Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы
1. Стресс как неспецифический адаптивный синдром стр.8
1.1. Стресс-система стр. 10
1.2. Стресс-лимитирующие системы стр.11
2. Нарушения микроциркуляции при стрессе
2.1. Нарушение кровоснабжения как основа стрессогенных патологий стр.14
2.2 Лимфатическая система как часть микроциркуляторного русла стр.20
3. Тучные клетки - звено адаптивной реакциистр.22
3.1. Участие тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции и язвообразовании СОЖ . стр.29
4. Физиологические функции глипролинов и семакса стр.33
Материалы и методы стр.39.
1. Влияние стресса на микроциркуляцию в брыжейке крыс
1.1. Изменение параметров микроциркуляции в брыжейке при различных стрессорных воздействиях стр.44
1.2. Исследование участия тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции в брыжейке. стр.51
2. Влияние разных видов стресса на секреторную активность тучных клеток стр.57
3. Протекторные эффекты глипролинов и семакса в отношении стресогенных нарушений микроциркуляции стр.67
4. Действие глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток
4.1. Исследование влияния глипролинов и семакса на спонтанную секрецию тучных клеток in vivo стр,71
4.2. Влияние глипролинов и семакса на стрессогенную активацию тучных клеток стр.72
4.3. Влияние глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток при введении синактена стр.78
4.4. Влияния глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток in vitro стр.80
5. Исследование динамики воздействия семакса HPGP на секреторную активность тучных клеток стр.84
Заключение стр.87
Выводы стр.90
Приложение стр.91
Список литературы.. стр.108
- Нарушение кровоснабжения как основа стрессогенных патологий
- Участие тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции и язвообразовании СОЖ
- Изменение параметров микроциркуляции в брыжейке при различных стрессорных воздействиях
- Протекторные эффекты глипролинов и семакса в отношении стресогенных нарушений микроциркуляции
Введение к работе
Актуальность проблемы. Несмотря на большое количество
исследований, посвященных различным аспектам проблемы стресса и стрессорной патологии, до сих пор нет целостного представления об этом феномене как физиологическом явлении, о механизмах его возникновения и формирования, механизмах, лежащих в основе устойчивости организма к стрессорным воздействиям.
Хронические и сильные стрессорные воздействия могут провоцировать серьезные поражения сердечно-сосудистой системы (внезапная сердечная смерть, инфаркт миокарда, гипертонический криз, инсульт), язвенную болезнь желудка, двенадцатиперстной кишки и другие патологии желудочно-кишечного тракта, а также поражения кровеносной и иммунной систем. Поэтому проблема возникновения и предупреждения патологий, вызванных стрессорным воздействием, до настоящего времени остается весьма актуальной.
Важным условием устойчивости организма к патологическим воздействиям стрессорных факторов является поддержание адекватного крово- и лимфообращения, нарушения которых приводят к ишемии тканей, переходящей в более тяжелые повреждения.
Для профилактики и коррекции стрессорных повреждений особое значение имеет поиск и создание новых лекарственных препаратов, обладающих протекторной активностью и направленных на ограничение чрезмерной стресс-реакции.
В последнее время ведется активное исследование семейства коротких пролинсодержащих пептидов - глипролинов (фрагменты коллагена, состоящие из аминокислот глицина и пролина - PGP, PG, GP) и семакса (фрагмент адренокортикотропного гормона АКТГ47 с присоединенным на С-конце PGP), которые обладают широким спектром биологической активности. Так, эти пептиды проявляют антитромботические и антиагрегационные свойства (Ашмарип, Пасторова и др., 1998; Черкасова, Ляпина и др., 2001), влияя на тонус кровеносных сосудов, способствуют поддержанию адекватного кровотока (Бакаева, Бадмаева и др., 2003), обладают выраженной антиульцерогенной активностью (Абрамова, Самонина и др., 1996; Самоиина, Копыловаидр., 2001; Жуйкова, Бакаева и др., 2003).
Сведения о влиянии глипролинов и семакса на микроциркуляцию крайне ограничены Известно, что PGP, PG и семакс препятствуют падению кровотока в стенке желудка при введении индометаципа (Жуйкова, Сергеев и др., 2002), семакс также модулирует нарушенное кровообращение в мозге (Ашмарин, Незавибатько и др., 1997).
В связи с известной биологической активностью глипролинов и семакса мы предположили, что эти пептиды могут участвовать в поддержании гомеостаза на уровне микроциркуляторного русла.
В регуляции кровеносной и лимфатической микроциркуляции принимают участие тучные клетки, которые силіезаруют. депонируют и секретируют широкий спектр биоліг^ЩАі*И*вМ|,^ешкств, в том
числе мощные вазодилятаторные и провоспалительные агенты -гистамин, протеазы, фактор активации тромбоцитов и др. (Galli, 1990; 2000; Krager-Krasagakes, Moller et al, 1996; Metcalfe, Baram et al, 1997). Установлена связь различных патологических изменений в организме, вызванных стрессорными воздействиями, с усилением секреторной активности тучных клеток (Lau, Ogle, 1980; Barszuk, Debek, 1995; Theoharides, Spanos et al, 1995; Theoharides, Letourneau et al, 1999; Lytinas, Kempuraj et al, 2003). Сведения о действии глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток в литературе отсутствуют.
Целью настоящей работы было исследование возможности протекторного действия глипролинов и семакса в отношении стрессогенных нарушениях микроциркуляции.
Перед нами стояли следующие задачи:
изучить характер стрессогенных нарушений микроциркуляции в брыжейке крыс;
выяснить роль тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции;
исследовать влияние предварительного введения глипролинов и семакса на выраженность стрессогенных нарушений микроциркуляции;
изучить влияние пролинсодержащих пептидов на стрессогенную активацию тучных клеток.
Научная новизна работы. Впервые детально проанализирован характер постстрессорных нарушений в микроциркуляторном русле брыжейки крыс.
Показано, что выраженность микроциркуляторных повреждений и степень усиления секреторной активности тучных клеток увеличиваются с ростом интенсивности стрессорных воздействий.
Впервые обнаружено свойство глипролинов (PGP, PG, GP) и семакса снижать реакцию тучных клеток на действие стрессора.
Впервые выявлены протекторные свойства глипролинов и семакса относительно стрессогенных нарушений микроциркуляции в брыжейке.
Научное и практическое значение исследования. Полученные данные уточняют и углубляют представления о развитии стресс-реакции на уровне микроциркуляторного русла.
Установленное в экспериментах на животных протекторное действие глипролинов и семакса относительно стрессогенных нарушений микроциркуляции брыжейки крыс позволит расширить сферу их исследования как препаратов, предохраняющих организм от патологического влияния стресса.
Апробация диссертации - Материалы исследования обсуждались на Втором Российском конгрессе по патофизиологии "Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы", Москва,9-12 октября 2000; XVTII съезде физиологического
общества им И.П. Павлова, Казань, 25-28 сентября 2001; на конференции молодых ученых "Ломоносов, 2002", Москва, 2002; на III Всероссийской конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем", Санкт-Петербург, 29 сентября-1 октября 2003; на заседаниях кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ, Москва 2001-2003.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, приложения и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 124 листах, содержит 19 рисунков и 16 таблиц. Список литературы включает 155 источников.
Нарушение кровоснабжения как основа стрессогенных патологий
В зависимости от состояния стресс-системы, характера адаптивного ответа и способности стресс-лимитирующих систем регулировать этот ответ, стресс может вызывать некоторые психосоматические расстройства или потенциировать уже имеющиеся заболевания. Одной из основных причин патологий функций органов является нарушение их адекватного кровоснабжения, связанное со стрессогенными изменениями условий микроциркуляции.
Микроциркуляторное русло представляет собой разветвленную сеть кровеносных и лимфатических сосудов.
К системе микроциркуляции крови относятся капилляры, прилегающие к ним мелкие артерии и вены, а также артерио-венозные анастамозы диаметром примерно до 100 мкм. Движущей силой кровотока в системе микроциркуляции любых органов является артерио-венозная разность давлений, которую называют также перфузионным давлением для данной системы сосудов. При относительной стабильности артерио-венозной разности давлений (которая имеет место в нормальных условиях) интенсивность микроциркуляции определяется величиной сопротивления на протяжении данного русла. В обычных условиях это сопротивление зависит от изменения просвета соответствующих артерий. При патологии периферическое сопротивление может меняться не только в результате патологических сосудистых реакций, но и вследствие изменений реологических свойств крови и при закупорке сосудистого просвета (тромбоз, эмболии и т. д.) (Мчедлишвили, 1989), Функция различных отделов микроциркуляторного русла находится в полном соответствии с особенностями строения стенок микрососудов. Основными регуляторами интенсивности микроциркуляции являются приводящие артерии, стенки которых имеют относительно, толстый мышечный слой, снабженный богатой вазомоторной иннервацией и активно реагирующий на прямое воздействие физиологически активных веществ, циркулирующих в крови или образующихся внутри или вблизи сосудистых стенок. Венозный отдел микроциркуляторного русла может участвовать в регуляции кровотока в микрососудах, хотя он имеет меньшее значение. Стенки кровеносных капилляров лишены специализированных сократительных элементов и потому участвуют только в процессе выключения капилляров из кровобращения. На уровне капилляров, через интерстициальное пространство, происходит обмен жидкостями и белками между кровью и лимфой, что имеет важное значение для обеспечения таких физиологически значимых процессов как перераспределение жидкостей в организме, поддержание иммунитета, дезинтоксикация и другие. Иными словами, от работы микроциркуляторного русла во многом зависит поддержание гомеостаза организма.
Микроциркуляторное русло отличается от других частей кровеносной системы не только по своему строению и функции, но и по особенностям микрореологии крови, ее свойства значительно отличаются от вязкостных характеристик однородных жидкостей. Одной из причин нарушения нормальной структуры потока крови в микрососудах является внутрисосудистая агрегация эритроцитов, при которой текучесть крови понижается, вызывая замедление тока крови вплоть до его полной остановки. Уменьшение объема крови, протекающей по микроциркуляторному руслу (ишемия), происходит в результате констрикции приводящих артерий (Мчедлишвили, 1989; Pries, Secomb, 2003).
Микроциркуляция обладает относительно самостоятельным регулированием, которое либо приводит к необходимым ее изменениям, либо к поддержанию ее постоянного уровня, особенно при патологических условиях, когда ее нарушения могут стать опасными для функции органов. Регулирование микроциркуляции осуществляется обычно вазомоторикой внутриорганных сосудов и всегда направлено, с одной стороны, на приспособление кровотока к специфической функции соответствующих органов и тканей, а с другой - на устранение возможных нарушений кровотока в них (DeFily, 1998; Monsuez, 2001).
В регуляции работы микроциркуляторного русла принимают участие как простые механизмы (растяжение сосудистых стенок, действие химических веществ и газов крови), так и сложные-через стимуляцию баро-, механо- и хеморецепторов. Миогенный, гуморальный и нейрогенный механизмы поддерживают адекватный уровень микроциркуляции. Стрессорные воздействия могут нарушать работу этой системы на разных уровнях. Когда нервная система включается в стресс-реакцию, в организме резко возрастает уровень стрессорных гормонов и кининов, которые оказывают влияние на сократимость и проницаемость сосудистых стенок, что, в свою очередь, не может не сказаться на работе микроциркулятороного русла (Plante, 2002).
Ярким примером стрессогенных патологий являются нарушения работы сердечно-сосудистой системы, почек, печени, нейродермиты. Во время первой стадии стресс-реакции, то есть при остром стрессе, возникают нарушения, ведущие к образованию в пищеварительной системе повреждений слизистой оболочки вплоть до появления язв. Язвенные повреждения желудка являются адекватным показателем стрессорной реакции, и поэтому широко используются в v экспериментальных исследованиях как для оценки интенсивности стрессорного воздействия, так и для изучения резистентности к этому воздействию,
В норме работа желудочно-кишечного тракта осуществляется при сложном балансе агрессивных и защитных факторов желудочного сока. Присутствие в желудочном соке кислой протеазы пепсина и соляной кислоты определяет как его переваривающую функцию, так и агрессивные свойства по отношению к СОЖ. Защиту СОЖ обеспечивают слизебикарбонатный барьер, нормальная регуляция моторной функции, кровоснабжения и крово- и лимфоциркуляции на уровне микрососудов, а также высокие репаративные способности желудочного эпителия.
Любое воздействие, направленное на увеличение продукции соляной кислоты или пепсина или, наоборот, ослабляющие щелочную продукцию и слизеобразование, а также нарушающие регенерационные способности поверхностного эпителия и кровоснабжение слизистой оболочки являются потенциальными факторами, способствующими повреждениям слизистой и язвообразованию (из книги Элем, патфизиол, 1997).
Участие тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции и язвообразовании СОЖ
В активации тучных клеток и регуляции их секреции при развитии стрессорной реакции важная роль принадлежит нервной системе. Тучные клетки находятся в тесном контакте с нервными волокнами и могут активироваться медиаторами нервных окончаний. Выделяемые тучными клетками биологически активные вещества, в Є свою очередь, оказывают регулирующе влияние на рецепторные окончания, развитие воспаления, болевого синдрома, а при травмировании нервов могут служить источником ростовых факторов нервной ткани (Nennesmo, Reinolt, 1986; Stead, Dixon et al., 1989; McKay, Bienenstock, 1994; Willams, Berthoud, J 997). Стрессы различной этиологии приводят к активации секреторной активности ТК. Было показано увеличение числа дегранулиро анных тучных клеток в соединительной ткани органов и периваскулярном пространстве при воздействии на организм физических и психологических факторов. Возникающие при этом повреждения слизистой оболочки желудка сопровождаются скоплением тучных клеток, их усиленной дегрануляцией и выделением провоспалительных медиаторов, влияющих на кровоток, микроциркуляцию, эпителиальную и эндотелиальную проницаемость, секрецию слизи (Barszuk, Debek, 1995; Steiner, Gonzalez et al., 2003).
Так, гиповолюмический шок и резкое снижение кровотока в стенке желудка приводили к дегрануляции тучных клеток и язвообразованию (Kokoschka, Gyber, 1977). Стресс при перевязке пилоруса сопровождается активацией ТК через холинергические пути и повреждениями в желудке, которые можно предотвратить
зо предварительным введением атропина (Cho, Ogle, 1979). Иммобилизационный стресс также приводит к резкому опустошению тучных клеток двух популяций — подкожной клетчатки и брыжейки, что говорит о практически повсеместной реакции ТК на стрессорное воздействие (Умарова, Шапиро и др., 1994). Водоиммерсионный стресс ведет к двухфазному нарастанию уровня гистамина в плазме, ведущее звено в этом процессе - его быстрый выброс из тучных клеток (Huang, Mochiszuki et al., 1998, 1999). Помимо непосредственной стимуляции нейромедиаторами, на тучные клетки как дегранулирующие агенты действуют кортикотропин-рилизинг гормон, нейротензин, АКТГ, урокортин выделяющиеся при стрессе (Шапиро, Умарова и др., 1995; 1998; Pang, Alexacos, 1998; Singh, Boucher et al., 1999; Lytinas, Kempuraj et al., 2003).
Отмечено, что при стимуляции вагуса повреждения слизистой желудка развивались на фоне повышенной дегрануляции тучных клеток. Введение NaHC03 нейтрализовало повышенный уровень НС1, но не предотвращало язвообразование и дегрануляцию. В то же время антагонист М - холинорецепторов (атропин) снижал и дегрануляцию тучных клеток и степень повреждения. Степень повреждения уменьшалась и после действия блокаторов Hi и Н2 рецепторов. На основании этого авторы приходят к выводу, что в данной экспериментальной модели гистамин, выделяющийся при дегрануляции тучных клеток, вызванной стимуляцией вагуса, действуя через Hi и Н2 рецепторы в желудке, является ведущим звеном в патогезе язвообразования (Cho, Hung et al., 1985).
В связи с вышесказанным есть все основания полагать, что тучные клетки, их активация и секреция ими биологически активных соединений, должны принимать непосредственное участие в физиологических и патологических процессах в слизистой желудочно-кишечного тракта. Это предположение имеет целый ряд экспериментальных подтверждений, свидетельствующих о том, что все воздействия, усиливающие дегрануляцию тучных клеток, одновременно способствуют язвообразованию, а стабилизация тучноклеточной популяции коррелирует с противоязвенным эффектом.
Так предварительное истощение тучных клеток дексаметазоном снижало язвообразование в желудке при стрессе (Lau, Ogle, 1980) и при воздействии этанола (Andersson, Mattsson et al., 1990; Rioux, Wallase, 1994). Ряд авторов изучал протекторный эффект стабилизаторов тучных клеток на разнообразных моделях язвообразования. Препараты цинка оказывают благоприятное действие на слизистую желудка при холодовом (Pfeiffer, Bulbena, 1987) и иммобилизационном стрессе через ингибирование выделения вазоактивных веществ из тучных клеток (Cho, Ogle et al., 1978). Takeuchi с сотрудниками исследовали действие стабилизаторов тучных клеток FPL-52694 и хромогликат натрия при оральном и внутрибрюшинном введении на различных моделях язвообразования: перевязка пилоруса, аспириновой, резерпиновой, водно-иммерсионном стрессе (1984); этаноловой модели (1986). Во всех случаях наблюдали снижение язвообразования, возможно опосредованное эндогенными простагландинами.
Показано, что противоязвенный и антивоспалительный эффект простагландина Е2 также связан с подавлением высвобождения из тучных клеток проульцирогенных и воспалительных факторов (Hodaboam, Bissomette et. al., 1993). А ПГ-12 оказывает сосудорасширяющее и цитопротекторное действие на модели ожогового поражения желудка (Battal, Hata et al., 1997). Кетотифен, снижая секрецию тучных клеток, подавляет адгезию лейкоцитов к эндотелию и воспаление в брыжейке (Costa, Harris et al., 1999).
Стабилизаторы тучных клеток также предупреждают воспаление, возникающее в результате рефлюксии НС 1 в пищевод из желудка (Barklay, Dinda et al., 1995; Feldman, Morris et al., 1996).
Изменение параметров микроциркуляции в брыжейке при различных стрессорных воздействиях
Известно, что стрессорные воздействия различной интенсивности приводят к изменениям проницаемости сосудистой стенки, нарушениям микроциркуляции и, как следствие этого, ишемии тканей, переходящей в более тяжелые повреждения, в том числе язвенные поражения слизистой оболочки желудка.
Одним из наиболее удобных объектов для изучения условий микроциркуляции является брыжейка, структурно-функциональная организация которой позволяет вести прижизненное наблюдение состояния кровеносных и лимфатических сосудов, лежащих в тонкой соединительнотканной пленке.
При исследовании влияния различных видов стресса на состояние микрососудов брыжейки крыс использовали четыре вида стресса: иммобилизацию в течение одного часа; постоперационную иммобилизацию - часовая иммобилизация через 12 часов после вживления в область лопатки электродов для регистрации частоты сердечных сокращений; водоиммерсионный иммобилизационный холодовой стресс 3 часа; и внутримышечное введение ХЦК-4 в дозе 100 мкг/кг.
Исследование состояния микроциркуляторного русла брыжейки проводили через 30-40 минут после окончания стрессорного воздействия.
О состоянии кровеносной системы судили по числу кровоизлияний - подсчитывали среднее количество на «окошко» (участок брыжейки между двумя крупными кровеносными сосудами) и по интенсивности кровотока. Визуально проводили качественную оценку кровотока в микрососудах и выражали в условных единицах: +++ - более чем у 80% микрососудов кровоток нормальный, т.е. при движении эритроциты сливаются в одну массу; ++ - примерно 50% сосудов имеют замедленный кровоток, можно проследить движение отдельных эритроцитов; + - более чем в 70% микрососудов кровоток медленный, в некоторых случаях вплоть до остановки, при этом эритроциты располагаются в сосуде в виде «монетного столбика».
О состоянии лимфатической системы судили по наличию исходной сократительной активности лимфангионов, лимфотока в них, а также оценивали количество форменых элементов в русле сосуда. Кроме того, детально анализировали характер реакции лимфатических сосудов на аппликацию норадреналина в концентрации 10"6М. У каждого животного исследовали от 5 до 10 сосудов. При этом оценивали: время от начала наблюдений, в течение которого лимфатические сосуды не реагировали на аппликацию норадреналина (время отсутствия реакции); процент сосудов, ответивших на аппликацию норадреналина серией ритмических сокращений; латентный период — время от аппликации норадреналина до начала сокращений; количество сокращений на первой минуте ответа и общую длительность периода сокращений после аппликации норадреналина; при помощи микролинейки на экране монитора измеряли амплитуду сокращений и выражали в процентах к исходному диаметру.
Внешний вид брыжейки и кишечника оценивали визуально. Полученные данные представлены в таблице 1 и на рисунке 3. У контрольных животных с самого начала эксперимента практически все лимфатические сосуды отвечали на аппликацию норадреналина (10"6М) серией сокращений, что соответствует данным литературы (Mahe, Chapelain et al., 1989). После стресса лимфатические сосуды временно теряли способность реагировать на норадреналин. Время отсутствия реакции на аппликацию норадреналина возрастало с увеличением силы и длительности стрессогенного воздействия. Наименьший эффект оказывала часовая иммобилизация - время отсутствия реакции в среднем составило 7,5 минуты; латентный период, число сокращений в минуту и процент ответивших сосудов достоверно не отличались от контроля. Заметно снизилась только длительность ответа на норадреналин. Увеличение интенсивности стрессорного воздействия - постоперационная часовая иммобилизация и 3-х часовой водоиммерсионный холодовой стресс вызывали значительно большие изменения - время отсутствия реакции составило, соответственно, 74 и 69 минут; кроме этого достоверно увеличился латентный период ответа, уменьшилось число сокращений на 1-ой минуте ответа и длительность реакции на аппликацию норадреналина; процент ответивших сосудов снизился практически в два раза. Изменения реактивности лимфатических сосудов, которые мы наблюдали после психо-эмоционального стресса, вызванного введением холицистокинина-4, были сходны с таковыми после часовой иммобилизации.
Таким образом, эксперимент показал, что стресс снижает чувствительность лимфатических сосудов к норадреналину. В литературе подобные наблюдения отсутствуют.
Протекторные эффекты глипролинов и семакса в отношении стресогенных нарушений микроциркуляции
Для выяснения возможности прямого действия пептидов на ТК была выполнена серии опытов in vitro. В первой серии опытов образцы подкожной клетчатки и брыжейки в течение 15 минут инкубировали в растворах пептидов (PG, GP, PGP - 6 10"5М, семакс - 1,2 10 6М), контрольные препараты инкубировали в физиологическом растворе. Инкубация образцов тканей в растворах PG, GP, PGP и семакса не изменила физиологического состояния тучных клеток. Результаты представлены в таблице 9 приложения. Таким образом, в условиях in vitro, также как и in vivo, глипролины и семакс не оказывали скольно-нибудь заметного влияния на уровень спонтанной (базальной) секреторной активности тучных клеток. В опытах по исследованию влияния глипролинов и семакса на вызванную секреторную активность тучных клеток в качестве активаторов использовали синактен (2 10"5М) и вещество 48/80 (2 10" 5 г/мл). Образцы тканей инкубировали последовательно по 30 минут в растворе исследуемого пептида и активатора. Результаты представлены на рисунках 17 и 18 и в таблице 10 приложения. При стимуляции тучных клеток синактеном (рис.17) усиление секреторной активности выразилось в росте индекса дегрануляции, количество клеток с сильной степенью дегрануляции также несколько увеличилось. Преинкубация в растворах пептидов практически полностью предотвращала активацию секреции тучных клеток синактеном. Индекс дегрануляции был достоверно ниже по сравнению со стимуляцией синактеном на фоне физиологического раствора, распределение клеток по степеням дегрануляции также не отличалось от контроля. В следующей серии опытов, в качестве активатора другой природы использовали вещество 48/80. При инкубации образцов ткани в растворе вещества 48/80 (рис. 18) наблюдали более существенное увеличение индекса дегрануляции (на 35 %). При этом количество клеток с сильной степенью дегрануляции составляло более половины всех дегранулированных клеток. Предварительная инкубация образцов ткани в растворах глипролинов и семакса не снижала активирующего эффекта вещества 48/80. Таким образом, все исследованные пептиды снижают ответ тучных клеток на действие синактена, но не вещества 48/80. Это может быть следствием различий в механизмах активирующего действия этих соединений.
Действие на тучные клетки АКТГ, его аналогов и фрагментов опосредовано рецепторами на мембране клеток. Вещество 48/80 является классическим либератором полиосновного типа и активирует тучные клетки, встраиваясь гидрофобной частью молекулы в мембрану клетки и непосредственно связываясь с G-белком (Metcalfe, Baram. etal, 1997).
Особого внимания заслуживает способность глипролинов и семакса предотвращать активацию тучных клеток синактеном -аналогом AKTTV24- Этот факт позволяет предположить, что исследуемые пептиды могут также модулировать и другие реакции, опосредуемые АКТГ.
Поскольку известно, что в ходе стресс-реакции активация тучных клеток начинается уже с первых минут воздействия и закономерно развивается во времени (Шапиро,Умарова и др., 1994), в следующих опытах мы исследовали влияние глипролинов и семакса на функциональное состояние тучных клеток на разных этапах этой реакции.
Часовой иммобилизационный стресс: Пептиды вводили за 1 час до стрессорного воздействия. Материал собирали на 5, 15 и 60 минутах стресса. Результаты представлены на рисунке 19А и в таблице 11 приложения.
Как видно на рисунке, иммобилизация уже на пятой минуте приводит к достоверному росту индекса дегрануляции, этот показатель остается высоким в течение всего периода наблюдения (до шестидесятой минуты). Процентное содержание среди дегранулированных клеток, клеток с сильной степенью дегрануляции также растет.
Внутрибрюшинное введение за час до стресса семакса и PGP (рис.19) предупреждало развитие активирующего влияния иммобилйзационного стресса на секреторную активность тучных клеток с первых минут и на протяжении всего времени стрессорного воздействия.
