Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 11
2,1 Особенности полового цикла коров и кобыл 11
2.2. Современное состояние и перспективы разработки методов определения оптимального времени осеменения коров и кобыл 28
2.3. Органолептические и физико-химические свойства вагинальной слизи коров и кобыл 35
2.4. Цитологическая структура вагинальной слизи коров и кобыл в динамике полового цикла 40
2.5. Биохимические показатели крови и половых секретов в связи с функциональным состоянием половой системы 43
2.5.1. Биохимические показатели крови в связи с воспроизводительной функцией 43
2.6. Иммунные показатели крови и половых секретов в период эструса в связи с функциональным состоянием половой системы 52
2.6.1. Иммунные свойства крови в связи с функциональным состоянием половой системы 52
2.6.2. Иммунные свойства секретов полового тракта 61
3. Материал и методика исследований 71
4. Результаты экспериментальных исследований и их обсуждение 87
4.1. Содержание овариальных гормонов у коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике 87
4.1.1. Содержание овариальных гормонов в сыворотке крови коров в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике 88
4.1.2. Содержание эстрадиола-17[3 и прогестерона в сыворотке крови и вагинальной слизи кобыл в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике 89
4.2. Иммунные специфические и неспецифические показатели крови и естественная резистентность вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса 102
4.2.1. Т- и В-лимфоцитариые системы, неспецифические иммунные показатели крови коров и кобыл в период эструса в связи с развитием фолликула в яичнике 103
4.2.2. Естественная резистентность вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула 109
4.3. Биохимические показатели крови и вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике 131
4.3.1. Биохимические показатели крови коров и кобыл в период эструса..131
4.3.2. Биохимические показатели вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике 135
4.3.3. Содержание электролитов в сыворотке крови и вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи с развитием фолликула 151
4.3.4. Активность ферментов в сыворотке крови и вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике 165
4.4. Клетки крови (гемограмма) коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике 176
4.5. Физико-химические и органолептические свойства вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса 184
4.5.1. Кристаллизация вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике 185
4.5.2. Электрическая проводимость вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса 196
4.5.3. Органолептические свойства вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула 208
4.6. Разработка метода определения оптимального времени осеменения коров и случки кобыл 214
4.6.1. Новая комплексная методика определения оптимального времени осеменения коров на основе прибора «Репротест» 216
4.6.2. Методика определения оптимального времени случки и осеменения кобыл с использованием «Репротеста» 221
4.6.3. Производственная проверка методики на основе прибора «Репротест» по определению оптимального времени осеменения коров и кобыл в хозяйствах Рязанской области 223
4.7. Концепция функционирования репродуктивной системы коров и кобыл в период эструса (Заключение) 229
5. Выводы 236
6. Предложения производству 241
Список литературы 242
- Современное состояние и перспективы разработки методов определения оптимального времени осеменения коров и кобыл
- Органолептические и физико-химические свойства вагинальной слизи коров и кобыл
- Содержание эстрадиола-17[3 и прогестерона в сыворотке крови и вагинальной слизи кобыл в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике
- Естественная резистентность вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула
Введение к работе
Актуальность работы
Эффективное воспроизводство - важнейшая составляющая рентабельного животноводства. Статистика показывает, что экономический ущерб от бесплодия и яловости превышает потери, ианосимые животноводству всеми заразными и незаразными болезнями. Яловость коров и прохолост кобыл зачастую достигает 30-40%.
На показатели воспроизводства влияет большой комплекс внешних и внутренних факторов (Шипилов B.C., 1977; Тупиков Г.М., Калашников В.В., Захаров В.А., 1996; Володин В.А., 2001; Чомаев A.M., 2001, 2004; Джапаридзе Т.Г., 2004). Воспроизводство - одна из наиболее сложных и наукоемких отраслей, биотехника которой базируется на глубоком знании репродуктивной функции. Несмотря на давние традиции и ценное научное наследие изучения физиологии размножения животных, заложенные выдающимися учеными, ряд вопросов по-прежнему остается актуальными и значимыми. Поэтому становится очевидной потребность в дополнении базовых теорий, их уточнение и подтверждение с позиций современных знаний и методов.
Учение о половом цикле сельскохозяйственных животных складывалось поэтапно. Хорошо известны специфические поведенческие реакции самок в период осеменения, особенности проявления половой охоты, продолжительность течки и время наступления овуляции, преобразования в половых органах, видовые особенности (У. Хип,1908; А.П. Студенцов,1953; В.К. Милованов 1972; Х.И. Животков, 1952; Р.Х.Ф. Хантер 1982; Г.У. Солсбери, Н.Л. Ван Демарк, 1969). Согласно современным представлениям, основу нормального полового цикла составляют периодически повторяющиеся циклические изменения в функциональной деятельности системы гипоталамус-гипофиз-яичники, связанные с ростом и
созреванием фолликулов, овуляцией, формированием желтого тела. Составляющим компонентом изменений являются также циклические преобразования в половом тракте, многообразные физиологические сдвиги в функционировании других систем организма и поведении животных. Мы использовали именно этот подход в наших исследованиях, при разработке методики, обосновании полученных результатов, а также как основу при разработке нового метода определения функционального состояния половой системы животных и оптимального времени осеменения.
По последним научным данным, в регуляции всех жизненных
функций, наряду с нервной и гормональной системами важное место
занимает иммунная. Стоявшими у истоков нового в 60-х годах и
перспективного сегодня направления - иммунология воспроизведения - И.И.
Соколовской, А.В. Бронской (1985), А. Братановым (1975) было выявлено
регулирующее влияние иммунной системы в процессах гаметогенеза,
калацитации спермиев, оплодотворении, эмбриогенезе. Этот огромный вклад
и сегодня остается базисом данного направления в физиологии. Однако до
конца не выяснено влияние Т- и В-лимфоцитарных систем,
неспецифических факторов системного и местного иммунитета в обеспечении регуляции подготовки организма и половой системы самки к осеменению и оплодотворению.
Гормональное влияние - как основа регуляции общепризнанно. Благодаря исследованиям Ю.Д. Клинского (1977), В.В. Ельчанинова (1972), М.И. Прокофьева (1979) сегодня мы обладаем схемой эндокринных регуляторных процессов в организме животных, обеспечивающей реализацию половой функции. Однако пока остается мало известно о влиянии гормонов, особенно овариальных, на биохимические, иммунные, физико-химические процессы в организме и половой системе коров и кобыл, свойства их половых секретов. В результате не достаточно изучены механизмы функциональных преобразований в половой системе, а также
ограничена возможность разработки прогностических тестов для опосредованного изучения уровня гормонов по доступным показателям.
Половые секреты обладают большим информативным потенциалом. Оргаиолептические признаки впервые послужили основанием для использования вагинальной слизи в диагностике половой охоты и беременности животных, что с успехом было принято специалистами на производстве. В настоящее время появилась возможность изучения сложных показателей; электролитного состава слизи, ферментативной активности, факторов естественной резистентности, физических свойств современными методами. Такой широкий спектр исследований способствует пониманию сущности физиологических преобразований в половой системе и открывает перспективы разработки диагностических тестов и приборов.
Во всем мире существует проблема определения оптимального времени осеменения сельскохозяйственных животных. За давнюю историю этого вопроса предложено немало разных методов: рефлексологический метод с использованием самцов-пробников, ректальная пальпация и УЗИ -диагностика фолликулов, гормональное обследование, инструментальные методы, визуальный контроль. Однако в силу низкой объективности или больших материальных затрат большинство методов не имеют применения. Такое положение оставляет специалиста один на один с вопросом «Когда осеменять?». В результате наиболее распространенный визуальный контроль за поведением животных и внешних признаков половых выделений имеет низкую эффективность, всего 60-70%.
Обозначенные научные и практические проблемы, современный комплексный подход к исследованиям определяют актуальность нашей работы.
Цель работы: изучить функциональные особенности репродуктивной системы коров и кобыл по показателям крови и вагинальной слизи в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике,
определить закономерности и механизм физиологических процессов, разработать прибор и научно обосновать доступный на производстве метод определения оптимального времени осеменения.
В связи с целью работы были поставлены задачи:
Изучить особенности функционирования организма и половой системы коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула по комплексу показателей
Выяснить особенности обменных процессов в период эструса по биохимическим показателям крови и слизи (общий белок, его фракции, ферментативная активность)
Изучить физиологическую роль электролитов (натрия, калия, хлора, кальция) крови и вагинальной слизи в обеспечении оптимальных условий в половой системе для осеменения и оплодотворения
Выяснить механизм влияния иммунных специфических (Т- и В-лимфоцитарных систем крови, иммуноглобулинов) и неспецифических (функциональная активность нейтрофилов, бактерицидная активность, лизоцим) факторов на функциональное состояние половой системы, в создании оптимальных условий для оплодотворения
Провести анализ изучаемых показателей в связи с уровнем основных овариальных гормонов - эстрадиола-17(3 и прогестерона в сыворотке крови коров и кобыл в период эструса по стадиям развития фолликула
Изучить влияние функционального состояния половой системы коров и кобыл в период эструса на физико-химические свойства вагинальной слизи по показателям кристаллизации и электропроводности, а также органолептические признаки
Разработать новый прибор и методику для определения оптимального времени осеменения коров и случки кобыл, дать научное обоснование его показателям и определить возможности использования, провести производственную проверку
Научная новизна работы
Впервые проведены комплексные исследования показателей крови и
вагинальной слизи по изучению функциональных особенностей
репродуктивной системы коров и кобыл в период эструса в связи со
степенью зрелости фолликула. Установлены новые закономерности и
представлен механизм физиологических преобразований при подготовке к
осеменению и оплодотворению.
Впервые определена взаимосвязь показателей Т- и В- лимфоцитарных систем крови коров и кобыл в период эструса с функциональным состоянием половой системы. Так, предовуляторное повышение, а затем частичное их торможение и перераспределение к овуляции обусловливает развитие иммунной толерантности как важного механизма, обеспечивающего осеменение и оплодотворение.
Установлены новые закономерности проявления функциональной активности иейтрофилов крови коров и кобыл по НСТ-тесту в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула.
Впервые определены закономерности формирования местной естественной резистентности в половой системе коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула и определены механизмы ее влияния в создании оптимальных условий для осеменения и оплодотворения.
Впервые установлена физиологическая роль ферментов вагинальной слизи коров и кобыл, как показателей, характеризующих течение цитохимических процессов в половой системе. Повышение активности ос-амилазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы в вагинальной слизи указывает на интенсивный углеводный обмен, что связано с активным функциональным состоянием репродуктивной системы в период эструса.
Выявлена физиологическая роль электролитов в создании оптимальных условий для оплодотворения. Впервые установлено соотношение электролитов в слизи, которое определяет создание оптимальных физико-химических и осмотических свойств вагинальной слизи, проницаемости клеточных мембран в плане подготовительных процессов к осеменению и оплодотворению.
Впервые установлена связь кристаллизации вагинальной слизи кобыл и коров с уровнем эстрадиола-17р в период эструса по стадиям развития фолликула в яичнике, разработаны критерии оценки кристаллизации мазков для определения оптимального времени осеменения.
Разработан принципиально новый прибор «Репротест» (патент № 2241375) для определения оптимального времени осеменения, основанный на проводимости вагинальной слизи в неоднородном электрическом поле. Показатели электропроводности у коров и кобыл закономерно менялись в связи со степенью зрелости фолликула. Дано научное обоснование его результатов и определена возможность оценки степени зрелости фолликула, овуляторной и гормональной функции яичников, физиологического состояния репродуктивной системы коров и кобыл.
Разработана комплексная методика определения оптимального времени осеменения коров и случки кобыл на основе прибора «Репротест». Методика научно обоснованна, объективна, безболезненна и не вызывает стресс у животных, доступна на производстве. Ее применение позволило быстро и достоверно определять оптимальное время осеменения коров и случки кобыл, с учетом индивидуальных особенностей животных и добиваться повышения оплодотворясмости.
Практическая значимость и реализация результатов
В работе дано современное научное представление о функциональных особенностях репродуктивной системы коров и кобыл в период эструса, в связи с развитием фолликула в яичнике. Доказано, что по вагинальной слизи - (кристаллизации, электропроводности, органолептическим признакам), можно определить функциональное состояние половой системы, степень зрелости фолликула и время осеменения. На этом основании разработан прибор, методика и алгоритм действий по определению времени осеменения коров и кобыл.
Разработан принципиально новый прибор «Репротест» (патент на изобретение способа для определения периода овуляции и устройство для его реализации МГІК 7 А 61 В5/05 10/10 per. номер заявки 2003109461, патент № 2241375 от 13.12.2004, Бюллетень № 34 2004г.). С помощью прибора по электропроводности вагинальной слизи можно быстро и точно определять время осеменения коров или случки кобыл, тем самым повысить оплодотворяемость животных.
Для специалистов по воспроизводству разработаны «Рекомендации по определению оптимального времени осеменения коров и кобыл» (Баковецкая О.В., Рязань, 2006), утверждены Областным управлением сельского хозяйства и продовольствия Рязанской области и ОАО «Рязанское» по племенной работе.
Научные положения диссертационной работы и практические предложения нашли отражение в монографии «Концепция функционирования репродуктивной системы коров в период эструса и биотехнологический контроль воспроизводства».- Рязань, 2005.
Современное состояние и перспективы разработки методов определения оптимального времени осеменения коров и кобыл
Одним из важных ключевых моментов в контроле межотельного цикла является своевременное, желательно однократное, осеменение коров и кобыл. Вместе с этим тесно связана проблема выбора оптимального времени осеменения. Искусственное осеменение должно рассматриваться не только как насущная потребность, но и в перспективе как этап биотехнологического процесса получения клонированных и трансгеиных животных, что усиливает актуальность этого вопроса (BensonM.,1988, Duszewska A.M.,2000).
Разработка методов определения оптимальных сроков осеменения коров - одна из актуальных проблем воспроизводства на протяжении многих десятилетий, со времен разработки и производственного внедрения искусственного осеменения И.И.Ивановым, В.К. Миловановым. Учеными и практиками были предложены самые разные методы. Исторически первыми были методы визуального контроля за поведением животных по характерным признакам в период охоты. Однако визуальный контроль, особенно в зимне-стойловый период имеет низкую эффективность и желательно применять его в комплексе с другими методами. В связи с этим ряд ученых указывали на необходимость использования быков-пробников как единственно надежного выявителя коров в охоте, и свести осеменение до однократного (Шипилов В.К., 1970, Студенцов А.П., 1970). В сравнение с коровами - выявительницами (эффективность всего 84%) и визуальным контролем техника искусственного осеменения (50-70 %) эффективность использования быка пробника возрастает до 99% (Баталии Е.Ю., 1997, Семков М, 1999). В коневодстве использование жеребцов-пробников рекомендовано и распространено гораздо шире, половую охоту выявлябт проведением «пробы». Но ученые продолжили поиск других способов анализа поведения. Предложен детектор охоты у коров (США) по интенсивности окраски тестера (капсулы), открывающегося при давлении на крестец при вспрыгивании других коров (Соколовская И.И., 1971). На основании изменения двигательной активности в период охоты изобретен шагомер (Anon J., 1986). Известны исследования по разработке радиоэлектронных детекторов с дисплеем двигательной активности коров с выведением данных на центральный компьютер (Thompson P.P., 1983). AT. Peter, W.T.K. Bosu (1986) показывают высокую эффективность использования педометров (датчиков двигательной активности) в целом из 91 происшедшей овуляции 69 (76%) предсказаны показаниями педометра и только 32 (35%) - по внешним признакам опытным наблюдателем. В Японии также разработаны датчики поведения коров (Dohi Н., 2002). Последние сообщения свидетельствуют о том, что в США продолжаются разработки в направлении создания электронной системы радиотелеметрического наблюдения за коровами для определения эструса и назначения оптимального времени для осеменения (Dairy Sc, 1998, Nebel R.L., 2000). В США эти методы показывают высокую эффективность в диагностике эструса зо до 98 %. Все это заслуживает большого внимания и анализа, но для России пока это лишь перспектива. Выяснение механизмов гормональной регуляции половых процессов и установление ведущей роли яичников привело к появлению метода ректальной пальпации яичников (Кедров В.К., 1956, Животков Х.И., 1970). Действительно, это объективный метод оценки функционального состояния яичников, степени развития фолликула и близости овуляции. В связи с этим и ректоцервикальный способ искусственного осеменения является наиболее эффективным (Субботин А.Д., 1998, 2001). Однако, на практике метод ректальной диагностики трудоемок, негигиеничен, его частое использование вызывает дискомфорт у животного и эффективность его варьирует от 25 до 60 %, что напрямую связано со степенью квалификации специалиста (Соколовская И.И., 1990). Ряд ученых отмечают нежелательное постоянное использование метода ректальной пальпации в связи с тем, что появляется опасность деформации яичника, сдвига бахромки яйцевода, что может нарушить процесс оплодотворения. B.C. Шипилов, В.К. Копытин (2004) считают, что этот метод у коров вообще не может использоваться в силу того, что на протяжении всей стадии возбуждения растущий фолликул, а определить его стадию удается не всегда точно. Однако у кобыл установление стадии развития фолликулов в яичнике является обязательным условием ведения случной компании и проведения осеменения или случки, поэтому без ректальной пальпации пока обойтись нельзя. Это предотвращает избыточную нагрузку на жеребца в ходе длительной половой охоте (до 12 суток), а также сенсибилизацию спермиев в половых путях кобылы. Бурное развитие технических средств диагностики в медицине привело к появлению УЗИ - исследования. В развитых странах широко используется УЗИ и в ветеринарной практике, так как позволяет достоверно оценить состояние яичников, стадию развития фолликула и матки (Jann J., 1998; Alimers Е.,1999; CarciaA,e.a.,1999). Канадские ученые R. Rajamahendran, С. Taylor (1990) рекомендовали для характеристики активности яичников у молочных коров после отела использовать ультразвуковое исследование и анализ концентрации прогестерона в плазме крови и молоке.
Органолептические и физико-химические свойства вагинальной слизи коров и кобыл
Физико-химические и органолептические показатели вагинальной слизи коров и кобыл послужили основанием для использования этого исследовательского материала в клинической диагностике. Наряду с другими методами, в частности, ректальным обследованием, анализ органолептических свойств вагинального содержимого начали применять в отечественных конных заводах еще с 30-х гг. нашего века. Исследователями, обращавшимися к этому вопросу, были рассмотрены такие показатели, как рН, электропроводность, вязкость, а также - количество, цвет, консистенция (Волосков П.А., 1936, Животков Х.И.,1952,Горбунов Ю.А.,1995, Bishnoi B.L., et.al.,1983, Radhakrishnan В.; RamanS.R.P.,1987, Jaskowski Ш.,1995). Самые внешние признаки, которые фиксируются при любом гинекологическом обследовании - органолептические, были изучены наиболее полно. В период, предшествующий охоте, количество влагалищной слизи увеличивается и ее консистенция становится более жидкой (Чернов В.И.Д936). Наиболее яркие изменения вагинальный секрет претерпевает в период охоты. В самом начале его количество еще незначительно, он полупрозрачен, приобретает соломенно-желтый цвет, становится жидким. В середине охоты - влагалищная слизь кобыл отличается прозрачностью, большим количеством (Тарасевич А.Ю.,1936, Волосков П. А., 1940, Буйко A.M.,1961). К овуляции - слизь наиболее прозрачна, в большом количестве. А после этого она вновь становится более густой, менее прозрачной и значительно в меньшем количестве (Волосков П.А.,1936, Тарасевич А.Ю.,1936, Буйко А.Н.,1961, Студенцов А.П.,1970). Анализ органолептических признаков вагинальной слизи коров в охоту показал идентичную картину (Полищук В.П.,1966). Физико-химические свойства влагалищного секрета кобыл и других сельскохозяйственных животных также характеризуются определенными изменениями в ходе полового цикла. Так, вязкость влагалищной слизи кобыл в период диэструса значительно выше, чем в последующие стадии полового цикла. В это время секрет вязкий, липкий, широко тянется между пальцев. В охоту вязкость влагалищной слизи постепенно снижается, достигая минимума к овуляции (Тарасевич А.Ю.,1936; Животков Х.И.,1952; Буйко А.Н.,1961; Студенцов А.П.). Динамика этого показателя по В.П. Волоскову (1936), иная. Так, по мнению автора, нарастание вязкости происходит к концу охоты, достигая наивысших значений к моменту овуляции. Вероятно, такая тенденция, противоречащая данным других авторов, связана с недостоверным определением стадий полового цикла и момента овуляции.
У коров вязкость вагинальной слизи в охоту снижается до 2-2,5 против фазы покоя, где она составляет до 20 единиц (Васильева К.Н., 1959,1957; Соколовская И.И. и др.,1991). Уровень рН влагалищной слизи кобыл так же не является стабильным. Так, в начале охоты А.П.Волосков (1936) отмечает этот показатель на уровне 7,4-8,0. К середине - 6,2-6,8, к концу - вновь увеличение до 7,0-7,4. Во время овуляции А.Ю. Тарасевич (1936) установил значение рН, равное 7,8-8,2. По данным А.Н. Буйко (1961) при 3-4 степени зрелости фолликула этот показатель составил 8,57, а спустя 81-130 ч. после овуляции - 7,98, то есть некоторое закисление среды. Укоров за 27-21 час до овуляции рН вагинальной слизи близок к 7,01, к овуляции происходит сдвиг в щелочную сторону до 7,3-7,6 (Паршутин Г.В.,1952; Жаркий В.В,,1967). S. Asolra, et.al. (1985) определяют рН слизи во время эструса выше 8,1. Исследования, проведенные на мышах выявили, что показатель рН подходит к нейтральному в стадию эструса. В проэструс отмечают защелачивание среды влагалища до 7,31. При беременности рН секретов полового тракта мышей имеет тенденцию к закисленню (Дмитриева Л.В. и ДР-,1971). По данным Х.И. Животкова (1952), Д.Д. Логвинова, В.Г. Бирюкова (1973) с наступлением жеребости, в связи с рядом гормональных и морфофункциональных перестроек, изменяются и свойства вагинальной слизи кобыл. При наступлении беременности она тускнеет, делается более вязкой, мутной, тягучей. Количество ее с течением жеребости уменьшается, она становится гуще, серого цвета, полупрозрачной, а через 3 недели теряет тягучесть и становится более клейкой и вязкой. Показатель рН слизи вначале близок к 7,0, а через три недели реакция становится слабокислой. Более того, при наличии воспалительных процессов в половом тракте самок отмечено, что влагалищная слизь кобыл имеет жидкую консистенцию, мутный оттенок и незначительную вязкость, тянется между пальцев. В большинстве случаев наблюдается нейтральная или слабощелочная реакция (Растяпин И.Т., Рязанцева Н.М., 1961), С развитием науки и техники происходило усовершенствование методов диагностики стадии полового цикла и клинического состояния половых органов сельскохозяйственных животных, основанных на использовании свойств вагинальной слизи.
Содержание эстрадиола-17[3 и прогестерона в сыворотке крови и вагинальной слизи кобыл в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике
У кобыл в сыворотке крови мы также провели исследование содержания эстрадиола-17В и прогестерона в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике. Как видно из таблицы 3, в начале охоты, при ф1 уровень эстрадиола-17В низкий - 7,59±1,92 пг/мл, при переходе к ф2 существенно повышался до 24,09±2,56 пг/мл, а в предовуляторный период составлял 62,3±5Д7 пг/мл. Овуляция проходила при низком значении этого гормона- 12Д9±1,69 пг/мл. Таблица З Динамика эстрадиола-17В и прогестерона в сыворотке крови кобыл в период эструса (п= 35) Показатель гормонов Концентрация гормонов в период эструса по стадиям развития фолликула Ф1 Ф2 ф ов Эстрадиол-17 6,пг/мл 7,59+1,92 24,09±2,56 62,3±5,17 12,19±1,69 Прогестерон, нг/мл 0,92±0,4 1,65±0,3 0,92±0,15 0Д1±0,06 Р 0,01-0,001 Уровень прогестерона на всем протяжении охоты у кобыл оставался низким в интервале от 1,65±0,3 нг/мл в ф2 до 0,11 ±0,06 в овуляции, при этом снижение прогестерона было достоверным. Впервые нами проведено исследование эстрадиола-173 в вагинальной слизи кобыл. В результате установлено, что в вагинальной слизи кобыл присутствует эстрадиол-17[3 и его концентрация в ходе полового цикла не стабильна (табл.4). В начале охоты ( ф1) она составляла 966,85 ± 132,75 пг/мл, затем ( ф2) концентрация эстрадиола увеличивалась до 1447,23 ± 160,37 пг/мл (Р 0,05). Таблица 4 Содержание эстрадиола-17[3 в вагинальной слизи кобыл в период эструса (п = 19) показатель гормонов - ... - ..концентрация гормонов в период эструса по стадиямразвития фолликула Ф1 Ф2 ф-4 ов Эстрадиол-17В,пг/мл 966,85± 132,75 1447,23±160,37 3025,72 ±47,23 2349,73 ± 25,8 Р 0,01-0,001 В предовуляторный период (фЗ-4) содержание эстраднола продолжало возрастать до максимальных величин в половом цикле 3025,72 ± 47,23 пг/мл (РО.001). В период овуляции уровень эстрадиола-17р в слизи снижался до 2349 ±325,8 пг/мл (Р 0,05). і Обсуждение В результате проведенных исследований и полученных результатов, анализа научных трудов многих ученых нам удалось выявить закономерности и установить механизмы и функционирования репродуктивной системы коров и кобыл в период эструса. Под эструсом мы понимаем весь комплекс внешних и внутренних проявлений половой активности, связанных с фолликулярной фазой процессов, направленных на создание в организме самки и ее половых органах благоприятных условий для оплодотворения.
По нашим данным эстрадиол в крови коров при фЗ-4 незадолго до овуляции возрастал в несколько раз от начала эструса до - 21,42 пг/мл (рисунок 7). Это находило свое отражение на поведении («половая охота», рефлекс неподвижности) и признаках вагинальной слизи, на всем комплексе подготовительных процессов к осеменению и оплодотворению в половом аппарате и во всем организме. Такую взаимосвязь отмечали многие исследователи (Сухих, В.Ф. 1966; Henricks D.M.,1984; Thomson D.L.,1987; Rauluszkiewicz S. ,et.ai.,1988; ItohT.,et.al.;2002, Lopez H.,2002). А.Г. Нежданов, К.А. Лободян (2005) сообщали, что в период эструса, в состоянии половой охоты эстрадиол у коров составлял 27,8-38,4 пг/мл. Полученные нами данные несколько ниже приведенных, но в целом находились в том же порядке.
Однако ряд авторов указьтвали на возрастание эстрадиола - 17(3 у коров в период течки за 1-2 дня до охоты, а ко времени ее наступления некоторое или даже существенное снижение (Прокофьев М.И.,1975; Алиев А.А. и др., 1988; Соловьев Н.А., 1989; Hansel W., Beal W.,1972). На наш взгляд разночтения связаны с неточностью установления стадии полового цикла, без учета степени зрелости фолликула, а также однократным исследованием в охоту. В связи с этим если усреднить наши данные, то уровень эстрадиола в крови был бы в этот период действительно достаточно низким всего около 10 пг/мл. Однако в интервале этого среднего значения нами выявлена закономерная динамика уровня эстрадиола в связи со степенью зрелости фолликула и функциональным состоянием половой системы, которые менялись в этот период стремительно и за ними сложно уследить и их прогнозировать. Индивидуальный подход к каждому животному и использование комплекса взаимосвязанных дополняющих друг друга показателей, определяющих состояние половой системы, позволили решить эту проблему. В тоже время после охоты, ко времени овуляции нами отмечено снижение эстрадиола до 5,76 пг/мл. Практически все авторы, как и мы, отмечали уменьшение эстрогенного фона, но при этом приводили разные показатели: Н.А. Соловьев (1989) до 17-19 пг/мл, А.Гордон (1990)-ниже 3 пг/мл. I
Содержание прогестерона у коров на протяжении всего эструса было низким, менее 1 нг/мл. Это согласуется с данными Н.И. Полянцева (1984), М.И. Прокофьева (1975), Н.А. Соловьев (1989), С.А. Moms, et.al.(1987), Т.Т. Stumpf (1988). Однако, проведя исследования по стадиям зрелости фолликула, нам удалось выявить ряд важных дополнений в виде закономерного снижения к овуляции. Овуляция также как и в случае эстрадиола проходила при низких значениях прогестерона 0,31±0,03нг/мл. Это подтверждает нормальное течение и полноценность полового цикла.
Таким образом, выявленный уровень эстрадиола-17(3 и прогестерона, их закономерная динамика указывает на нормальное протекание эструса, полноценный половой цикл. Это согласуется с новыми данными автора A.R. Rabiee, et.al. (2002), который отмечал заметные отклонения в содержании половых гормонов в сыворотке крови коров только при патологических состояниях,
Естественная резистентность вагинальной слизи коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула
Кроме системного нами изучены процессы местного иммунитета половой системы по неспецифическим показателям (естественной резистентности) вагинальной слизи коров и кобыл. У кобыл определено содержание лизоцима, бактерицидной активности вагинальной слизи. Местные факторы неспецифического иммунитета имели более выраженную тенденцию, чем аналогичные показатели в крови. Таблица 9 Показатели естественной резистентности вагинальной слизи кобыл (п=84) Показателиестественнойрезистентностислизи Содержание показателей в период эструса по стадиям развития фолликула Ф1 Ф2 ф ов Лизоцим, мкг/мл 4,32±0,22 7,06±0,25 15,8 ±0,35 2,84±0,16 Бактерицидная активность, % 7,65±0,38 16,79±0,31 26,50±0,29 12,26+0,34 - Р 0,05 - 0,001 Так, нами впервые установлена концентрация лизоцима в вагинальной слизи кобыл и характер ее динамики в период эструса в связи со степенью по зрелости фолликула (табл. 9). Установлено, что концентрация лизоцима возрастала в период эструса. Так, в начале (ф1) она составляла 4,32 ± 0,22 мкг/мл, затем (ф2 ) - увеличивалась до 7,06±0,25 мкг/мл (Р 0,001). Максимальное значение отмечено в предовуляторный период, стадию ф 3-4 -15,80 ± 0,35 мкг/мл (Р 0,001). В период овуляции происходило резкое снижение концентрации лизоцима в слизи до 2,84±0Д6 мкг/мл. Вероятно, именно такое минимальное значение лизоцима необходимо для создания оптимальных условий для оплодотворения. Бактерицидная активность вагинальной слизи кобыл в период эструса имела тенденцию к повышению. В самом начале (ф1) она составляла 7,65± 0,38%, далее ( ф2 ) возрастала до 16,79±0,31% (Р 0,001). В период максимальной зрелости фолликула (фЗ-4) бактерицидная активность слизи резко увеличивалась до 26,50±0,29 % (Р 0,001). В период овуляции отмечено быстрое падение бактерицидной активности слизи -12,26 ± 0,34 % (Р 0,001). Данный факт можно рассматривать как биологическую закономерность, способствующую созданию в половых путях оптимальных условий для оплодотворения. У коров в начале эструса содержание лизоцима в вагинальной слизи коров было 6,53±0,60 мкг/мл, отметим, что это самый низкий его уровень (табл. 10). Очень скоро, концентрация лизоцима существенно возрастала до 12,53±0,74 мкг/мл, а в предовуляторный период составляла 22,49±1,13 мкг/мл. В овуляцию происходило достоверное снижение в 2 раза уровня лизоцима до 10,90±0,68 мкг/мл. ПІ Таблица 10 Показатели естественной резистентности вагинальной слизи коров Показателиестественнойрезистентностислизи Содержание показателей в период эструса по стадиям развития фолликула Ф1 ф2 ф3 ОБ Бактерициднаяактивность,%(п=66) 5,09 ±0,67 10,08 ±0,55 Ї5,88±0,72 9,31± 0,54 Лизоцим, мкг/мл(п=47) 6,53±0,60 12,53±0,74 і 22,49±ЦЗ 10,90±0,68 Р 0,001 Анализ бактерицидной активности слизи коров в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула показал следующие результаты (табл. 10). Так, в самом начале эструса бактерицидная активность слизи коров низкая 5,09 ±0,67%, затем достоверно возрастала до 10,08±0,55%, а в предовуляторныи период - до 15,88±0,72%. Повышение бактерицидной активности и лизоцима в слизи в пердовуляторныи период указывает на активацию неспецифических факторов местной естественной резистентности в половой системе коров в период охоты. Обсуждение Основная функция иммунной системы заключается в поддержании генетического единства, гомеостаза внутренней среды организма. По последним научным данным, жизненные процессы в организме млекопитающих регулируются интегральной нейроэндокриноиммунной системой (Нежданов А.Г.,1994). То есть иммунная система вместе с нервной и эндокринной системами принимает активное участие в обеспечении функционирования репродуктивной системы на оптимальном уровне (Соколовская И.И., Милованов В.К.,1981; Соколовская И. И., 1976,1994; Говалло В.И.., 1989). Однако анализ литературных источников показал недостаточную изученность иммунных показателей и факторов неспецифической защиты животных в связи с функциональным состоянием репродуктивной системы, особенно в период эструса. Такая новая информация необходима для полной характеристики физиологических процессов в период подготовки организма самок к осеменению и оплодотворению, то есть, важна в теории физиологии воспроизведения, а также для разработки методов определения оптимального времени осеменения, совершенствования диагностики и лечения гинекологических заболеваний.
Мы впервые проанализировали специфические иммунные факторы крови коров и кобыл в период эструса и установили, что по мере роста и созревания фолликула в яичнике все показатели находились на высоком уровне, но при этом характеризовались закономерной динамикой. Так, в крови кобыл Т-общие от начала охоты продолжали достоверно возрастать и при OJ" достигали 42,26±1,17%,Т- хелперы оставались на тех же значениях -28,67±0,95% (рисунок 11). Важно отметить, что Т-супрессоры в предовуляторный период повышались резко, более чем в 2 раза, по сравнению с начальным уровнем до 13,58±0,82%. У коров также достоверно возрастала концентрация Т-общих до 55,62±0,86%, Т-хелперов до 42,0±0,92%. Т-супрессоры, в свою очередь, поднявшись в начале эструса, пока оставались на прежнем уровне 12,95±0,60% (рисунок 12). В-лимфоциты у коров были относительно стабильны- 48514±1,38%.
