Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Физико-географическая характеристика шельфа сахалина 21
Глава 2. История изучения разнообразия паразитических гидробионтов промысловых рыб сахалина (обзор литературы собственные исследования) 26
Глава 3. Материал и методы 32
3.1. Сбор паразитологического материала от промысловых рыб естественных популяций 32
3.2. Сбор материала от рыб на рыбоводных заводах и экспериментальные работы 49
3.3. Сбор материала для бактериологических исследований 53
Глава 4. Мониторинг разнообразия паразитов и их взаимоотношения с промысловыми рыбами сахалина 64
4.1. Разнообразие паразитов промысловых рыб Сахалина 64
4.2. Взаимоотношения простейших с промысловыми рыбами 109
4.2.1. Микроспоридиоз горбуши 110
4.2.2. Миксозомоз кеты 124
4.2.3. Триходиноз выращиваемой молоди лососевых рыб 133
4.2.4. Хилодонеллез выращиваемой молоди лососевых рыб 151
4.2.5. Тетрахименоз выращиваемой молоди лососевых рыб 154
4.3. Взаимоотношения цестод с промысловыми рыбами и их эпидемиологическое и практическое значение 156
4.3.1. Практическое значение Nybelinia surmenicola и зараженность рыб нибелиниями 157
4.3.2. Дифиллоботрииды и их эпидемиологическое значение 168
4.4. Взаимоотношения трематод с промысловыми рыбами и их практическое значение 190
4.4.1. Криптокотилез молоди кеты и горбуши в условиях садкового выращивания 202
4.5. Взаимоотношения скребней с промысловыми рыбами и их эпидемиологическое значение 207
4.6. Эпидемиологическое значение личинок нематод сем. Anisakidae 215
4.7. Взаимоотношения паразитических ракообразных с промысловыми рыбами 248
Глава 5. Взаимоотношения бактерий и рыб в естественных водоемах и на рыбоводных заводах 262
5.1. Санитарное состояние морских прибрежных акваторий, нерестовых водоемов и водоисточников лососевых рыбоводных заводов Сахалина 262
5.2. Микрофлора половозрелой горбуши и кеты 267
5.3. Фурункулез половозрелых лососевых рыб Сахалина 279
5.4. Бактериальная геморрагическая септицемия половозрелых лососевых рыб Сахалина 293
5.5. Микробиоценозы рыб в естественных условиях и на рыбоводных заводах 305
5.5.1. Микробиоценоз молоди лососевых рыб на естественных нерестилищах 306
5.5.2. Микробиоценозы икры и молоди лососевых рыб HZL--рыбоводных заводах 312
5.5.3. Бактериальные инфекции молоди лососевых рыб на рыбоводных заводах 320
5.6. Роль токсикологического фона в возникновении бактериозов камбаловых рыб на шельфе Сахалина 326
Выводы 333
Список использованной литературы 337
Приложение 392
- Сбор материала от рыб на рыбоводных заводах и экспериментальные работы
- Взаимоотношения простейших с промысловыми рыбами
- Взаимоотношения скребней с промысловыми рыбами и их эпидемиологическое значение
- Микрофлора половозрелой горбуши и кеты
Введение к работе
`Актуальность. Дальний Восток занимает ведущее место в экономике России по объему вылова и воспроизводству различных промысловых гидробионтов. Среди биологических факторов, определяющих состояние популяций, важнейшее место отводится ихтиопатологическим аспектам исследований взаимоотношений различных систематических групп гидробионтов. Их взаимоотношения определяются множественными связями, в частности трофическими, симбиотическими, паразитическими и др. Многие авторы под паразитическими понимают взаимоотношения микро-и макроорганизмов, которые в силу эволюционных процессов преобразовались в равновесную систему "паразит-хозяин" (Бауер и др., 1977; Головина и др., 2003). Нарушение равновесного состояния системы "паразит-хозяин" при неблагоприятных условиях для хозяина, как правило, приводит к увеличению численности возбудителей и к возникновению заболеваний различной этиологии, в связи с чем в настоящее время становится особенно актуальным ихтиопатологический мониторинг. Однако до сих пор не показано комплексного влияния паразитов на популяции гидробионтов. Недостаточная изученность патогенного воздействия паразитов гидробионтов и болезней рыб в естественных популяциях вызывает ряд проблем, связанных с оценкой их комплексного влияния на организм, с одной стороны, и санитарно-гигиеническим и медико-биологическим качеством - с другой.
В настоящее время уделяется большое внимание увеличению объемов вылова гидробионтов за счет реализации программ по их искусственному воспроизводству. Сахалинская область - единственный регион в Российской Федерации, где интенсивно развивается искусственное разведение лососевых рыб, а выпуск молоди составляет до 90% от общего выпуска молоди в России (Любаева и др., 2001). В настоящее время действуют 30 и строятся 20 лососевых рыбоводных заводов, на которых планируется довести выпуск выращиваемой молоди до 1 млрд., вводятся в эксплуатацию завод по подращиванию трепанга и две плантации по подращиванию гребешка. Общеизвестно, что чем интенсивнее развивается аквакультура, тем острее стоит проблема болезней гидробионтов, и тем больше возникает необходимость в постоянном ихтиопатологическом мониторинге.
Необходимость проведения систематических ихтиопатологических наблюдений как за половозрелыми лососевыми рыбами и молодью на рыбоводных заводах, так и в естественных условиях, возникала в связи со сложной эпизоотической ситуацией. В середине семидесятых годов прошлого столетия при обнаружении возбудителя фурункулеза Aeromonas salmonicida на все заводы и водоразделы рек Сахалинской области был наложен карантин, что в значительной степени осложнило работу рыбоводных предприятий. Одной из важных задач явилось выявление микроорганизмов и определение этиологической значимости различных патогенов в возникновении инфекционного процесса и неблагоприятных факторов, способствующих его развитию. Исследования, проводимые на разных этапах выращивания, впервые позволили установить, что у молоди лососевых на сахалинских рыбоводных заводах также имеют место бактериальные инфекции, возникающие на фоне неблагоприятных условий среды. Из икры, подвергшейся колонизации грибковой и бактериальной флорой, выходят мальки, плохо адаптирующиеся к условиям среды обитания и предрасположенные к инфекционным заболеваниям на более поздних этапах развития.
Ихтиопатологический мониторинг позволяет выявлять
неблагополучные хозяйства Сахалина, уделять больше внимания санитарному состоянию водоемов и чаще проводить обследования объектов воспроизводства, а также своевременно разрабатывать практические рекомендации по предупреждению заболеваний рыб. Все большую важность приобретают исследования по изучению патологий рыб шельфа и на рыбоводных заводах, изучение взаимоотношений паразитических гидробионтов и их хозяев. В связи с этим ихтиопатологические аспекты взаимоотношений гидробионтов в условиях среды, когда эти взаимоотношения становятся конфликтными (то есть возникает болезнь), приобретают особую актуальность.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение взаимоотношений гидробионтов различных таксонов при ихтиопатологическом мониторинге в естественных водоемах и в условиях аквакультуры Сахалина.
Для реализации цели были поставлены следующие задачи:
1. Выявить взаимоотношения паразитических беспозвоночных разных
систематических групп с основными промысловыми рыбами шельфа
Сахалина и на рыбоводных заводах.
2. Охарактеризовать таксономическую структуру паразитофауны
основных промысловых рыб шельфовой зоны Сахалина и на рыбоводных
заводах.
3. Оценить патогенную значимость видов паразитов рыб в зависимости
от факторов среды.
4. Изучить эпизоотологию регистрируемых паразитов у рыб
естественных популяций и факторы, способствующие возникновению
заболеваний.
5. Оценить взаимоотношения и патогенное влияние некоторых видов паразитов на рыб в условиях аквакультуры.
6. Выявить особенности циркуляции возбудителей зооантропонозов на Сахалине в зависимости от их экологии.
7. Оценить санитарное состояние морских прибрежных районов,
нерестовых водоемов и водоисточников лососевых рыбоводных заводов
Сахалина.
8. Изучить структуру микробиоценоза, циркуляцию условно-патогенной микрофлоры и условия возникновения инфекционных болезней у диких рыб и рыб, выращиваемых на рыбоводных заводах.
9. Оценить эпизоотическую ситуацию по ряду инфекционных заболеваний в популяциях рыб шельфа Сахалина в зависимости от условий среды. Научная новизна и теоретическая значимость работы. Исследования являются первой обобщающей эпизоотологической работой по взаимоотношениям гидробионтов различных таксонов (бактерии, паразитические беспозвоночные, рыбы) при ихтиопатологическом мониторинге водоемов Сахалина.
Впервые для Сахалина зарегистрированы 28 видов паразитов, для 3-х видов дополнено описание, для 6-ти - отмечены новые хозяева. На основании собственных многолетних материалов и литературных данных изложены сведения о 69 видах паразитов. Освещены их Систематическое положение, биология, характер локализации, распространение и практическое значение. Для исследованных видов рыб представлена многолетняя изменчивость видового и количественного состава паразитов, выделены массовые виды, определены уровни зараженности, прослежена динамика их численности в основных рыбопромысловых районах, что позволило охарактеризовать некоторые ихтиопатологические аспекты взаимоотношений в популяциях гидробионтов. Установлено наличие в естественных популяциях рыб группы паразитов (11 видов), имеющих практическое значение для рыбной промышленности. Впервые даны количественная оценка и характеристика ущерба от паразитов, влияющих на товарный вид рыбы. Зарегистрировано наличие 9 видов паразитов, потенциально опасных для здоровья человека и теплокровных животных.
Выявлены наличие пяти паразитических гидробионтов, вызывающих заболевания рыб в естественных водоемах: микроспоридиоз и лепеофтериоз горбуши, миксозомоз кеты и эргазилез сельди, красноперки, корюшки, наваги, и факторы среды, способствующие возникновению этих болезней. Изучено их патогенное воздействие на рыб.
Список патогенных для выращиваемой молоди лососевых рыб паразитических гидробионтов дополнен 5-ю видами, являющимися возбудителями заболеваний. Определено, что возникновению заболеваний на рыбоводных заводах способствуют неблагоприятные условия среды, в том числе оптимальный для размножения паразитов температурный режим. Показано патогенное воздействие возбудителя при триходинозе, тетрахименозе, хилодонеллезе и криптокотилезе.
Впервые представлены многолетние материалы по микробиоценозам воды и рыбы и сведения о бактериальных болезнях тихоокеанских лососей Сахалина естественного и искусственного воспроизводства. По исследованиям 1990-2005 гг. от лососевых выделено 30 групп бактерий, относящихся к 7 семействам и 16 родам. Большое разнообразие отмечено у бактерий семейств Pseudomonadaceae и Enterobacteriaceae. Наибольшую этиологическую значимость имели представители родов Aeromonas и Pseudomonas, которые при определенных условиях в микробиоценозе приобретали патогенные свойства. Дана сравнительная оценка взаимоотношений молоди лососевых искусственного и естественного воспроизводства с выявленными микробиальными сообществами. Впервые у заводской молоди отмечены и описаны заболевания бактериальной этиологии. Изучены микробиоценозы водоисточников рыбоводных заводов, нерестовых рек и прилегающих к ним морских акваторий, что позволило оценить их санитарное состояние. Приведены результаты взаимоотношений горбуши, кеты и камбал с бактериями в условиях антропогенного загрязнения. Показана динамика и экстенсивность поражения рыб бактериями в районах промысла.
Практическая значимость и реализация результатов работы. Выявленная в ходе мониторинговых ихтиопатологических исследований и охарактеризованная таксономическая структура паразитофауны и микрофлоры промысловых рыб Сахалина, некоторые особенности их биологии, распространения, локализации и полученные количественные уровни заражения послужили материалом для создания компьютерной базы данных, с помощью которой возможно предоставить эпизоотологическую экспертную оценку в каждом конкретном районе. Материалы диссертации использовались при разработке санитарных норм и правил «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации: Санитарно-эпидемиологические правила и нормы» -(СанПиН, 2003).
Материалы использовались при разработке методических указаний: «Методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки» (МУК 3.2.988-00) и «Профилактика паразитарных болезней: Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями» (МУ 3.2.1756-03), а также при разработке предложений и рекомендаций технологическим службам рыбной промышленности по снижению ущерба.
Санитарно-эпидемиологической службе области даны рекомендации по проведению мероприятий, обеспечивающих эпидемиологическую безопасность рыбы, зараженной паразитами: «Эпидемическая безопасность при употреблении лососевых» (№ 16-95).
Впервые разработаны и внедрены в производство инструкция по диагностике и профилактике микроспоридиоза лососевых и методы борьбы и профилактики псевдомоноза молоди горбуши.
Впервые предложен и внедрен в практику способ борьбы с триходинозом молоди лососевых рыб фиолетовым «К».
Полученные результаты могут быть использованы при изучении некоторых аспектов биологии рыб, дифференциации их локальных стад и способствовать более точному определению запаса и прогноза вылова.
Полученные знания об эпизоотически значимых видах паразитов и условно-патогенных бактериях, способных вызывать заболевания в условиях искусственного разведения лососевых и в естественных популяциях, могут способствовать контролю за здоровьем рыб и прогнозированию заболеваний. Описанные и изученные заболевания - 7 у выращиваемой молоди и 8 - у половозрелых рыб, причины их возникновения, разработанная диагностика послужат успешному предупреждению этих болезней. Изданные рецензированные монографии «Паразитозы кеты {О. keta) и горбуши (О. gorbuscha)» и «Микрофлора и бактериальные болезни тихоокеанских лососей естественных популяций и в аквакультуре на Сахалине» могут быть использованы при чтении лекционных курсов по ихтиопатологии в ВУЗах страны, занимающихся подготовкой специалистов по направлению «Водные биоресурсы и аквакультура».
Основные положения, выносимые на защиту
1. Ихтиопатологический мониторинг как метод оценки
взаимоотношений паразитов и микроорганизмов с основными
промысловыми объектами ихтиофауны шельфа Сахалина.
2. Санитарно-гигиеническая значимость и циркуляция условно-патогенной микрофлоры в микробиоценозах воды естественных водоемов и рыбоводных предприятий Сахалина и их влияние на численность некоторых видов ихтиофауны.
3. Ихтиопатологические аспекты взаимоотношений гидробионтов различных таксонов в зависимости от условий среды у рыб естественных популяций и в аквакультуре.
4. Санитарно-гигиеническая и медико-биологическая значимость отдельных видов паразитов и бактерий. Эпизоотологическое обоснование рыбохозяйственного использования водоемов, разработка мер борьбы с болезнями рыб в аквакультуре.
Апробация работы. Основные положения и фрагменты работы представлялись и обсуждались на: IV Всесоюзном совещании по научно-техническим проблемам марикультуры (Владивосток, 1983); Всесоюзных конференциях молодых ученых (Москва, 1984; Владивосток, 1995); VIII Всесоюзном совещании по паразитам и болезням рыб (Астрахань, 1985); X конференции Украинского общества паразитологов (Киев, 1986); V Симпозиуме по патологии и паразитологии морских организмов (Севастополь, 1992); V Всесоюзном совещании по систематике, биологии и биотехнике разведения лососевых рыб (Москва, 1994); XXX научно-технической конференции (Южно-Сахалинск, 1995); Всесоюзном совещании
ю
по проблемам товарного выращивания лососевых рыб (Мурманск, 1995); Первом конгрессе ихтиологов России (Астрахань, 1997); дегустационных совещаниях в лаборатории СХФ ЦПКТБ «Дальрыба» (1985-1990); совещаниях департамента по рыболовству г. Южно-Сахалинска (1996-1998, 2003); заседаниях ученого совета СахНИРО (1991-2005); Всероссийском совещании по искусственному воспроизводству и охране ценных видов рыб (Южно-Сахалинск, 2000); симпозиуме «Памятные научные чтения к 85-летию профессора В. А. Мусселиус-Богоявленской» (ВНИИПРХ, 2004); заседаниях Межведомственной ихтиологической комиссии НКС по болезням рыб (1999, 2004, 2005); Всероссийской научно-практической конференции-семинаре (Москва, МИК, 2005).
Материалы представлялись и - обсуждались на международных семинарах и конференциях: 10-й международной конференции (Ирландия, Дублин, 2001); семинаре АТЭС по борьбе с морскими вредителями, 17-й сессия РГР и 15-й сессия РГСМР (Чили, Пуэро Варас, 2004); семинаре АСЕАН «Создание базы для борьбы с интродуцированными и трансграничными патогенными возбудителями в странах АСЕАН» (Малайзия, Пинанг, 2004); заседаниях рабочей группы по патологии и заболеваниям морских организмов ИКЕС (Финляндия, Турку, 2004; Франция, Ла Трембладе, 2005; Дания, Копенгаген, 2006).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 48 печатных работ, в том числе 4 методических инструкции и 2 монографии.
Структура и объем работы. Диссертация включает введение, 5 глав, выводы, список литературы и приложение. Общий объем рукописи 394 -страницы, включая 139 таблиц, 74 рисунка. Список использованной литературы состоит из 490 источников: 303 работы отечественных авторов и 187-зарубежных.
Сбор материала от рыб на рыбоводных заводах и экспериментальные работы
Экспериментальные работы проводились на Соколовском, Таранайском, Анивском и Калининском рыбоводных заводах, здесь же была собрана основная часть материала по изучению протозойных болезней молоди лососевых рыб с 1982 по 1998 г. Для анализа бралась только свежая рыба. При паразитологических вскрытиях молодь рыб обязательно подвергали тщательному клиническому осмотру и патолого-анатомическомуисследованию. Полное паразитологическое исследование включало в себя наружный осмотр и исследование внутренних органов и тканей рыбы (сердце, мочевой пузырь, желчный пузырь, печень, селезенка, жировая ткань, брюшина, кишечник, плавательный пузырь, почка, глаза, головной мозг, спинной мозг, мускулатура, скелет). При патолого-анатомическом исследовании учитывались патоморфологические изменения органов и тканей (нормой патоморфологической картины служила здоровая дикая молодь). Всего на рыбоводных заводах было исследовано 7625 экз. молоди кеты и горбуши (см. табл. 3.1).
Одновременно брали пробы воды на содержание в ней кислорода, рН, измеряли температуру воды. Некоторые сведения, касающиеся резистентности хозяина и биологии возбудителя, были получены экспериментальным путем.
Эксперимент по заражению молоди лососевых рыб триходинами был проведен как в условиях рыбоводного завода, так и на р. Найба. Накопление паразитов на экспериментальных партиях молоди и увеличение зараженности достигали естественным путем за счет прекращения профилактических и лечебных обработок. Цели эксперимента - выяснение патогенности триходин и определение их летальной дозы для рыб. Для этого использовали 100 тыс. экз. молоди кеты, содержащейся при температуре 5С в бассейне рыбоводного завода (плотность посадки - 40 тыс. экз./м). Контролем служила молодь из другого бассейна с аналогичными технологическими показателями и обычными плановыми профилактическими обработками. Результаты снимали через 10 дней.
Эксперимент по заражению молоди лососевых триходинами на р. Найба проходил при температуре воды 10С. Для заражения были использованы 10,0 тыс. экз. молоди кеты и горбуши (по 5,0 тыс. экз. каждого вида). Рыбу помещали в садки из мелкоячейной капроновой дели, установленные в средней части русла р. Найба, где наблюдалась наибольшая проточность и глубина. Молодь кормили икрой минтая и гранулированным кормом японского производства. Степень инвазии молоди определяли до и после посадки в садки. Опыт длился 10 дней.
Был проведен эксперимент по применению красителя фиолетового «К» для лечебно-профилактической обработки икры и молоди лососевых. Целью эксперимента являлось выяснение влияния препарата на паразитов (триходина), а также на физиологическое состояние икры и молоди лососей в условиях рыбоводного завода Сахалина. Работу проводили в 1982-1985 гг. в специально выделенных для этих целей производственных рыбоводных бассейнах. Для икры испытывались концентрации препаратов 50 мг/л в течение 30 минут, 100 мг/л - 20 минут и 200 мг/л в течение 1,5-3 минут. Для обработки молоди испытывались концентрации 0,5 мг/л, 1,4 мг/л, 5 мг/л и 10 мг/л с различной экспозицией - 10, 20, 30 и 40 минут. Каждый вариант опыта дублировали 2-3-кратной повторностью. Соответственно контролем для молоди служили партии рыб без обработок, а для икры -производственная партия, которая обрабатывалась формалином в соответствии с установленными требованиями биотехники.
В течение эксперимента вели наблюдения за абиотическими факторами (температура воды, содержание растворенного в воде кислорода, рН, объем воды и т. д.) и состоянием мальков и икры.
В вариантах эксперимента с икрой наблюдали время появления «глазка», подвижность эмбрионов, синхронность стадий развития, сроки выклева личинок, гибель в эмбриональный период, количество уродств или случаев аномального развития на 100 экз. Физиологическое состояние молоди до обработок и после них контролировали гематологическими методами. Эффективность действия препарата оценивали по влиянию его на рыб (поведение, выживаемость) и паразитов через два-три дня после обработки. Состояние паразитов (их подвижность, угнетенность, способность к размножению, снижение интенсивности инвазии ими рыб) определяли под микроскопом МБС.
Профилактические и лечебные обработки проводили по следующей методике: непосредственно перед обработкой готовили маточный раствор.
Для его приготовления отвешивали насчитанное количество сухого препарата и растворяли его в 50 мл горячей воды (90-100С). Маточный
Взаимоотношения простейших с промысловыми рыбами
Как в зарубежной, так и в отечественной литературе большое внимание уделяется изучению заболеваний, возникающих у рыб при искусственном разведении. Сведения о паразитозах, возникающих в естественных водоемах, встречаются реже (Wellborn, 1967; Woo, 1987; Wood, 1979; Wootten and Smith, 1980).
Следует отметить, что сам термин «паразитарная болезнь» до настоящего времени спорен. А. В. Гаевская и А. А. Ковалева (1975), С. Ж. Синдерманн (Sindermann, 1970) употребляли этот термин в широком смысле слова, то есть они считали болезнью любые отклонения от нормальной деятельности организма хозяина. Многие другие авторы обосновывают этот термин наличием клиники, массового поражения или массовой гибели рыб (Курочкин, 1976; Бауер и др., 1977). В наших исследованиях мы разделяли точку зрения последних и считали заболеванием массовое поражение рыб при наличии у нее клиники или массовой гибели.
В естественных популяциях у диких лососевых нами были зарегистрированы два паразитарных заболевания, возбудителями которых являлись микроспоридии Microsporidium takedai и миксоспоридии Myxosoma dermatobia.
В аквакультуре паразитозы являются одной из актуальных проблем. Так, среди тихоокеанских лососей на хозяйствах Японии широко распространены простейшие паразиты Ichthyobodo necator, Trichodina truttae и Chilodonella piscicola (Takeda et al., 1969; Urawa, 1987, 1992, 1992a, 1992b, 1993,1995,1996; Urawa and Arthur, 1991; Urawa and Awakura, 1994).
На сахалинских рыбоводных заводах для молоди лососевых наибольшую опасность представляют четыре вида простейших: инфузории Trichodina truttae и Т. californica, Tetrahymena pyriformis и Chilodonella piscicola.
Микроспоридии - паразитические простейшие, изучение которых представляет значительный общебиологический интерес и имеет большое практическое значение. Уникальные особенности жизненного цикла и структурной морфологической организации послужили основанием для выделения их в самостоятельный тип Microsporidia в подцарстве Protozoa, а высокая патогенность для многих хозяев разного систематического положения, в том числе и рыб, диктует необходимость тщательного изучения паразитохозяинных отношений.
Число видов микроспоридий, паразитирующих в рыбах, относительно невелико и в настоящее время приближается к 100 (Гробов и др., 1983). Из них в России описано 18 видов микроспоридий как в естественных водоемах, так и в аквакультуре (Воронин, 1999). У лососевых паразитирует их менее 10 (Бауер, Мирзоева, 1984). Некоторые из них, проявляя высокую патогенность, отмечены в качестве причин массовых заболеваний и гибели молоди разводимых лососевых в США и Японии. В Калифорнии описаны три эпизоотии микроспоридиоза у форели, стальноголового лосося и кеты, вызванные Pleistophora salmonae (Putz et al., 1965), а на Аляске - заболевание молоди чавычи, вызванное Loma sp. (Hauck, 1984).
Этиология, клиника, патогенез. Патогенность Microsporidium takedai описали в Японии еще в 1930-х годах. На Сахалине он был зарегистрирован впервые в 1982 г. (Вялова, 1984). Основная масса паразитов была представлена спорами грушевидной формы размером 2,8-3,9 мкм длины и 1,7-2,3 мкм ширины, соотношение длины к ширине - 1,65-1,72. Размер спор, фиксированных в 4%-ном формалине, составлял 3,7 (3,4-4,2) х 2,2 (2,0-2,5) мкм. Задняя вакуоль занимала около 1/4 объема споры.
При микроскопии свежего материала доспоровые стадии не выявлялись, а в гистологических срезах они были представлены удлиненными клетками с бледноокрашенной цитоплазмой и округлыми ядрами, количество которых колебалось от одного до четырех. Доспоровыестадии были сконцентрированы, преимущественно, по периферии очага поражения.
Развитие и спорообразование микроспоридии происходило в поперечно-полосатой мускулатуре туловища, глазных, жевательных, жаберных, глоточных и мышцах неба, а также в сердечной мускулатуре предсердия и желудочка в следующей последовательности: зрелые шизонты, споробласты и споры.
Очаги поражения, представляющие одно либо несколько заполненных паразитами волокон, имели вид белых веретеновидных цистоподобных образований длиной 3-6 и шириной 2-3 мм. Первичные очаги выявлялись при просмотре сердца под МБС и имели вид мельчайших белых овальных цист. У сильнозараженных особей сердце, как правило, становилось увеличенным, бугристым, деформированным, и цвет его изменялся от бледно-красно-розового до беловатого. Даже при простом визуальном осмотре рыб одной партии интенсивность инвазии колебалась в широких пределах, начиная от единичных находок только в сердце до генерализованного поражения как сердца, так и поперечно-полосатой мускулатуры туловища, глаз, глотки и т. п. (рис. 4).
При всех случаях заражения интенсивность поражения сердца была выше, чем скелетной мускулатуры, а длина цистоподобных образований в сердце при этом меньше, чем в мышцах (табл. 4.5).
Выделенные условно, по степени интенсивности инвазии сердца и мышц, три группы рыб характеризовались достаточно четкими различиями как по длине цистоподобных образований, так и по степени насыщенности ими сердечной и скелетной мускулатуры в пересчете на 100 мг массы. При единичной степени инвазии (1-5 экз.) наблюдалось снижение размера цист (0,24-0,5 мм). Максимальной величины цистоподобные образования достигали при сильной степени инвазии (см. табл. 4.5).
Взаимоотношения скребней с промысловыми рыбами и их эпидемиологическое значение
У промысловых рыб шельфа Сахалина нами выявлено 8 видов паразитов класса Acanthocephala: Corynosoma strwnosiim, Corynosoma semerme, Corynosoma villosum, Echinorhynchus gadi, Echinorhynchus lotellae, Rhadinorhynchus trachuri, Bolbosoma caenoforme, Bolbosoma bobrovi.
Из общего числа выявленных скребней эпидемиологическое значение имеют 3 вида: С strumosum, С. semerme, С. villosum. Первыми промежуточными хозяевами скребней являются морские амфиподы, а в качестве резервуарных хозяев используются многие виды рыб. Дефинитивные хозяева - морские млекопитающие и птицы, заражаются при поедании инвазированной рыбы (рис. 35).
Кориносомоз вызывается С. strumosum, С. semerme, С. villosum. Половозрелые кориносомы паразитируют в кишечнике морских млекопитающих и рыбоядных птиц, пушных зверей (норок, лисиц, песцов) и других. Личинки (акантеллы) поражают брюшину, брыжейку, стенку кишечника, внутренние органы и реже мышцы различных морских, проходных и пресноводных рыб. У человека могут паразитировать личинки кориносом. Паразиты представляют опасность для человека и теплокровных животных (СанПиН, 2003).
Тело паразита длиной до 9 мм (рис. 36). Самец и самка одинаковой величины.Почти все из обнаруженных кориносом паразитировали на внешних стенках кишечника и пилорических придатках. В меньшем числе они встречались на стенках желудка и совсем редко на печени, пищеводе и гонадах, (рис. 37).
Навага. У наваги в полости тела паразитировали 2 вида скребней рода Corynosoma: С stritmosum и С. semerme. Соотношение этих видов по частоте встречаемости идентифицированных в отдельной выборке наблюдалось как 1:2,5. Акантеллы p. Corynosoma являлись доминирующими гельминтами полости тела наваги и составляли более 40% от общего числа видов, которые локализовались в полости.
В таблице 4.55 представлены данные суммарной зараженности полости тела обоими видами скребней p. Corynosoma. На фоне достаточно высокой инвазии кориносомами наваги из всех промысловых районов зараженностью ими выделяется популяция Северных Курил (88,9%; 15,7±2,62 экз./рыбу; 1-46 экз.). Вместе с тем также различаются по зараженности группировки наваги заливов Терпения и северо-восточного Сахалина как по экстенсивным, так и по интенсивным показателям. Зараженность рыб заливов Мордвинова (популяция зал. Терпения) и Ныйский (популяция северо-восточного Сахалина), где нагуливаются младшевозрастные мелкоразмерные группировки стад, составляла 63,6%; 3,34±0,35 экз./рыбу; 1-51 экз. и 3,6%; 0,25±0,25 экзУрыбу; 1-7 экз. соответственно.
Камбала. У камбаловых рыб акантеллы кориносом локализовались в основном в полости тела на внешних стенках органов. В таблице 4.56, на примере выборки из 639 экз. рыб, показано распределение скребней на полостных органах, где видно, что предпочтительными местами обитания являлись кишечник и печень.
Кроме того, у камбаловых рыб отмечена отличительная от других видов рыб особенность локализации акантелл С. striimoswn, а именно: кроме локализации в полости тела паразиты часто выявлялись в мышечных тканях стенок желудка или кишечника, и число паразитов в стенках желудков было значительным. Помимо скребней, в мышцах желудка встречались нематоды, трематоды и нибелинии.
Параметры инвазии стенок желудка нибелиниями были довольно высокими: экстенсивность заражения - 28% при индексе обилия 7,7±0,9 экз./рыбу. Число этих паразитов в стенках желудка достигало 240 экз. Отмечались отдельные случаи паразитирования плероцеркоидов нибелинии в стенках кишечника. Значительно ниже были заражены мышцы желудка и кишечника скребнями С. strumosum, и еще реже встречались трематоды и нематоды (табл. 4.57).
Инвазия отдельных видов камбал в разных районах варьировалась от 16 до 96% (табл. 4.58). Максимальная зараженность отмечена у длиннорылой камбалы Татарского пролива. Экстенсивность заражения составила 96%, индекс обилия 12,3±0,4 экз./рыбу, а число кориносом в полости одной рыбы достигало 116 экз. Отличий в степени инвазии рыб Охотского и Японского морей не выявлено, но замечено, что у звездчатой камбалы из пресноводного озера Тунайча скребни не обнаружены.
Волосозуб японский. По нашим наблюдениям, С. strumosum был единственным из паразитов, обнаруженых у волосозуба японского. Акантеллы С. stnimosiim паразитировали в полости тела волосозуба. Как правило, кориносомы локализовались на кишечнике (88,9% от общего числа обнаруженных экземпляров). Доля зараженных рыб составила 71,3% при индексе обилия 2,85±0,23 экз./рыбу и амплитуде интенсивности 1-27 экз.
Корюшка. Из эпидемиологически значимых представителей кл. Acanthocephala у корюшек выявлен один вид - С. strumosum. Акантеллы скребней локализовались в полости на всех внутренних органах, предпочтительно на желудке и кишечнике. Инвазия корюшки была высокой во всех промысловых районах и колебалась от 31,9 до 71,8% с интенсивностью 1,1-2,5 (1-23) экз./рыбу у зубастой и от 6,0 до 21,2%, 0,19-0,51 (1-30) экзУрыбу - у молоротой корюшки (табл. 4.59). Зараженность зубастой корюшки во всех районах была выше, чем малоротой.
Микрофлора половозрелой горбуши и кеты
Из всего многообразия бактерий наибольшую опасность для здоровьярыб представляет группа условно-патогенных бактерий, способных вызывать заболевания при неблагоприятных условиях внешней среды. В связи с этим возникает необходимость уточнения качественного состава изолируемых групп бактерий и их возможной роли в этиологии бактериальных инфекций у рыб. Смешанные популяции этих бактерий, несомненно, обладаютзначительно большим патогенным потенциалом. Результаты наших многолетних исследований выявили определенный бактериальный фон лососевых рыб Сахалина, который представлен в таблице 5.6.производителей лососевых было выделено 30 групп бактерий. В формировании микробиоценозов у лососевых рыб Сахалина принимали участие как сапрофитные, так и условно-патогенные бактерии. Из всех обнаруженных бактерий наибольшее эпизоотическое значение для половозрелых лососей имели подвижные представители рода Aeromonas -возбудители аэромоноза. Эпизоотически значимыми официально признаются все подвижные представители рода Aeromonas (Сборник инструкций..., 1998). В наших исследованиях разнообразие аэромонад представлено четырьмя видами (см. табл. 5.6).
Наиболее широкий диапазон видов отмечался у бактерий семейства Pseudomonadaceae (10 видов). Псевдомонады наряду с аэромонадами являются типичными представителями водных микробиоценозов и нормофлоры рыб. В больших количествах они представлены в грунтах и воде (Каховский, 1987). Псевдомонады известны как активные патогены для культивируемых рыб, способные как вызывать специфические инфекции-псевдомонозы, так и участвовать в ассоциативных бактериозах (Warren, 1991). Это подтверждено также и нами на основании многолетних наблюдений молоди лососевых Сахалина (Вялова, Полтева, 1994; Вялова, Шкурина, 1995; Шкурина и др., 1999).
Многочисленными были и представители семейства Enterobacteriaceae - девять групп, относящихся к семи родам (см. табл. 5.6). Следует подчеркнуть, что энтеробактерии, в нашем случае это Proteus, Hafnia, Klebsiella, Enterobacter и Citrobacter, которые дополняют бактериальный фон рыб, как правило, являются индикаторами биологического загрязнения водоема, так как поступают в него только из кишечника теплокровных животных и человека. Энтеробактерии способны участвовать в неспецифических септических процессах у рыб, а также вызывать различные бактериозы. Например, Proteus vulgaris описан как этиологический агент при заболевании сазана и форели (Карцева, 1990; Бычкова и др., 1995). Klebsiella pneumoniae способна вызвать разложение мышц канального сомика (Жезмер и др., 1991), в развитии некоторыхпатологических состояний у лососевых рыб участвует Citrobacter freundii (Sanz, 1991). Бактерии p. Citrobacter являются наиболее типичными представителями группы энтеробактерий, входящих в состав микробных ассоциаций, формирующихся в кишечном тракте гидробионтов. В связи с этим возникает вопрос о значении этих представителей колиформных бактерий в инфекционной патологии рыб. Несмотря на то, что цитробактеры считаются сапрофитной водной микрофлорой и естественной составной частью микробиоценоза кишечника рыб, в литературе имеются сведения о возникновении заболеваний с гибелью рыб, этиологически связанных с бактериями этого рода (Sato et al., 1982). В. Ю. Жезмер с соавторами (1991) экспериментально выявили особое значение энтеробактерий (протеев и клебсиелл) в развитии патологических состояний у канального сомика. Причем, как показали проведенные исследования, синергизм возбудителей в их патогенном воздействии на организм рыбы приводил к более тяжелым последствиям инфекционного процесса. На наш взгляд, это обстоятельство указывает на то, что энтеробактерий представляют опасность для инфицирования рыб и в естественных условиях.
В микрофлоре лососевых были обнаружены бактериии рода Streptococcus, который представляет сравнительно крупную группу микроорганизмов (24 вида), некоторые из них являются патогенными для человека, животных и рыб (Рудиков, Грищенко, 1985). Обнаруженный у рыб Streptococcus faecalis является одним из индикаторов антропогенного загрязнения водоемов. Патогенного значения для рыб этот вид стрептококка не имеет. Не установлено болезнетворное влияние на рыб и для бактерий родов Moraxella, Acinetobacter, Micrococcus, Bacillus, Alcaligenes, Flavobacterium, которые встречались у обследованных нами рыб (см. табл. 5.6). Однако в последние годы из водоемов, в которых ведется интенсивное рыбоводство, от рыб с различным клиническим статусом выделялись бактерии - представители родов Moraxella и Acinetobacter (Аморос-Хименес, 1993; Юхименко и др., 2001; Юхименко и др., 2002). Микроорганизмы этих таксонов объединяются в группу неферментирующихщелочеобразователей (НФЩ). В микробиоценозах воды чрезмерно эвтрофированных рыбохозяйственных водоемов эта группа бактерий имеет значительный удельный вес. Как показывает анализ литературных источников, из таких водоемов у рыб с характерными для аэромонадной септицемии клиническими признаками во многих случаях не удавалось выделить предполагаемый этиологический агент-штамм подвижной аэромонады ни в чистой культуре, ни при доминировании в микробиоценозе. Высевались многокомпонентные ассоциации грамнегативных бактерий, и микробный пейзаж был обычно представлен несколькими видами подвижных аэромонад (иногда даже авирулентными), энтеробактериями, неферментирующими щелочеобразователями (Boonyaratpalin, 1989; Жезмер и др., 1991; Юхименко и др., 2001; Юхименко и др., 2002). Все эти микроорганизмы признаны условно-патогенными для рыб (Аморос-Хименес, 1993).
В таблицах 5.7 и 5.8 показана микрофлора горбуши и кеты обследованных районов Сахалина. Исследованиями установлено, что у горбуши бактериальный спектр был шире, чем у кеты. Из всего многообразия бактерий, выделенных от лососевых, у горбуши присутствовали 30 групп микроорганизмов, относящихся к семи семействам и 16 родам, а у кеты - 23 вида бактерий, относящихся к 12 родам. У горбуши было обнаружено четыре вида патогенных аэромонад - A. salmonicida subsp. salmonicida, A. hydrophila subsp. hydrophila, A. hydrophila subsp. pwteolytica, A. punctata subsp. punctata.
За все годы наблюдений возбудитель фурункулеза A. salmonicida subsp. salmonicida не встречался у горбуши юго-западного побережья и в заливе Терпения. В свою очередь, возбудитель бактериальной геморрагической септицемии A. hydrophila subsp. hydrophila отмечался у горбуши всех обследованных районов. Из всех аэромонад, выделенных от горбуши, у кеты во всех обследованных районах не встретилась A. hydrophila subsp. pwteolytica, и, в отличие от горбуши, у кеты не встретилась A. salmonicida subsp. salmonicida в заливе Анива. Сравнивая микрофлору кеты и горбуши,
