Введение к работе
Актуальность проблемы. Успешное развитие беременности зависит от иммунологического контроля взаимоотношений матери и плода. Одной из наиболее тяжелых форм патологии беременности, связанной с нарушением регуляторных механизмов, является гестоз, проявляющийся полиорганной функциональной недостаточностью, развитием гипертензии, отеков и протеинурии после 20 недели беременности. Частота гестоза в различных странах колеблется от 2 до 14% к числу всех беременностей [Douglas K.A., 1994; Cавельева Г. М., 2000]. Гестоз остается одной из ведущих причин материнской смертности и составляет в ее структуре 25%. Наиболее часто гестоз развивается у женщин, страдающих соматическими заболеваниями, а также у первородящих и у беременных старше 30 лет. Преждевременные роды при гестозе наблюдаются в 25-41%, частота оперативного родоразрешения составляет 40% [Савельева Г.М., 1996; Серов В.Н., 1997]. Несмотря на многочисленные исследования последних десятилетий, до сих пор не существует единых четких представлений об этиологии и патогенезе данного заболевания. К настоящему времени изучены механизмы иммунологического контроля инвазии трофобласта в стенку матки, механизмы создания иммунологической толерантности в системе мать – плод, факторы, действие которых может приводить к патологическому течению беременности. Вместе с тем, до сих пор не проанализированы иммунологические механизмы, связывающие особенности функционирования клеток иммунной системы, эндотелиальных клеток сосудистого русла беременной женщины, эндотелиальных и других клеток плаценты при ее физиологическом развитии и при патологическом течении беременности. Недостаточно изучен до сих пор характер изменений цитокиновой сети плаценты при ее физиологическом развитии и при гестозе. В литературе представлены разрозненные сведения о локализации ростовых факторов в плаценте на ранних и поздних этапах физиологически протекающей беременности. Изучение секреции тканью плаценты цитокинов и других факторов проводилось, как правило, без иммуногистохимического подтверждения наличия или отсутствия исследуемых факторов в плаценте. Комплексное сравнительное изучение иммунологических механизмов регуляции, роли гуморальных и клеточных факторов в контроле развития плаценты в норме и при патологии позволит конкретизировать отдельные звенья иммунопатогенеза гестоза.
Цель работы. Оценить роль иммунологических механизмов в регуляции формирования плаценты при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
Задачи исследования.
-
Провести сравнительную оценку популяционного состава лимфоцитов периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и при гестозе.
-
Сравнить функцию адгезии мононуклеаров периферической крови беременных женщин к эндотелиальным клеткам при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
-
Изучить интенсивность поглощения липидов сыворотки крови моноцитами периферической крови и эндотелиальными клетками при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
-
Сопоставить особенности продукции иммунологически значимых секреторных вариантов поверхностных молекул, ростовых факторов, хемокинов, цитокинов тканью плаценты на ранних и поздних этапах ее развития при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
-
Охарактеризовать экспрессию и локализацию ангиогенных и антиангиогенных факторов в плаценте на различных этапах ее развития при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
-
Оценить характер экспрессии и локализации апоптогенных и антиапоптогенных факторов, а также определить степень выраженности апоптоза в плаценте на ранних и поздних этапах ее развития при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Беременность, осложненная гестозом, характеризуется нарушением иммунологической регуляции развития плаценты, проявляющимся выраженными изменениями морфологии ткани плаценты и секреции биологически активных молекул клетками плаценты.
-
Сбалансированная продукция ангиогенных и антиангиогенных, антиапоптогенных и проапоптогенных факторов, а также цитокинов клетками плаценты определяет ее нормальное развитие и препятствует проявлению цитотоксических эффектов лимфоцитов матери. При этом антиангиогенные и проапоптогенные факторы на ранних этапах физиологически протекающей беременности ограничивают избыточную пролиферацию клеток плаценты, а в третьем триместре способствуют формированию структуры плаценты. Напротив, при гестозе в третьем триместре беременности происходит повышение продукции IL-6, IL-8, антиангиогенных и проапоптогенных факторов, сопровождающееся повышенной гибелью клеток трофобласта.
-
Физиологическое развитие плаценты сопровождается изменением локализации процессов апоптоза при сохранении их интенсивности, что позволяет плаценте выполнять свои функции и обеспечивать растущие потребности плода вплоть до родоразрешения.
-
В плаценте при гестозе запускаются компенсаторные механизмы защиты против избыточных антиангиогенных, апоптогенных стимулов и цитотоксических эффектов лимфоцитов матери, к которым относится повышение секреции ангиогенина, PDGF, TGF и растворимых форм поверхностных рецепторов sFas, sFasL при одновременном снижении экспрессии Fas, FasL и повышенной экспрессии TRAIL.
-
Некоторые из обнаруженных нами изменений, в частности, увеличение продукции тканью плаценты при гестозе секреторных вариантов поверхностных молекул sVEGF-R1 и sVE-cadherin, являются отражением нарушения функций клеток плаценты. Повышение концентрации sICAM-1 в сыворотке периферической крови беременных с гестозом свидетельствует об активации лейкоцитов периферической крови и нарушении функций эндотелиальных клеток кровеносного русла.
Научная новизна. Впервые проведено комплексное сопоставление иммунологических механизмов, контролирующих физиологическое развитие плаценты и особенностей иммунологической регуляции и иммунопатологических механизмов при гестозе.
Впервые выявлено усиление функции адгезии к эндотелиальным клеткам линии EA.Hy926 у мононуклеаров периферической крови беременных с гестозом по сравнению со здоровыми беременными.
Впервые показана более выраженная способность эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 поглощать липиды из сывороток беременных с гестозом по сравнению с сыворотками здоровых беременных. Также впервые выявлена повышенная способность моноцитов периферической крови беременных с гестозом в сравнении с моноцитами периферической крови здоровых беременных поглощать липиды из аутологичной сыворотки крови.
Установлено, что продукция тканью плаценты секреторных вариантов поверхностных молекул sVEGF-R1, sVE-cadherin, sICAM-1, sFas, sFasL не вносит существенного вклада в их накопление в периферической крови. В то же время, повышение в сыворотке крови беременных женщин уровня sICAM-1 можно расценивать как отражение системной эндотелиальной дисфункции и активации лейкоцитов при гестозе.
Впервые продемонстрировано, что снижение экспрессии проангиогенных и антиангиогенных факторов, секреции IL-6, IL-8, а также увеличение секреции IFN, IL-4, IL-10 в плаценте в динамике от первого к третьему триместру физиологически протекающей беременности не сопровождается изменением интенсивности апоптоза. В отличие от этого при гестозе снижение экспрессии ангиогенных факторов, увеличение секреции IL-6, IL-8 и экспрессии антиангиогенных и проапоптогенных факторов в плаценте сопровождается апоптотической гибелью преимущественно клеток трофобласта и эндотелиальных клеток плодовых сосудов.
Впервые обнаружено, что повышение секреции ангиогенина, PDGF, TGF и растворимых форм поверхностных рецепторов sFas, sFasL, а также снижение экспрессии мембранных рецепторов Fas, FasL и повышение экспрессии рецептора TRAIL отражают реализацию компенсаторных механизмов защиты клеток плаценты при гестозе.
Практическая значимость. Среди общепринятых иммунологических тестов отобраны наиболее информативные, позволяющие уточнить раннюю диагностику гестоза, начиная с первого триместра беременности: определение уровня содержания молекул sICAM-1 в сыворотке крови, оценка функции адгезии мононуклеаров периферической крови к эндотелиальным клеткам, оценка поглощения липидов эндотелиальными клетками и моноцитами.
Разработана модификация метода для оценки интенсивности поглощения липидов эндотелиальными клетками линии EA.Hy926 из сыворотки крови. Метод позволяет изучать механизмы, лежащие в основе нарушений липидного обмена, в том числе при гестозе, оценивать риск развития эндотелиальной дисфункции и тяжесть гестоза. Метод также может быть использован для мониторинга проводимой терапии.
Модифицированный метод оценки интенсивности поглощения липидов моноцитами периферической крови беременных из аутологичной сыворотки крови позволяет оценить функциональную активность моноцитов и их потенциальную способность образовывать пенистые клетки при гестозе. Метод может быть использован для мониторинга проводимой терапии.
Определение уровня содержания молекул sICAM-1 в сыворотке крови может использоваться в качестве прогностического критерия развития гестоза, а также для оценки выраженности эндотелиальной дисфункции при различных заболеваниях.
Личное участие автора заключалось в проведении всех лабораторных исследований, обобщении и анализе полученных результатов, написании статей. Проведение морфологического и иммуногистохимического анализа осуществлялось при консультативной помощи сотрудников лаборатории патоморфологии НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН, анализ содержания липидов в сыворотке крови осуществлялся при консультативной помощи сотрудников лаборатории биохимии НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на VII, VIII, IX, X конференциях «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2004, 2005, 2006, 2007 гг.), конференции «Объединенный иммунологический форум - 2008» (Санкт-Петербург, 2008), 2-м региональном научном форуме «Мать и дитя» (Сочи, 2008г.), конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2007г.), первом региональном научном форуме «Мать и дитя» (Казань, 2007г), конференции II-го междисциплинарного конгресса «Ребенок, врач, лекарство», (Санкт-Петербург, 2007г.), I съезде патологоанатомов Республики Беларусь (Беларусь, г. Минск, 2006г), конференции «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 2006 г.), девятой всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей (Санкт-Петербург, 2007 г.), первом международном конгрессе по репродуктивной медицины (Москва, 2006 г.).
По теме диссертации опубликовано 29 работ, в том числе глава в учебнике для
ВУЗ`ов; журнальных статей 14, из них 12 статей в рекомендованных ВАК РФ журналах; 14 тезисов докладов.
Реализация работы. Диссертация выполнена на базе НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН. Результаты исследований внедрены в практическую и научную деятельность лаборатории иммунологии НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН, научную деятельность отдела иммунологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН. Материалы диссертации использованы в учебнике для ВУЗ`ов «Руководство по нейроиммуноэндокринологии». Основные положения, материалы и выводы диссертации используются в учебном процессе на кафедре патологии медицинского факультета Государственного образовательного учреждения Высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский Государственный Университет».
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 344 страницах и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, выводы, практические рекомендации, список литературы. Текст диссертации иллюстрирован 88 рисунками и 21 таблицей. Список литературы включает 671 источник, из них 75 отечественных и 596 зарубежных.
![Роль гистамина, рецепторов Н1, Н2, Н3/4-типа и оксида азота в регуляции синтеза IgE в норме и при поллинозе [Электронный ресурс]](/i/i/4282/212410.png "Роль гистамина, рецепторов Н1, Н2, Н3/4-типа и оксида азота в регуляции синтеза IgE в норме и при поллинозе [Электронный ресурс] Лесик Дина Владимировна")
