов на вагинальном эпителии, комплементарных адгезинам определённых сочленов ценоза [55]. Несмотря на своё видовое разнообразие, большинство лактобактерий (96%) способно продуцировать перекись водорода и молочную кислоту – защитные факторы поддержания стабильности постоянства видового состава бактериального ценоза влагалища [60, 68]. Минорные компоненты влагалищного микроценоза составляют около 3-5% [9]. Типичными представителями таких микробов являются бифидобактерии, они представляют анаэробную компоненту биоценоза. По данным Коршунова В. М. и соавт. у здоровых женщин репродуктивного возраста они высеваются не более чем в 12% случаев [36]. Багирова М. Ш. и соавт. обнаруживали данный вид микробов у 26,6% здоровых женщин [7], а Кира Е. Ф. в 60% случаев [33]. Следует заметить, что Соловьёва И. В. [78] рассматривает появление бифидобактерий как компенсаторный фактор на начальных стадиях дисбиоза влагалищной флоры. Наиболее часто в вагинальной экосистеме встречаются Bifidobacterium bifidum, B. breve, B. adolescentis, B. longum. Все они являются активными кислотопродуцентами, способны вырабатывать антимикробные агенты (бактериоцины), лизоцим и спирты, поддерживая таким образом стабильность микробного ценоза.
Характеристика коллекции микроорганизмов
В 1999 году Gustafsson J. A. и соавт. открыли новый тип эстрогеновых рецепторов. Данные рецепторы, в отличие от известных ранее -рецепторов, расположенных в клетках половых органов (матки, влагалища, яичников, молочной железы) получили название -рецепторов. Последние были обнаружены не только в клетках половых органов, но и в ткани головного мозга, костях, клетках мочеполового тракта, а также в стенках сосудов. На стимуляции или ингибировании или эстрогеновых рецепторов основано применение селективных модуляторов, в частности фитоэстрогенов. Однако молекулярные механизмы взаимодействия -рецепторов на данный момент изучены недостаточно [137]. Не смотря на это, существует много работ, в которых описаны эффекты, вызываемые эстрогенами и эстрогеноподобные вещества при взаимодействии с рецепторами в тканях-мишенях. В частности, Tchernitchin A. N. с соавт. [204] после введения 17-эстрадиола показали изменения в тканях матки, такие как: увеличение количества желёз в эндометрии, гипертрофия эндометрия, а также увеличение количества клеток, находящихся в разных фазах митотического деления. Для того чтобы объяснить процессы, развивающиеся в матке после воздействия эстрогенов Tchernitchin A. N. с соавт. были описаны два механизма действия эстрогенов на рецепторы тканей матки, не зависимых друг от друга [202]. Первый тип действия эстрадиола в организме обусловлен взаимодействие гормона с классическими цитозольно-ядерными рецепторами, описанный впервые Jensen E. V. С соавт. [133]. Данный механизм действия эстрогенов детерминирует геномные ответы в клетках на стимуляцию эстрогеновых рецепторов, что выражается увеличением количества митотически делящихся клеток в тканях матки, гипертрофией клеток мышечного слоя матки, активацией синтеза белка.
Второй тип действия эстрогенов - негеномный, впервые описанный и затем более подробно изученный Tchernitchin A. N. с соавт. в Лаборатории экспериментальной эндокринологии и патологии окружающей среды медицинского факультета Университета Чили [200, 203] опосредуется через рецепторы, находящиеся на поверхности эозинофилов, взаимодействие эстрогенов с которыми, проявляется миграцией эозинофилов из кровяного русла в ткани матки, наряду с другими проявлениями негеномного механизма дейcтвия включающими в себя отёк глубокого слоя эндометрия, высвобождение тучными клетками гистамина, увеличение синтеза оксида азота и др. Позднее Unda C. с соавт. [204] показал независимость описанных выше геномного и негеномного механизмов действия эстрогенов.
Приведённые данные показывают, что эндогенные эстрогены, их синтетические аналоги, а также модуляторы эстрогенов растительного происхождения отличаются сродством к разным типам эстрогеновых рецепторов. При взаимодействии эндогенных эстрогенов с любым из возможных в организме типов рецепторов, во всех тканях-мишенях будут генерироваться все эффекты эстрогенов, поскольку они обладают наибольшей афинностью к своим рецепторам. Применение модуляторов эстрогеновых рецепторов, структура которых лишь схожа со структурой эндогенных гормонов, может стимулировать только отдельные эффекты гормона в тропных органах и, в тоже время нивелировать другие.
Фитоэстрогены, как альтернатива эстрогенсодержащим препаратам для коррекции микроценоза влагалища
Фитоэстрогены (фитогормоны, селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов растительного происхождения) – это вещества, содержащиеся в растениях. Они имеют структуру сходную с эндогенными эстрогенами и обладают способностью взаимодействовать с эстрогеновыми рецепторами в клетках организма. Запуская тем самым реакции сходные с действием эндогенных гормонов.
Впервые в 1927 году Loewe S. с соавт. [147] описали вещества, содержащиеся в растениях и проявляющие подобное эстрогену действие на организм. По данным Farnswotrth N. R. c соавт. [118] к 1975 году были описаны сотни веществ, выделенных из растений, имевшие эстрогеноподобное действие на организм. В 40-ые годы прошлого столетия Bennetts H. W. с соавт. [96] описали и определили причину «клеверной болезни» овец Австралии, показав в своей работе, что поступление в корм овцам средиземноморского клевера, содержащего в своём составе фитоэстроген, привело к инфертильности женских особей данного вида животных
В 1979 году Setchell K. D. R. с соавт. [181] обнаружили фитоэстрогены в моче приматов, затем в 1982 Axelson M.с соавт. [91] – в моче человека. Множество эпидемиологических исследований доказывают, что наличие в рационе питания растений, содержащих фитоэстрогены, во много раз снижает риск возникновения рака молочной железы и простаты, а также кардиоваскулярных патологий [89].
Определение сухого веса вещества в спиртовом экстракте препарата № 181 фракция b
Как следует из табл. 4 и 6, в группе женщин, принимавших Климадинон, значительно повышается адгезивная активность как L. acidophilus NК 1 (t=11,2 при р 0,05 ), так и L. fermentum 90 TS-4 (t=13,3 при р 0,05 ), связь показателей адгезии с гормональным уровнем в том и другом случаях умеренная (r=0,53 для L. acidophilus NК 1 и r=0,56 для L. fermentum 90 TS-4) по сравнению с женщинами в постменопаузе, не принимавшими этот фитоэстроген. Из сказанного следует, что хотя количество женщин, у которых Климадинон индуцировал повышение адгезии, увеличилось не столь значимо, но, у положительно среагировавших на лечение пациенток, уровень адгезии лактобактерий значительно возрос. Адгезия выбранного тест-штамма ДПГ на фоне терапии фитоэстрогеном не изменяется (t=0,3 при р 0,05), что также подтверждается тетрахорическим показателем связи (r=0,09), т. е. проводимое лечение не изменило частоту случаев с высоким уровнем адгезии и также не изменило средний уровень адгезии по группе. Несколько иной эффект был получен у женщины применявшей Климонорм (препарат используемый для заместительной гормональной терапии, содержащий эстрадиола валериат - 2 мг и левоноргестрел (синтетический аналог прогестерона) - 150 мкг). Адгезивная активность L. acidophilus NК 1 составила 2,6, по сравнению с аналогичным показателем у женщин, не получавших никакой терапии (2,6±0,3). В то же время, адгезия L. fermentum 90 TS-4 достигала (6,0) тогда как в контроле этот показатель составил 2,7±0,4. Следует отметить, что у данной пациентки был хронический кандидозный вульвовагинит. Адгезивная активность ДПГ на её эпителиоцитах составила (10,9), что существенно не отличалось (1l,1±0,45) от показателя в репрезентативной группе женщин, больных кандидозным вульвовагинигом в постменопаузальном периоде (t=0,4 при р 0,05). Это позволяет считать, что препарат Климонорм активирует адгезию L. fermentum 90 TS-4, но не влияет на адгезию L.acidophilus NК 1 и С. albicans 506 В. Таким образом, можно заключить, что адгезия обоих выбранных штаммов лактобактерий является гормонозависимой, причём применение препаратов, направленных на коррекцию гормонального фона в постменопаузе и имеющих различный состав и механизм действия, по-разному влияют на адгезивные свойства L. acidophilus NК 1 и L. fermentum 90 TS-4, тогда как адгезия изученного варианта ДПГ не ассоциируется с уровнем эстрогенов в крови при отсутствии их циклических колебаний, однако, при изменении уровня эстрогена в МЦ, адгезивная активность тест-штамма ДПГ проявляет обратную зависимость от уровня гормона в крови.
Приведённые данные позволяют предположить, что повышение уровня эстрадиола вызывает экспрессию только определённых рецепторов на поверхности эпителиоцитов влагалища женщин, что определяет избирательную адгезию сочленов микробного ценоза. Использование гормонозаместительной терапии путём применения различных препаратов, в том числе фитоэстрогенов, позволяет стимулировать экспрессию только определённых рецепторов и избирательно повышать адгезию некоторых видов бактерий. 3.3 Биологическая модель для выбора препаратов, содержащих фитоэстрогены, коррегирующие микробный ценоз влагалища Изучение модулирующего действия фитоэстрогена Климадинона на адгезию микробов к вагинальному эпителию в постменопаузальном периоде показало, что этот препарат оказывается эффективным при восстановлении нормального ценоза влагалища, где доминирующими являются лактобактерии. Поиск новых препаратов аналогичного действия возможен при условии использования лабораторной модели для их испытания. Именно в этом аспекте проводилась оценка нового препарата № 181 фракция b, полученного из эндемичного чилийского растения. Очевидно, что в этом случае проблема формирования микробного ценоза при испытании новых фитоэстрогенов напрямую связана с механизмом экспрессии эстрогензависимых рецепторов. В связи с этим при оценке предложенного для испытания чилийской стороной препарата мы использовали модель, разработанную в лаборатории экспериментальной эндокринологии и патологии окружающей среды (LEEPА), Universidad de Chile в рамках Российско-Чилийского сотрудничества и при поддержке CONICYT (проект Anillos de Investigacin АСТ07, Chile).
Исходя из того, что модулирующее действие фитоэстрогена Климадинона на адгезию основных сочленов микробного ценоза влагалища было продемонстрировано на группе женщин, находящихся в постменопаузе, т. е. с низким уровнем эстрадиола, модельно-эквивалентной ей можно было принять группу неполовозрелых животных. В этом случае можно было исключить влияние эндогенного эстрадиола на результаты. На неполовозрепых 21-дневных крысах были проведены исследования препарата № 181 фракция b в сравнении с другими модуляторами эстрогеновых рецепторов.
Исследование адгезии L. acidophilus NK l, L. fermentum 90 TS-4 и С. albicans 605 В на эпителии влагалища беременных женщин и пробандов в постменопаузе
Сказанное позволяет предположить, что различные модуляторы эстрогеновых рецепторов растительного происхождения будут по-разному влиять на адгезию отдельных видов сочленов микробного ценоза. Отсюда возникает возможность индивидуально сочетать определённые виды фитоэстрогенов и пробиотические штаммы лактобактерий. Подтверждением этого является установленный нами факт стимуляции адгезии обоих видов лактобактерий при приёме Климадинона, а также увеличение адгезивной активности только L. fermentum 90 TS-4 при приёме Климонорма. Для того чтобы понять различия в эффекте действия фитоэстрогенов нами было проведено сравнительное изучение экстракта эндемичного чилийского растения (препарат №181 фракция b), любезно предоставленный Лабораторией экспериментальной эндокринологии и патологии окружающей среды Университета Чили (Сантьяго). Поскольку данный препарат проходил доклинические испытания, была выбрана биологическая модель для отбора фитоэстрогенов. Испытания были проведены на самках крыс линии Sprague-Dawley. На первом этапе, учитывая критерии Jensen E. V. [133], который описал изменения в матке при действии эстрадиола на эстрогеновые рецепторы клеток данного органа, а также критерии Tchernitchina A. N. [201, 203], предположившего наличие отдельного негеномного эстрогенового рецептора на мембране эозинофилов, мы сравнили действие препарата Климадинон и препарата № 181 фракция b на матку животных. При анализе морфологических изменений тканей матки крыс под действием 17-эстрадиола, Климадинона и препарата № 181 фракция b было показано, что вводимые образцы по разному влияли на рецепторный аппарат матки крыс, однако каждый из них приводил к каким-либо морфологическим изменениям. 17-эстрадиол увеличивал отёк эндометрия, гипертрофию мышечного слоя и миграцию эозинофилов в ткани матки относительно контроля.
Фитоэстроген Климадинон незначительно увеличивал инфильтрацию матки эозинофилами, относительно контроля, вызывал пролиферацию миометрия, но не влиял на отёк эндометрия; при совместном его введении с эстрадиолом он полностью нивелировал стимулирующее действие 17-эстрадиола на инфильтрацию эозинофилами и отёк эндометрия, но не снимал эффект стимуляции 17-эстрадиолом пролиферации миометрия.
При введении препарата № 181 фракция b не наблюдалось инфильтрации матки эозинофилами, однако происходила пролиферация миометрия и наблюдался отёк эндометрия; при совместном его введении с 17-эстрадиолом, эффект был сходен с тем, который наблюдали при введении только 17-эстрадиола. Однако степень выраженности пролиферации эндометрия и гипертрофии миометрия в случае введения фитоэстрогенов была гораздо ниже, что свидетельствует о минимальных негативных эффекта данных субстанций на «клетки-мишени». В итоге было показано, что препараты, воздействующие на эстрогензависимые рецепторы матки, проявляют себя по-разному. В своих работах Gaete L. c соавт.[13], изучая действие фитоэстрогена генистеина на аналогичной модели показали, что испытанное ими средство ингибирует действие 17-эстрадиола на эстрогеновые рецепторы матки, т.е. проявляет антиэстрогенные свойства.
Наши данные подтверждают это положение, поскольку действительно различные препараты, воздействующие на эстрогензависимые рецепторы матки, проявляют себя по-разному. Отличия ответов на стимуляцию эстрогеновых рецепторов различными фитоэстрогенами побуждают к поиску новых вариантов препаратов, расширяющих возможности направленной коррекции гормонозависимых эффектов.
Для изучения действия на микробный ценоз влагалища фитоэстрогена № 181 фракция b группы животных для исследования были сформированы таким образом, чтобы гормональный фон крыс был аналогичен таковому в группах женщин, на эпителиоцитах которых изучали адгезивную активность L. acidophilus NK 1, L. fermentum 90 TS-4 и C. albicans 506 B. Для моделирования периода постменопаузы крысам была проведена овариоэктомия. Через неделю после операции обсеменённость влагалища крыс лактобактериями значительно снижалась. Необходимо отметить, что введение препарата № 181 фракция b оперированным животным восстанавливало пул лактобактерий во влагалище, однако введение такого же материала интактным крысам не изменяло количества лактобактерий во влагалище. В то же время при совместном введении препарата № 181 фракция b овариоэктомированным животным ИО оставался на уровне контроля, тогда как у интактных крыс он снижался относительно данного показателя. Полученные материалы позволили нам считать, что препарат № 181 фракция b обладает конкурентым действием при взаимодействии 17эстрадиола с эстрогеновым рецептором у половозрелых животных. Возможно, снижение размножения лактобактерий объясняется тем, что эндогенный гормон у неоперированных животных вытесняется фитоэстрогеном. Полученные данные позволяют заключить, что изучение действия модуляторов эстрогеновых рецепторов растительного происхождения может открыть дополнительные возможности поиска фитопрепаратов, которые взаимодействуя с эстрогеновыми рецепторами на поверхности эпителиоцитов, так изменяют их структуру, что позволяют различным адгезинам лактобактерий взаимодействовать с мембраной микробных клеток и индивидуально увеличивать свою адгезивную активность.
