Содержание к диссертации
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 5
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ . II
Факторы внешней среды, влияющие на результаты. коагулологических анализов II
Влияние методики проведения коагуляцяонных исследований.на диагностическую информативность коагуляционных тестов 30
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 38
Глава 3. ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ПОДГОТОВКИ ПРОБ КРОВИ
НА ПОГРЕШНОСТЬ ИЗМЕРЕНИЯ ПАРАМЕТРОВ ГЕМО
КОАГУЛЯЦИИ 45
Оценка влияния времени хранения и режимов центрифугирования крови на погрешность измерения параметров гемокоагуляции 45
Влияние сроков хранения плазмы крови на погрешность измерения параметров гемокоагуляции . 56
Изменение параглетров гемокоагуляции в зависимости от' температурного режима хранения проб плазмы
крови 69
Влияние сроков хранения плазмы над форменными элементами на показатели гемокоагуляции 80
Значение силиконирования поверхности лабораторной посуды при проведении коагулологических исследований 84
Изменение рН плазмы в процессе хранения 88
Исследование влияния сроков хранения плазмы на погрешность измерения параглетров свертывания крови
у больных с гипер- и гипокоагуляцией 93
Глава 4. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ КОАГУЛОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ
Стр.
ИССЛЕДОВАНИЯ Ill
Метод определения активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ). . . III
Метод определения коагуляционнои активности
фактора УШ (антигемойильного глобулина) 118
4.3. Метод определения активности фактора }ЗП в условиях
нарушения активации свертывания крови по
"внутреннему" пути 125
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 129
ВЫВ0.ЦЫ. 145
ЛИТЕРАТУРА 147
- 4>-ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ '
АПТВ - активированное парциальное тромбопластиновое время , ШВ - парциальное тромбопластиновое время ,
ПТ - парциальный тромбопластин ,
ПВ - протромбиновое время , ТЭГ - тромбоэластограмма ,
КК - кривая коагулографа , ФСФ —фибрин стабилизирующий фактор,
Сі - индекс коагуляции , ІТР - индекс тромбодинаїлического потенциала ,
рН - концентрация водородных ионов , УШ : С - коагуляционная активность фактора УШ .
\
Введение к работе
Актуальность проблемы. Изучение системы гемостаза все шире входит в клиническую практику. Исследование факторов свертывания необходимо для осуществления правильной диагностики нарушений гемокоагулянии, что способствует з^іуч-шению лечения различных, видов кровоточивости, в том числе синдрома диссеминированнсто внутрисосудистого свертывания при терапевтических, хирургических и других заболеваниях, для контроля лечения антикоагулянтами, тромболитическими препаратами (Г.Н.Де-тинкина, И»М.Дынкина с соавт., 1984, а). В настоящее время предложено большое количество методов исследования, используемых для выявления нарушений в системе гемостаза. В нашей стране первая попытка централизованной унификации методов.исследования системы свертывают крови и фибринолиза была предпринята в IS74 году (Приказ МЗ СССР В 960 от 15Jl0.74 г. "Об унификации клинических лабораторных методов исследования"). Однако, предложенные ГО методов исследования гемокоагуляции в настоящее время не удовлетворяют возросшим требованиям к коагулологическим анализам. Совершенствование хирургической техники, углубленное терапевтическое обследование больных, применение новых высокоактивных лекарственных препаратов, кровезаменителей, полимерных соединении и использование лазерной техники требуют более углубленного подхода к систематизации и унификации всех методов исследования. Так, И.П.Бокарев, Е.В.Кабаева (I960) предлагают уни-фицкровать не только отдельные коагулологические методы, но и программы с минимальным количеством методов, соответственно цели обследования. Однако, в проводимых исследованиях еще не-
достаточно учитывается влияние внешних факторов ври взятии и хранении вроб крови.
Как известно, система свертывания крови отличается чрезвычайной лабильностью, реагирует не только на внутренние факторы, способствующие активации свертывания, но и на факторы внешней среды, такие как время и скорость центрифугирования, рН крови и реактивов и другие /Д.М.Зубаиров, 1977; Д.М.Зубаиров с соавт., 1983; Л.А.Малолеткина, В.С.Улащик, 1983/. Изменения внешних факторов во многом обусловливают вариабельность коагулологичес-ких показателей, что может существенно исказить истинные показатели гемокоагуляции у больного. В связи с этим разработка стандартных метрологических и методических условий при проведении исследований системы свертывания крови является актуальной задачей.
На важность соблюдения единых условий при выполнении коа-гулологических исследований указывается в ряде работ /Д.М.Зубаиров, Р.И.Литвинов, 1982; В.Т.Морозова с соавт., 1983; KSste-ring, Hasten, 1982/, однако, в этих работах не проводились экспериментальные исследования по изучению влияния внешних факторов на погрешность измерения параметров гемокоагуляции и не учитывалось влияние каждого фактора в отдельности на результаты коагулологического анализа. Между тем эти исследования имеют большое значение, поскольку дают возможность максимально уменьшить погрешность измерения или, в крайнем случае, учесть ее и выразить количественно, что приведет к повышению точности исследований, позволит сравнивать данные, полученные в различных лабораториях, и дать четкие рекомендации по унификации проведения исследований.
Существенное влияние на результаты коагуляционных исследований оказывают условия хранения исследуемого материала. Сроки максимальной сохранности плазмы для коагуляционных исследований, по данным различных авторов, варьируют в широких пределах, от 20 минут до 5 часов. Расхождения в допустимых сроках хранения возможно связаны с тем, что выводы о них делались на основании изучения различных показателей коагуляции, без учета стабильности определяемого фактора свертывания крови. В связи с этим не поднимался вопрос и об очередности проведения коагу-лологических исследований.
Следует заметить, что качество диагностики нарушений в системе гемостаза зависит не только от влияния внешних факторов, но и от специфичности методики проведения исследований, ее точности и воспроизводимости. Особое значение это приобретает при диагностике форм врожденных коагулопатий, поскольку нельзя забывать, что за каждым полученным результатом лабораторного исследования стоит больной человек, и недостаточная точность анализа может привести к ошибочной оценке состояния больного, к неправильной постановке основного диагноза заболевания и связанной с этим тактике лечения.
Все вышесказанное дикутет необходимость унификации условий и методов исследования гемостаза.
Целью настоящей работы явилось повышение точности и достоверности коагулологических исследований, путем установления влияния ряда внешних факторов на погрешность измерения параметров процесса гемокоагуляции и учета этих данных при отработке режима проведения исследований для улучшения диагностики приобретенных и врожденных коагулопатий.
Для выполнения работы были поставлены следующие задачи:
Оценить влияние условии подготовки проб крови на погрешность измерения параметров коагуляции.
Сравнить степень изменения показателей гемокоагуляции при различных сроках хранения плазмы, оставляемой в пробирке после центрифугирования над шорменными элементами и отделенной от них»
Определить значение силикопирования поверхности лабораторной посуды на стабильность коагулологических показателей.
Сравнить влияние сроков хранения плазмы на погрешность измерения показателей коагуляции при нормо-, гипо— и гиперкоагуляции.
Усовершенствовать ряд методов диагностики нарушении гемо-коагуляции путем повышения их стандартизации и специфичности.
Научная новизна. Впервые количественно измерено и оценено влияние ряда внешних факторов на погрешность измерения параметров гемокоагуляции.
Проведено изучение влияния сроков хранения плазмы на результаты отдельных показателей гемокоагуляции и установлена очередность проведения коагулологических анализов, что способст-взгет снижению до 1/шнимума искажения истинных значении коагулологических показателей у обследуемого и сравнимости данных, полученных в различных лабораториях.
Впервые установлено, что длительное хранение плазмы больных с гипокоагуляцией приводит к более существенной погрешности измерения показателей гемокоагуляции по сравнению с хранением плазмы больных с гиперкоагзолящей и здоровых лиц.
Предложен доступный и надежный способ получения парциаль-
ного тромбопластина из коммерческого тромбошіастина, не требующий применения дорогостоящих импортных реактивов, используемый для определения АПТЗ и коагутіяционнои активности фактора ЖЕ.
Усовершенствованы методы оценки процесса активашк фактора X по "внутреннеіяу" пути, активности факторов УШ и Ш, сохраняющие свою специфичность при нарушении в других звенья): гемостаза. Улучшение этих методов исследования позволит повысить точность диагностики врождённых коагуяопатип и, следовательно, более полное выявление больных этой группы.
Практическая ценность работы.
Данная работа является лабораторно-методическим исследованием, направленным на повышение точности и достоверности коагу-ляционных исследований. Последнее достигается установлением очередности проведения коагуляционных исследований, определением зозможных сроков хранения плазмы крови при проведении отдельных исследований.
Выявлены условия хранения материала для коагулологических исследований, снижающие до глпнимума искажение истинных значений состояния гегігокоагуляпди у обследуемого.
Для увеличения сроков хранения исследуемой плазмы показана необходимость раннего отделения плазмы от форменных элементов и целесообразность хранения ее в силиконированной посуде.
Усовершенствованные методы исследования коагуляшонного звена гемостаза имеют большое практическое значение, таге как повышают точность и специфичность исследования в условиях как резкого отклонения от кормы коагуляционного потенциала,' так и скрытых форм нарушений гемокоагуляиии, осложняющих заболевания
системы крови.
На защиту выносятся следующие положения;
I. Одним из основных элементов повышения точности и достоверности методов исследования системы свертывания крови является установление закономерностей влияния на ее параметры внешних факторов: времени и температуры хранения, продолжительности и скорости центрифугирования, свойств контактной поверхности и рН плазмы, что позволяет определить допустимые сроки и оптимальные условия хранения материала для коагулологических исследований.
2- Различная способность факторов свертывания крови к активации в процессе хранения требует установления очередности проведения коагулологических исследований, что особенно важно при выполнении массовых анализов.
3. Стандартизация условий течения реакций свертывания крови in vitro позволяет увеличить диагностическую ценность методов исследования коагуляционного процесса (активированного парциального тромбопластинового времени, активности факторов УШ и Ш).
- II -
