Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 17
1.1 .Иммуноглобулины биологических жидкостей организма 17
1.1.1. Функциональные особенности иммуноглобулинов класса А (IgA) 17
1.1.2. Функциональные особенности иммуноглобулинов классов G (IgG) и M(IgM) 19
1.1.3. Функционоальные особенности иммуноглобулинов класса Е (IgE) 20
1.2. В -лимфоциты слизистых оболочек 21
1.3. Типы биологических жидкостей организма 22
1.4.Современное представление о местном иммунитете 22
1.5. Внешние и внутренние барьеры 23
1.5.1. Строением функции гистогематических барьеров 24
1.5.2. Строение и функции эпителиальных барьеров
1.6. Местная иммунная система ЦНС 26
1.7. Мукозная иммунная система 28
1.7.1. Строение ассоциированной со слизистыми лимфоидной ткани 28
1.7.2.Взаимодействие между различными представительствами ассоциированной со слизистыми лимфоидной ткани 31
1.7.3. Изменение функционирования мукозной иммунной системы при воспалении 32
1.7.4. Цитокиновая регуляция функционирования мукозной иммунной системы 34
1.7.5. Ассоциированная со слизистой носа лимфоидная ткань (NALT) 35
1.7.6. Ассоциированная со слизистой трахей и бронхов лимфоидная ткань (BALT) 36
1.7.7 Местная иммунная система женского репродуктивного тракта 37
1.7.8. Местная иммунная система мужского мочеполового тракта 39
1.8. Современные принципы оценки состояния местного иммунитета 40
1.9. Современные лекарственные препараты, обладающие иммунокорригирующим действием 41
Глава 2. Материалы и методы исследования 44
2.1 Общая характеристика обследованных здоровых и больных лиц 44
2.2. Получение исследованного материала 45
2.2.1. Получение сыворотки крови 46
2.2.2. Получение назального смыва 46
2.2.3. Получение смыва из гайморовых пазух 46
2.2.4.Получение назофарингеального секрета 47
2.2.5.Получение бронхоальвеолярной жидкости 47
2.2.6.Получение цереброспинальной жидкости 47
2.2.7. Получение вагинального секрета 48
2.2.8. Получение эякулята 48
2.2.9. Получение секрета предстательной железы 48
2.2.10. Обработка и хранение материала 48
2.3. Методы исследования 49
2.3.1. Определение иммуноглобулинов класса А, М, G, Е 49
2.3.2. Определение секреторного иммуноглобулина А 49
2.3.3. Определение цитокинов в биологических жидкостях 49
2.3.4. Определение альбумина 49
2.3.5. Определение показателей местного синтеза иммуноглобулинов и проницаемости гистогематических барьеров 50
2.3.6. Проведение иммунокорригирующей терапии 50
2.3.7. Статистическая обработка данных 52
Глава 3. Иммунологический анализ секретов верхних дыхательных путей .. 53
3.1. Содержание иммуноглобулинов и альбумина в секретах верхних дыхательных путей здоровых лиц 53
3.1.1. Содержание иммуноглобулинов и альбумина в назальных смывах здоровых лиц
3.1.2. Содержание иммуноглобулинов и альбумина в смывах из гайморовых пазух пациентов контрольной группы 54
3.2. Концентрация иммуноглобулинов и альбумина в секретах верхних дыхательных путей при патологии 55
3.2.1. Изменение содержания иммуноглобулинов основных классов и подклассов иммуноглобулина G в назальных смывах при синуситах различной локализации (фронтиты, этмоидиты) 56
3.2.2. Изменение содержания иммуноглобулинов основных классов и подклассов иммуноглобулина G в смывах из пазух при синуситах различной локализации (гаймориты, фронтиты) 58
3.3. Влияние местной цитокиновой иммунотерапии на иммуноглобулиновый состав назальных смывов и смывов из пазух пациентов с гнойными синуситами 60
3.3.1. Влияние местной монотерапии ронколейкином на концентрацию иммуноглобулинов в назальных смывах и смывах из пазух обследованной группы пациентов 61
3.3.2. Влияние местной монотерапии ронколейкином на концентрацию иммуноглобулинов в смывах из гайморовых пазух 61
3.3.3. Влияние местной иммунотерапии ронколейкином на концентрацию иммуноглобулинов в смывах из гайморовых пазух 63
3.3.4.Динамика концентрации IL-8 в назальных смывах и смывах из пазух при местной монотерапии ронколейкином 65
3.4. Обсуждение результатов 66
3.5. Изучение состава назофарингеального секрета 68
3.5.1. Содержание иммуноглобулинов и альбумина в назофарингеальном секрете здоровых лиц 69
3.5.2. Изменение содержания иммуноглобулинов основных классов и подклассов иммуноглобулина G в назофарингеальном секрете при атопическом дерматите 70
3.6. Влияние цитокиновой терапии на иммуноглобулиновый состав назофарингеального секрета 72
3.6.1. Изменение концентрации иммуноглобулинов в назофарингеальном секрете пациентов с атопическим дерматитом при иммунокорригирующей терапии циклофероном 72
3.7.Обсуждение результатов 76
Глава 4. Иммунологический анализ вагинального секрета 79
4.1. Содержание иммуноглобулинов и альбумина в вагинальном секрете здоровых лиц 79
4.2. Изменение содержания иммуноглобулинов основных классов и подклассов иммуноглобулина G в вагинальном секрете при кандидозном и неспецифическом вагинитах и вагинозах 81
4.2.1. Изменение иммуноглобулинового состава вагинального секрета при бактериальном вагинозе 81
4.2.2. Изменение иммуноглобулинового состава вагинального секрета при кандидозном вагините 82
4.2.3. Изменение иммуноглобулинового состава вагинального секрета при урогенитальном микоуреаплазмозе 83
4.2.4. Изменение иммуноглобулинового состава вагинального секрета при 84
неспецифическом бактериальном вагините 84
4.3. Влияние местной иммунотерапии циклоферн- линиментом на иммуноглобулиновый состав вагинального секрета
4.3.1. Определение дополнительных лабораторных показаний к 85
назначению терапии линиментом циклоферона 91
4.4. Обсуждение результатов 92
Глава 5. Иммунологический анализ бронхоальвеолярной жидкости 101
5.1. Содержание иммуноглобулинов и альбумина в бронхоальвеолярной жидкости здоровых лиц 101
5.2. Изменение иммунологических показателей бронхоальвеолярной жидкости при патологии 102
5.2.1. Изменение иммунологических показателей бронхоальвеолярной жидкости при фиброзно-кавернозном туберкулезе легких и атопическойбронхиальной астме 102
5.2.2. Концентрация IL-8 в бронхоальвеолярной жидкости в норме и при патологии 105
5.2.3. Изменение иммуноглобулинового состава бронхоальвеолярной жидкости пациентов с атопической бронхиальной астмой при терапииронколейкином 106
5.3. Обсуждение результатов 107
Глава 6. Иммунологический анализ цереброспинальной жидкости 113
6.1. Содержание иммуноглобулинов и альбумина в цереброспинальной жидкости здоровых лиц 113
6.2. Изменение концентрации иммуноглобулинов основных классов и подклассов G в ЦСЖ при патологии 115
6.2.1. Концентрация иммуноглобулинов в ЦСЖ пациентов с рассеянным склерозом 115
6.2.2. Концентрация иммуноглобулинов в ЦСЖ пациентов с глиальными опухолями головного мозга 116
6.2.3. Концентрация иммуноглобулинов в ЦСЖ пациентов с нейроваскулитами 118
6.3. Обсуждение результатов 118
Глава 7. Иммунологический анализ секретов мужского мочеполового тракта 123
7.1. Содержание иммуноглобулинов и альбумина в эякуляте здоровых лиц 123
7.2. Изменение концентрации иммуноглобулинов основных классов и подклассов G в эякуляте при хроническом простатите 124
7.3. Концентрация IL-8 в эякуляте и секрете предстательной железы пациентов с хроническим простатиом 126
7.4. Обсуждение результатов 127
Глава 8. Заключение 130
Выводы 148
Практические рекомендации 150
Список литературы
- Функционоальные особенности иммуноглобулинов класса Е (IgE)
- Получение сыворотки крови
- Изменение содержания иммуноглобулинов основных классов и подклассов иммуноглобулина G в смывах из пазух при синуситах различной локализации (гаймориты, фронтиты)
- Изменение иммуноглобулинового состава вагинального секрета при кандидозном вагините
Введение к работе
Исследование уровня иммуноглобулинов в различных биологических жидкостях проводится многими исследователями в течение ряда лет. Однако до настоящего времени существует расхождение в полученных данных в различных лабораториях. Эти различия могут быть обусловлены отсутствием стандартных методов получения биологических жидкостей (БЖ) для исследования и тем, что для иммунологического анализа биологических жидкостей в различных лабораториях используют различные по чувствительности и специфичности методы исследования. В отечественных и зарубежных работах приводятся данные, полученные методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, турбидиметрическим или иммуноферментным методом [Bohler К. et al., 1994]. При ряде местных воспалительных процессов, на начальных этапах, не оказывающих выраженного действия на весь организм, динамика уровней сывороточных иммуноглобулинов не имеет диагностической и прогностической ценности. Согласно современным литературным данным, наибольшие изменения патологический очаг вызывает именно в месте своей локализации [Brandtzaeg Р. 1997]. Следовательно, биологические жидкости, участвующие в жизнедеятельности соответствующих органов, тканей и систем органов, в наибольшей степени будут отражать активность местного патологического процесса, а иммунологический анализ соответствующей биологической жидкости позволит оценіггь состояние местного иммунитета [Тоголян А.А.,1999]. Хотя в последние годы появляется все больше работ, посвященных данной теме, периферическая кровь до настоящего времени остается основной биологической жидкостью для иммунологического исследования, иммуногло-булиновый состав ряда экстраваскулярных секретов остается мало изученным, нет единого мнения о месте синтеза иммуноглобулинов, выявляемых в различных биологических жидкостях.
В последние годы во всем мире в терапии различных заболеваний широко применяются препараты, обладающие иммуностимулирующим действием [Ершов Ф.И., 1998]. Вместе с тем, в современной литературе практически отсутствуют данные о лабораторных иммунологических показаниях для решения вопроса о выборе конкретного иммунокорригирующего препарата и для контроля эффективности проводимой терапии.
Таким образом, поиск новых подходов к терапии острых и хронических воспалительных заболеваний различной локализации, на основании изучения иммуноглобулиновых профилей биологических жидкостей, является актуальной проблемой.
Цепь исследования состояла в изучении иммуноглобулинового профиля различных биологических жидкостей человека в норме и при патологии с целью оценки информативности показателей местного синтеза иммуноглобули-
еюв для диагностики, назначения иммунокорригирующей терапии и контроля ее эффективности.
Задачи исследования:
-
Определить границы нормальных значений иммуноглобулинов, показателей местного синтеза и проницаемости соответствующих гнстогематических барьеров для таких биологических жидкостей, как цереброспинальная жидкость (ЦСЖ), назальный смыв, назофарингеальный секрет, бронхоальвеоляр-ная жидкость (БАЖ), эякулят, вагинальный секрет;
-
Изучить влияние характера и типа воспаления на состояние гисто-гематических барьеров (ГТБ) и на местный синтез иммуноглобулинов различных классов и подклассов на примере острых и хронических заболеваний инфекционной и аллергической природы;
-
Изучить возможность использования интегральных показателей местного синтеза иммуноглобулинов (относительный коэффициент секреции -ОКС) и проницаемости ГТБ (Q) для назначения местной иммунокорригирующей терапии;
4. Определить динамику иммуноглобулинового профиля различных био
логических жидкостей при проведении местной и системной иммунокорриги
рующей терапии.
Научная новизна и теоретическое значение исследования
Проведен полный анализ иммуноглобулинового состава назальных смывов, смывов из гайморовых пазух, назофарингеального секрета, ЦСЖ, бронхо-альвеолярной жидкости, вагинального секрета, эякулята практически здоровых людей.
Определены границы нормальных значений иммуноглобулинов классов IgA, IgM, IgG, IgE, подклассов IgG и slgA с использованием адекватного современного лабораторного метода исследования - иммуноферментного твердофазного анализа.
Определен характер происхождения иммуноглобулинов в назальных смывах, назофарингеальных смывах, БАЖ, вагинальном секрете, эякуляте на основании анализа интегральных показателей (OKC,Q).
Определена зависимость иммуноглобулинового состава вагинального секрета, степени и характера местного синтеза иммуноглобулинов, а также функционального состояния вагинального ГТБ от циклических гормональных изменений в процессе физиологического менструального цикла.
Впервые выявлен местный синтез IgE в нижних отделах женского репродуктивного тракта при кавдидозном вагините и микоуреаплазмозе.
Впервые изучено влияние местной терапии линиментом циклоферона на показатели местного иммунитета нижних отделов женского репродуктивного тратта пациентов с инфекционно-воспалительными заболеваниями и дисбио-зами женской половой сферы. Определены показания для назначения терапии
цнклофероном. Выявлены критерии эффективности нммунокоррнпірующей терапии линиментом циклоферона.
Впервые изучено влияние местной терапии рекомбинантным IL-2 на показатели местного иммунитета носа и околоносовых пазух пациентов с гнойными синуситами.
Впервые изучено влияние системной терапии рекомбинантным IL-2 на показатели местного иммунитета бронхов и легких пациентов с атопической БА.
Практическое значение исследования
Показана высокая информативность и целесообразность использования иммуноглобулинового анализа биологической жидкости из патологаческого очага с применением интегральных показателей для оценки состояния местного иммунитета, выявления характера и механизма нарушений защитно-регуляторных функций соответствующего ГГБ.
Определены границы нормальных значений иммуноглобулинов в ЦСЖ, назальных смывах, назофарингеалышх смывах, БАЖ, вагинальном секрете, эякуляте с помощью иммуноферментного метода.
Показана диагностическая значимость изучения иммуноглобулинового состава биологических жидкостей, определения степени нарушения проницаемости соответствующих ГГБ для оценки состояния и степени нарушения функционирования местного иммунитета при гнойных синуситах, атопиче-ском дерматите, атопической БА, фиброзно-кавернозном туберкулезе легких, простатите, вагинальных инфекциях.
Показана большая диагностическая значимость изучения иммуноглобулинового состава смывов из гайморовых пазух по сравнению с назальными смывами при гнойных синуситах.
Определены иммунологические показатели вагинального секрета, являющиеся показаниями для назначения местной терапии линиментом циклоферона при гинекологической патологии.
Изучен характер изменения иммуноглобулинового состава вагинального секрета при различных репродуктивно значимых вагинальных инфекциях и дисбиозах.
Показана диагностическая значимость использования анализа иммуноглобулинового состава вагинального секрета и функционального состояния вагинального ГГБ для оценки характера и степени нарушений местного иммунитета при инфекционной патологии нижнего отдела женской репродуктивной сферы.
Основные положения диссертации, выносимые па защиту
1. Определение иммуноглобулинового состава разлігчньгх БЖ, функционального состояния соответствующих ГГБ с использованием анализа интегральных показателей (ОКС, Q(Ig), Q(Alb)) является информативным методом оценки состояния местного иммунитета, позволяющим дифференцировать ха-
рактер и механизм иммунопатогенетических нарушений защитно-регулятор-ной функции гисто-гематических барьеров.
-
Вычисление интегральных показателей - коэффициентов проницаемо-сти и секреции ((QAlb), Q(Ig), ОКС) и их графическая интерпретация являются высоко информативным методом оценки состояния местного иммунитета, позволяющим производить анализ функционального состояния различных ГГБ, выявлять характер происхождения иммуноглобулинов в БЖ.
-
Иммуноглобулиновые профили БЖ при воспалении зависят от характера течения воспаления (острое и хроническое), от природы воспаления (инфекционное или аллергическое), вида патогена.
-
Динамика иммуноглобулинов в БЖ отражает состояние местного иммунитета и функциональное состояние соответствующего ГГБ, а мониторинг иммунологических показателей БЖ является необходимым условием назначения и контроля эффективности местной иммунокорригирующей терапии.
Апробация исследования и внедрение результатов в практику
Результаты исследований доложены на следующих научно-практических конференциях и симпозиумах: II -V международных научных конференциях "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, май, 1998, 1999, 2000, 2001 г.); Fourth John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology (Пущино, сентябрь 1998); 4th World Congress on Trauma, Shock, Inflammation and Sepsis, Munich (Germany), (март 1998 г.); заседание Санкт-Петербургского научного общества иммунологов, (Санкт-Петербург, апрель 1999г); VII Конгресс акушеров и гинекологов стран Балтийского моря (Санкт-Петербург, май, 1999 год), 5th World Congress on Trauma, Shock, Inflammation and Sepsis, (Munich (Germany), февраль-март 2000 г.); II Российский форум "Мать и Дитя" (Москва, сентябрь, 2000 год), World Congress of Lung Health and 10th ERS Annual Congress (Florence, Italy. August 30-September 3, 2000); Научно-практическая конференция «Инфекционно-воспалительные заболевания мочеполовой системы», (Новосибирск, 1-3 марта 2000г.); 14-th European Immunology Meeting EFTS 2000, (23-27 September, Poznan, Poland); European Congress of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (Euromedlab) (Prague, 2001).
Результаты исследований внедрены в практическую работу лаборатории клинической иммунологии, отделений гинекологии, дерматовенерологии, ЛОР-болезней н госпитальной терапии клиник СПбГМУ им. акад. И..П. Павлова.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 29 печатных работ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 170 страницах, содержит 25 рисунков, 18 таблиц. Библиография содержит 183 источника, в том числе 50 отечественных и 133 зарубежных.
Функционоальные особенности иммуноглобулинов класса Е (IgE)
Функциональные особенности иммуноглобулинов классов G (IgG ) и М (IgM) IgA является основным, но не единственным иммуноглобулином, определяемым в секреторных жидкостях. В различных мукозных секретах человека обнаружены иммуноглобулины других классов. Наиболее важная роль (после slgA) отводится IgG, который может быть как локального, так и системного происхождения. [55, 109, 134]. В большинстве случаях концентрация IgG в мукозных секретах во много раз превосходит концентрацию IgM. При врожденном дефиците IgA в секретах выявляется повышенная концентрация IgM и IgG [140, 169]. ]. IgM, определяемый в секреторных жидкостях, также связан с sc, эта связь образуется в результате транспорта IgM в секреты с помощью plgR [64, 73]. Однако, концентрация slgM значительно ниже, чем slgA. Это связано с низким содержанием IgM продуцирующих клеток в слизистых тканях.[ 132, 140]. Соотношение IgG и IgA в экстраваскулярных секретах зависит не только от локализации в мукозной иммунной системе, но и от способа сбора материала [135]. К настоящему времени не выявлен специфический механизм для транспорта IgG на поверхность слизистых оболочек. Иммуноглобулин IgG из периферической крови поступает на поверхность слизистых путем пассивной транссудации интерстициальной жидкости через покровный и железистый эпителий, и оказывает там противовирусную и антибактериальную защиту [91, 138]. Часть IgG антител продуцируется местно плазматическими клетками, расположенными в подслизистом слое. В слизистой респираторного и урогенитального тракта которые, в основном, более проницаемы и менее богаты протеазами, чем слизистая кишечника, в норме содержится значительное количество IgG, который вносит весомый вклад в противоинфекционную защиту слизистых оболочек [55, 105]. В некоторых экстраваскулярных секретах (в вагинальных смывах, эякуляте) IgG основной тип иммуноглобулинов [97, 133]. В слизистой носа у человека синтезируемые местно IgG обнаруживаются после интраназальной вакцинации [106].
Иммуноглобулин Е (IgE) определяемый в секретах слизистых тканей, часто связан с аллергическим ответом слизистых, этот класс иммуноглобулинов может иметь как системное (транссудативное), так и местное происхождение. Доказано, что при увеличении проницаемости мукозных барьеров в результате аллергических реакций, увеличивается концентрация IgE в секретах слизистых [133]. Главная особенность этого класса иммуноглобулинов - способность фиксироваться на поверхности тучных клеток с помощью Fc-фрагмента. Это активирует биохимические процессы в клетке и приводит к секреции биологически активных веществ, вызывающих усиление микроциркуляции в очаге инфекции. Такие изменения способствуют притоку в очаг воспаления клеточных элементов, оказывающих цитотоксическое действие. Таким образом, воспалительная аллергическая реакция, вызванная антителами IgE типа, направлена на повреждение и элиминацию инфекционного агента [45].
Продукция иммуноглобулинов является одной из наиболее важных функций В-лимфоцитов. Основным продуцентом антител являются плазматические клетки, в которые дифференцируются В-лимфоциты в периферических органах иммунной системы и лимфоидной ткани. Эти клетки являются короткоживущими и на своей поверхности не несут мембранной формы иммуноглобулинов. Секретирующие антитела плазматические клетки мигрируют в мозговой слой лимфоузлов, в красную пульпу селезенки, в костный мозг и lamina propria слизистых оболочек. Согласно одной из существующих гипотез большинство плазматических клеток слизистой, секретирующих IgA происходят из В-1 клеток. В-1 лимфоциты широко представленны в плевральной и перитонеальной полости, в селезенке содержатся в небольшом количестве, а в лимфоузлах практически отсутствуют [2]. В-1 лимфоциты - субпопуляция В-лимфоцитов, отделяющихся в отдельный самоподдерживающийся росток в периоде эмбрионального развития, несут отличительный мембранный маркер-СБ5 (Т-клеточный маркер), но являются CD23" [12]. В отличие от В-1 лимфоцитов В-2 несут поверхностный маркер CD5", CD23+. В-1 лимфоциты являются важным источником плазматических клеток, продуцирующих IgA, IgM. В крови они составляют около 20% от общего числа В-клеток [4, 44]. Эта популяция лимфоцитов заселяет Пейеровы бляшки подвздошной кишки, которые, вероятно, обладают свойствами первичных лимфоидных органов. Вероятно, лимфоидные клетки (скорее всего, костномозгового происхождения), поступают в Пейеровы бляшки или другие участки лимфоидной ткани желудочно-кишечного тракта через высокие эндотелиальные венулы. В конце концов, эта клеточная популяция заселяет мукозные лимфоидные ткани организма при помощи мукозных хомминг-рецепторов. В этих тканях происходит окончательная дифференциация в IgA - продуцирующие плазматические клетки [115
Получение сыворотки крови
Цитокины принимают активное участие в функционировании местной иммунной системы в норме и при патологии. Они запускают этапы пролиферации и дифференцировки активированных В-лимфоцитов в плазматические (антителопродуцирующие) клетки. Эти цитокины продуцируются клетками, находящимися в мукозном окружении. В созревании В-лимфоцитов в плазматические клетки принимают участие IL-ip, IL-6, IL-10. [89, 146, 152]. Основной аутокринный ростовой фактор Т-лимфоцитов - IL-2 воздействует на предварительно активированные В-лимфоциты как один из ростовых факторов. Этот цитокин участвует в регуляции синтеза иммуноглобулинов классов А, М, G . Совместно с IFN-y, IL-2 регулирует у В-лимфоцитов экспрессию генов, регулирующих синтез \х и у2 цепей иммуноглобулинов. Показано, что IL-2 вызывает значительно больший эффект в стимуляции бластных В-клеток ПБ и не влияет на В-лимфоциты селезенки [16, 86]. Экспрессия sc и связывание с plgA регулируется такими цитокинами, как IFN-y,TNF-cc ,IL-4 [92, 112, 131]. IFN-y является важным провоспалительным цитокином, продуцируемым активированными Т-лимфоцитами и ЕК. Одной из важнейших функций IFN-y является активация эффекторных функций макрофагов: их микробицидности и цитотоксичности, продукции ими цитокинов, супероксидных и нитроактивных радикалов, простагландинов [53, 92]. Кроме того, IFN-y уменьшает восприимчивость эпителиальных клеток к патогенам, индуцирует инфицированные эпителиальные клетки к продукции N0 [83, 159]. При контакте организма с вирусной инфекцией именно продукция интерферона является наиболее быстрой ответной реакцией на патоген. IFN-y индуцирует переключение В-клеток на синтез IgG2a, а на макрофагах усиливает экспрессию FcyRI/III. Одновременно он является антагонистом переключения на синтез IgGl или IgE и экспрессии FcsRII. Таким образом, IFN-y способствует усилению антителозависимой клеточной цитотоксичности, секреции провоспалительных цитокинов [45]. TGF-P вместе с IL-5 и IL-4 увеличивает пул IgA+ клеток на 15-20%. TGF-P в иммунной системе слизистых in vivo способствует переключению синтеза В-клеток на изотип slgA и практически не влияет на регуляцию синтеза данного иммуноглобулина в системных лимфоидных органах [78, 122]. При воспалительных процессах на слизистых в секретах определяется повышенный уровень хемокинов. Увеличение секреции хемокинов во время воспаления - результат селективного поступления лейкоцитов в воспаленную ткань. Во время заболевания хемокины определяются во многих тканях, включая мозг, кровеносные сосуды, почки, кожные покровы, легкие, желудочно-кишечный тракт. Главный стимул для продукции хемокинов - это ранние провоспалительные цитокины (IL-1, TNF-a), бактериальные продукты (ЛПС), вирусная инфекция. В БАЖ высокий уровень IL-8 обнаружен при острых воспалениях в легких, например, при респираторном дистресс-синдроме, при бактериальной пневмонии [42, 122]. Кроме того, ряд хемокинов, воздействующих на эозинофилы, после антигенной стимуляции определяются в больших количествах в эпителии у пациентов с атопическим дерматитом, аллергическим ринитом, астмой. Это позволяет высказать предположение о том, что эти хемокины являются молекулярным связующим звеном между антиген-специфической иммунной активацией и миграцией эозинофилов в ткани [122, 143, 166].
Слизистая носа и параназальных синусов содержит инфильтраты Thl,Th2, и плазматические клетки, способные синтезировать IgA, IgM, подклассы IgG [134]. Слизистая верхних отделов респираторного и генитального тракта содержат схожие пропорции IgA и IgG продуцирующих клеток. Значительная часть IgG, определяемого в назальном секрете, поступает из сыворотки крови. Однако, после интраназальной вакцинации в назальном секрете возрастает количество IgG синтезируемого местно. Кроме того, показано, что слизистая тонзиллярная ткань здоровых людей способна синтезировать IgGl [59, 63]. Инфекция, развивающаяся на слизистых, лучше коррелирует с активностью мукозных антител, чем сывороточных [67, 141]. В ранних работах, посвященных иммуноглобулинам в биологических жидкостях, авторы приводили данные, свидетельствующие об отсутствии местного синтеза IgE в слизистой и под слизистой ткани носа [134]. В более поздних работах доказывается возможность местного синтеза данного иммуноглобулина. Так, например, с помощью иммуногистохимии и проточной цитометрии было показано, что у пациентов с аллергическим ринитом при обострении заболевания происходит уменьшение CD23+ в слизистой носа. Это вызвано тем, что зрелые нативные CD23+ клетки переключаются в В-клетки памяти с потерей экспрессии CD23. Авторы считают, что это указывает на дифференциацию В- лимфоцитов к клеткам, которые могут быть локальным источником IgE [56]. Другие авторы показали, что в слизистой носа пациентов с сенной лихорадкой существуют В-клетки экспрессирующие IgE. У пациентов с пыльцевой аллергией в назальном секрете 97% IgG и IgA, 74% IgE синтезируются местно. В слизистой носа изменение количества IgE продуцирующих клеток не зависит от их количества в сыворотке крови. Существование местного синтеза IgE может объяснить развитие ринита у части «атопиков» и отсутствие его у других [84, 88, 102, 141].
Изменение содержания иммуноглобулинов основных классов и подклассов иммуноглобулина G в смывах из пазух при синуситах различной локализации (гаймориты, фронтиты)
Концентрация альбумина в смывах из гайморовых пазух пациентов с острым течением синусита через 24 часа после введения РЛ практически не менялась, к концу проводимой терапии (на 5-7 день) она снижалась в среднем в 10 раз ( по сравнению с исходным уровнем), но достоверно превышала значения в контрольной группе (р 0,05). В смывах из гайморовых пазух пациентов из первой группы после введения РЛ отмечалось постепенное снижение концентрации исследуемых иммуноглобулинов (рис. 3.5 и 3.6 в приложении). К окончанию иммунотерапии средние значения исследуемых иммуноглобулинов были достоверно ниже исходных, но превышали показатели в контрольной группе. Так, концентрация IgA через сутки после введения препарата составила 117,4± 44,3мг/л (исходная концентрация 199,5±56,7мг/л), а через 7 дней после введения -125,5±40,2мг/л. Средние значения концентрации IgM к окончанию проводимой терапии достоверно снизились с 52,5±9,8 мг/л до 19,4±5,1 мг/л (р 0,01). Уровень IgE к моменту окончания терапии в среднем снизился в 10 раз, но оставался достоверно выше значений в контрольной группе (р 0,05). Содержание slgA уменьшалось на протяжении всего времени проведения иммунотерапии, но в отличие от остальных исследуемых показателей к концу терапии его концентрация практически не отличалась от значений в контрольной группе. Вероятно, через 5 дней после начала иммунотерапии происходила нормализация синтеза данного иммуноглобулина. Концентрация IgGl на 5 день после введения РЛ в среднем снизилась в 2 раза, но она почти в 10 раз была выше, чем в контрольной группе (р 0,05). Одновременно с этим к моменту окончания терапии уровень IgG2 в 15-18 раз (р 0,05), a IgG4 в среднем в 2 раза превышал показатели в контрольной группе. Концентрация IgG3 в этой группе практически не отличалась от значений в контроле. Динамика исследованных показателей представлена графически на рис. 3.5, 3.6 в приложении.
При подостром типе воспаления через сутки после введения РЛ концентрация альбумина в смывах из пазух практически не менялась. Несмотря на то, что через 5 дней после начала терапии уровень альбумина снижался в среднем до 0,54±0,19г/л, он оставался достоверно выше, чем в контрольной группе (р 0,05). Через сутки после введения РЛ концентрация slgA в смывах из пазух пациентов второй группы не изменялась, а к окончанию проводимой терапии его средняя концентрация была 26,18±9,2мг/л, что соответствовало значениям в контрольной группе. Концентрация остальных иммуноглобулинов возрастала в несколько раз через сутки после введения препарата. К моменту окончания терапии их концентрация достоверно снижалась (по сравнению с исходным уровнем), но была выше, чем в контрольной группе. Так, средняя исходная концентрация IgG в этой группе была 190,3±67,3мг/л, через сутки она равнялась 437,6±129,8мг/л (р 0,005), а через 7 дней - 103,5±36,4 мг/л (р 0,05, по сравнению с исходным уровнем).
Таким образом, после окончания курса иммунотерапии уровень большинства исследуемых иммунологических показателей в смывах из пазух оставался выше аналогичных показателей в контрольной группе, что может указывать на неполное восстановление нормального функционирования слизистой околоносовых гайморовых пазух.
Концентрация IL-8 была определена в назальных смывах здоровых лиц (10 образцов) и пациентов с острыми гнойными синуситами (30 образцов: 15 острое течение, 15 подострое течение) во время проведения иммунокорригирующей терапии. Полученные результаты изображены графически на рис 3.7 в приложении. Кроме того, уровень данного цитокина был определен в смывах из гайморовых пазух пациентов с острыми синуситами (30 образцов: 15 острое течение, 15 подострое течение). Полученные результаты изображены графически на рис 3.8 в приложении. В назальных смывах здоровых лиц концентрация IL-8 составила 0 до 10 пкг/мл. У пациентов с острым течением синуситов исходная концентрация IL-8 в назальных смывах находилась в диапазоне от 700 до 2200 пкг/мл (среднее значение - 1316± 257 пкг/мл). Через 24 часа после введения РЛ уровень этого цитокина практически не изменялся и находился в пределах от 620 до 2200 пкг/мл (среднее значение - 1500±330пкг/мл), к окончанию проводимой терапии его концентрация снижалась до 360 - 940пкг/мл (среднее значение - 810±220пкг/мл). В назальных смывах пациентов с подострым типом воспаления по сравнению с подострым, исходный уровень IL-8 был значительно ниже - от 35 до 480 пкг/мл (среднее значение - 223±121 пкг/мл). Через сутки после введения РЛ его концентрация была от 128 до 1200 пкг/мл (среднее значение - 789±230пкг/мл), а к моменту окончания терапии - от 40 до 800пг/мл (среднее значение -505±173пкг/мл). Таким образом, к окончанию курса терапии концентрация IL-8 в назальных смывах пациентов обеих групп превышала значения нормы, но была достоверно ниже исходного уровня (р 0,05).
До начала терапии концентрация IL-8 в смывах из пазух пациентов с острым течением синусита достигала 8000пкг/мл (среднее значение - 5600±876 пкг/мл). На 5-7 день после начала терапии она снижалась до 1250±375пкг/мл (максимальная концентрация - 3000пкг/мл). В смывах из пазух пациентов с подострым течением синусита исходная концентрация IL-8 была 300-6600пкг/мл (среднее значение -2250±1230 пкг/мл). Через 24 часа после введения РЛ максимальная концентрация данного цитокина достигала 10000пкг/мл (среднее значение - 5333±1796 пкг/мл). К моменту окончания терапии концентрация IL-8 в смывах пациентов из второй группы снижалась до 560-3000пкг/мл (среднее значение - 1300±580пкг/мл). Конечная концентрация IL-8 в смывах из пазух пациентов обеих групп зависела от сроков полного очищения пазух: у пациентов при полном очищении пазух на 3-4 сутки значения IL-8 были минимальные (.560-700пкг/мл.), а при полном очищении на 5 сутки - максимальные (.1800-3000пкг/мл.). Из приведенных данных видно, что выявленная динамика концентрации IL-8 в назальных смывах и смывах из пазух коррелирует с активностью местных воспалительных реакций. Так, в группе с острым течением синусита исходные значения концентрации данного цитокина превышали его концентрацию во второй группе. То, что в смывах пациентов с обоими типами течения синуситов концентрация IL-8 оставалась выше нормального уровня и после окончания терапии является доказательством несовпадения во времени клинического и иммунологического выздоровления: при отсутствии клинических проявлений сохраняются иммунологические признаки воспаления.
Изменение иммуноглобулинового состава вагинального секрета при кандидозном вагините
Увеличение Q(Alb) во вторую фазу цикла (28,89±3,4 в первую и 44,34±6,4 во вторую, р 0,05 может быть связано с увеличением проницаемости вагинального ГГБ в этот период, обусловленным физиологическими процессами, протекающими в организме. Физиологические циклические изменения в слизистой оболочке влагалища (пролиферация и десквамация) происходят синхронно с циклическими изменениями эндометрия и обусловлены репродуктивной гормональной регуляцией. Во вторую фазу цикла и непосредственно в начале фазы десквамации капилляры, входящие в состав ГГБ влагалища наиболее развиты и полнокровны. Эти процессы, вероятно, приводят к увеличению проницаемости ГГБ влагалища и тем самым способствуют повышению доли сывороточных иммуноглобулинов в вагинальном секрете. В секреторную фазу (II) менструального цикла происходит снижение локального синтеза большинства иммуноглобулинов в результате супрессивного действия прогестерона. Одновременно усиливается секреторная деятельность желез и увеличивается синтез slgA. Возможно, увеличение синтеза slgA в этот период является компенсаторным защитным механизмом нижних отделов женского репродуктивного тракта, так как перечисленные выше процессы приводят к снижению защитной роли остальных компонентов местного иммунитета влагалища. По результатам анализа Q(Ig) и ОКС можно предположить, что в норме иммунокомпетентные клетки слизистой влагалища не синтезируют IgM и IgE, и данные иммуноглобулины поступают в вагинальный секрет путем пассивного транспорта через ГГБ из кровотока. Практически весь slgA и IgA синтезируется локально лимфоидными клетками женского репродуктивного тракта (0КО1), незначительная часть IgA определяемого в вагинальном секрете в норме, имеет сывороточное происхождение. При анализе данных, полученных при изучении уровня IgG, было показано, что местно синтезируется небольшая часть этого иммуноглобулина, и в основном, это IgGl (ОКС от 0,48 до 1,25). По нашим данным остальные подклассы IgG в вагинальном секрете в норме не синтезируются, и их уровень в вагинальном секрете не зависит от фазы цикла.
Анализ полученных результатов показал, что при исследуемых патологиях меняется и концентрация различных иммуноглобулинов в вагинальном секрете, и соотношение между сывороточными и мукозными иммуноглобулинами. В результате проведенного исследования было показано, что концентрация slgA достоверно ниже нормальных значений при всех изученных патологиях. Снижение концентрации slgA в вагинальном секрете может быть связано либо с нарушением синтеза секреторного компонента и изменением сборки молекулы, что может приводить к возникновению воспалительных заболеваний, либо с деструкцией молекулы иммуноглобулина бактериальными протеазами.
По результатам проведенного исследования изучаемые патологии можно разделить на три группы:
1) Бактериальный вагиноз, кандидозный вагинит, урогенитальный микоуреаплазмоз, острая форма неспецифического бактериального вагинита заболевания, при которых увеличение проницаемости гисто-гематического барьера сопровождается снижением концентрации большинства классов иммуноглобулинов в вагинальном секрете. Такие изменения могут быть вызваны тем, что при данной патологи проницаемость эпителиального барьера влагалища недостаточна для повышенного притока сывороточных иммуноглобулинов, а местный синтез иммуноглобулинов снижен. При заболеваниях, входящих в эту группу, отмечается снижение уровня slgA, IgA, IgG в вагинальном секрете. Кроме того, при KB выявлен местный синтез IgE.
2) Хронический неспецифический бактериальный вагинит - заболевания, при которых снижение проницаемости ГГБ влагалища сочетается со снижением уровней иммуноглобулинов в вагинальном секрете. При этой патологии в слизистой влагалища отсутствуют четкие воспалительные изменения экссудативного характера, объем вагинального секрета снижен. Выявляемые сдвиги при данной патологии могут быть связаны с тем, что из-за снижения проницаемости ГГБ приток сывороточных иммуноглобулинов снижен, а иммунокомпетентные клетки слизистой влагалища не могут восполнить возникший дефицит иммуноглобулинов в вагинальном секрете. Для заболеваний, входящих в эту группу выявлено резкое снижение синтеза slgA, уменьшение концентрации IgA и IgG4. Наряду с этими изменениями показано повышение концентрации местно синтезируемого IgGl, которое, вероятно, носит компенсаторный характер в связи со значительным уменьшением концентрации IgA.
