Введение к работе
Актуальность проблемы.
Заболеваемость чумой по данным ВОЗ (Wkly Epidemiol Rec. 1993, 1994, 1995, 1996) неуклонно растет, особую настороженность вызывают вспышки легочной чумы в Танзании и Китае в 1991 г. (Ткачев А.В., Мурначев Г.П., 1994; Lyamuya E.F.e.a., 1992), а также в Индии в 1994 г. (Butler D., 1994; Jayaraman K.S., 1994), которые не регистрировались уже несколько десятилетий. Только своевременное проведение противоэпидемических мероприятий способно локализовать очаг инфекции.
Экстренная и специфическая профилактика, высокоэффективная терапия
инфекции являются важнейшими составляющими в системе
противоэпидемических мероприятий и требуют постоянного
совершенствования. Одним из направлений таких разработок может явиться оценка перспектив сочетанного применения средств этиотропной и иммунотерапии (активной и пассивной). Необходимость этих исследований обусловлена несколькими причинами. Прежде всего, схемы экстренной профилактики некоторыми препаратами (ампициллин, доксициклин, фторхинолоны и др.) рассчитаны на 7 дней при сроке изоляции 6 дней, и вакцинация предполагается через 2 дня после окончания превентивной терапии, что создает сложности организационного плана. Эффективность профилактического применения ряда химиопрепаратов оказывается сниженной, если инфекция вызвана возбудителем с Fra" фенотипом, что требует увеличения курса антибиотикотерапии (Самоходкина Э.Д., 1992, 1993; Рыжко И.В. и др., 1995).Такие штаммы выделяются от носителей во всех природных очагах чумы СНГ (Филиппов А.А. и др., 1992; Кокушкин A.M., 1995). Зарегистрированы случаи выделения Fra" культур и от умерших людей (Lawton W.D.e.a., I960; Winter С.С.е.а., 1960; Williams J.E.e.a., 1978; 1983; 1994). Может возникнуть необходимость вакцинации на фоне антибактериальной терапии инфекции другой этиологии. Лечение, начатое на фоне генерализации процесса, малоэффективно даже при условии интенсивной патогенетической терапии. И, наконец, нельзя исключить возможность включения в эпидпроцесс штаммов возбудителя чумы с множественной лекарственной устойчивостью,
4 что осложнит своевременный выбор эффективного средства этиотропной терапии.
Несмотря на то, что целесообразность сочетанной специфической и экстренной профилактики в эпидочаге не вызывает сомнений, возможность ее осуществления ограничивается антибиотикочувствительностью вакцины EV. Однако к настоящему времени уже получена полиантибиотикорезистентная вакцина, не уступающая по имыуногенности эталонному штамму EV, и химическая — на основе протективного антигена возбудителя чумы — фракщм I (Дальвадянц СМ., 1990; Евстигнеев В.И. и др., 1991; Домарадский И.В. и др., 1993), за рубежом используется убитая вакцина USP. Внедрение в практику таких вакцин, на наш взгляд, должно сопровождаться совершенствованием схем сочетанной специфической и экстренной профилактики чумы с использованием новых высокоэффективных препаратов (в частности, фторхшюлоноз).
В последние годы внимание исследователей направлено на использование пассивной иммунотерапии с целью повышения эффективности лечения различных инфекций. Преимущество введения в ішфицированньш макроорганизм антител заключается в немедленной их реализации после поступления в гемо- и лимфосистему, что не только обеспечивает их воздействие на иммунную систему, но делает возможным прямое действие на микроорганизм, его опсонизацию, фагоцитоз и элиминацию из макроорганизма. Развитие гибридомной технологии позволяет надеяться на получение и клиническое использование для иммунотерапии инфекционных заболеваний моноклональных антител (МКАт), полученных к антигенам вирулентности возбудителей. Экспериментальные аспекты профилактики и лечения чумы с помощью МКАт к антигенным детерминантам возбудителя могут явиться основой для поиска оптимального набора терапевтически эффективных моноклональных антител.
5 Цель работы.
Поиск новых подходов к разработке рациональных схем сочетанной специфической (активной, пассивной) профилактики и антибактериальной терапии на модели экспериментальной чумы белых мышей.
Задачи исследования:
-
дать сравнительную характеристику влияния хинолонов (налидиксовой кислоты, ципрофлоксацина, пефлоксацина, офлоксацина, норфлоксацина) на формирование поствакцинального и постинфекционного иммунитета при экспериментальной чуме;
-
оценить преимущество профилактического применения хинолонов на фоне иммунизации животных устойчивым к ним вариантом Y.pestis EV Nalr в сравнении с использованием только антибактериальных препаратов;
3)изучить профилактическое действие гамма-глобулина и
иммуноглобулина G из лошадиной чумной агглютинирующей сыворотки и влияние иммунотерапии на эффективность позднего (через 48-72 ч после заражения) начала антибактериальной терапии;
4) провести отбор препаратов МКАт, узнающих различные эпитопы
фракции І (ФІ), липополисахарида (ЛПС) и "мышиного" токсина (МТ),
обладающих терапевтической активностью при экспериментальной чуме
белых мышей;
5) оценить перспективность пассивной иммунотерапии с помощью МКАт
и их комбинаций per se и в сочетании с использованием
антибактериальных препаратов на поздних стадиях развития инфекции.
Научная новизна.
Установлено, что фторхинолоны (ципрофлоксацин, пефлоксацин, офлоксацин) в отличие от норфлоксацина и налидиксовой кислоты, подавляют формирование постинфекционного противочумного иммунитета при начале их применения на стадии регионарной инфекции. Сочетанная специфическая (иммуногенный вариант штамма Y.pestis EV Nalr ) и экстренная (хинолоны) профилактика не только повышает эффективность последних, но и обеспечивает формирование высокой степени защиты от повторного заражения -1000 ЛДя Y.pestis 231.
Профилактическое применение гамма-глобулина и
иммуноглобулина G позволяет значительно повысить эффективность позднего (через 48-72 ч после заражения) начала этиотропной терапии.
Показана возможность отбора терапевтически активных МКАт к ФІ, ЛПС, МТ и создания их комбинаций, по своей эффективности не уступающих антибактериальным препаратам широкого спектра действия.
Использование МКАт и их комбинаций повышает эффективность позднего применения антибактериальных препаратов (через 72 ч после заражения) при экспериментальной чуме, обусловленной не только типичным в антигенном отношении штаммом возбудителя, но и его вариантом, утратившим способность синтезировать капсульный антиген фракцию ФІ.
МКАт к эпитопам ФІ, ЛПС, МТ, обладающие протективными свойствами, могут быть использованы не только для создания препаратов, высокоэффективных в профилактике и лечении чумы, но и для целенаправленного поиска антигенных детерминант, полезных при конструировании новых вакцинных препаратов против этой инфекции.
Практическая значимость.
Доказана принципиальная возможность повышения эффективности хинолонов в сокращенные сроки (до 5 дней) и создания в период изоляции (6 дней) специфической защиты от чумы, что способствует обоснованию новых схем сочетанной специфической и экстренной профилактики чумы.
Из 15 препаратов МКАт (к ФІ, ЛПС, МТ) отобраны пять, обладающие терапевтической активностью в профилактике и лечении экспериментальной чумы белых мышей. Показана целесообразность их комплексного использования с антибактериальными препаратами. Разработаны и утверждены Ученым Советом РПЧИ "Методические рекомендации по использованию хинолонов нового поколения (ципрофлоксацина, пефлоксацина, офлоксацина) в профилактике и лечении чумы, обусловленной полноценными в антигенном отношении штаммами чумного микроба и вариантами, лишенными способности продуцировать фракцию I".
7 Положения, выносимые на защиту.
1) Сочетанная специфическая и экстренная профилактика чумы
(фторхинолоны) позволяет повысить эффективность последней при
сокращении срока до 5 дней и создать невосприимчивость к последующему
заражению возбудителем чумы.
-
Профилактическое применение пассивной специфической иммунотерапии (гамма-глобулин, IgG, МКАт) повышает эффективность позднего применения антибактериальных препаратов в сроки, когда этиотропная терапия не обеспечивает выживания животных.
-
Набор протективпъгх МКАт к ФІ, ЛПС, МТ позволяет создать комбинации, наделенные профилактическими и лечебными свойствами, не уступающими по эффективности антибактериальным препаратам широкого спектра действия при экспериментальной чуме белых мышей.
Апробация работы.
Основное содержание диссертации отражено в 7-ми опубликованных работах.
Материалы диссертации докладывались на конференциях молодых ученых РПЧИ (1994, 1995, 1996), утвержден и представлен в ГКСЭН заключительный отчет по теме: "Иммуноглобулины в терапии экспериментальной чумы", где автор является ответственным исполнителем.
Структура диссертации.
Монография изложена на 179 страницах, состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, содержит 34 таблицы. Библиография представлена 212 отечественными и 130 зарубежными источниками.
