Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 14
1.1. Влияние природных факторов и их сочетанного действия на секреторную и экскреторную функции желудка 14
1.1.1. Влияние минеральной воды на функционирование пищеварительной системы 18
1.1.2. Действие лекарственных растений на деятельность пищеварительной системы 24
1.2. Влияние исследуемых природных факторов на метаболическую активность печени 29
2. Материалы и методы исследований 32
2.1. Характеристика экспериментальных животных и общая структура физиологического эксперимента 32
2.2. Бальнеологическое описание минеральной воды озера Шира 35
2.3. Характеристика используемых лекарственных растений 39
2.4. Методы исследований желудочного сока 46
2.4.1. Определение величины рН желудочного сока и активности ионов водорода 46
2.4.2. Определение дебита соляной кислоты . 46
2.4.3. Определение протеолитической активности желудочного сока 47
2.4.4 Определение содержания углеводных компонентов гликопротеинов в желудочном соке 47
2.4.5.Определение концентрации эндогенного аммиака в желудочном соке 48
2.5. Определение показателей плазмы крови 48
2.6. Статистическая обработка данных 50
3. Результаты собственных исследований 52
3.1. Влияние сочетанного применения минеральной воды озера Шира и фитосбора на секреторную и экскреторную функции желудка лабораторных животных 52
3.1.1. Влияние однократного сочетанного применения минеральной воды озера Шира и фитосбора на секреторный процесс в желудке собак 53
3.1.2. Влияние однократного и курсового сочетанного применения минеральной воды озера Шира и фитосбора на секреторную функцию и экскрецию аммиака в желудке крыс 60
3.2. Влияние минеральной воды озера Шира на секреторную и экскреторную функции желудка лабораторных животных 63
3.2.1. Действие минеральной воды озера Шира на секреторный процесс в желудке собак при разовом введении 63
3.2.2. Влияние минеральной воды озера Шира на секреторный процесс в желудке крыс в условиях однократного и курсового применения .69
3.3. Действие фитосбора из лекарственных растений на секреторную функцию желудка лабораторных животных 71
3.3.1. Действие фитосбора на показатели желудочной секреции и экскреции аммиака в желудке собак при разовом введении 71
3.3.2. Влияние фитосбора на желудочную секрецию крыс при однократном и курсовом применении 77
3.3.2.1. Влияние зверобоя продырявленного на секреторную активность желудка крыс при однократном и курсовом введении 80
3.3.2.2. Влияние мяты перечной на желудочную секрецию крыс при однократном и курсовом введении 82
3.3.2.3. Влияние пустырника пятилопастного на секреторный процесс в желудке крыс при однократном и курсовом введении 84
3.3.2.4. Влияние кипрея узколистного на секреторный процесс в желудке крыс при однократном и курсовом введении 86
3.3.2.5. Влияние чаги на желудочную секрецию и экскрецию аммиака в желудке крыс при однократном и курсовом введении 88
3.4. Изменение показателей метаболической функции печени лабораторных животных после сочетанного воздействия минеральной воды озера Шира и фитосбора 90
3.4.1. Влияние минеральной воды озера Шира на показатели метаболической функции печени собак и крыс 92
3.4.2. Влияние фитосбора на показатели метаболической функции печени собак и крыс 94
3.4.3. Влияние настоев лекарственных растений, входящих в фитосбор, на показатели метаболической функции печени крыс 96
4. Обсуждение полученных результатов 99
4.1. Сочетанное действие минеральной воды озера Шира и фитосбора на секреторную и экскреторную функции желудка лабораторных животных 99
4.1.1. Влияние минеральной воды озера Шира на желудочную секрецию у лабораторных животных 107
4.1.2. Действие фитосбора и лекарственных растений, входящих в его состав, на секреторную активность желудка лабораторных животных 113
4.2. Сочетанное воздействие минеральной воды озера Шира и фитосбора на метаболическую функцию печени лабораторных животных 122
Заключение 128
Выводы 132
Список литературы 134
Приложение 161
- Влияние природных факторов и их сочетанного действия на секреторную и экскреторную функции желудка
- Характеристика экспериментальных животных и общая структура физиологического эксперимента
- Влияние однократного сочетанного применения минеральной воды озера Шира и фитосбора на секреторный процесс в желудке собак
- Сочетанное действие минеральной воды озера Шира и фитосбора на секреторную и экскреторную функции желудка лабораторных животных
Введение к работе
Актуальность проблемы. В последние годы все больше внимание специалистов привлекают вопросы комплексного применения природных лечебных факторов для оптимизации физиотерапевтических воздействий и разработке на их основе новых высокоэффективных технологий, направленных на коррекцию протекающих в организме процессов.
Снижение уровня заболеваемости населения, разработка мер по повышению уровня здоровья является актуальной задачей нашего общества. Возможность использования в качестве превентивных средств природных факторов (бальнеотерапия и фитотерапия) с естественными методами воздействия обусловлена не только дефицитом и дороговизной лекарств, но, в первую очередь, мягкостью и эффективностью воздействия природных средств. Достижение эффекта в результате действия факторов природного происхождения осуществляется менее специфичным путем через активацию общих адаптационных резервов организма. Методы естественного лечения рассматриваются как методы эндогенной терапии. Живая система, оценивая характер действия природных и естественных факторов, формирует ответную реакцию, которая обеспечивает более высокий уровень функционирования жизнедеятельности (Пашинский В.Г., 1989; 1990; Турищев С.Н., 1999; Ваганова B.C., 2001; Ernst Е., 1998; Cowan М.М., 1999). В этом плане вызывают интерес исследование сочетанного применения в качестве немедикаментозных средств минеральной воды и лекарственных растений, возможности их взаимодополнения. В настоящее время недостаточно изучены физиологические механизмы их действия и коррекция функций сочетанным применением экзогенных факторов.
Если для большинства природных минеральных вод экспериментально и клинически подтверждено их нормализующее и улучшающее функционирование желудка действие (Выгоднер Е.Б., 1987; Полушина Н.Д., Фролков В.К., 1990; Полушина Н.Д. и др., 2000; Королев Ю.Н., 1998), то многие лекарственные растения назначаются на основании результатов их долголетнего применения в практике народной медицины. Однако отсутствие клинического изучения лекарственных растений не должно стать причиной прекращения их применения, а, напротив, должно стать причиной их углубленного изучения (Йорданов Д. и др., 1976). В связи с этим поиск перспективных растений и разработка на их основе новых высокоэффективных средств для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний, а также включение лекарственных растений в состав комплекса внешних воздействий на организм является весьма актуальной задачей (Пшуков Ю.Г. и др., 1993).
Общепризнано, что один из факторов, затрудняющих оптимизацию комплексных физиотерапевтических воздействий, является относительный дефицит знаний о физиологических механизмах действия природных средств.
Как считает B.C. Улащик (1994), постоянно расширяющееся применение с лечебно-профилактическими целями естественных факторов внешней среды, требующее научного обоснования, неизбежно повышает роль эксперимента в физиотерапии. Согласно его утверждению, исключительно важен экспериментальный подход при изучении механизмов физиологического действия природных факторов. С этим утверждением трудно не согласится.
Целенаправленное изучение физиологических механизмов реализации корригирующих эффектов в условиях комплексного воздействия минеральной воды и лекарственных растений, поиск объективных параметров, пригодных для выбора режима их применения, имеет практическую значимость. Данные, полученные при этом, позволят с большей эффективностью использовать природные факторы для коррекции нарушенных функций организма, в том числе функций пищеварительной системы.
В настоящее время остается недостаточно изученным вопрос о физиологических механизмах сочетанного применения минеральной воды и лекарственных растений. Возможно, что применяемые в комплексе эти средства способны ослабить или усилить свое действие или же, напротив, проявить отрицательный побочный эффект, заставляя взвешивать соотношение пользы и риска применения. Есть еще ряд вопросов, касающихся возможности сочетанного применения минеральной воды и лекарственных растений. Например, какому природному фактору при сочетанном применении принадлежит определяющая роль в формировании ответной реакции со стороны секреторной и экскреторной функции желудка и метаболической функции печени разных лабораторных животных? Как изменятся функции желудка при сочетанном применении природных средств в разные фазы секреторного процесса? На часть этих вопросов нам предстоит ответить в рамках данной диссертационной работы.
Цель исследования. Выявить общие закономерности и установить особенности сочетанного влияния минеральной воды озера Шира и фитокомпозиции на показатели секреторной функции желудка и метаболической функции печени лабораторных животных.
Задачи исследования:
1. Изучить сочетанное действие минеральной воды озера Шира и фитосбора (зверобой продырявленный, мята перечная, пустырник пятилопастной, кипрей узколистный и чага) в условиях их однократного применения на секреторную и экскреторную функции желудка собак в динамике желудочного сокоотделения.
2. Выяснить характер сочетанного воздействия минеральной воды озера Шира и фитосбора в условиях однократного и курсового применения на желудочную секрецию у крыс.
3. Определить степень раздельного влияния природных факторов (минеральной воды озера Шира, фитосбора и настоев растений, входящих в фитосбор) на показатели секреторной функции желудка лабораторных животных в условиях однократного и курсового применения.
4. Изучить сочетанное влияние минеральной воды озера Шира и фитосбора на показатели метаболической функции печени лабораторных животных в условиях однократного и курсового применения.
5. Выяснить роль раздельного влияния минеральной воды озера Шира, фитосбора и входящих в его состав растений на изменение показателей метаболической функции печени лабораторных животных.
Научная новизна. Впервые выявлено, что при сочетанном влиянии минеральной воды и фитосбора на показатели секреторной функции желудка происходит устранение противоположных эффектов (минеральная вода озера Шира - ингибирующий, фитосбор - активирующий), полученных при отдельном воздействии сочетаемых факторов. Эти изменения прослеживаются и в динамике желудочного сокоотделения (в нервную и химическую фазы).
Показано, что по мере развития изменений со стороны секреторного аппарата желудка крыс на введение фитосбора происходит суммация эффектов действия настоев отдельных лекарственных растений. Отмечена ликвидация отклонений от контрольных значений показателей секреторной функции желудка крыс после курсового применения настоев лекарственных растений.
Впервые выявлена способность минеральной воды озера Шира и фитосбора вовлекать в формирование ответной реакции со стороны секреторного аппарата желудка собак процессы саморегуляции функции. Показана зависимость изменений протеолитической активности желудочного сока и уровня слизи у собак от исходного фона показателей.
Впервые выявлено усиление антиоксидантной способности минеральной воды озера Шира и фитосбора, вследствие суммации эффектов при их сочетанном применении. В случае курсового применения настоев используемых в фитосборе растений показано увеличение их антиоксидантных свойств.
Практическая ценность. Полученные данные значительно расширяют и углубляют знания о сочетанном влиянии таких природных факторов, как минеральная вода и лекарственные растения на показатели желудочной секреции лабораторных животных при однократном и курсовом применении.
Настоящая работа вносит вклад в развитие представлений о действии основных химических компонентов минеральной воды и лекарственных растений на секреторную и экскреторную функции желудка и метаболическую функцию печени, о способности их усиливать или ослаблять эффекты друг друга при сочетанном применении.
Результаты имеют как теоретический, так и практический интерес, т.к. позволяют яснее понять перспективность и широкие возможности сочетанного использования минеральной воды и лекарственных растений для коррекции секреторной деятельности желудка и метаболической функции печени.
Полученные результаты дают возможность разработать наиболее оптимальную, физиологичную методику применения минеральной воды и лекарственных растений, а также возможности сочетанием средств природного происхождения ослабить нежелательные и усилить желаемые эффекты.
Полученный материал об изменении секреторной функции желудка в разные фазы желудочного сокоотделения могут быть использованы для обоснования времени приема минеральной воды и фитосбора с целью коррекции желудочного пищеварения.
Основные положения работы могут быть использованы в качестве теоретической основы для прикладных исследований в научно-практических учреждениях, занимающихся проблемами профилактики и коррекции функциональных нарушений пищеварительной системы.
Материалы диссертационной работы имеют клиническое применение в Томском НИИ курортологии и физиотерапии при комплексном лечении больных с различными патологиями гастродуоденальной зоны. Практическая значимость подтверждена получением положительного решения № 1610 от 04.07.03 г. на выдачу патента РФ.
Материалы диссертационной работы используются на лекциях общего курса «Физиология человека и животных» и спецкурса «Трофология» на кафедре физиологии человека и животных Томского государственного университета.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Однократное сочетанное применение минеральной воды озера Шира и фитосбора оказывает стимулирующее влияние на секреторную функцию желудка собак, активируя выработку как «агрессивных» составляющих желудочного секрета, так и защитных его факторов. В химическую фазу желудочного сокоотделения отмечается максимальное проявление эффекта.
2. При однократном применении сочетанное использование минеральной воды озера Шира и фитосбора у крыс проявляет ингибирующее влияние, как на секреторную, так и на экскреторную функции желудка. Курсовое введение крысам в комплексе минеральной воды озера Шира и фитосбора возвращает кислотно-пептические показатели желудочного сока к контрольным значениям.
3. Получено ингибирующее влияние минеральной воды озера Шира на секреторную функцию желудка лабораторных животных после однократного и курсового ее введения. Однократное введение в желудок собак фитосбора повышает кислотность и протеолитическую активность желудочного сока. Сочетанное применение нивелирует это «противостояние» эффектов минеральной воды и фитосбора.
4. Сочетанное действие минеральной воды и фитосбора способствует проявлению процессов саморегуляции желудочной секреции. Они проявляются в выраженной зависимости секреторного ответа от исходного фона показателей секреции (особенно протеолитическая активность желудочного сока и количество в нем слизи). При высоком фоне показателя композиция {минеральная вода + фитосбор} снижает их уровень, при низком фоне -повышает.
5. Действие настоев растений, составляющих фитосбор, на показатели секреторной и экскреторной функций желудка крыс носит ингибирующий характер, который не во всех случаях сохраняется при их курсовом использовании. В частности, нормализация показателей активности ионов водорода и пептической активности ферментов желудочного сока происходит после курсового применения настоев зверобоя, мяты и чаги.
6. Изменения показателей плазмы крови лабораторных животных, характеризующих метаболическую функцию печени, после сочетанного применения минеральной воды озера Шира и фитосбора сохраняют пределы физиологической нормы, при этом проявляя защитно-компенсаторные влияния. Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на различных мероприятиях регионального, общероссийского и международного уровней: на городской конференции молодых ученых и специалистов «Региональные проблемы экологии и природопользования» (Томск, 1999); на региональной научно-практической конференции Сибири и Дальнего Востока, посвященной 150-летию со дня рождения академика И.П. Павлова (Томск, 1999); на XXVIII международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 2000); на 9ой и 10ой научно-практических конференциях «Достижения современной гастроэнтерологии» (Томск, 2001; 2002); на всероссийской конференции, посвященной памяти и 95-летию со дня рождения В.А. Пегеля «Физиология организмов в нормальном и экстремальном состояниях» (Томск, 2001); на международной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения A.M. Уголева «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2001); на IV съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002); на научной конференции, посвященной 70-летию биолого-почвенного факультета (Томск, 2003); на VI всероссийской конференции студентов и аспирантов по совместной программе Минобразования России и Государственного Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере «Студенты и аспиранты - малому наукоемкому бизнесу» (Ползуновские гранты) (Ярославль, 2003); на III всероссийской конференции с международным участием «Механизмы функционирования висцеральных систем», посвященная 175-летию со дня рождения Ф.В. Овсянникова (Санкт-Петербург, 2003).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ, из которых 6 в центральной печати.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста и состоит из списка сокращений, введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав собственных экспериментальных исследований, главы с обсуждениями полученных результатов, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 233 отечественных и 73 зарубежных источника, и приложения. Работа иллюстрирована 26 рисунками и 12 таблицами.
Влияние природных факторов и их сочетанного действия на секреторную и экскреторную функции желудка
Все больше внимания в последнее время уделяется регулирующим, экологически безопасным методам коррекции и профилактики различных нарушений в функционировании организма. К ним относится использование таких природных факторов, как минеральные воды (бальнеотерапия) и лекарственные растения (фитотерапия).
По данным экспертов ВОЗ от осложнений лекарственной терапии ежегодно погибают около 1 % жителей планеты. Значительно больше процент осложнений, снижающих качество жизни, инициирующих патологические процессы (Турищев С.Н., 1999). Более того, по признанию экспертов ВОЗ, регулирующая терапия станет терапией XXI века. Методы бальнео- и фитотерапии направлены прежде всего на регуляцию и нормализацию ответной реакции организма на патогенные воздействия окружающей среды.
Нередко синтетические лекарственные препараты сами по себе становятся самостоятельным патогенным фактором. Некоторые авторы считают, что, несмотря на значительные успехи в области химии лекарственных средств, вещества природного происхождения наиболее отвечают требованиям современной медицины (Турищев С.Н., 1999; Убашеев И.О., 1998; Савеленко Б.К., 2001; Ernst Е., 1998; O Hara М. et al., 1998; Winslow L.C., Kroll D.J., 1998; Craig W.J., 1999; Cowan M.M., 1999; Vickers A., Zollman C, 1999; Beyerstein B.L., 2001; Mahady G.B., 2001; Talalay P., 2001; Marcus D.M., Grollman A.P., 2002).
Глобальная цель применения минеральных вод и лекарственных растений как факторов экзогенной регуляции функций - направленная коррекция пищеварительного процесса, усиление или ослабление в случае необходимости составных частей этого процесса (Кузнецов Б.Г., 1988; Лещинский А.Ф., Улащик B.C., 1989; Завражнов В.И. и др., 1993; Савеленко Б.К., 2001). По мнению B.C. Ваганова (2001) методы естественного лечения относятся к методам эндогенной терапии и достижение эффективности в результате воздействия природных лечебных факторов осуществляется менее специфичным путем через активацию адаптационных резервов организма.
Среди многочисленных проблем особую актуальность приобрела проблема использования местных природных лечебных ресурсов, в частности минеральных вод и растительного сырья, являющихся природными факторами, значение которых с годами не только не снижается, а, наоборот, возрастает и расширяется диапазон их лечебного применения.
По расчетам Томского НИИ курортологии и физиотерапии в настоящее время потребность населения в санаторно-курортном лечении за счет местных ресурсов удовлетворяется лишь на 35%. В этой связи Западно-Сибирский регион как эндемический очаг некоторых серьезных заболеваний ЖКТ должен служить и источником сырья для бальнеотерапии и фитотерапии. Актуальность направления подчеркивается новой глобальной стратегией ВОЗ на XXI век, заключающейся в оценке окружающей среды в качестве главного фактора, определяющего здоровье человека (Бычкова Н.К., 1998).
Увеличение удельного веса в оздоровительной работе использования именно природных факторов обусловлено еще и дефицитом доступных лекарственных препаратов (Быкова В.В., 1991; Васильев А.В. и др., 2000). Сокращение индивидуальных затрат населения на профилактику и лечение обеспечит большее число людей высоким качеством жизни (Перегонцева С.А., 2000).
При широком применении природных средств для повышения эффективности их действия возникает необходимость их комплексного использования. Повышение эффекта может быть за счет сложения действующих в одном направлении (на одни и те же физиологические системы) единых начал или потенцирования действия одного фактора другим (Улащик B.C., 1986; Ушаков А.А., 1996; Соснин И.Н., Кариев М.Х., 1998; Михайлова Л.М., Забалуева Н.И., 1999). Анализ литературы выявил ограниченное число работ, посвященных изучению сочетанного применения минеральных вод и лекарственных растений с какими-либо физиофакторами. По мнению Л.А. Комаровой с соавт. (1986) за счет суммации и потенцирования действия нескольких факторов можно получить усиление и ускорение эффектов.
Есть отдельные исследования, показывающие эффективность сочетанного применения различных природных факторов, как то: синусоидальных модулированных токов и фитотерапии при язвенной болезни желудка (Комарова Л.А. и др., 1991); комбинированное применении грязевый аппликаций и питья минеральной воды при язвенной болезни (Мехтиев П.С., Мусаев А.В., 1997). Показана эффективность комплексного использования минеральных вод и природных энтеросорбентов при нефрокальцинозе (Гвозденко Т.А. и др., 2001), минеральных вод и пищевых добавок при гастродуодените (Кнышова В.В., 1999), возможность сочетанного применения питьевых минеральных вод и гипоксии (Полушина Н.Д. и др., 2000), а также минеральных вод и экстракта лечебной грязи (Калинин СВ., 2002). Имеется указание на использование ряда лекарственных растений (зверобой, ромашка, пустырник и др.) при комплексном медикаментозном лечении язвенной болезни желудка и получение эффективной положительной динамики (Лебедев В.П. и др., 1989).
Сочетанное использование природных факторов, когда несколько факторов действуют одновременно, является относительно новым направлением в комплексной физиотерапии (Комарова Л.А., Егорова Г.И., 1994).
Основы физиологических механизмов и лечебного действия сочетанных методов физиотерапии на организм можно сравнить с механизмами действия комбинированных фармакопейных препаратов, суммарный лечебный эффект которых значительно превышает действие каждого ингредиента, взятого в отдельности. Сочетание нескольких факторов основано на принципах рационального их подбора. Чаще всего при сочетанной физиотерапии используются факторы однонаправленного синергичного действия, сходное влияние которых суммируется или потенцируется друг другом. Результатом этого является усиление эффективности при назначении меньших доз — менее интенсивных по силе воздействий по сравнению с применением каждого природного фактора по отдельности. При сочетанной физиотерапии часто используются 2 фактора, из которых один улучшает реакцию или повышает чувствительность органа, системы или всего организма на действие другого фактора (Комарова Л.А., Егорова Г.И., 1994; Соснин И.Н., Кариев М.Х., 1998). При сочетанной физиотерапии также возможно использование факторов противоположного - антагонистического - действия чаще всего для ослабления или смягчения тех или иных реакций, возникающих в организме под влиянием одного из факторов (Комарова Л.А., Егорова Г.И., 1994; Михайлова Л.М., Забалуева Н.И., 1999).
Таким образом, правильно разработанные, научно обоснованные сочетания различных природных факторов друг с другом представляют большую ценность, в частности, для лечебной практики.
Следует отметить, что на многие природные факторы после нескольких сеансов воздействия развивается адаптация (привыкание), в силу чего влияние фактора постепенно снижается и становится мало значимым. При сочетанном методе применения природных факторов, который является более сильным раздражителем для организма в результате одновременного действия двух и более факторов, процесс адаптации становится менее выраженным, сила воздействия не ослабевает в течение длительного периода времени. В связи с этим терапевтическая эффективность сочетанных методов, как правило, значительно выше. По мнению Л.А. Комаровой и Г.И. Егоровой (1994), речь идет о пролонгированном периоде последействия сочетанного действия природных факторов.
Характеристика экспериментальных животных и общая структура физиологического эксперимента
Исследования проводились в хроническом эксперименте на 7 беспородных собаках - самцах весом от 14 до 20 кг, оперированных под нембуталовым наркозом с образованием фистулы желудка по В.А. Басову (Сперанская Е.Н., 1953).
Собак брали в опыт после 18-часовой пищевой депривации при свободном доступе к воде. Перед опытом желудок предварительно промывали от остатков пищи.
В качестве стимулятора желудочного сокоотделения во всех экспериментах использовали карбахолин («Reanal», Венгрия), который вводили внутримышечно в дозе 6 мкг/кг. Карбахолин является аналогом ацетилхолина -медиатора парасимпатической нервной системы, которая является стимулятором желудочной секреции. Он относится к группе парентеральных стимуляторов (как гистамин и пентагастрин), которые, всасываясь в кровь, гуморальным путем действуют на кислотообразующие железы и свидетельствуют о кислотообразующей способности желудка. За 30 минут до введения карбахолина собакам через фистулу вводили в желудок минеральную воду или фитосбор в дозе 5 мл/кг температурой 20С.
Перед каждой серией экспериментов устанавливался исходный фон желудочного сокоотделения. Контролем служили опыты с введением водопроводной воды, химический состав которой, по неопубликованным данным А.В. Куровского (2000) следующий: Са2+ - 48 мкг/л, Mg2+ - 19,2 мкг/л, СГ - 33,5 мкг/л, рН- 7,15, суммарная концентрация солей - 102,7 г/л.
Пробы собирались через каждые 30 минут, начиная с момента введения карбахолина. Вызванная секреция продолжалась 2,5 часа, что позволяет оценивать динамику изменения исследуемых показателей. В каждой пробе оценивались следующие показатели: объем желудочного сока, активность ионов водорода, протеолитическая активность желудочного сока, объем полостной слизи и содержание фукозы в желудочном соке, концентрация эндогенного аммиака в желудочном соке.
В хроническом эксперименте на собаках было проведено 4 серии опытов (всего 93 опыта) (таблица 1), обработано 465 проб желудочного содержимого и выполнено около 3000 анализов.
Для проведения острых опытов использовали самцов крыс линии Wistar массой 180 - 250 гр, выращенных в питомнике «Рассвет» НПО «Вирион» (сертификат имеется). Всего было использовано 170 крыс.
За 24 часа до операции крыс лишали пищи при свободном доступе к воде. Наложение лигатуры на пилорический отдел проводили под кратковременным эфирным наркозом. Затем в желудок вводили минеральную воду, фитосбор или настои растений в дозе 5 мл/кг температурой 20С. Через 30 минут крысам вводили подкожно карбахолин в дозе 25 мкг/кг. Вызванная секреция продолжалась 40 минут, после чего животных декапитировали и содержимое желудка подвергали биохимическому анализу. Оценивались те же показатели, что и в хроническом эксперименте на собаках, кроме того, определяли дебит соляной кислоты. Для оценки курсового влияния минеральной воды или настоев лекарственных растений на исследуемые показатели их вводили крысам ежедневно натощак интрагастрально через зонд в течение 14 дней.
В остром опыте на крысах было проведено 17 серий опытов (таблица 2) и собрано 170 проб желудочного содержимого, проведено около 1000 биохимических анализов.
Опыты проводились в осенне — зимний период в одно и то же время (в утренние часы). Содержание животных в виварии проводилось в соответствии с санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально - биологических клиник (от 06.04.1993 г.), кормление в соответствии с нормами утвержденными приказом МЗ РФ № 163 от 10 марта 1996 г. Карантирование животных проводилось в течение 30 дней. Все эксперименты проводились в соответствии с правилами гуманного обращения с животными, которые регламентированы «Правилами проведения работ и использования экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР № 775 от 12 августа 1977 г., а также основывались на положениях Хельсинской Декларации Всемирной Медицинской Ассоциации от 1964 г., дополненной в 1975, 1983 и 1989 г.г. Операции выполнялись с соблюдением требований асептики и антисептики, под общей анастезией.
Для оценки динамики функционального состояния печени исследования проводили в плазме крови опытных животных. При однократном введении минеральной воды озера Шира (минерализация 9,2 г/л), фитосбора или их сочетанного применения в дозе 5 мл/кг температурой 20С забор крови из вены у собак осуществляли через 30 минут после введения. В качестве контроля служило аналогичное введение водопроводной воды. Кровь забирали в количестве 4-5 мл, после чего центрифугировали 15-20 мин при 3000 об/мин. В плазме определяли уровень общего билирубина, общих липидов, малонового диальдегида, активность аланин- и аспартатаминотрансфераз. Кровь у крыс получали после декапитации из шейных сосудов. После центрифугирования анализ плазмы проводили по тем же показателям, что и у собак.
В хроническом эксперименте на собаках было проанализировано по всем показателям 40 проб крови, выполнено 200 анализов, в острых опытах на крысах - 170 проб крови и проведено 850 анализов.
Влияние однократного сочетанного применения минеральной воды озера Шира и фитосбора на секреторный процесс в желудке собак
Данный фрагмент работы был посвящен исследованию сочетанного влияния ширинской воды и фитосбора как в условиях разового так и курсового (14 дней) применения, для чего был проведен ряд экспериментов на крысах.
При однократном внутрижелудочном сочетанном введении природных факторов было выявлено ингибирующее действие на некоторые показатели секреторной функции желудка крыс: объем желудочного сока уменьшился на 52%, активность ионов водорода — на 65%, дебит соляной кислоты — на 67%, протеолитическая активность желудочного сока достоверно не изменилась. На фоне снижения «агрессивных» факторов желудочного сока отмечали уменьшение содержания фукозы в соке на 69% и снижение экскреции желудком аммиака на 39% (рис. 7, см. Прил. табл. 4).
После сочетанного введения в желудок минеральной воды озера Шира и фитосбора в течение 14 дней сохранился характер изменений для многих показателей функций желудка крыс, но если для одних эффект стал еще заметнее, то для других, напротив, значение приближалось к контрольному уровню. Так, объем желудочного сока относительно контроля с водопроводной водой остался понижен на 47%. По-прежнему ниже контрольного значения (на 94%), но выше однократного сочетанного введения ширинской воды и фитосбора (на 59 %) была активность ионов водорода. Приблизились к исходному уровню показатели дебита соляной кислоты и протеолитической активности желудочного сока. Относительно однократного введения дебит НС1 увеличился в 2 раза, а протеолитическая активность снизилась на 34 %. Ингибирующее влияние сохранилось для концентрации эндогенного аммиака (понижение на 39 % относительно контроля и на 22 % относительно однократного сочетанного применения физиофакторов) и содержания фукозы в желудочном секрете (уменьшение на 67 % относительно контроля и на 45 % относительно однократного сочетанного введения).
Корреляционный анализ данных, полученных на крысах, показал выраженную положительную зависимость (rs = 0,92) между активностью ионов водорода и дебитом НС1 при однократном сочетанном применении природных факторов. Возможно, это лишь подчеркивает достоверность результатов относительно угнетения кислотообразующей функции желудка крыс.
Таким образом, сочетанное применение минеральной воды озера Шира и фитосбора у крыс в условиях однократного воздействия проявляет ингибирующее влияние, как на секреторную, так и на экскреторную функции желудка. Курсовое же введение крысам в комплексе минеральной воды озера Шира и фитосбора нормализует уровень кислотно-пептической активности желудочного сока, возвращая значения к контрольным значениям, что, возможно, говорит о процессах адаптивного характера.
Обращает на себя внимание тот факт, что сочетанное применение минеральной воды озера Шира и фитосбора у собак и крыс вызвало несколько разные по характеру ответные реакции со стороны секреторно-экскреторной деятельности желудка: у собак преобладало стимулирующее влияние, тогда как у крыс было выражено тормозное действие на показатели желудочной секреции. За отсутствием литературных данных по вопросу сочетанного действия минеральных вод и растений не известно, насколько уместным будет предположение о наличие видоспецифической реакции разных лабораторных животных на исследуемые средства.
Имеются лишь указания на то, что биофлавоноиды растительного происхождения способны влиять на активность холинэстеразы, пролонгируя действие ацетилхолина или повышая чувствительность к нему (Зуева Е.П. и др., 2003). Гипотетически можно предположить, что холинэстераза у разных видов животных может обладать разной чувствительностью к ряду экзогенных биологически активных веществ. Также из литературы известно, что ионы Mg необходимы для синтеза холинэстеразы (Ваганова B.C., 2001). Не исключено, что в дозе 5 мл/кг в перерасчете на массу тела собакам этих ионов попадало больше, чем крысам, возможно, поэтому мы и наблюдаем более выраженное стимулирующее действие.
Кроме того, не следует забывать и о разных условиях хронического и острого опытов. Ведь в остром опыте животные подвергаются действию наркоза, хирургическому вмешательству и стрессу. Возможно, это могло отразиться на полученных результатах.
Материал, полученный в рамках данного этапа работы, представляется весьма интересными, однако не дает пока возможности выделить, какому фактору принадлежит основное влияние в механизме сочетанного действия минеральной воды озера Шира и фитосбора. Также нет пока представлений о характере - синергическом или антагонистическом - их сочетанного действия. Оказалось необходимым выяснить вклад каждого из используемых нами природных факторов в формирование ответной реакции со стороны секреторной функции желудка и экскреции в нем аммиака.
Действие минеральной воды озера Шира на секреторный процесс в желудке собак при разовом введении Данный фрагмент исследования был посвящен рассмотрению физиологических эффектов минеральной воды озера Шира в условиях здорового организма на секреторную и экскреторную активность желудка собак при однократном применении. Было установлено, что ширинская минеральная вода вызывает увеличение сокоотделения - на 93% наряду с не менее весомым снижением кислотности желудочного сока - на 46% (табл. 4).
Что касается динамики изменения данных показателей, то статистически значимые изменения отмечали практически на протяжении всего экспериментального времени для объема желудочного сока (рис. 8, см. Прил. табл. 2) и активности ионов водорода в соке (рис. 9, см. Прил. табл. 2). Причем максимально выраженная ответная реакция прослеживалась преимущественно в сложнорефлекторную фазу желудочного сокоотделения.
Сочетанное действие минеральной воды озера Шира и фитосбора на секреторную и экскреторную функции желудка лабораторных животных
Настой пустырника пятилопастного при однократном введении в желудок крыс оказал достоверное влияние на следующие показатели: объем желудочного сока уменьшился на 34 %, активность ионов водорода в желудочном соке - на 62 %, дебит соляной кислоты - на 50 %, концентрация эндогенного аммиака в желудочном соке - на 17 %. Достоверных изменений не было обнаружено для протеолитической активности и уровня фукозы в желудочном соке (рис. 24, см. Прил. табл. 9).
Курсовое воздействие пустырника привело к тому, что объем желудочного секрета еще более уменьшился - на 75 % относительно контроля и на 62 % относительно разового применения. Кислотность желудочного сока после 14 дней применения настоя пустырника приблизилась к контрольному значению. Активность ионов водорода стала в 2 раза выше относительно однократного воздействия. Пептическая активность желудочного сока увеличилась на 53 % относительно контроля и на 86 % относительно однократного введения. Только 2-х недельное воздействие настоя пустырника оказало достоверное влияние на уровень фукозы в желудочном соке, который упал на 37 %. Более сниженной стала и экскреторная активность желудка -концентрация эндогенного аммиака уменьшилась на 23 % (рис. 24, см. Прил. табл. 9).
Корреляционный анализ не выявил взаимосвязей между исследуемыми показателями желудочной секреции крыс при воздействии настоя пустырника.
Таким образом, более действенным оказалось однократное введение настоя пустырника. Но и при курсовом введении отмечалось снижение интенсивности секреторно-экскреторной деятельности желудка. Не исключено, что усиление пептической активности желудочного сока при курсовом применении связано с уменьшением объема желудочного секрета.
Однократное применение настоя кипрея узколистного привело к достоверному снижению объема желудочного сока у крыс на 58 % и содержания фукозы в нем на 23 %. Для других показателей достоверных изменений обнаружено не было (рис. 25, см. Прил. табл. 10).
После запаивания животных в течение 14 дней настоем кипрея уменьшилось выделение желудочного сока на 61 %, на 43 % понизилось содержание фукозы в соке. Только при курсовом введении кипрея произошли изменения дебита соляной кислоты и концентрации эндогенного аммиака на 50 и 29 % соответственно. Относительно однократного введения настоя достоверно изменилась протеолитическая активность желудочного сока, которая уменьшилась на 22 %, и концентрация аммиака, которая снизилась на 19 % (рис. 25, см. Прил. табл. 10).
Как видно на рисунке 25 (см. Прил. табл. 10), настой кипрея, более чем все изученные растения, способен оказывать действие на желудочную секрецию крыс после курсового воздействия.
Корреляционный анализ выявил взаимосвязь между объемом желудочного сока и дебитом соляной кислоты (rs = + 0,74), а также между активностью ионов водорода и уровнем фукозы (rs = - 0,81), но только при однократном использовании настоя кипрея.
Таким образом, настой кипрея в меньшей степени, чем другие используемые нами растения, способствует угнетению секреторного процесса в желудке крыс, оказывая свое влияние преимущественно на содержание фукозы в желудочном соке и на концентрацию в нем эндогенного аммиака.
