Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Механизмы, обеспечивающие естественную резистентность и иммунный статус сельскохозяйственных животных 9
1.2. Морфологические и биохимические показатели крови животных - индикаторы состояния гомеостаза 21
1.3. Радиоэкологическая характеристика Брянской области и механизм действия ионизирующих излучений 35
1.4. Особенности пищеварения и микробиоценоза кишечника у телят . 44
1.4.1. Микрофлора желудочно-кишечного тракта телят. 44
1.4.2. Основные представители микрофлоры пищеварительного тракта телят. 48
1.5. Общая характеристика пробиотиков. 55
2. Собственные исследования. 69
2.1. Материал и методы исследований. 69
2.2. Результаты исследований 76
2.2.1. Эффективность использования у телят с суточного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-1010 КОЕ/гол. и 4,0-1010 КОЕ/гол. в сутки. 76
2.2.1.1. Влияние выпаивания телятам с суточного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-1010 КОЕ/гол. и 4,0-1010 КОЕ/гол. в сутки на гемограмму. 76
2.2.1.2. Влияние выпаивания телятам с суточного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-1010 КОЕ/гол. и 4,0-1010 КОЕ/гол. в сутки на уровень естественной резистентности. 79
2.2.1.3. Влияние выпаивания телятам с суточного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-1010 КОЕ/гол. и 4,0-1010 КОЕ/гол. в сутки на иммунный статус. 83
2.2.1.4. Влияние выпаивания телятам с суточного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-1010 КОЕ/гол. и 4,0-1010 КОЕ/гол. в сутки на микробиоценоз и живую массу. 86
2.2.1.5. Влияние выпаивания телятам с суточного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-1010 КОЕ/гол. и 4,0-1010 КОЕ/гол. в сутки на биохимические показатели. 88
2.2.2. Эффективность использования у телят с суточного возраста. пробиотического препарата в дозе 8,0-10 КОЕ/гол. в сутки. 91
2.2.2.1. Влияние выпаивания пробиотического препарата в дозе 8,0-10ш КОЕ/гол. в сутки на гемограмму подопытных телят. 91
2.2.2.2. Влияние выпаивания пробиотического препарата в дозе 8,0-10 КОЕ/гол/сутки на уровень естественной резистентности телят. 93
2.2.2.3. Влияние выпаивания пробиотического препарата в дозе 8,0-10шКОЕ/г на иммунный статус телят. 96
2.2.2.4. Влияние выпаивания пробиотического препарата в дозе 8,0-10 КОЕ/гол/сутки на биохимические показатели крови телят. 98
2.2.2.5. Влияние выпаивания пробиотического препарата в дозе 8,0-10 КОЕ/гол/сутки на микробиоценоз и живую массу телят. 102
2.2.3. Влияние выпаивания пробиотического препарата в дозе 8,0-10 КОЕ/гол/сутки на микробиоценоз и живую массу телят 1.5-месячного возраста. 104
2.2.4. Эффективность использования с 1,5-месячного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-10 КОЕ/гол/сутки у телят содержавшихся на территории с повышенной плотностью загрязне-1 ~Мния почвы Cs. 106
2.2.4.1. Влияние выпаивания телятам с 1,5-месячного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-10 КОЕ/гол/сутки на гемограмму. 106
2.2.4.2. Влияние выпаивания телятам с 1,5-месячного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-10 КОЕ/гол/сутки на уровень естественной резистентности. 111
2.2.4.3. Влияние выпаивания телятам с 1,5 месячного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-10 КОЕ/гол/сутки на иммунный статус. 119
2.2.4.4. Влияние выпаивания телятам с 1,5-месячного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-10 КОЕ/гол/сутки на биохимические показатели крови. 123
2.2.4.5. Влияние выпаивания телятам с 1,5-месячного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-10 КОЕ/гол/сутки на микробиоценоз кишечника и живую массу. 128
Обсуждение полученных результатов. 132
Выводы 141
Практические предложения. 143
Список литературы 144
Список сокращений 188
Приложения 189
- Морфологические и биохимические показатели крови животных - индикаторы состояния гомеостаза
- Особенности пищеварения и микробиоценоза кишечника у телят
- Влияние выпаивания телятам с суточного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-1010 КОЕ/гол. и 4,0-1010 КОЕ/гол. в сутки на гемограмму.
- Влияние выпаивания пробиотического препарата в дозе 8,0-10ш КОЕ/гол. в сутки на гемограмму подопытных телят.
Введение к работе
Актуальность работы.
Развитие молочного скотоводства во многом зависит от культуры выращивания молодняка крупного рогатого скота, высокий уровень которой можно достичь только при научно-обоснованном полноценном кормлении и надлежащем уходе. Однако повышение требований к уровню продуктивности животных и его качеству, связанные с интенсификацией производства, усилило техногенную и антропогенную нагрузку на организм молодняка, что привело к снижению уровня их биологической защиты и ослаблению физиологических систем, в том числе пищеварительного тракта (В.Р. Хусаинов, 2005; А.Г. Шахов, 2002).
В условиях неблагополучной экологии, технологических стрессов у животных нарушается микробиоценоз кишечника, снижается активность защитных механизмов организма (уровень естественной резистентности и иммунный статус), что способствует возникновению незаразных и заразных заболеваний, снижению продуктивности и развитию дисбактериоза (И.В. Валышева, М.В. Сычёва, Л.Ф. Сулеева, О.Л. Карташова, А.В. Валышев, 2011). В раннем постнатальном онтогенезе, когда роль пассивного иммунитета снижается, а формирование собственного – находится в начальной стадии развития, организм молодняка остается слабо защищенным. Именно в этот период у животных, в первую очередь, резко снижается уровень бифидо- и лактофлоры, что приводит к увеличению содержания в желудочно-кишечном тракте количества условно патогенных микроорганизмов. В результате дисбиотических явлений нарушается обмен веществ, снижается уровень иммунной защиты организма, возникают желудочно-кишечные, респираторные и другие заболевания, а в дальнейшем – потеря продуктивности (А.Н. Панин, и др., 1998). При выявлении дисбиоза кишечника одним из рациональных методов коррекции является стимуляция роста нор-мофлоры, в том числе лактобацилл.
Степень ее разработанности.
В настоящее время одним из новых направлений в животноводстве является изучение и использование пробиотиков вместо традиционных антибиотиков. Пробиотики - препараты, содержащие живые микроорганизмы, относящиеся к нормальной, физиологически и эволюционно обоснованной флоре кишечного тракта, и оказывающие положительное влияние на организм животного. Применение пробиотиков способствует повышению иммунитета, восстановлению нормального пищеварения и улучшению переваримости питательных веществ (В.В. Смирнов, 1982, 1998; Б.В. Тараканов, 1997, 1998, 2006; R. Fuller, G.R. Gibson, 1998; G.T. Macfarlane, 1999; С.А. Стегний, Б.Т. Гужвинская, 2005; D. Richardson, 2006). При этом снижается заболеваемость желудочно-кишечными заболеваниями, количество фармакологических обработок и связанные с ними материальные издержки, в связи с чем, их еще рекомендуют использовать в качестве кормовых добавок – биологических регуляторов метаболических процессов в организме животного (Л.К. Эрнст, 1996; В.С. Зернов, 1998; Н.И. Малик, и др., 2001, 2006; М.А. Сидоров, В.В. Субботин, Н.В. Данилевская, 2000; Ю. Алямкин, 2005; Е.Д. Шинкаревич, 2008; А.В. Олейник, 2009). Поэтому изучение эффективности новых пробиотических препаратов, в отношении повышения активности защитных механизмов организма телят и их продуктивности является актуальным исследованием. Комплексный пробиотик на основе молочнокислых бактерий является новой разработкой лаборатории Биотехнологии микроорганизмов пищеварительного тракта.
Цель и задачи исследований.
Целью исследования являлось изучение влияния комплексного препарата на основе молочнокислых бактерий на функциональную активность защитных механизмов организма телят в зависимости от схем и условий его применения.
Задачами исследования являлось изучение влияния комплексного пробиотического препарата на основе молочнокислых бактерий при различных дозах и схемах его применения у телят с 1-суточного и с 1,5-месячного возраста, в том числе в условиях с повышенной плотностью загрязнения почвы 137Cs на:
гемограмму;
уровень естественной резистентности организма;
иммунный статус организма;
биохимические характеристики гомеостаза;
микробиоценоз толстого кишечника;
динамику живой массы и среднесуточные приросты.
Научная новизна работы.
Впервые предложено научное обоснование использования в технологии выращивания телят нового пробиотического препарата на основе лактобактерий. Выявлено, что выпаивание телятам с 1-суточного возраста пробиотического препарата во всех изученных дозах вызывает тенденцию к оптимизации микробиоценоза толстого кишечника, без существенного влияния величины дозы, но при этом обусловливает развитие стрессорной реакции. Установлено, что выпаивание телятам пробиотического препарата на основе молочнокислых бактерий с 1-суточного возраста в дозах 2,01010 и 8,01010 КОЕ/гол/сутки; сопровождается активизацией механизмов естественной резистентности, повышением иммунного статуса за счет гуморального звена, оказывает положительное влияние на увеличение среднесуточных приростов. Выявлено долгосрочное действие препарата на продуктивность 1,5 месячных телят (достоверное повышение среднесуточных приростов отмечено только через месяц после окончания выпаивания препарата). Установлено, что применение препарата с 1,5-месячного возраста не вызывает у телят стрессорной реакции при активизиза-ции наиболее широкого спектра защитных механизмов организма.
Теоретическая и практическая значимость работы.
Полученные результаты комплексных исследований состояния защитных систем организма у молодняка крупного рогатого скота и их изменения под действием препарата при различных дозах, схемах и условиях расширяют и углубляют уже имеющиеся данные о действии пробиотиков на гомеостаз животных. Установлена наиболее оптимальная дозировка данного препарата, при которой он активизирует наиболее широкий спектр защитных механизмов организма и повышает среднесуточные приросты телят.
Публикация результатов исследования.
По материалам диссертации опубликовано 10 статей, в том числе 5 из них в центральных рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.
Положения, выносимые на защиту:
-
Выпаивание телятам с 1-суточного возраста пробиотического препарата в дозах 2,01010, 4,01010, 8,01010 КОЕ /гол/сутки вызывает тенденцию к оптимизации микробиоценоза толстого кишечника, но при этом обусловливает развитие стрессорной реакции.
-
Выпаивание пробиотического препарата с 1-суточного возраста в дозах 2,01010 и 8,01010 КОЕ/гол/сутки сопровождается активизацией механизмов естественной резистентности, повышением иммунного статуса за счет гуморального звена, оказывает положительное влияние на увеличение среднесуточных приростов.
-
Выпаивание телятам препарата с 1,5 месячного возраста в течение 20 суток в дозе 8,01010 КОЕ/г/гол обусловливает оптимизацию микробиоценоза толстого кишечника и способствует повышению среднесуточных приростов живой массы только через месяц после окончания его применения.
4. Использование препарата с 1,5 месячного возраста телят в условиях с повышенной плотностью загрязнения почвы 137Cs в течение 20 суток в дозе 2,01010 КОЕ/г/гол обусловливает повышение уровня естественной резистентности и иммунного статуса организма, а также оптимизирует микробиоценоз толстого кишечника.
Апробация работы.
Основные результаты диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на: 1. Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства» (Новочеркаск, 2011.); 2. Международной научно-практической конференции, посвященной 30-летию образования кафедры кормления, разведения и генетики с.-х. животных и памяти первому ректору Брянской государственной сельскохозяйственной академии Е.П. Ващекину «Современные проблемы развития животноводства» (Брянск, 2012.); 3. 29-ой научно-практической конференции студентов и аспирантов «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения её качества» (Брянск, 2014.); 4. 7-ой международной научно-практической конференции «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных» (Краснодар, 2014).
Структура и объем работы.
Морфологические и биохимические показатели крови животных - индикаторы состояния гомеостаза
Щелочная фосфатаза содержится во многих тканях животных, особенно ее много в слизистой оболочке кишечника, остеобластах, стенках желчных протоков печени, плаценте и лактирующей молочной железе. Она катализирует отщепление фосфорной кислоты от ее органических соединений. Находится она на клеточной мембране и принимает участие в транспорте фосфора, обеспечивает выход глюкозы из клеток. Уровень активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови в норме составляет 1,2-5 ед. Бодански, или 0,4-1,4 мкмоль/мл за 1 час инкубации при 37С, или 110-390 нмоль/смі. Значительное повышение активности щелочной фосфатазы наблюдается при холестазе, кишечных бактериальных инфекциях. Нормальное или незначительно увеличенное содержание щелочной фосфатазы в крови отмечается при вирусном гепатите, интенсивном росте костной ткани у молодняка. Снижение активности фермента наблюдается при гипотиреозе, анемии (Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун, 2002; И.П. Кондрахин, А.В. Архипов, В.И. Левченко, 2004).
Перекисное окисление липидов (ПОЛ) является обычным метаболическим процессом. В норме через стадию перекисных производных в организме происходит синтез различных веществ (простагландинов, гормонов и др.). Главной функцией перекисного окисления является регуляция обновления, преобразования ненасыщенных структурных липидов, проницаемости липидов биологических мембран (Е.А. Строев, 1986; В.К. Казимирко, В.И. Мальцев, В.Ю. Бутылин, Н.И. Горобец, 2004). Образование избыточного количества свободных радикалов и активизация перекисного окисления липидов приводит к деформации мембранного липопротеинового комплекса, повышению проницаемости мембран и ингибированию активности мембраносвя-занных ферментов. ПОЛ возникает под влиянием активных форм кислорода и носит самоиндуцирующий (цепной) характер. На первых этапах этого процесса образуются гидроперикисные радикалы (ROO"), что сопровождается появлением диеновых конъюгатов, а затем гидроперикисей (ROOH). Эти первичные продукты ПОЛ нестойки и разрушаются с образованием альдегидов, кетонов, спиртов и, в том числе, малонового диальдегида, который взаимодейтсвуя с аминогруппами молекул, образует шиффовы основания (конечные продукты ПОЛ). Эти основания приводят к полимеризации и поликонденсации молекул, межмолекулярным сшивкам (Р.Х. Кармолиев, 2002, 2005; В.Н. Титов, Д.М. Лисицын, 2006). При этом изменяется и/или значительно увеличивается проницаемость биологических мембран (И. Сидоров, Н. Костромитинов, Е. Уколова, 2008.; В.А. Галочкин, В.П. Галочкина, К.С. Остренко, 2009). В настоящее время отмечены три наиболее известные случаи активации ПОЛ: снижение уровня антиоксидантной активности (АОА), гипоксия в клетках и образование свободных радикалов в биологической системе (А.Е. Лаврова, 2000; А.И. Журавлев, СМ. Зубкова, 2008). Это подтверждает распространенность и неспецифичность показателей ПОЛ. Однако, включаясь в патогенез заболевания, как правило, вторично, процессы ли-попероксидации играют важную роль в прогнозе и исходе болезни (М.А. Юдина, 1997; Н.К. Зентов, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньшикова, 2001; B.J. Halliwell, М.С. Cutteridge, 1999).
Антиоксидантная система защиты (АОС), объединяющая антирадикальные и антипероксидные механизмы, рассматривается в качестве универсальной биологической защиты. Функционирование этой системы определяет развитие адаптационных и компенсаторных процессов при действии химических веществ и обусловливает повышение устойчивости к действию токсикантов (Л.А. Тиунов, 1995; И.А. Зборовская, М.В. Банникова, 1995; Г.И. Клебанов, Ю.О. Теселкин, И.В. Бабенкова, 1999; И.В. Сидоров, Н.А. Костро-митинов, 2003; Н.А. Костромитинов, И.В. Сидоров, Е.А. Суменкова, 2005; А.И. Журавлев, СМ. Зубкова, 2008).
Активность свободнорадикального окисления липидов оценивают по накоплению липидных перекисей, которые определяют по содержанию малонового диальдегида (МДА). Повышенная его концентрация свидетельствует об активизации процессов ПОЛ или о снижении антиоксидантной защиты организма. Пониженная и стабильная концентрация продуктов ПОЛ свойственна здоровому организму с хорошо функционирующей антиоксидантной защитой. Концентрация МДА у млекопитающих животных в норме колеблется от 0,20 до 1,5 мкмоль/л крови (B.C. Бузлама, 1997; Л.М. Двинская, Л.Н. Никифорова, 1980; А.Е. Деханд, В.Г. Максуль, М.И. Горбачева, 2008). Уровень МДА поддерживается при участии ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ) или активности (АОА), что позволяет говорить о перекисном гомеостазе (В.В. Банкова, 1990). Наиболее активными компонентами антиоксидантной системы являются восстановленный глутатион и глутатионперокси-дазы (Se-зависимая и Se-независимая), с помощью которых органические и гидроперекиси превращаются в воду и безвредные продукты, неспособные вызвать цепную реакцию переоксидации липидов (Г.О. Кругликов, И.М. Штутман, 1976; Р.В. Русаков, 2006; В.А. Галочкин, В.П. Галочкина, Е.В. Крапивина, Г.И. Боряев, 2007).
При воздействии на организм животных неблагоприятных факторов процессы свободнорадикального окисления усиливаются, возникает недостаточность антиоксидантов, накапливаются токсичные для клеток продукты, что приводит к хроническому патологическому состоянию (Р.В. Русаков, В.И. Нетеча, Т.В. Агалакова, 2006; А.И. Журавлев, СМ. Зубкова, 2008). Накопленные результаты исследований, посвященные изучению взаимоотношений компонентов в системе ПОЛ - АО А, обосновывают необходимость и актуальность изучения их роли в организме, поиск средств, повышающих АОА организма.
Особенности пищеварения и микробиоценоза кишечника у телят
Сложной и ответственной задачей в животноводстве является получение здорового молодняка и его сохранение в раннем возрасте. Высокий процент заболеваемости и гибели молодняка в этот период обусловлен не только отсутствием адекватных условий при их выращивании, но и несовершенством физиологических механизмов защиты организма от воздействия вредных факторов внешней среды. Для создания оптимальных условий содержания и кормления животных, а также разработки практических рекомендации для профилактики заболеваемости молодняка необходимо знать и учитывать физиологические особенности их развития (A.M. Емельянов, В.Г. Серебренников, 1990).
У молодняка всех видов животных наиболее часто встречаются заболевания желудочно-кишечного тракта, которые являются причиной падежа в 95% в первый месяц жизни телят. Несмотря на то, что эшерихии признаны неотъемлимой частью нормальной микрофлоры кишечника человека и животных, их удельный вес в возникновении кишечных заболеваний остается весьма высоким. (Б.В. Тараканов, Г. Ф. Нурбаков, Н. В. Бурнышева, 2005; А.В. Воробьев, 2006; А.С. Овод, 2007).
Микрофлора желудочно-кишечного тракта телят. В формировании гомеостаза значительная роль принадлежит микрофлоре, населяющей кишечник. Нормальная микробная экосистема благоприятна для макроорганизма. В кишечнике теплокровных животных обитают 400 -500 различных видов микроорганизмов, а количество микробных клеток в 1 г кишечного содержимого здоровых животных достигает 10 . Как известно, нормальной микрофлоре желудочно-кишечного тракта принадлежит ведущая роль в поддержании многих функций организма, так как она представляет собой совокупность множества биоценозов, каждый из которых включает характерные постоянно встречающиеся виды микроорганизмов (А.Н. Панин, 2002, А.И. Парфенов, 2003). Основные функции нормальной микрофлоры заключаются в обеспечении колонизационной резистентности открытых полостей организма за счет антагонистической и иммуномодулирующей активности, детоксикационной, синтетической, пищеварительной и антиканцерогенной функций (В.М. Бондаренко, В.Г. Лиходед, 2007). С нарушением микробной экосистемы изменяется баланс, и потенциально патогенные микроорганизмы становятся патогенными, что приводит к снижению активности защитных механизмов организма и заболеванию.
В первые дни жизни качественный и количественный состав кишечной микрофлоры животных таков, что он не способен предотвращать заселение кишечника посторонними микроорганизмами, включая и патогенных. Становление кишечного нормобиоза, характеризуется преобладанием, прежде всего бифидо- и лактобактерий, и в основном завершается к 10-15 суточному возрасту. С этого момента животные наряду с факторами клеточного и гуморального иммунитета (общего и местного, специфического и неспецифического) приобретают еще одну «линию обороны» от патогенов в виде защиты слизистой оболочки кишечника антагонистически активной нормальной микрофлорой. Однако в первые (3-4) недели жизни состав кишечной микрофлоры молодняка может быть охарактеризован как дисбактериоз. Животные в этот период лишены первичного неспецифического барьера, роль которого выполняет кишечная нормофлора, вступающая в борьбу с патогенной и условно патогенной микрофлорой еще до инициации других неспецифических, а затем и специфических механизмов защиты (В.В. Субботин, 2004). Доказано, что кишечный дисбиоз может способствовать развитию целого ряда заболеваний - общей интоксикации, аллергии, иммунодефицита, остеохондроза, рахита (В.М. Бондаренко, 2003; А.А. Воробьев, 2004). Таким образом, недостаточность полезной кишечной микрофлоры негативно отражается на физиологическом состоянии животных. При этом следует отметить, что одной из наиболее острых проблем в животноводстве России являются желудочно-кишечные болезни новорожденных телят, которые приводят к существенным нарушениям гомеостаза. (Г.А. Ноздрин, А.Б. Иванова, А.Г. Ноздрин, 2003). Отсутствие у телят в первые недели жизни полноценного кишечного микро-биоциноза, способного обеспечить колонизационную резистентность кишечника, создаёт условия для возникновения массовых желудочно-кишечных болезней бактериальной, вирусной и другой этиологии. Мировой опыт свидетельствует, что в профилактике и лечении желудочно-кишечных заболеваний молодняка велико значение заместительной терапии, направленной на восстановление кишечного биоценоза путем регулярного введения живых бактерий - представителей нормальной кишечной микрофлоры (Н.И. Малик, А.Н. Панин, 2001).
Сразу после рождения любой организм вступает во взаимодействие с окружающей средой и в первую очередь с микроорганизмами, которые могут проникать во все органы и ткани и заселяют желудочно-кишечный тракт, где они играют наиболее важную роль для организма. Для профилактики заболеваний животного важно поддерживать необходимое количество полезных бактерий в его пищеварительном тракте. Важными факторами, влияющими на формирование нормофлоры в желудочно-кишечном тракте животных, являются условия содержания и состав рациона (Е.А. Доронин, 2005; А.Н. Панин, 2006), время приема первой порции молозива, состояние иммунитета, проведение вакцинаций и применение лекарственных средств (Б.В. Тараканов, 2000).
По данным М.А. Тимошко (1990) кишечная микрофлора, при ее стабилизации, является очень сложной и содержит около 10 микроорганизмов, представляющих более 400 различных видов бактерий. В такой большой и сложной системе устанавливаются сложные взаимосвязи, как между микроорганизмами, так и между микро - и макроорганизмом. Известно, что кишечная микрофлора участвует в формировании устойчивости организма животного к желудочно-кишечным заболеваниям, благодаря таким свойствам как колонизационная резистентность, бактериальный антагонизм, барьерный эффект, бактериальное вмешательство, конкурентное исключение (Б.В. Тарканов, 2000; М.А. Сидоров, В.В. Субботин, Н.В. Данилевская, 2000; Н.Ю. Каширская, 2000).
В пищеварительном канале в процессе филогенетического развития сформировалась специфическая микроэкологическая система (микробиоценоз), характерная для каждого вида животных и для каждого отдела желудочно-кишечного тракта. Данная система представляет собой состояние динамического равновесия, которое определяется, с одной стороны физиологическими и иммунобиологическими особенностями макроорганизма, с другой - видовым и количественным составом микробных ассоциаций и разнообразием их биохимической активности (Б.А. Шендеров, 2001).
В составе любого микробиоценоза всегда имеются постоянно обитающие виды бактерий (или автохтонная, индигенная, облигатная микрофлора), а также транзиторные (или добавочные, случайные виды, аллохтонная, факультативная флора) микроорганизмы. Облигатная флора, состоящая из анаэробных и аэробных бактерий, составляет основу биоценоза кишечника. (О.В. Чахава, 1982; Б.А. Шендеров, 2001). Представителями анаэробных микроорганизмов, населяющих кишечник, являются грамположительные и грам отрицательные микробы палочковидной или шаровидной формы: бифи-добактерии, лактобактерии, бактероиды, пептококки, пептострептококки. Все они характеризуются анаэробным типом дыхания, чувствительностью к действию кислорода и отсутствием спорообразования (М.М. Интизаров, 1994; О.А. Лаздин, 1999; М.А. Сидоров, В.В. Субботин, Н.В. Данилевская, 2000; В.А. Машеро, 2004). К факультативной микрофлоре относятся эшери-хии с пониженной ферментативной активностью и лактозонегативные, энтерококки, образующие черные колонии на сывороточно-теллуритовом агаре, анаэробные сульфитредуцирующие клостридии, гнилостные бациллы и стафилококки с гемолитической активностью, цитратредуцирующие условно-патогенные энтеробактерии, грибы, протеи (Г.Ф.Бовкун, Е.П. Ващекин, Н.И. Малик, Е.В. Малик, 2008). Основная часть нормальной микрофлоры теплокровных животных представлена такими анаэробами как бифидобактерии, лактобациллы и молочнокислые энтерококки, бактероиды, и микроорганизмами с факультативным дыханием - эшерихиями, при этом у молодняка больше всего представителей родов Bifidobcterium и Lactobacillus (В.А. Ан-типов, 1981).
Влияние выпаивания телятам с суточного возраста пробиотического препарата в дозе 2,0-1010 КОЕ/гол. и 4,0-1010 КОЕ/гол. в сутки на гемограмму.
Морфологические и биохимические показатели крови взаимосвязаны с ростом, развитием, продуктивными и племенными качествами сельскохозяйственных животных и во многом объясняют возрастные и генетические различия в становлении этих процессов. Исходя из огромного значения крови в обмене веществ и других важнейших процессах жизнедеятельности организма животного, можно утверждать, что состав крови влияет на продуктивность животных, а также наиболее полно отражает в себе разнообразные биохимические и физические процессы, происходящие в организме (С.Д. Батанов, 2005).
Результаты изучения влияния разных доз пробиотического препарата на морфо-биохимические показатели крови телят представлены в таблице 5.
Анализ полученных результатов показал, что гематокрит, количество лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина в крови у телят подопытных групп в оба исследованных возрастных периода соответствовали нормативным значениям без существенных межгрупповых различий (табл.5). СОЭ у 1-суточных телят была низкой, через 20 суток она несколько повышалась, но без достоверной значимости. Это может быть связано с малым количеством защитных белков в крови, низкими адгезивными свойствами эритроцитов в эти возрастные периоды или анизоцитозом эритроцитов, что замедляет формирование монетных столбиков (Г.И. Назаренко, 2002).В мазках крови подопытных телят анизоцитоз эритроцитов наблюдался в значительной степени. Содержание палочкоядерных нейтрофилов в крови у 1-суточных телят подопытных групп было несколько ниже нормативных значений, к 21-суточному возрасту у телят 1, 2 и 3 групп отмечена тенденция к снижению числа этих клеток на 42,27, 46,08 и 30,99% соответственно, что свидетельствует о недостаточности костномозгового нейтрофилопоэза. Выпаивание телятам изучаемого препарата не оказало влияния на этот процесс. Относительное содержание сегментоядерных нейтрофилов и суммы нейтрофилов всех ядерных форм в крови у телят подопытных групп в оба исследованных периода соответствовало нормативным значениям без существенных межгрупповых различий. Уровень эозинофилов в крови у 1-суточных телят подопытных телят соответствовал нормативным значениям, а через 20 суток снижался, что косвенно указывает на повышение функциональной активности коры надпочечников (B.C. Бузлама, 1996; Г.И. Козинец, В.А. Макаров, 1998). При этом достоверно значимое снижение содержания этих клеток по сравнению с суточным возрастом было только у телят 2 группы (на 80%). Следовательно, выпаивание пробиотического препарата в дозе 2,0-10 КОЕ/гол/сутки в течение 20 суток вызвало повышение активности коры надпочечников. Количество базофилов в крови у 1- и 20-суточных телят подопытных групп соответствовало норме и не имело межгрупповых различий.
Содержание моноцитов в крови у 1-суточных телят подопытных групп существенно не различалось и соответствовало наиболее высоким значениям физиологической нормы. Через 20 суток у животных 1, 2 и 3 групп отмечена тенденция к снижению числа этих клеток в крови на 13,44, 31,49 и 51,61% соответственно. Относительное количество лимфоцитов в крови 1- и 21-суточных телят соответствовало нормативным значениям без существенных межгрупповых различий. При этом установлено достоверное повышение числа этих клеток на 23,65% в крови у 21-суточных телят контрольной группы по сравнению с 1-суточным возрастом, у животных 2 и 3 групп отмечена только тенденция к повышению - на 27,05 и 7,63% соответственно.
Следовательно, ежедневное выпаивание телятам с рождения до 20-суточного возраста пробиотического препарата в дозах в дозе 2,0-10 КОЕ/гол. и 4,0-10 КОЕ/гол/сутки препятствовало повышению числа лимфоцитов к 21-суточному возрасту, но обусловило повышение активности коры надпочечников на что косвенно указывает более низкий уровень эозинофи-лов в крови у телят подопытных групп по сравнению с контролем.
В настоящее время получили широкое распространение снижение уровня естественной резистентности и приобретенные иммунодефицитные состояния сельскохозяйственных животных (М.Л. Ананчиков, 2005; Ю.Н. Федоров, 2009).
Недостаточность защитных механизмов приводит к появлению различных заболеваний, особенно у молодняка в первые месяцы жизни (В.Г. Ма-ренков, 2004; Н.В. Самбуров, 2006; Ю.Н. Фёдоров, 2009). Эти обстоятельства настоятельно требуют применения эффективных средств, направленных на устранение иммунодефицитных состояний и повышения резистентности организма животных. Определение уровня естественных защитных сил животных и широкое использование их показателей в селекционной работе дает возможность создавать в хозяйствах высокорезистентные стада, обеспечивающие высокий уровень продуктивности (И.Ф. Горлов, 1987).
Через 20 суток отмечена тенденция к повышению этого показателя у телят 1 и 3 групп на 4,81 и 8,96% соответственно, и достоверное его увеличение на 96,04% у животных 2 группы. После внесения в пробы крови 1-й 21-суточных телят подопытных групп зимозана, значения фагоцитарного показателя существенно не увеличились и не достигали величины минимального значения этого показателя, характерного для 1 и 2 возрастных иммунодефицитов (В.А. Телепнев, 1998). Это указывает на недостаточность данного защитного механизма и на отсутствие адаптационного резерва нейтрофильных гранулоцитов, способных к поглощению чужеродного материала. Фагоцитарный индекс в базаль-ных условиях у суточных телят подопытных групп соответствовал нормативным значениям без существенных межгрупповых различий.
Через 20 суток отмечена тенденция к повышению этого показателя у телят 1 и 3 групп на 23,38 и 3,98% соответственно, и достоверное его увеличение на 36,94% у животных 2 группы. Так как увеличение числа нейтрофи-лов, способных к поглощению, у телят 2 группы к 21-суточному возрасту увеличилось на 96,04%, а интенсивность поглощения только на 36,94%, можно заключить, что у этих животных - экстенсивный путь увеличения поглотительной способности нейтрофилов. Фагоцитарный индекс, в стимулированных зимозаном условиях, у 1- и 21-суточных телят подопытных групп существенно не отличались от величины этого показателя в базальных условиях и были ниже нормативных значений без значительных межгрупповых различий, что также указывает на отсутствие адаптационного резерва поглотительной способности нейтрофильных гранулоцитов.
Величина абсолютного фагоцитоза в базальных условиях у 1- и 21-суточных телят подопытных групп соответствовали наименьшим нормативным значениям без существенных межгрупповых различий. В индуцированных зимозаном условиях, величина этого показателя существенно не изменялась у всех групп подопытных животных и была ниже физиологически нормальных значений.
Анализ показателей, характеризующих кислородозависимую микроби-цидность нейтрофилов крови показал, что количество НСТ-позитивных нейтрофилов крови и индекс их активации в базальных условиях у суточных телят подопытных групп соответствовали нормативным значениям без межгрупповых различий и к 21-суточному возрасту существенно не изменялись .
Влияние выпаивания пробиотического препарата в дозе 8,0-10ш КОЕ/гол. в сутки на гемограмму подопытных телят.
При анализе динамики показателей гемограммы подопытных животных (табл. 14) установлено, что содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина в них, гематокрит и СОЭ соответствовали нормативным значениям в оба исследованных периода. Выпаивание телятам тетралактобактерина не оказало влияния на эти показатели. Относительное количество палочкоядер-ных нейтрофилов в первые сутки жизни в крови у телят соответствовало физиологической норме, через 15 суток у телят контрольной группы оно резко снизилось (на 52,03 %, р 0,05), а у животных опытной группы - практически не изменилось, что указывает на сохранившуюся высокую активность костномозгового нейтрофильного гранулоцитопоэза. Количество сегментоядер-ных нейтрофилов в первые сутки жизни у телят было ниже нормативных значений, которые находятся в интервале 46-64 %. Через 15 суток уровень этих клеток в крови у телят обеих групп существенно не изменился и стал соответствовать возрастной норме (24-62 %).
Относительное содержание эозинофилов в крови 1-суточных телят соответствовало нормативным значениям, а через 15 суток снизилось, особенно значительно у телят опытной группы (на 95,52 %, р 0,05) до нижних границ физиологической нормы, что указывает на более высокую активацию коры надпочечников у животных, получавших препарат (B.C. Бузлама, 1996, Г.И. Козинец, В.А. Макаров, 1997). Количество базофилов в крови у 1-суточных телят превышало возрастную норму (0-0,1 %) более чем в два раза и составляло 0,29±0,08 %. Через 15 суток у телят подопытных групп отмечены противоположно направленные тенденции: в крови у телят контрольной группы - увеличение их числа на 86,21 %, а у опытной - снижение на 24,14 %, что косвенно свидетельствует о снижении функциональной активности щитовидной железы у первых и о её повышении у вторых (А.А. Кудрявцев, Л.А. Кудрявцева, 1974; Г.И. Кози-нец, В.А. Макаров, 1998; К.И. Мышкин, 1979). Уровень моноцитов в крови у телят подопытных групп несколько превышал нормативные значения и в исследованные периоды существенно не различался. Установлено, что через 15 суток применения препарата у животных опытной группы сохранилась высокая активность костномозгового нейтро-фильного гранулоцитопоэза, на что указывает отсутствие снижения числа палочкоядерных нейтрофилов в лейкограмме, обнаруженное у телят опытной группы. Кроме того, у этих телят повысилась функциональная активность коры надпочечников и щитовидной железы, о чем косвенно свидетельствует снижение содержания эозинофилов и базофилов (соответственно) в лейкограмме. Результаты изучения влияния пробиотического препарата на уровень естественной резистентности организма телят представлены ниже. При анализе поглотительной способности микрофагов установлено, что относительное количество нейтрофилов крови, способных к поглощению чужеродного материала в базальных условиях у 1 -суточных телят превышало нормативные значения, что указывает на наличие в их организме факторов, активирующих нейтрофилы (табл. 15). Неспособность нейтрофилов крови адекватно реагировать на бактериальные стимулы рассматривается как структурный элемент состояния сниженной неспецифической антибактериальной резистентности организма (В.Н. Галанкин, 1989). После внесения в пробы крови 1-суточных телят зи-мозана количество нейтрофилов, проявляющих поглотительную активность, увеличивалось незначительно (на 19,33 %, р 0,05), что говорит о низком адаптационном резерве этого защитного механизма. Фагоцитарный индекс, абсолютный фагоцитоз и фагоцитарное число после стимуляции нейтрофилов зимозаном по сравнению с базальным уровнем у 1-суточных телят существенно не изменялись, что подтверждает низкий адаптационный резерв поглотительной способности нейтрофилов крови. Через 15 суток у телят 1 и 2 групп отмечено достоверное снижение фагоцитарного показателя в базальных условиях на 44,44 и 59,01 % соответственно, что указывает на более благополучное состояние организма животных по сравнению с 1-суточным возрастом. Величина фагоцитарного показателя в стимулированных условиях также снижалась у животных обеих групп, но при этом его значение у телят опытной группы было выше на 36,94 % (р 0,05), по сравнению с контролем и выше на 121,08 % по сравнению с его величиной в базальных условиях. Фагоцитарный индекс в базальных условиях через 15 суток также снижался на 17,74 % (р 0,05) и 27,17 % (р 0,05) у животных 1 и 2 групп соответственно по сравнению с 1-суточным возрастом. После внесения в пробы крови 15-суточных животных 1 и 2 групп зи-мозана отмечена тенденция к повышению на 4,59 и 17,36 % соответственно фагоцитарного индекса по сравнению с базальным уровнем, что в 1-суточном возрасте не наблюдалось. Более выраженная тенденция к увеличению ФИ в стимулированных условиях у телят опытной группы обусловила достоверное повышение на 34,96 % у них фагоцитарного числа по сравнению с контролем.
Следовательно, выпаивание телятам пробиотического препарата в дозе 8,0-10 КОЕ/гол/сутки с рождения до 15-суточного возраста обусловило повышение адаптационного резерва поглотительной способности нейтрофилов крови, как за счет повышения числа активных клеток, так и за счет интенсификации этого процесса.
Число НСТ-позитивных нейтрофилов крови, индекс их активации, коэффициент метаболической активации и показатель резерва кислородозави-симой микробицидности в базальных условиях у 1-суточных телят соответствовали нормативным значениям (табл. 16). После внесения в пробы крови зимозана отмечено достоверно значимое увеличение числа НСТ-позитивных нейтрофилов и индекса активации нейтрофилов, не достигающие, однако, оптимальных значений. Так по данным И.А. Пахмутова, М.С. Ульяновой (1984) в норме количество нейтрофилов, проявляющих НСТ-активность в спонтанной пробе (базальный уровень) составляет у здоровых телят до 3-месячного возраста 10,2+4,5%, а в активированной пробе (при стимуляции) 50,6±4,3%. Через 15 суток у телят контрольной группы отмечено достоверное снижение на 58,49 % числа НСТ-позитивных нейтрофилов в базальных условиях, а у опытных животных, напротив тенденция к повышению (на 58,49 %) числа этих клеток, однако, в пределах нормативных значений. У 15-суточных телят как 1, так и 2 групп число НСТ-позитивных нейтрофилов и индекс их активации после стимуляции клеток зимозаном были достоверно выше, чем в базальных условиях (но не достигали оптимальных значений), что указывает на наличие у телят подопытных групп адаптационного резерва кислородоза-висимой микробицидности нейтрофилов. Следовательно, несмотря на наличие адаптационного резерва кислородозависимой микробицидности нейтрофилов крови, эта защитная система у 1- и 15-суточных телят недостаточно активна.
Кислородонезависимая микробицидность нейтрофилов крови, определяемая количеством в них катионных белков у 1-суточных телят была ниже нормативных значений. Через 15 суток у телят контрольной группы отмечена тенденция к снижению на 19,09 % содержания этих белков в нейтрофилах, а у телят опытной группы, напротив, к повышению на 14,54 %.
Выпаивание пробиотического препарата телятам с рождения до 15 суточного возраста в дозе 8,0-10 КОЕ/гол/сутки способствовало повышению уровня естественной резистентности, о чем свидетельствует достоверное увеличение адаптационного резерва поглотительной способности нейтрофилов крови и тенденция к повышению кислородонезависимой микробицидности этих клеток.
