Содержание к диссертации
Введение
1. Незаразный жаберный некроз как следствие аммиачной интоксикации (аналитический обзор) 11
1.1. История изучения некроза жабр рыб 11
1.2. Факторы, способствующие развитию незаразного некроза жабр у рыб 14
1.3. Клиническая картина некроза жабр рыб при аммиачной интоксикации 24
1.4. Образование и экскреция аммиака в организме рыб 28
1.5. Традиционные методы профилактики и терапии некроза жабр рыб при аммиачной интоксикации 32
2. Материал и методы исследований 35
3. Изменение физиолого-биохимического статуса рыб при аммиачном интоксикозе 43
3.1. Рости общий обмен веществ 43
3.2. Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен 47
3.3. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная система 59
3.4. Гематологические показатели 63
4. Анализ и диагностическое значение физиолого-биохимических показателей при аммиачной интоксикации 68
5. Профилактика аммиачного интоксикоза рыб и лечение 81
5.1. Результаты профилактики
5.2. Результаты лечения 85
5.2.1. Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен сеголеток бестера после лечения 86
5.2.2. Состояние процессов перекисного окисления липидов у сеголеток бестера после лечения 92
5.2.3. Состояние крови сеголеток бестера после лечения 96
Заключение 100
Выводы 106
Практические рекомендации 108
Список литературных источников 109
- Клиническая картина некроза жабр рыб при аммиачной интоксикации
- Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен
- Гематологические показатели
- Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен сеголеток бестера после лечения
Введение к работе
Актуальность проблемы. Особенностью современного интенсивного рыбоводства является высокая концентрация производства. Она обеспечивается высокой плотностью посадки, применением физиологически полноценных комбикормов и целенаправленным формированием водной среды. Однако нарушение нормальных процессов нитрификации в условиях повышенной температуры, ухудшения санитарно-гигиенических условий в рыбоводных емкостях из-за высоких плотностей посадок, снижения уровня растворимого в воде кислорода и вероятного изменения направленности обмена веществ у рыб способствует незаразному некрозу жабр, при котором гибнет до 80 % выращиваемых особей (Лопухина, 1969; Щелкунов, 1988). Доказано, что незаразный некроз жабр у рыб возникает в результате токсикоза организма аммиаком экзогенного и эндогенного происхождения (Schreckenbach, Spangen-berg, 1978; Щелкунов, 1988).
Несмотря на известную природу причин возникновения незаразного некроза жабр, достаточно эффективных методов его лечения и профилактики еще не разработано. До сих пор остается нерешенной проблема, связанная с особенностями метаболизма рыб, которая усугубляется условиями при интенсивном выращивании, нестабильных климатических и гидрохимических условиях. Кроме того, на смену разработке методов лечения болезней приходит направление, предусматривающее сохранение здоровья объектов аквакульту-ры на протяжении всего периода выращивания путем разработки методов (или технологий), предупреждающих развитие заболеваний. В связи с этим необходимо изучение физиологических и биохимических изменений в организме рыб на тканевом и клеточном уровне при патологиях, что позволит разработать новые более эффективные подходы к выращиванию рыб.
Цель и задачи исследований. Основная цель настоящей работы заключалась в выявлении изменений физиолого-биохимического статуса и метаболизма рыб (на примере бестера) при аммиачной интоксикации и разработке рационального кормления, способствующего нивелированию неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды.
Для достижения этой цели ставились следующие задачи:
І і
изучить влияние аммиачной интоксикации на темп роста, выживаемость, упитанность и направленность общего обмена веществ;
выявить изменения липидного и жирнокислотного обмена при аммиачной интоксикации;
определить влияние аммиачной интоксикации на активность перекис-ного окисления липидов;
изучить влияние аммиачной интоксикации на активность оксидегидро-геназ;
изучить влияние аммиачной интоксикации на активность фосфатаз и липазы;
изучить изменения состава крови при аммиачной интоксикации;
изучить физиологическое действие кормовой липидной добавки при некрозе жабр аммиачной природы и установить оптимальное ее количество в рационе рыб.
Научная новизна. Впервые определено изменение баланса эссенциаль-ных жирных кислот 0)3 и соб ряда при аммиачной интоксикации молоди бестера. Установлено, что при данном заболевании существенно снижается уровень соЗ при активном расходовании на поддержание гомеостаза эйкозапен-таеновой (20:5), докозапентаеновой (22:5) и докозагексаеновой (22:6) жирных кислот. Выявлено снижение активности витамина А с преобладанием суммы мононенасыщенных кислот 20:1 и 22:1 и уменьшением уровня полиненасыщенной кислоты 22:6. Показано, что при аммиачной интоксикации повышаются энерготраты организма и в обмен веществ включаются мембранные ли-пиды.
Впервые определено, что при аммиачной интоксикации нарушается динамическое равновесие процессов свободнорадикального окисления, снижается активность дегидрогеназ - лактатдегидрогеназы, малатдегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы, а также кислых и щелочных фосфатаз, липазы. Изменяется картина крови в сторону увеличения фагоцитарных клеток, а также в 2 раза уровня аммиака. Установлено, что для предотвращения аммиачной интоксикации и, как следствие, некроза жабр, целесообразно вводить в рацион рыб специальную кормовую липидную добавку в количестве 2 %, основным физиологическим действием которой является нормализация процессов метабо-
лизма рыб, в том числе уровня аммиака в крови, тем самым, устраняя причину заболевания.
Практическая значимость работы определяется возможностью повышения эффективности выращивания рыб за счет профилактики аммиачной интоксикации и поражения жабр, особенно в условиях высокой интенсификации выращивания.
Обогащение рациона рыб кормовой липидной добавкой способствует не только снижению потерь рыбоводной продукции в случае заболевания, но и их предупреждению при проведении профилактического кормления, а также хорошему физиологическому состоянию рыб. Результаты наших исследований подтверждены производственными испытаниями.
Апробация работы. Материалы диссертации представлялись, обсуждались и докладывались на Международной научной конференции «Состояние и перспективы развития фермерского рыбоводства аридной зоны» (г. Азов, 2006), IY Международной научно-практической конференции «Аквакультура осетровых рыб: достижения и перспективы развития», (Астрахань, 2006), на Международной научной конференции «Наука, техника и высшее образование» (Аура, Мальта, 2007), II Международной научной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины (Ростов-на-Дону, 2008), а также на заседаниях кафедр «Водные биоресурсы» и «Биоэкологи и ихтиологии» МГУТУ.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и приложения (акты производственных испытаний). Список цитируемой литературы включает 191 работу, из которых 38 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 24 рисунками и 20 таблицами.
1. НЕЗАРАЗНЫЙ ЖАБЕРНЫЙ НЕКРОЗ КАК СЛЕДСТВИЕ АММИАЧНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ (аналитический обзор)
В данной главе освещена история изучения незаразного некроза жабр рыб аммиачной природы, клиника и причины заболевания. Обсуждены пути
образования и экскреции аммиака в организме рыб, традиционные методы профилактики и терапии данного заболевания. Обзор литературных данных источников показал, что, несмотря на установленные факторы, провоцирующие заболевание рыб некрозом жабр, а также разработанные методы профилактики и лечения, вспышки жаберного некроза аммиачной природы происходят регулярно в различных хозяйствах. Однако вопросы, связанные с нарушением физиологического и биохимического статуса рыб при данном заболевании, имеющих существенное значение для его профилактики изучены недостаточно или совсем не затрагивались.
Клиническая картина некроза жабр рыб при аммиачной интоксикации
Распространение заболевания, приводившее к массовой гибели рыбы в прудовых хозяйствах многих стран и большие убытки, заставили вести интенсивные поиски патогена и методов борьбы с ним. На решение этой задачи было потрачено достаточно много времени и усилий российских и зарубежных исследователей.
Первое время приоритет в исследованиях принадлежал советским ученым - A.M. Лопухиной, Л.Х. Апазиди, В.Я. Линник, Т.Н. Мамыш, В.А. Мус-селиус, И.С. Щекунову, Л.Н. Головневу, С.А. Баранову и др. Затем, наиболее важные результаты были получены зарубежными исследователями - Э. Малик, Я. Олах, 3. Свободовой, R. Spangenberg, К. Schreckenbach, J. Farkas и др. (цит. по Щелкунову, 1988). Неопределенность причин заболевания, наряду со способностью многих патогенов вызывать аналогичное поражение жаберного аппарата, способствовали возникновению множества гипотез, объясняющих природу болезни. Еще на начальных этапах исследований было высказано предположение о неоднородности природы жаберного некроза (Ахмеров, 1957). В своей работе А.Х. Ахмеров определял бранхионекроз, называя так все поражения, приводящие к некрозу жабр, как совокупность заболеваний различной природы, объединенных сходным симптомокомплексом. В качестве причин автор указывает как на некоторые инвазионные заболевания, так и на химический состав воды, в частности значительные изменения ее кислотно-щелочной реакции. Предположение о неоднородности причин развития нового жаберного заболевания способствовало формированию двух основных направлений поиска патогенных факторов. Одни исследователи предполагали наличие неизвестного патогенного возбудителя, другие искали причину в гидрохимическом составе воды, используемой в рыбоводных хозяйствах. Таким образом, предполагалось существование двух форм жаберного некроза неизвестной этиологии - заразной и незаразной.
Первые целенаправленные исследования по установлению причин нового жаберного заболевания были проведены в Опочецком прудовом хозяйстве Псковской области, где впервые оно было зафиксировано. Под руководством A.M. Лопухиной изучались больные карпы на предмет паразитарных инвазий. В ходе этих работ на жабрах больной рыбы были найдены неизвестные образования, неоднородные по строению. Встречались зернистые амебоиды, крупные полиплоидные клетки и округлые белые цисты, достигающие 2 мм в диаметре (Лопухина, 1969; Witala et al., 1971). Однако в своих работах исследователи сразу отмечали, что не во всех случаях при поражении жаберного аппарата у рыб можно обнаружить эти микроорганизмы. Указывалось таюке, что в проточной речной воде состояние больной рыбы резко улучшается. Также было отмечено, что у диких и сорных рыб заболевание жаберного аппарата не проявляется, даже при массовом заболевании карпа. В дальнейшем, найденные микроорганизмы были определены, как миксоспо-ридии из рода Dermocystidium, а заболевание получило название дермоци-стидиоз (Осетров, 1978).
Продолжающиеся поиски возбудителя жаберного некроза способствовали установлению такого заболевания, как миксоспоридиальная анемия карпа (миксоболез карпа), вызываемая амебоидом Myxobolus cyprinid. При этом заболевании наблюдается клиническая картина, сходная с бранхиоми-козом. При поражении жабр в период выхода созревших спор из цист, происходит массовая гибель рыбы. В отличие от некроза жабр, заболевание проявляется обычно ранней весной и наблюдается среди молоди карпа (Ваня-тинский и др., 1979). Микроспоридии, вызывающие аналогичное поражение жаберного аппарата встречаются у кефали (Myxobolus exiguous), толстолобиков (Myxobolus pavlovskii) и некоторых других рыб (Канаеев, 1988).
Были выявлены некротические поражения жаберного аппарата, вызываемые миксобактериями: флексибактериоз (Olah et al., 1982, Spangenberg, 1975), флавобактериоз (Farkas, 1985). Однако, по мнению ряда авторов (Ко-vacs-Gaye, 1981; Wakabayashi, Iwado, 1985; Олах и др., 1988) эти бактерии -обычная микрофлора у рыб и являются условно патогенным.
Была предложена версия грибковой природы жаберного некроза. Позже она была отвергнута. Сейчас это заболевание известно как кандидамикоз (Семенова, Триленко, 1974; Golovin, Golovina, 1995).
Рассматривалась гипотеза вирусной природы жаберного некроза. Предположение о существовании вирусного возбудителя впервые было высказано Т. Миачинским (Miaczynski, 1965). Затем белорусскими учеными (Линик и др, 1972; Головнев, Екельчик, 1978) при острых формах заболевания был выделен вирус, вызывающий симптоматику жаберного некроза при введении его в организм здоровых рыб. При исследовании патогенных свойств вируса выяснилось, что он характеризуется слабой вирулентностью и контагиозностью (Попкова, Щелкунов, 1978; Щелкунов, 1979). Эти данные были подтверждены исследованиями, проведенными в Венгрии, Чехословакии, Германии (Bekesi et al., 1981; Fijan, 1982; Sauberlich, Schreckenbach, 1982).
Таким образом, несмотря на обнаружение различных патогенных организмов, вызывающих симптомокомплекс жаберного некроза, далеко не всегда вспышки жаберного заболевания можно было связать с каким-либо из них. Во многих случаях при исследовании больной рыбы обнаруживалась незначительная зараженность, характерная для здоровой рыбы, или патогенные организмы вовсе отсутствовали.
Опыты, проведенные в прудах, бассейнах и аквариумах, показали, что попытки заражении здоровой рыбы патологическим материалом, полученным от экземпляров с симптоматикой жаберного некроза, при отсутствии других стрессирующих факторов, не приводят к развитию заболевания (Лопухина, 1969; Мусселиус, Чернышев, 1974; Олах, Фаркаш и др., 1988). Развитие жаберного некроза происходило в тех случаях, когда рыба содержалась в воде с неблагоприятными гидрохимическими показателями. Это свидетельствовало в пользу незаразной природы данного заболевания.
Сторонники данной теории с момента появления жаберного некроза основной причиной болезни считали наличие химических загрязнителей в воде. Еще в 1960 г. А.Х. Апазиди указывала на связь между возникновением жаберного некроза и качеством воды. При изучении гидрохимических показателей воды прудовых хозяйств, где наблюдалось жаберное поражение карпа, была выявлена зависимость между вспышками заболевания и такими параметрами воды, как уровень рН, концентрация кислорода, окисляемость (Апазиди, 1960, 1961). В ряде работ зарубежных исследователей рассматривалось избыточное внесение в пруды азотно-фосфорных и органических удобрений, приводящих к снижению кислорода, появлению аммиачных соединений и повышению рН, как основных факторов, способствующих развитию жаберного некроза (Kocylowski, 1970, 1972; Maetz, 1971).
Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен
Физиолого-биохимические исследования Общий химический анализ кормов и рыб проводили по стандартным методикам, рекомендованным М.А. Щербиной (1983). Они включали определение влаги высушиванием при Т = 105 С, жира - экстрагированием в аппарате Сокслета, сырого протеина - путем калориметрического определения азота, умноженного на коэффициент 6,25 с применением реактива Неслера. Содержание золы определяли сжиганием исследуемого материала в муфельной печи при Т = 500 С, безазотистых экстрактивных веществ (БЭВ) - по разности между суммой всех веществ пробы и суммой протеина, жира и золы.
Для разделения липидов на классы использовали метод тонкослойной хроматографии (Шталь, 1965), с предварительным экстрагированием их по Фолчу (Folch et all., 1957). В качестве сорбента применяли закрепленный слой силикагеля "LS 5/40 lm 0" (Chemapol) + 13% гипса. Разгонку липидов осуществляли в системе растворителей - гексан:диэтиловый эфиргледяная уксусная кислота в соотношении - 80:20:2.
Холестерин определяли по методу Либермана-Бурхарда модифицированного С. Ильком, эфиры холестерина с использованием дигитонина (Пса, 1962), глицеринов - по цветной реакции с хромотроповой кислотой (Биохимические методы исследований в клинике, 1969), неэстерифициро-ванных жирных кислот колориметрически с использованием медного реактива (Yang Jeun-Sing, Biggs, 1971). Определение липоидного фосфора проводили методом, основанным на освобождении йодной кислотой фосфорной кислоты в виде ортофосфорной кислоты, которая, взаимодействуя с молибденовой кислотой, образует фосфорномолибденовую кислоту, последняя восстанавливается эйконогеном до молибденовой сини (Isao et all., 1967).
При количественном определении спектра фосфолипидов использовали систему растворителей - хлороформ:метанол:вода - в соотношении 65:25:4 (Шталь, 1965). При этом липиды разделялись на следующие фракции: ино-зитфосфатиды, лизофосфатидилхолины, сфингомиелины, фосфатидилхоли-ны, фосфатидилсерины, фосфатидилэтаноламины, кардиолипины.
Жирные кислоты определяли методом газожидкостной хроматографии на хроматографе «ЦВЕТ-5». В качестве неподвижной среднеполярной фазы использовали "Lac 2R-446" - 27%. Идентификацию жирных кислот осуществляли путем сравнения графиков зависимости логарифмов удерживаемых объемов от длины цепи углеродных атомов. В качестве метчиков использовали стандартные смеси метиловых эфиров жирных кислот - "Sigma-189-l" и "Sigma-189-6".
Содержание диеновых конъюгатов оценивали по характерному для них ультрафиолетовому спектру поглощения раствора липидов в системе растворителей - метанол: гексан в соотношении 5:1. Малоновый диальдегид определяли в реакции с тиобарбитуровой кислотой (Коробейникова, 1989). Ко 41 нечные продукты ПОЛ (основания Шиффа) - продукты взаимодействия ко-роткоцепочечных диальдегидов с аминофосфолипидами - регистрировали по спектрам флуоресценции растворов липидов в хлороформе с максимумом возбуждения флуоресценции при 360 нм и максимумом испускания в области 420-440 нм на спектрофотометре "Hitachi". Определение активности СОД проводили гидроксиламиновым методом (Yasuhira, 1983), а-токоферола - флуорометрическим методом (Taylor, 1980).
Определение активности лактатдегидрогеназы проводили по методу Зумермана и Вестейна (Zimmerman, Weistein, 1966), малатдегидрогеназы - по методу Амелунга с соавторами (Amelung et all, 1966), уровень сукцинатде-гидрогеназы - по методу Сонтула с соавторами (Sontull et all, 1968).
Активность щелочной и кислой фосфатазы определяли методом по Бессею, Лоури (Щеклик и др., 1966), активность липазы - по скорости гидролиза трибутирина (Yang Jeun-Sing, Biggs, 1971).
Определение витамина А в тканях проводили колориметрическим методом в тканях (Carr, Prince, 1926), витамина С - методом, основанным на способности аскорбиновой кислоты, окисляясь, количественно восстанавливать 2,6- дихлорфенолиндофенол (Tillman et all., 1932).
Для характеристики крови исследуемых рыб использовали следующие показатели: содержание гемоглобина, величину гематокрита, интенсивность эритропоэза и лейкоцитарную формулу. Из каждого варианта исследовали по 10 экземпляров рыб.
Кровь для анализа брали из хвостовой артерии. Концентрацию гемоглобина определяли по Сали, величину гематокрита - на центрифуге Шкля-ра. Мазки фиксировали и окрашивали по Паппенгейму. Клетки крови идентифицировали по классификации Н.Т. Ивановой (1970, 1983).
Гематологические показатели
Так у больной молоди более чем на 40% уменьшается величина соотношения фосфолипидов к триацилглицеринам (ФЛ/ТАГ) и фосфатидилхоли-на к фосфатидилэтаноламинам (ФХ/ФЭА), при одновременном повышении на ту же величину коэффициента Дьердии (Х/ФЛ).
Согласно нашим и литературным данным изменение баланса отдельных липидов в организме рыб, как правило, приводит к изменениям в соотношении жирных кислот (Абросимов, 2004; Абросимова, Абросимова, 2006).
Известно, что жирные кислоты соЗ ряда регулируют проницаемость клеточных мембран, выполняют структурную функцию и контролируют процессы клеточного транспорта и активность ферментов. Установлена связь резкого снижения запасов витамина А в печени животных с дефицитом эс-сенциальных жирных кислот (Ржавская, 1976). Накоплено достаточно данных о взаимосвязи уровня витамина В6 (пиридоксина), витамин В2 (рибофла 52 вина), витамина Bi2 с дефицитом эссенциальных жирных кислот. Наиболее четко это проявляется у молодых животных. Изменение активности витамина А особенно хорошо коррелирует с изменением содержания кислоты 22:6 (Ржавская, 1976).
Следовательно, можно полагать, что наличие дефицита эссенциальных жирных кислот может являться одним из предрасполагающих факторов нарушения стабильности мембран, что, в свою очередь, является определяющим фактором в развитии различных заболеваний (Алимова и др., 1974). Существенные количественные изменения отмечены в составе жирных кислот ряда соЗ и соб. У больной молоди по сравнению со здоровыми рыбами повышается уровень соб кислот и снижается содержание соЗ кислот (табл. 8). Уровень насыщенных, моноеновых и полиеновых жирных кислот как в общих липидах, так и фосфолипидах у больных и здоровых рыб отличался незначительно и не превышал 8%. Максимальное отличия были по полиено-вым кислотам, за счет повышения содержания суммы соб кислот (рис. 11).
Изменения содержания некоторых жирных кислот у больной молоди бестера, % к контролю (контроль принят за 100 %): ОЛ - общие липиды, ФЛ - фосфолипиды си Так, сумма юб кислот в общих липидах и фосфолипидах больных рыб соответственно в 1,9-2,0 раза была больше, а сумма соЗ кислот - на 46 и 50 % меньше по сравнению со здоровой молодью.
Количественные изменения суммы 0)6 кислот у больных рыб обусловлены в основном повышением уровня линолевои и арахидоновои жирных кислот в 1,8 и 1,5 раза в общих липидах и 1,7 и 1,6 раз в фосфолипидах.
Снижение уровня суммы юЗ кислот в общих липидах и фосфолипидах в значительной степени обусловлено уменьшением содержания линоленовой жирной кислоты в 5 раз, эйкозапентаеновой — 1,4-1,6 раза, докозапентаено-вой более чем в 2 раза и докозагексаеновой 1,7 -1,8 раза по сравнению со здоровыми рыбами. Отмеченные изменения количества жирных кислот определили и соотношение юЗ/шб кислот, которое у больной молоди более чем в 3,5 раза было меньше, чем у здоровой.
Аналогичные изменения липидов и жирных кислот отмечали у двухлеток карпа, молоди бестера и русского осетра с некрозом жабр (Абросимов, Хлебнова, 2004; Абросимова, Абросимов, 2004). Согласно данным этих исследователей у двухлеток карпа, молоди бестера и осетра отмечено повышение уровня триацилглицеринов на 16%, моно- и диацилглицеринов - более чем в 2 раза и снижение уровня фосфолипидов и эфира холестерина более чем на 30%. Увеличивается коэффициент Дьердии почти на 25%. При этом в фосфолипидах повышается уровень лизофосфатидилхолинов и фосфатидилэ-таноламинов и снижается содержание сфингомиелинов, фосфатидилхолинов и кардиолипинов с полиглицерофосфатидами. Характерно и более высокое в 2 раза соотношение фосфолипидов/фосфатидилхолинов (ФЛ/ФХ), что свидетельствует о снижении у рыб скорости окисления и утилизации фосфатидилхолинов. Почти в 2 раза снижается у них уровень соЗ кислот, как в общих липидах, так и фосфолипидах в основном за счет уменьшения докозагексаеновой кислоты в 1,5 раза. Ввиду этих изменений величина соЗ/соб снижалась в 3 раза (рис. 12 и 13).
Липидный, жирнокислотный и энергетический обмен сеголеток бестера после лечения
С улучшением и стабилизацией липидного обмена у сеголеток бестера после лечебного кормления отмечены положительные изменения состава крови. У них снизилось содержание аммиака в крови до 2,0 мг/дм3 (максимум - 2,2, минимум - 1,7), что соответствовало его уровню для здоровых рыб. У контрольных (здоровых) рыб содержание аммиака в крови осталось практически на прежнем уровне - 2,2 мг/дм .
У переболевшей (опытной) молоди достоверно повысился уровень гемоглобина в крови на 69 % по сравнению с начальными показателями (см. табл. 11, гл. 3) и отличались от контрольных рыб не более чем на 3,5 %. Повышение содержания гемоглобина в крови у контрольной молоди составило 30 %. По показателю гематокрита обе группы молоди практически не отличались (табл. 20).
К осени у рыб существенно повысилась интенсивность эритропоэза: у больных после лечения (опытные) - в 2,2 раза, у контрольных - в 1,4 раза, что определило различия в данном показателе на уровне 10 %.
Более низкая интенсивность эритропоэза у опытной молоди была обусловлена за счет меньшего содержания в крови эритробластов и базофильных нормобластов почти в 2 раза. Несмотря на эти отличия, показатели красной крови у обеих групп рыб соответствовали физиологической норме.
Из морфологических изменений красной крови на мазках наблюдается незначительный анизопойкилоцитоз и слабая гипохромазия, единично встречаются эксцентрически расположенные ядра эритроцитов, безъядерные эритроциты и шистоцитоз. Эти изменения почти всегда наблюдаются у рыб в интенсивной аквакультуре и в отмеченных пределах не оказывают существенного влияния на здоровье рыб (Ассман, 1960; Головина, 1977; Житенева и ДР-Д989).
По сравнению с начальными показателями у опытной молоди уровень лимфоцитов возрос почти на 46 %, а у контрольных рыб данный показатель остался практически на прежнем уровне. Повышение количества лейкоцитов в пределах физиологической нормы у переболевших рыб является показателем их выздоровления. Об этом свидетельствуют и снижение у них нейтро-филов - палочкоядерных и сегментоядерных, соответственно более чем в 2 раза и на 23 %. У контрольных рыб отмечено повышение палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов. Если у молоди до лечебного кормления моноциты встречались единично в контроле, то у сеголеток их количество увеличилось, особенно, у переболевших рыб. Однако, как отмечает Г.Г. Голодец (1954), с возрастом у рыб, в том числе молоди осетровых, отмечается увеличение относительного количества моноцитов и полиморфоядерных лейкоцитов, что является проявлением нормального созревания их организма.
Г.Г. Голодец (1954) считает, что увеличение количества эозинофилов у осетровых рыб связано с усилением интенсивности питания, так как изменение количества эозинофилов зависит главным образом от условий питания. Мы в своем опыте получили неоднозначный результат. Так, у рыб контрольной группы количество эозинофилов увеличилось в 1,9 раза, что согласуется с литературными данными, так как с возрастом возрастает активность и, соответственно, интенсивность питания. Можно было ожидать, что с выздоровлением и нормализацией активности пищеварительных ферментов, количество эозинофилов у опытных сеголеток увеличится. Однако их численность, наоборот, уменьшилась более чем наполовину. Вероятно, это связано с фагоцитарной функцией эозинофилов, отмеченную рядом авторов (цит. по Н.Т. Ивановой, 1983). В целом нужно признать, что состав лейкоцитов у переболевших рыб начинает возвращаться к норме. Некоторые различия в количественном соотношении моноцитов, эозинофилов и отдельных нейтрофи 99 лов у выздоровевших и контрольных рыб, по-видимому, являются следствием нарушения функции жабр в период болезни и длительного восстановительного периода.
Таким образом, кормовая липидная добавка в количестве 2 % в составе корма способствует выздоровлению сеголеток бестера, улучшению их ли-пидного и жирнокислотного статуса и состоянию крови. Следовательно, в соответствующих количествах она может использоваться не только в профилактических целях, но и в качестве лечебного средства при жаберном некрозе.
