Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 8
1.1. Особенности состояния здоровья и физического развития воспитанников детских домов государственных учреждений и детей из семьи 8
1.2 .Особенности иммунитета у ребенка на Севере 19
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 26
2.1. Общая характеристика обследованных лиц 26
2.2. Методы исследования иммунологических показателей 27
2.3. Бактериологические методы исследования 33
2.4. Методика цитологического исследования 34
2.5. Методы математической обработки результатов исследования 35
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 36
3.1. Особенности состояния здоровья и физического развития воспитанников детских домов и детей из семьи 36
3.2. Иммунологический статус воспитанников детских домов 39
3.3. Корреляционные взаимосвязи иммунологических параметров у детей 54
3.4. Микробиоценоз слизистых у детей, воспитывающихся в детских домах 56
3.5. Корреляционные взаимосвязи иммунологических параметров и микрофлоры 66
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов собственных исследований 77
Выводы 84
Практические рекомендации 85
Список литературы 86
- Особенности состояния здоровья и физического развития воспитанников детских домов государственных учреждений и детей из семьи
- .Особенности иммунитета у ребенка на Севере
- Методы исследования иммунологических показателей
- Иммунологический статус воспитанников детских домов
Введение к работе
Актуальность исследования. Особенности жизни у ребенка, воспитывающегося в детском доме, значительно отличаются от условий, в которых воспитывается ребенок, живущий в семье, что, естественно, накладывает отпечаток на состояние здоровья [49]. Имеются единичные сведения о снижении состояния здоровья детей по мере проживания в доме ребенка. Здоровье ребенка, гармоничность его физического и психического развития в значительной степени определяются состоянием его иммунной системы.
Важнейшим стимулом развития иммунной реактивности является нормальная микрофлора, которая формируется в течение первого года жизни ребенка и зависит от наличия или отсутствия грудного вскармливания [99]. Известно, что большинство воспитанников детских домов были лишены грудного вскармливания. Одной из важнейших в наше время причин развития вторичного иммунодефицита является инфицирование новорожденных патогенными, часто госпитальными, штаммами микроорганизмов, при этом ребенок часто и длительно болеет, довольно быстро развивается инфекционная аллергия [22, 47, 54, 57, 78, 168]. Значительная роль в развитии недостаточности иммунной защиты у детей принадлежит влиянию различных иммунодепрессивных факторов. Иммунодепрессивным влиянием обладают многие вирусы, в том числе так называемые возбудители детских инфекций - безусловно-патогенные бактерии [41, 44, 56, 106, 136, 138, 140, 166].
На Севере возрастное формирование иммунной системы у детей отстает на 2-4 года, в зависимости от изучаемого критерия и места проживания ребенка [40, 43, 45, 48, 53, 171]. Особенности иммунной защиты, этапов и уровня возрастного формирования иммунной системы у воспитанников детских домов практически не изучены, механизмы развития у них вторичных иммунодефицитов неизвестны. Вместе с тем физическое и
5 психическое развитие ребенка заметно зависит от социальных условий жизни, экологической обстановки, режима труда и отдыха, а также находится под влиянием взаимоотношений окружающих ребенка людей [46]. В детском доме дети практически постоянно находятся в коллективе, в котором формируются собственная циркуляция возбудителей инфекций, нормальной микрофлоры и соответствующие уровни иммунного ответа. Коллективный иммунитет может оказывать существенное влияние на формирование иммунной системы, стимулируя или задерживая её развитие [24, 29, 42, 50].
Всё вышеизложенное определило актуальность проблемы: существует необходимость изучения особенностей иммунной системы у воспитанников детских домов.
Цель и задачи исследования. Цель работы - выявить особенности формирования иммунной системы у воспитанников детских домов. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить в сравнительном плане состояние иммунной защиты у воспитанников детских домов и детей, воспитывающихся в семье.
2. Изучить состояние микрофлоры слизистых оболочек верхних дыхательных путей, мочевыделителыюй системы и кишечника.
3. Изучить фагоцитарную активность нейтрофильных лейкоцитов и сорбционную способность эпителия слизистых.
Изучить состояние гуморальных механизмов защиты по содержанию CD22+, IgA и циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК).
Установить возрастные особенности формирования иммунной системы у воспитанников детских домов.
Положения, выносимые на защиту. 1. У воспитанников детских домов выше уровни фоновой лимфопролиферации, антителозависимой и клеточно-опосредованной цитотоксичности. 2. У детей, воспитывающихся в детских домах, выше частота регис-трации нейтропепии, дефицита активных фагоцитов, сокращения резерва компенсации повышением интенсивности фагоцитоза; дефицит фагоцитарной защиты формируется на первом году жизни. 3. Низкая эффективность местной защиты слизистых у воспитанников детских домов обусловливает риск аутоинфицирования и дисбактериоза.
Научная новизна работы. Получены новые данные об иммунологической реактивности у детей, воспитывающихся в детских домах. Впервые установлено, что у воспитанников детских домов дефицит фагоцитарной защиты регистрируется чаще, чем у детей, живущих в семьях, и не компенсируется увеличением интенсивности фагоцитоза. У воспитанников детских домов в 2,6 раза чаще встречается дефицит сорбционной способности эпителия слизистых, к 10 годам у 84 % детей содержание IgA не достигает нормативного уровня. Доказано, что повышение содержания нормальной микрофлоры обусловлено дефицитом slgA и сорбционной способности эпителия слизистых.
Научно-практическая значимость исследования. Установлена частота регистрации вторичных иммунодефицитов у детей, воспитывающихся в детских домах. Причиной формирования дефицита фагоцитарной защиты является отсутствие грудного вскармливания и соответственно нормального развития микрофлоры кишечника. Обоснована необходимость систематического контроля иммунитета и 'профилактики иммунодефицитов у детей, воспитывающихся в детских домах. Полученные в работе сведения создают теоретическую базу для разработки комплекса лечебно-профилактических мероприятий по профилактике формирования вторичных иммунодефицитов у воспитанников детских домов.
Материалы исследования могут быть использованы в процессе преподавания на кафедрах иммунологии, общей биологии и клинических кафедрах медицинских высших и средних учебных заведений.
Данная работа выполнена в Институте физиологии природных адаптации УрО РАН (Архангельск) в соответствии с планом НИР (номер государственной регистрации 01.2.00101811).
Апробация работы и публикации. Основные положения работы представлены на II Всемирном конгрессе по иммунопатологии и
7 аллергологии (Москва, 14-17 мая, 2004 г.); III съезде иммунологов России (Екатеринбург, 31 мая-4 июня, 2004 г.); симпозиуме с международным участием «Проблемы адаптации человека к экологическим и социальным условиям Севера» (Сыктывкар, 1-3 июня, 2004 г.); всероссийской конференции с международным участием «Биологические аспекты экологии человека» (Архангельск, 1-3 июля, 2004 г.); всероссийской конференции с международным участием «Геодинамика и геологические изменения в окружающей среде северных регионов» (Архангельск, 13-18 сентября, 2004 г.); XIX съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 19-24 сентября, 2004 г.); VIII всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2004» (Санкт-Петербург, 27-30 сентября, 2004 г.); II международной научно-практической конференции «Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки» (Архангельск, 5-7 октября, 2005 г.).
По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ.
Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 18 рисунками. Библиография включает 176 отечественных и 79 зарубежных публикаций.
Особенности состояния здоровья и физического развития воспитанников детских домов государственных учреждений и детей из семьи
Анализ данных Государственного доклада о состоянии здоровья населения Российской Федерации в 2005 году показал, что общее число детей-сирот составляет 654 тысячи. Только 10% стали сиротами вследствие смерти родителей или инвалидности. Установлено, что около 67% детей поступают в дома ребенка до одного года жизни, 23 % детей — на втором году и 10 % детей — на третьем году жизни. Среди детей, поступивших на первом году жизни, половина детей устраиваются в дом ребенка временно. При рождении показатели здоровья детей, которые в последующем поступают в дома ребенка, достоверно не отличаются от показателей здоровья детей, которые будут воспитываться в семье. У них практически с одинаковой частотой встречаются перинатальные поражения центральной нервной системы (у 84,3%о и 81,7% детей соответственно), врожденные аномалии развитии (у 10,2%) и 13,1%) детей соответственно), анемии новорожденного (у 5,3%) и 4,4% соответственно), задержка внутриутробного развития (у 19,8% и 16,4% соответственно) [104].
Регистрируются данные заболеваемости детей раннего возраста в домах ребенка и семье. У 14,2% детей дома ребенка выявляется гипотрофия, что в 4,7 раза чаще, чем у детей из семьи. Кроме того, у детей, воспитывающихся в семье, диагностируется гипотрофия 1 степени, тогда как у 2,7% воспитанников домов ребенка выявляется гипотрофия 2 степени. У них более часто, чем у их сверстников из семьи, диагностируется рахит (15,9% и 6,0% соответственно). При этом, у детей из дома ребенка чаще регистрируется рахит средней степени тяжести (И), тогда как у детей, воспитывающихся в семье, рахит легкой и средней степеней тяжести встречаются с одинаковой частотой. У детей из дома ребенка железодефицитная анемия наблюдается в 2,3 раза чаще, чем в группе сверстников из семьи, и диагностируется у 7,1% детей [74].
Более высокий уровень патологии ЛОР-органов у воспитанников домов ребенка обусловлен более частым развитием у них гипертрофии небных миндалин и аденоидных вегетации (8,2% и 6,1% соответственно), а также формированием у них хронической патологии в виде хронического отита у 1,6%; хронического ринита - у 0,5%; хронического тонзиллита и аденоидита - у 0,5%. У детей из семьи в раннем возрасте перехода заболеваний в хроническую форму не наблюдается [77].
Практически с одинаковой частотой у детей, воспитывающихся в доме ребенка и в семье, диагностируется патология органа зрения (4,9% и 6,1% соответственно). Однако если у детей, воспитывающихся в семье, патология органа зрения представлена только астигматизмом, то у воспитанников домов ребенка практически с одинаковой частотой диагностируются астигматизм и гиперметропия (2,7% и 2,2% соответственно) [107].
Некоторые заболевания в группе воспитанников домов ребенка диагностируются реже, чем в группе сверстников из семьи, в частности -атопический дерматит (10,4% и 36,4% соответственно). Кроме того, у 15,2% детей из семьи диагностируется активная фаза процесса, что чаще, чем среди воспитанников домов ребенка. Более редкое развитие у воспитанников домов ребенка атопического дерматита, вероятно, связано с меньшим поступлением с пищей облигатных аллергенов у этого контингента детей по сравнению с домашними детьми. Более частое развитие кариеса у домашних детей так же обусловлено особенностями питания (большим потреблением сладкого) [13].
Кариес зубов не выявлен ни у одного воспитанника домов ребенка, тогда как такие дети, воспитывающиеся в семье, составляют 6,1% [115]. Под физическим развитием понимают динамический процесс роста (увеличение длины и массы тела, развитие отдельных частей тела) и биологического созревания в том или ином периоде детства. Особенности физического развития воспитанников домов ребенка в отличие от детей из семьи, заключаются в высокой частоте встречаемости среди них детей, имеющих физическое развитие с отклонениями. Отклонения физического развития у воспитанников домов ребенка встречаются в 2,2 раза чаще, чем у сверстников, воспитывающихся в семье (88,8%о и 39,5%). Наиболее частыми отклонениями физического развития у воспитанников домов ребенка являются низкий рост, дефицит массы тела и их сочетание; у детей, воспитывающихся в семье - дефицит и избыток массы тела [130].
По мере пребывания в доме ребенка состояние здоровья детей ухудшается и его отклонения диагностируются чаще, чем у детей из семьи, хотя при рождении показатели здоровья детей практически не отличаются. Это связано, прежде всего, с хроническим стрессом, который испытывают дети дома ребенка, влиянием на них эмоциональной, сенсорной, материнской депривации. Изменение условий жизни ребенка, устройство его в семью, способствуют нормализации эмоционального фона, устранению стрессовой ситуации и оптимизации показателей здоровья этих детей [165].
Экологическое неблагополучие, возрастание стрессовых воздействий, массовое бесконтрольное применение антибиотиков и химиотерапевтических препаратов, повышенный радиоционный фон и неполноценность питания -характерный набор причин, вызывающих дисбиоз кишечника и рецидивирующие респираторные заболевания [8, 14, 60, 89, 109, 231].
Кроме того, одной из важнейших функций желудочно-кишечного тракта является его участие в формировании общей иммунобиологической реактивности организма. Это определяется тесным взаимодействием иммунокомпетентных образований, ассоциированных с кишечником (GALT-система), с населяющими его микроорганизмами, а также с присутствующими в химусе чужеродными макромолекулами с антигенными свойствами [9, 15, 70, 127, 153]. Микроэкологическая система пищеварительного тракта является открытым биоценозом, так как между микрофлорой окружающей среды и микрофлорой желудочно-кишечного тракта происходит постоянная циркуляция микроорганизмов. Следует подчеркнуть, что заселение пищеварительного тракта некоторыми видами условно-патогенных бактерий, приводит к развитию дисбиотических нарушений в кишечнике и к снижению колонизационной резистентости, которая относится к факторам неспецифической защиты. Поэтому, возможно, это является одной из причин снижения общей резистентности организма человека к инфекционным возбудителям [151, 184].
Как показали исследования Куваевой И.Б. [76, 77], у 92-94% детей, страдающих частыми респираторно-вирусными заболеваниями, имел место дисбактериоз кишечника 1-2 степени; у 67% детей из кишечника высевались такие условно-патогенные штаммы, как клебсиеллы, протеи, дрожжеподобные грибы рода Кандида, энтеробактеры и другие (в концентрации 104 ОКЕ/мл). Поэтому коррекция микрофлоры кишечника у детей данной группы имеет перспективы в плане повышения общей сопротивляемости к инфекциям. Кроме этого, к сожалению, есть группа детей, у которых дисбиоз кишечника диагностируется уже с первых дней жизни - это недоношенные дети, доношенные, имеющие отягощенный перинатальный анамнез и, находящиеся с рождения на исzкусственном вскармливании.
.Особенности иммунитета у ребенка на Севере
Есть все основания считать, что иммунная система у ребенка, проживающего в неблагоприятной климатической обстановке, недостаточно эффективна [40, 34, 56, 67, 95, 125, 135, 163]. Основными факторами, влияющими на иммунную систему у ребенка на Севере, являются дефицит тепла, недостаточная плотность кислорода в атмосфере, влажность, неблагоприятный ветровой режим, повышенное атмосферное давление, напряженный иономагнитный режим, необычный фотопериодизм, а также в данном регионе сконцентрированы крупнейшие целлюлозно-бумажные комбинаты, полигон для ядерных испытаний, космодром, производство атомных судов, отходы ядерной энергетики [33, 41, 108, 113, 120, 135,162]. Торможение возрастного развития у детей, родившихся на Севере, вероятно, касается многих систем: дефицит роста и окружности грудной клетки в зависимости от степени дискомфортности места проживания регистрируется в первых двух дискомфортных зонах в течение всего периода с семилетнего до пятнадцатилетнего возраста, а в зонах дискомфорта и даже в южных районах области, которые по климатическим параметрам не входят в северные территории, дефицит роста и окружности грудной клетки выявляется в возрасте 9, 13, 14 и 15 лет. Торможение возрастного развития четко проявляется относительно иммунной системы. Дело в том, что иммунитет в своем развитии проходит четко обозначенные стадии у человека в возрасте 1, 5 и 10 лет и на каждом из этих этапов отмечается достоверно видимая задержка. Так, к году у 62% детей, находящихся на грудном вскармливании, еще не устанавливаются нормальные параметры микробиоценоза кишечника [76, 77]. К пятилетнему возрасту концентрации сывороточных IgM, IgG, IgA не достигают нормальных уровней у 19, 54 и 87% детей соответственно. В возрасте 10 лет 27 и 32% детей не имеют нормальных концентраций IgA и slgA соответственно [44, 81, 82, 86, 119, 124, 139, 197, 199].
На Севере (в Архангельской области) постоянно и в течение 30 последних лет регистрируется повышение уровня заболеваемости среди детей и подростков по сравнению с данными в среднем по России. Так общая заболеваемость среди детей превышает на 16-26% в зависимости от года наблюдения, среди подростков данные различия колеблются в пределах 17-24%. Подобные различия выявляются относительно первичной заболеваемости: у детей уровни заболеваемости выше на 16-28 %, среди подростков - на 21-32 % в зависимости от года наблюдения [45, 56, 159]. Исследования подтверждают высокий уровень иммунозависимой заболеваемости на Севере, особенно среди детей, высокой частотой хронической патологии осложнений, а также злокачественных новообразований [51, 54, 114, 161, 165]. Имеется достаточно оснований для суждения о формировании региональных особенностей иммунного статуса с широким распространением северного варианта иммунного дисбаланса [48]. Доказано значительное влияние выявленных иммунных дисбалансов на характер течения воспалительного процесса, типичного инфекционного заболевания, гиперчувствительности замедленного типа, аутоиммунных болезней [39, 54, 167]. Однако, констатация факта иммунодефицита, и даже характеристики его еще не объясняют происхождение, направленность развития и формирования дефектов иммунной системы на Севере. В то же время, только анализ последовательности развития иммунодефицитов, их корреляций и причинно-следственных взаимосвязей позволяет получить объективное представление о сущности процесса и обосновать наиболее рациональные в региональном отношении направления профилактических мероприятий. Кроме того, процесс дальнейшего исследования иммунологической реактивности населения в экстремальных северных условиях требовал более тонкого и детального изучения функциональной активности иммунной системы на уровне фенотипирования не только Т-лимфоцитов, но и клеток, отражающих функциональную активность, мобилизации и дифференциацию.
Инфекционный синдром является наиболее популярным признаком неблагополучия в системе иммунитета. Кроме инфекций, обычных для умеренного климата, на Севере есть своя краевая инфекционная патология, связанная с зоонозами и более длительным сохранением вирулентности патогенными микроорганизмами во внешней среде при пониженных температурах. У детей и подростков, а также у взрослых, проживающих на Севере первые 5 лет, повышается уровень острых воспалительных заболеваний (ОРЗ, ангины, отиты, бронхиты, пневмонии, фурункулез, пиелонефриты, заболевания желудочно-кишечного тракта) [122, 124, 130, 145, 160].
Изучены особенности иммунного статуса у детей, живущих на Севере. Наиболее часто регистрируются дефицит содержания в крови Т-лимфоцитов и сывороточных иммуноглобулинов А на фоне высоких концентраций В-лимфоцитов, иммуноглобулинов М, иммуноглобулинов G, иммуноглобулинов Е, циркулирующих иммунных комплексов и аутоантител. Во всяком случае, такие маркеры иммунологической недостаточности, как инфекционный, аллергический и аутоиммунный, имеют значительно больший уровень распространенности на Севере [51 58, 116, 130, 164].
Однако известно, что система Т-клеточного гомеостаза очень стабильна и способна к самосохранению даже при элиминации 15% клеток. Вторичное нарушение Т-клеточного репертуара, вплоть до иммунодефицита, как правило, развивается путем нарушения Т-клеточного клонального равновесия из-за длительного или чрезвычайного преобладания процессов активации над уровнями торможения иммунной реакции [178, 185, 203, 209, 223, 229, 235, 240, ].
Методы исследования иммунологических показателей
Комплекс иммунологического обследования включал: -определение гемограммы (абсолютного содержания в периферической крови лейкоцитов, абсолютного и относительного содержания лимфоцитов, нейтрофилов); -исследование лимфоцитов: определяли фенотипы Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов, лимфоциты с рецепторами CD5+ (выявляется на поверхности всех зрелых Т-лимфоцитов), CD3+ (принимает участие в распознавании антигена, ассоциированного с детерминантами главного комплекса гистосовместимости класса 2 на антигенпредставляющих клетках и способствует передаче сигнала в цитоплазму, может быть использован для идентификации зрелых активированных Т-клеток), CD4+ (хелперы, индукторы, составляющие 45 % лимфоцитов периферической крови), CD8+ (цитотоксические Т-лимфоциты, составляющие 35% лимфоцитов периферической крови), CD10+ (клетки с рецепторами, отражающими лимфопролиферацию, ранний антиген В-клеток, предшественников В-лимфоцитов), CD16+ (естественные киллеры, все лимфоциты, экспрессирующие этот маркер, способны к антителозависимой клеточной цитотоксичности), CD25+ (активированные после воздействия на них митогенов, вирусов Т-лимфоциты с низкоафинными рецепторами к интерлейкину-2), CD71+ (активированные Т-лимфоциты с рецептором к трапсферрипу), HLA DR+ (Т-лимфоциты, активированные через рецептор к сублокусу Главного комплекса гистосовместимости класса II), CD95+ (клетки с рецепторами к фактору некроза опухоли, отражающие процессы апоптоза; в норме содержание CD95+ адекватно количеству пролиферирующих клеток, что обеспечивает иммунный гомеостаз), CD22 (В-лимфоциты); -исследование нейтрофильных лейкоцитов, определяли фагоцитирующую способность нейтрофилов; -определение содержания некоторых цитокинов: интерлейкин-2 (IL-2), фактор некроза опухолей альфа (ФНО-сс); -определение содержания сывороточных иммуноглобулинов А, М, G, Е и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК); -определение абсолютного и относительного содержания нейтрофилов на слизистых зева, мочевыводящих путей и желудочно-кишечного тракта; -определение содержания секреторных иммуноглобулинов А, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и сорбционной активности эпителия. Количество лимфоцитов и нейтрофилов подсчитывали в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимза при иммерсионном увеличении объектива х90 и окуляра х7. Для регистрации клеток использовали клавишные лабораторные счётчики. Производили подсчёт 100 клеток. Данные анализа выражали в процентах. Абсолютное содержание клеток определяли подсчётом процентного содержания от общего количества. Для получения лейкоцитарной взвеси 5-10 мл венозной крови, взятой в асептических условиях в пробирку с гепарином из расчёта 20 Ед на 1,0 мл крови, выдерживали при комнатной температуре в течение 1,5 часов для оседания эритроцитов, после чего плазму с элементами белой крови отсасывали в стерильную пробирку и центрифугировали 5 минут при 1000 об. в минуту. Надосадочную жидкость удаляли и вместо неё наливали раствор Хенкса без ионов кальция и магния в том же объёме. После смывания со дна и стенок пробирки проводили дважды дополнительное центрифугирование отмытых форм. Осадок клеток ресуспензировали в среде 199 с 10% бычьей сывороткой, доводя концентрацию до 1 10/6/мл. Получение отдельных популяций лейкоцитов основано на различиях удельной массы лейкоцитов разных популяций. В качестве градиента плотности использовали водный раствор фикола с добавлением верографина. Принцип метода состоит в том, что суспензию клеток помещают сверху градиента и центрифугируют. В результате те клетки, которые имеют плотность больше, чем градиент, проходят через него и скапливаются на дне пробирки, в то время как все остальные остаются над градиентом. Использование градиента позволяет разделять сумму лейкоцитов на отдельные популяции: моноцитоядерные клетки и гранулоциты. зо Субпопуляции лимфоцитов определяли методом непрямой иммунопероксидазной реакции с использованием моноклональных антител производства НПЦ «Мед Био Спектр» (г. Москва). После выделения в градиенте фикол-верогафин 0,5 мл лейкоцитов наносили каплю на предметное стекло и помещали на 20 мин. в холодильник при t =40С. По завершении инкубации остатки жидкости высушивали при комнатной температуре. На высушенную каплю наносили 20 мкл 3% раствора перикиси водорода на 10 мин для блокады эндогенной пероксидазы. Каплю промывали 5 раз в 100 мкл физиологического раствора и наносили 20 мкл хорошо перемешанного раствора моноклональных антител, инкубировали в течение часа при комнатной температуре под чашкой Петри на влажной бумаге. Промывали препараты 5 раз в 100 мкл физиологического раствора и наносили 20 мкл хорошо перемешанного пероксидазного конъюгата, инкубировали до появления коричневого окрашивания при комнатной температуре. После высушивания образцов добавляли 20 мкл 50% глицерина и считали число клеток с коричневой зернистостью при объективе х90 окуляре х10.
Иммунологический статус воспитанников детских домов
Высокий уровень болезней верхних дыхательных путей являются результатом несовершенства защиты слизистых оболочек, что дает основание для исследования местного иммунитета. Средний уровень slgA значительно ниже у воспитанников детских домов (0,63 ± 0,02 против 0,88 ± 0,14). Уровень ЦИК выше у детей из детских домов, но в обеих группах средние концентрации ЦИК превышают физиологический предел (3,69 ± 0,09 у воспитанников детских домов и 2,26 ± 0,04). Средние значения фагоцитарного числа и процента активных фагоцитов у детей практически одинаковы (соответственно 42,72 ± 0,47 и 53,69 ± 0,67; 15,39 ± 0,28 и 13,36 ± 0,36). Уровень сорбционной активности эпителия значительно ниже физиологического предела ( 100) в той и другой группе, но статистически ниже у обследуемых детей детских домов (38,64 ± 1,59 против 46,68 ± 1,36). Антитела слизистых, slgA являются основными секреторными иммуноглобулинами, играют важную роль в формировании местного иммунитета, наиболее мобильны и активны в слизистых, коже, серозных оболочках, обеспечивают защиту барьерных тканей. У новорожденного ребенка slgA практически отсутствуют, уровень взрослого (1,2-5,4 мг/л) достигается только к десяти годам. Дефицит slgA обусловливает повышенный уровень воспалительных заболеваний кожи, слизистых оболочек дыхательных путей, пищеварительной системы органов мочевыделения и более длительное течение болезни. Дефицит slgA среди воспитанников детских домов старше 10 лет составил - 84,43%, а у детей живущих в семьях - 78,04%. Одним из самых древних в филогенетическом отношении механизмов защиты является фагоцитоз; минимальным уровнем фагоцитарного показателя считается 1,0, минимальным процентом активных фагоцитов -50%; данные критерии оправданы для моноцитов и нейтрофилов. В иммунном ответе все начинается и заканчивается фагоцитозом: фагоциты распознают чужеродные антигены, представляют их антиген-реактивным клеткам, а в завершении утилизируют продукты деградации комплекса антиген-антитело, в том числе то, что остается от реакций цитотоксичности. Дефицит фагоцитарной защиты среди воспитанников детских домов -79,03% и 45,52%о - среди детей из семей. В оценке уровня гуморального ответа иммунитета большое значение имеют концентрации циркулирующих в крови иммунных комплексов антиген - антитело (ЦИК), аномально большие их количества - свыше 2 г/л. Высокие концентрации циркулирующих иммунных комплексов свидетельствуют о дефектах активности системы комплемента или фагоцитарной способности. С позиций патогенеза повышенные уровни ЦИК неблагоприятны из-за возможности нарушения микроциркуляции, повреждения лизосомальными ферментами фагоцитов, протеолитическими ферментами цитоплазматических и базальных мембран. Токсические концентрации циркулирующих иммунных комплексов выявлены у 84,23%) детей из детских домов и 11,42% у детей из семей. Низкая сорбционная активность эпителия установлена среди 32,03%) детей из семей и среди 84,32%) воспитанников детских домов. Установлена прямая зависимость между сорбционной активностью эпителия и концентрация slgA (г= 0,91). В группе детей с сорбционной активностью эпителия менее 10 - концентрация slgA не достигает 0,5 г/л. В группе детей, имеющих сорбционную активность эпителия менее 50, уровень slgA не достигает 1,0 г/л, но более 0,5 г/л. В группе детей, имеющих сорбционную активность 100 и более - уровень секреторного иммуноглобулина А составляет 1,0 г/л и выше. Выявленная закономерность свидетельствует об активной роли slgA в способности к сорбции эпителиальных клеток. Итак, уровень местной защиты со стороны slgA, активности фагоцитарной защиты, сорбционной активности эпителия и диссоциации ЦИК значительно слабее у детей воспитанников детских домов. Установлено более высокое содержание на поверхности слизистых нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов, что свидетельствует о более выраженных процессах миграции и экссудации фагоцитов и иммунокомпетентных клеток. Увеличение % содержания лимфо-ретикулярных клеток отражает уровень лимфопролиферации. Более значительный уровень миграции, экссудации и лимфопролиферации иммунокомпетентных клеток слизистых, возможно, является компенсаторно-приспособительной реакцией на фоне более выраженного дефицита фагоцитарной защиты, TgA и сорбционной активности эпителиальных клеток (табл. 5).
