Введение к работе
Актуальность исследования. Современная медицинская наука развивается высокими темпами, и достигла значительных успехов. Раскрыты многие звенья патогенеза иммунопатологических заболеваний и получены лекарственные средства, позволяющие эффективно контролировать развитие клинических симптомов. Однако современные методы лечения аллергических и аутоиммунных заболеваний недостаточно эффективны и практически не влияют на патогенетическую основу данных заболеваний [Грачева Л.,1997; Чучалин А.Г., 1995]. В тоже время, современная биотехнология позволяет получать вещества заданного состава и с необходимыми свойствами [Халимская Л.М., 2000]. Синтетические вещества отличаются от природных постоянством химического состава и отсутствием необходимости использовать донорский материал. В настоящее время создано большое количество синтетических иммуноактивных пептидов: гепон, вилон, бестим и другие. Они созданы на основе естественных тимических пептидов и обладают заметным иммунорегулирующим действием. Однако они чаще применяются при лечении острых и хронических инфекций [Оковитый С. В., 2005], так как обладают иммуностимулирующими эффектами. Следовательно, возникает необходимость поиска новых иммуноактивных веществ, которые могут применяться для лечения иммунопатологических состояний.
Имеется ряд наблюдений, что в третьем триместре беременности у больных иммунопатологическими болезнями (ревматоидный артрит, ревматизм, тромбоцитопеническая пурпура, рассеянный склероз) наблюдается развитие ремиссии. Это связывают с эффектами фетоплацентарных белков [Кузник Б.И., Васильев Н.Б., 1998]. Получение и применение фетоплацентарных белков природного происхождения имеет ряд существенных трудностей: поиск донорского материала, нестабильность химической структуры и возможность парентеральной передачи вирусов [Шмагель К.В., Черешнев В.А., 2003].
В последние годы появились работы, в которых показано наличие иммуномодулирующих свойств, присущих нативным фетоплацентарным белкам, а также синтетическим пептидам, содержащим определенные пептидные последовательности фетоплацентарных белков. На кафедре биохимии РГМУ профессором Терентьевым А.А. в молекулах АФП и ТБГ были определены пептидные последовательности, которые согласно теоретическим представлениям должны отвечать за ограничение активации иммунной системы.
В лаборатории кафедры патологической физиологии РГМУ ранее исследовался синтетический аналог белка АФП, были получены данные о его влиянии на пролиферацию лимфоцитов [Казимирский А.Н. и соавт., 1999]. Позднее были проведены исследования влияния белков АФП и на популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов, активационные процессы в культуре клеток больных АБА [Казимирский А.Н., 2003], где было показано снижение клеток с экспрессией ранних активационных маркеров. Затем, было выдвинуто, предположение о наличии активных центров в нативных молекулах АФП и ТБГ. Позже были выделены и синтезированы полипептидные последовательности, предположительно отвечающие за иммунотропные эффекты АФП и ТБГ [Терентьев А.А., 2001].
Необходимость прицельно изучить иммунотропные свойства синтетических пептидов аналогов белков АФП и ТБГ, которые могут стать новыми средствами для лечения иммунопатологических и аллергических заболеваний человека, обосновало выбор направление исследования.
Цель работы. Исследовать иммунотропное действие синтетических пептидов, аналогов некоторых пептидных последовательностей белков трофобластического комплекса (БТК) человека, на экспериментальных моделях.
Задачи работы.
-
Изучить действие синтетических аналогов пептидов БТК человека на изменение количества лимфоцитов экспрессирующих поверхностные маркеры здоровых доноров in vitro.
-
Изучить действие синтетических аналогов пептидов БТК человека на изменение количества лимфоцитов экспрессирующих поверхностные маркеры больных ревматоидным артритом in vitro.
-
Изучить действие синтетических аналогов пептидов БТК на изменение количества лимфоцитов экспрессирующих поверхностные маркеры больных атопической бронхиальной астмой in vitro.
-
Исследовать влияние синтетических аналогов пептидов БГК человека на анафилактическую и медиатор-индуцированную контрактуру гладких мышц in vitro.
-
Исследовать влияние синтетических аналогов пептидов БТК человека на развитие сенсибилизации морских свинок.
Научная новизна исследования.
Диссертационная работа посвящена исследованию иммунотропных свойств ранее не изучавшихся синтетических пептидов, производных БТК человека.
Впервые изучено влияние пептидa АФП14-20, пептидa V, пептидa Q, пептид CEA, пептидa E на изменение количества клеток несущих ранние активационные маркеры (CD25, CD71), поздние активационные маркеры (HLA-DR, CD95) при культивировании лимфоцитов здоровых доноров, больных атопической бронхиальной астмой, больных ревматоидным артритом.
Впервые изучено влияние пептидa V, пептидa Q, пептид CEA, пептидa E на изменение количества содержания Т-лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+), NK-клеток (CD16+, CD56+), B-лимфоцитов (CD20+), изменения количества разных форм дифференцировки В-лимфоцитов (CD72+, CD23+, IgM+, IgG+) при культивировании лимфоцитов здоровых доноров, больных атопической бронхиальной астмой, больных ревматоидным артритом. Показана способность, всех исследованных пептидов аналогов БТК человека, снижать содержание Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD4+), цитотоксических лимфоцитов (CD8+) при культивировании лимфоцитов здоровых доноров.
Впервые исследовано действие синтетических пептидов, аналогов некоторых пептидных последовательностей БТК человека на развитие экспериментальной анафилаксии и медиатор-индуцированной контрактуры гладких мышц.
Впервые показано, что пептиды АФП14-20, V, CEA, E не влияют на развитие медиатор-индуцированной контрактуры гладких мышц морской свинки под действием ацетилхолина и гистамина. Была выявлена способность пептида Q, увеличивать медиатор-индуцированную контрактуру гладких мышц морской свинки к ацетилхолину и снижать медиатор-индуцированную контрактуру к гистамину.
Впервые была исследована и охарактеризована, способность пептидов аналогов БТК человека влиять на развитие сенсибилизации in vivo. Показано, что пептид АФП14-20 способен усиливать сенсибилизацию морских свинок.
Полученные результаты, позволяют охарактеризовать иммунотропные эффекты синтетических пептидов аналогов БТК человека.
Практическая значимость работы.
Предложен способ оценки иммунотропных свойств пептидов при культивировании лимфоцитов здоровых доноров, больных атопической бронхиальной астмой, больных ревматоидным артритом, включающий широкий спектр антигенных маркеров. Полученные данные расширяют представления о взаимосвязи структуры и функции пептидов. Показанные иммунотропные свойства исследованных пептидов позволяют рассматривать их в качестве потенциальных лекарственных препаратов.
Положения, выносимые на защиту.
-
Синтетические пептиды, аналоги некоторых пептидных производных белков трофобластического комплекса оказывают иммунотропное действие на лимфоциты здоровых доноров, больных атопической бронхиальной астмой, ревматоидным артритом.
-
Пептид АФП14-20 и пептид Е, in vitro в исследованных моделях, уменьшают количество клеток экспрессирующих ранние активационные маркеры (CD25, CD71) больных иммунопатологическими заболеваниями.
-
Пептиды, синтетические аналоги белков ТБГ - V, Q, СЕА подавляют Т-клеточное звено (CD3, CD4, CD8) иммунной системы больных иммунопатологическими заболеваниями.
-
Синтетический пептид АФП14-20 усиливает сенсибилизацию.
-
В условиях in vitro пептид Q, способен усиливать действие ацетилхолина и значительно снижать эффект гистамина на гладкую мускулатуру тонкого кишечника морской свинки.
Внедрение результатов исследования.
Полученные результаты используются в учебном процессе и научной деятельности кафедры патологической физиологии и кафедры биохимии РГМУ.
Апробация работы.
Материалы диссертации представлены на конференции «Медико-биологические науки для теоретической и клинической медицины, (Москва, 2003), на XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006). Основные положения диссертации доложены на совместной научно-практической конференции кафедры патофизиологии и кафедры биохимии ГОУ ВПО РГМУ от 13.02.2007. Также материалы диссертации представлены на XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010).
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе три в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Объем и структура диссертации.
