Проявления и механизмы формирования иммуносупрессии на различных этапах репродуктивного процесса в норме и при патологии Хонина Наталья Алексеевна

Введение к работе

Актуальность темы исследования обусловлена ухудшением демографической ситуации, связанной с одной стороны — с нарастанием числа бесплодных браков, а с другой - с увеличением случаев осложненного течения беременности При этом существующие на сегодняшний день современные методы лечения не всегда эффективны В последние годы появились данные, свидетельствующие о том, что все этапы репродуктивного цикла контролируются с участием иммунной системой На это указывают данные об экспрессии рецепторов на иммунокомпетентных клетках (ИКК) к половым гормонам [Henderson Т F et al 2003, Michimata N et al 2002], их влияние на функции ИКК, а также изменение продукции цитокинов в зависимости от фазы овуляторного цикла [Chegini N et al 2002] и накопление ИКК в эндометрии к моменту открытия имплантационного OKHafOzenciG G et al 2001]

Согласно современным представлениям, иммунные нарушения на ранних этапах репродуктивного цикла могут лежать в основе так называемого « бесплодия неясного генеза» [Chong Р J et al 1995], которое связывают с низким иммунным ответом на аллоантигены партнера из-за сходства по отдельным HLA-локусам, недостаточной продукцией блокирующих факторов (БФ) [Дрынов Г И 2004, Szekeres-Bartho et al 2002, Agarwal S et al 2002, Ramhorst R E et al 2005], а также с повышенным содержанием активированных натуральных киллерных (NK) клеток [Quenby S et al 2002, 2006] При этом использование иммунотерапевтических подходов, направленных на индукцию состояния иммуносупрессии, в частности, повышение продукции блокирующих факторов (при аллоиммунизации лимфоцитами партнера) позволяет добиться повышения фертшгьности

Обязательным условием для физиологического течения беременности является индукция толерантности к аллоантигенам плода, что достигается за счет формирования гестационной иммуносупрессии [Thellin О et al 2003], однако, механизмы ее формирования остаются во многом неясными Наибольшее значение придается активной цитокин-опосредованной супрессии, обусловленной смещением цитокинового баланса в сторону продукции Тгі2/иммуносупрессорньіх медиаторов [Jones В М et al 2000, ErlebacherA et al 2001, Maksheed M et al 2002, Raghupathy R et al 2001] В свою очередь, нарушение цитокинового баланса, характерного для физиологической гестации, рассматривается в качестве причин осложнений беременности [Raghupathy R et al ,2001, Power L L et al 2002, Maksheed M et al 2001] Однако полученные за последние годы данные о продукции цитокинов у беременных с осложнениями гестации оказались во многом противоречивыми и неоднозначными Предполагается, что иммунные дисфункции в 1-ой половине гестации провоцируют развитие самопроизвольных выкидышей (УСВ) [Chaouat G et al 2004, Bates M D et al 2002, Zenclussen А С et al 2002] Иммунная дисрегуляция во П-ой половине беременности может служить причиной развития серьезного осложнения - гестоза [Посисеева Л В и др 2004, Rinehart et al 1999, Del GobboV etal 2000], который занимает 2—3 место в структуре материнской

смертности и сопровождается развитием перинатальных осложнений [Токова 3 3 и др 2004] Исследование иммунитета у беременных с гестозом в основном касается цитокинового баланса, при этом полученные результаты весьма противоречивы Так, по данным разных авторов, развитие гестоза может быть сопряжено с доминированием ТЫ-цитокинов [Посисеева Л В и др 2004, Leszczy et al 2000, Freeman D S et al 2004, Bartha J L et al 2001], с повышенным содержанием Th2 медиаторов [Del Gobbo V et al 2000, Matthiesen L et al 2003, Olusi S О et al 2000], а также с отсутствием выраженных изменений [Benyo D F et al 2001, Velzing-Aarts F V et al 2002, Jonsson Y et al 2004]

Наряду с цитокин-опосредованной иммуносупрессией важную роль в подавлении иммунного ответа матери на аллоантигены плода могут играть естественные регуляторные CD4⁺CD25⁺ Т-клетки В литературе широко обсуждается роль CD4⁺CD25⁺ Т-клеток, в том числе и CD4⁺CD25^hlgh, в контексте подавления трансплантационных реакций [Kanm М et al 2004, Fehervari Z et al 2004] Потому представляется актуальным их исследование при угрозе самопроизвольного выкидыша (УСВ) и гестозе Свой вклад в формирование иммуносупрессии могут вносить CD14⁺CD16⁺- моноциты, которые по разным данным способны продуцировать не только TNF-a, но и IL-10 [Beige К -U etal 2002, Skrzeczynska J et al 2002]

Несмотря на большой интерес к проблеме иммунной регуляции на различных этапах репродуктивного процесса, остается много нерешенных вопросов Так, до сих пор не ясно, на каком этапе происходит переключение иммунной системы на иммуносупрессивный тип реагирования и как иммунные дисфункции на ранних этапах репродукции могут быть связаны с развитием бесплодия Учитывая разнородные данные о балансе Thl/Th2 цитокинов при осложненном течении гестации, сложно сделать заключение о цитокин-опосредованных механизмах иммунных дисфункций, ассоциированных с развитием патологии Практически не исследована роль клеточно-опосредованных механизмов развития гестационной иммуносуперссии, в частности функции естественных регуляторных Т-клеток и моноцитов Недостаточное понимание механизмов формирования иммуносупрессии при бесплодии, физиологической и осложненной беременности в свою очередь обусловливают отсутствие патогенетически обоснованных подходов к лечению патологии репродукции, особенно позднего осложнения беременности - гестоза, который остается основной причиной детской и материнской смертности Опасность развития гестоза диктует необходимость поиска новых патогенетически обоснованных подходов к его профилактике и лечению Известно, что формирование УСВ и гестоза происходит на фоне неполноценной лютеиновой фазы, обусловленной недостаточной продукцией прогестерона [Сидельникова В М и др 2002, Ernpson М et al 2002] В этом аспекте представляется оправданным оценить эффективность пролонгированного назначения гестагена - дюфастон беременным с целью профилактики развития гестоза

На основании вышесказанного сформулирована цель работы и задачи исследования

Цель исследования: На основе комплексного анализа параметров иммунитета охарактеризовать механизмы формирования физиологической иммуносупрессии в различные фазы репродуктивного процесса и оценить их значение для развития беременности

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать особенности локального и системного иммунитета у женщин в динамике овуляторного цикла

2. Изучить уровень продукции ТЫЯЪ2 цитокинов и параметры клеточного звена иммунитета (пролиферативную активность Т-клеток, относительное содержание регуляторных сЬ4⁺СЮ25⁺-лимфоцитов и естественных кшшерных клеток) при физиологическом течении первой половины беременности

3. Проанализировать закономерности продукции Thl/Th2 цитокинов, содержания СБ4⁺С025⁺-Т-клеток, CD14⁺CD16⁺-mohouhtob и субпопуляций естественных киллерных клеток во второй половине физиологической беременности

4. Охарактеризовать параметры иммунитета у женщин с бесплодием неясного генеза

5. Оценить продукцию Thl/Th2 цитокинов и параметры клеточного звена иммунитета у беременных с угрозой самопроизвольного выкидыша

6. Охарактеризовать цитокиновый статус, количественное содержание СТ)4⁺-лимфоцитов, CD14⁺CD16⁺-mohouhtob и популяций естественных киллерных клеток у женщин с осложненной гестозом беременностью

7. Провести клинико-иммунологический анализ эффективности лечения бесплодия неясного генеза методом аллоиммунизации лимфоцитами партнера

8. На основании клинико-иммунологической характеристики женщин из группы риска по невынашиванию беременности оценить иммуно-модулирующий эффект аналога прогестерона — дюфастона и эффективность его использования для профилактики гестоза

Научная новизна. На основании проведенных исследований показано, что супрессорная реорганизация иммунной системы формируется уже в период овуляции как на системном, так и на локальном уровнях и обусловлена доминированием активности супрессорных факторов в сыворотке крови и фолликулярной жидкости и увеличением в рециркуляции доли естественных регуляторных CD4⁺CD25⁺-KneTOK Впервые показано, что наступление беременности, диагностируемое по уровню ХГЧ, прямо коррелирует с супрессорной активностью фолликулярной жидкости (ФЖ) Состояние иммуносупрессии, характерное для физиологической беременности, наиболее выражено в I триместре гестации, постепенно снижается к исходу беременности и определяется долевым участием как гуморальных факторов, так и регуляторных клеток Получены новые данные о динамике содержания регуляторных Т-лимфоцитов (CD4⁺CD25⁺ и СБ4⁺СВ25^Ыг11) и естественных цитотоксических клеток (CD56⁺CD16\ CD56⁺CD16⁺, CD56⁺CD3⁺NK) в различные триместры физиологической гестации Впервые показано, что при физиологической беременности в

периферической крови регистрируется снижение содержания TNFot/p⁺-моноцитов и возрастает доля CD14⁺ клеток с внутриклеточной продукцией IL-10

Дефект супрессорной реорганизации иммунной системы у женщин с первичной и вторичной формами бесплодия неясного генеза может проявляться как изолированными нарушениями (снижением продукции блокирующих факторов, повышением числа CD56⁺CD16⁺NK-KneTOK), так и их сочетанным вариантом Продемонстрировано, что снижение иммуносупрессии у беременных с УСВ ассоциировано с одновременным смещением цитокинового баланса в сторону повышения Thl-медиаторов и уменьшением содержания CD4⁺CD25⁺Т-клеток, включая CD4⁺CD25^bgh

У беременных с тяжелым гестозом в периферической циркуляции регистрируется повышение продукции как ТЫ-, так и Тп2-цитокинов При этом оценка супрессорной активности сыворотки и соотношения отдельных ТЬЛ/ТЬ2-цитокинов указывают на снижение содержания ф актор ов/цито-кинов с супрессорной активностью при развитии гестоза Впервые показано, что в повышении продукции цитокинов при гестозе участвуют CD14⁺-моноциты с внутриклеточной продукцией TNFa/p и CD14⁺CD16⁺IL-10⁺ моноциты

Выявлены новые данные о снижении у беременных с гестозом в циркуляции естественных регуляторных CD4 СБ25⁺-клеток, включая CD4⁺CD25^bgh На основе анализа уровня пролиферативного ответа и апоптоза Т-клеток в анти-СВЗ-стимулированных культурах МНК охарактеризовано состояние функциональной активности Т-клеток при различных вариантах течения беременности Показано, что повышение при гестозе продукции ТЬ2-цитокинов и содержания CD14⁺CD16⁺-mohouhtob с внутриклеточной продукцией IL-10⁺ отражает включение механизмов feedback регуляции в ответ на усиление продукции провоспалительных цитокинов, а глубокое угнетении продукции IL-ІОу беременных с ПЭ означает ее срыв

Установлено, что устранение дефекта иммуносупрессии, которое при бесплодии неясного генеза сопровождается повышением уровня блокирующих факторов в сыворотке крови и снижением содержания активированных CD56⁺CD16⁺ NK-клеток, ассоциировано с наступлением беременности Пролонгированный прием дюфастона в 1-ой половине гестации приводит к коррекции цитокинового баланса у женщин с риском развития гестоза и позволяет снизить частоту развития осложнений во И-ой половине беременности, что свидетельствует о патогенетической роли иммунных дисфункций в развитии гестоза

Теоретическая и практическая значимость. В результате выполнения работы получены новые данные о механизмах формирования и значимости иммуносупрессии для физиологического течения репродуктивного процесса Показано, что наряду с цитокинами важную роль в супрессорной реаранжіфовке иммунной системы играют регуляторные клетки, при этом их долевое участие на различных этапах варьирует Дефект иммуносупрессорной реорганизации может возникать на всех этапах

репродуктивного цикла, являясь причиной развития различных патологий — бесплодия, самопроизвольных выкидышей и гестоза Данные об обратной корреляционной зависимости между супрессорной активностью сыворотки крови и содержанием СБ4⁺СВ25⁺/СЮ4⁺С025^Ы8Ь Т-клеток со степенью тяжести гестоза подтверждают важность нарушения механизмов гестационной иммуносупрессии в развитии поздних гестационных осложнений

В процессе проведения работы выявлены новые иммунологические маркеры, которые могут служить дополнительным критерием при оценке степени тяжести гестоза Непосредственное клиническое значение имеют данные об эффективности иммунокоррекции с использованием метода аллоиммунизации лимфоцитами партнера у женщин с бесплодием неясного генеза, а также характеристика иммуномодулирующего эффекта гестагена дюфастон, что позволило разработать принципиально новый подход к профилактике гестоза в группах высокого риска, имеющий важное значение для предотвращения репродуктивных потерь

Основные положения, выносимые на защиту

9. Овуляторный период и физиологическое течение беременности ассоциировано с супрессорной реорганизацией иммунной системы, которая форміфуется к моменту овуляции яйцеклетки, максимально выражена в I триместре и снижается к исходу гестации

10. Формирование иммуносупрессии обусловлено действием гуморальных факторов, в том числе ігі2-цитокинов, и регуляторных клеток, включая CD4⁺CD25⁺T-KueTKH и 1Ь-10⁺моноциты При этом долевое участие и выраженность клеточных и гуморальных механизмов иммуносупрессии меняется в течении репродуктивного процесса

11. Дефект иммунносупрессорной реорганизации ассоциирован с развитием дисфункций в репродуктивной сфере и проявляется снижением продукции блокирующих факторов и повышением доли активированных NK-клеток при бесплодии, уменьшением супрессорной активности сыворотки крови, повышением соотношения ТЫ/Тп2-цитокинов и уменьшением количества CD4⁺CD25⁺/ CD4⁺CD25^hgh регуляторных Т-клеток при угрозе выкидыша, снижением супрессорной активности сыворотки крови на фоне существенного усиления продукции ТЬ1/Тгі2-цитокинов и уменьшением содержания СБ4⁺С1)25⁺/СВ4⁺СВ25^Ы811 Т-клеток при гестозе

12. Коррекция дефекта иммуносупрессии при патологии репродуктивной функции позволяет добиться положительного клинического эффекта В частности, восстановление продукции блокирующих факторов на фоне аллоиммунизации лимфоцитами партнера приводит к повышению фертильности, а коррекция цитокинового баланса на фоне пролонгированного приема гестагена (дюфастон) - снижению частоты развития гестоза

Объем и структура диссертации

Похожие диссертации на Проявления и механизмы формирования иммуносупрессии на различных этапах репродуктивного процесса в норме и при патологии

Микробная протеаза стрептолиаза и ее иммобилизованная форма как иммуномодуляторы в норме и патологииРагулина, Вера Алексеевна

Модифицированные эритроциты как иммуномодуляторы в норме и патологииСипливая, Любовь Евгеньевна

Белки семейства макроглобулинов как компонент врожденного иммунитета и универсальные регуляторы межклеточных взаимодействий в норме и при патологииЗорина Вероника Николаевна

Изучение некоторых свойств антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий и их роли в норме и при патологииТельнюк Яна Ивановна

Оценка бактерицидной активности биологических жидкостей в норме и при патологии с помощью лазерной проточной цитометрииБудихина Анна Сергеевна

Особенности ИЛ-8-продуцирующей способности нейтрофильных гранулоцитов в норме и при патологииБыковская Екатерина Юрьевна

Комплексы альфа-2-макроглобулина с иммуноглобулином G и другими белками крови человека в норме и при патологииЗорина Вероника Николаевна

Иммуноглобулиновые профили биологических жидкостей организма в норме и при патологииГалкина Ольга Владимировна

Близкодействующая регуляция пролиферации ранних гемопоэтических предшественников в норме и при аутоиммунной патологии (экспериментальные исследования)Матросова, Вера Юрьевна

Иммуномодулирующее действие магнито-лазерного облучения в норме и при некоторых видах экспериментальной патологииГоряинов, Игорь Иванович