Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Факторы, влияющие на результаты инкубации куриных яиц 10
1.2. Особенности иммунной системы птиц 21
1.3. Характеристика биологически активных веществ, выделенных из тканей тимуса и фабрициевой сумки птиц 29
2. Материал и методы исследований 34
3. Результаты исследований 38
3.1. Применение нетрадиционных способов предынкубационной обработки яиц 38
3.1.1. Вакуумирование яиц 38
3.1.2. Обработка яиц вибрацией 39
3.1.3. Влияние транспортировки яиц перед инкубацией на вывод цыплят 42
3.1.4. Оксигенация яиц 45
3.1.5. Инсоляция инкубационных яиц 46
3.1.6. Гелий-неоновое облучение инкубационных яиц 47
3.1.7. Прединкубационная обработка яиц жидким азотом 49
3.1.8. Обработка яиц ионами серебра 50
3.1.9. Использование настоев лекарственных трав для предынкубационный обработки яиц 50
3.2. Особенности морфологического строения тимуса и фабрициевой сумки у цыплят-бройлеров полученных из яиц, подвергавшихся перед инкубацией обработке различными способами 52
3.3. Состояние клеточных мембран иммунных и пищеварительных органов у цыплят-бройлеров 54
3.4. Естественная резистентность у цыплят-бройлеров, полученных из яиц подвергавшихся предынкубационной обработке различными способами 60
3.5. Морфо-функциональные свойства эритроцитов цыплят-бройлеров, полученных из яиц после обработки перед инкубацией различными способами 63
3.6. Характеристика морфологической структуры иммунных органов цыплят-бройлеров, полученных из яиц после применения различных методов предынкубационный обработки яиц 65
3.6.1. Микроструктура тимуса и фабрициевой сумки цыплят, полученных из яиц, подвергавшихся вибрации 65
3.6.2. Особенности микроструктуры тимуса и фабрициевой сумки цыплят, полученных из яиц, подвергнутых вакуумированию 68
3.6.3. Микроструктура иммунных органов цыплят, полученных из яиц подвергавшихся воздействию низкой температуры 71
3.6.4. Характеристика микроструктуры тканей иммунных органов цыплят, полученных из яиц обработанных лазерным облучением 76
3.6.5. Микроструктура тканей тимуса и фабрициевой сумки цыплят, полученных из яиц подвергавшихся обработке настоями лекарственных трав 79
3.7. Изготовление биологически активньж препаратов из тканей тимуса и фабрициевой сумки птиц и их производственные испытания 82
3.7.1. Способ получения биологических стимуляторов из тканей тимуса и фабрициевой сумки птиц 82
3.7.2. Испытания биологических стимуляторов при травмах и ожогах у цыплят 86
3.7.3. Морфологические особенности иммунных органов у цыплят-бройлеров после применения биологических стимуляторов 89
4. Обсуждение результатов исследований 95
Выводы 104
Предложения производству 107
Литература 108
Приложения 122
- Факторы, влияющие на результаты инкубации куриных яиц
- Состояние клеточных мембран иммунных и пищеварительных органов у цыплят-бройлеров
- Микроструктура иммунных органов цыплят, полученных из яиц подвергавшихся воздействию низкой температуры
- Морфологические особенности иммунных органов у цыплят-бройлеров после применения биологических стимуляторов
Факторы, влияющие на результаты инкубации куриных яиц
Известно, что яйца, полученные от здоровых несушек, не содержат микроорганизмов в белке и желтке. Во время снесения яйца скорлупа обычно стерильная. Скорлупа, подскорлупная и надскорлупная оболочки предохраняют яйцо от проникновения гнилостных бактерий и грибов. Кроме того, белок яйца обладает бактерицидными свойствами, благодаря этому микроорганизмы, проникшие через поры скорлупы, гибнут или теряют способность к размножению. Птичьи яйца обладают мощными факторами защиты от проникновения в них микроорганизмов, но если болезнетворные или гнилостные бактерии попадают на поверхность скорлупы, то они могут проникнуть в середину яйца ( М.В.Орлов и др., 1982 ; J.M.Mauldin, 1989; J.Scriba, 1990; S.G.Tullet, 1990 ).
Заражению яиц микроорганизмами способствуют колебания температуры и влажности. Яйца, снесённые на сырую подстилку в гнезде или на грязном полу птичника, заражаются разными микроорганизмами и плесневыми грибами. Поэтому чем лучше санитарно-гигиенические условия при содержании птицы, во время сбора яиц, их транспортировке и хранении до закладки в инкубатор, тем меньше яйца заражаются микроорганизмами и тем выше выводимость ( И.П. Кривопишин, 1989; А. Паулавичюте, 1989; А. Rudy, 1988; A. Ar. et al., 1989; S. Panigrahi,1989 ).
Кроме гнилостных микроорганизмов, яйца могут быть заражены возбудителями паратифа, колибациллёза, аспериллеза и других заболеваний.
Яйца, полученные от несушек, страдающих авитаминозами или гипо-витаминозами, также нельзя использовать для инкубации, так как в них резко уменьшается бактерицидная устойчивость белка и в яйцо легко проникают различные микроорганизмы.
По данным J.Scriba (1990) на чистой скорлупе яйца после его снесения и нахождения в гнезде в течение одного часа может быть от 5 до 10 тыс. бактерий, а на частично загрязнённой скорлупе - до 1 млн. бактерий и больше. Поэтому, подчёркивает автор, гнёзда должны быть постоянно чистыми и сухими, а яйца собираться как можно чаще. Для инкубации следует брать только чистые или с незначительным загрязнением скорлупы яйца. Допускается брать яйцо с пола при условии, что оно чистое и только снесённое ( тёплое ). Инкубация загрязнённых и находящихся долгое время на полу яиц снижает вывод цыплят и их жизнеспособность. Не допускается мойка яиц непосредственно на ферме.
Чтобы предупредить проникновение в яйца во время их инкубации болезнетворных микроорганизмов и плесневых грибов, необходимо подвергать яйца предынкубационный дезинфекции.
М.В. Орлов и др. (1982) предлагают для мойки загрязнённых яиц использовать специальную машину, имеющую производительность 3000 яиц в час, при расходе моющего раствора 100 мл/ч. Обслуживают такую машину два человека. Постоянная температура и давление воды в моечной камере поддерживается автоматическими приборами. С помощью наклонного лотка и шнекового транспортёра яйца поступают в моечную камеру, где щетки и 0,2%- ый раствор каустической соды (температура 30 ) или 0,5%-ый кальцинированной соды очищают скорлупу от загрязнений. Затем яйца перемещают в камеру обсушки, где щётками и вытяжными вентиляторами со скорлупы удаляются остатки влаги. После этого яйца поступают на приёмный латок.
По данным J. Cook (1989) в Великобритании в инкубаториях фирмы Кобб имеются моечные машины, в которых обрабатываются яйца хлоридной водой или гипохлоритом. Использование таких машин позволило значительно повысить выводимость цыплят.
Р.Н. Patterson et al. (1990) провели две серии опытов по инкубации яиц кур породы белый леггорн. В первой серии опытов яйца обрабатывали раствором двуокиси хлора, а во второй - пеной двуокиси хлора и путём фумигации формальдегидом. Результаты исследований показали, что погружение яиц на 5 мин в раствор двуокиси хлора с концентрацией 100 мг С1/л снижало выводимость цыплят до 20 %. После обработки пеной двуокиси хлора и формальдегидом выводимость соответственно составляла 80,2 и 84,2 %, против 85,7 % в контроле.
Эксперименты, проведённые А.К. Sachdew et al. (1988), свидетельствуют, что при 10-минутном «окуривании» яиц парами формальдегида регистрировалась максимальная выводимость и минимальный процент мёртвых зародышей.
Для предынкубационный обработки куриных яиц в условиях Окской птицефабрики Рязанской области В.Г. Астахов и др. (1988) использовали янтарную и щавелевую кислоты. С этой целью яйца погружали на 3 мин в раствор янтарной кислоты с концентрацией 0,1 и 0,2 %. Другую партию яиц погружали в аналогичные растворы щавелевой кислоты при температуре 35 . Самый высокий процент вывода и выход здоровых кондиционных цыплят был получен при обработке яиц 0,1 % раствором янтарной кислоты - 82,7 и 78,4 % соответственно. В контрольных партиях яиц (без обработки) процент вывода составил 76,8, а кондиционных цыплят было получено 69,8 %. При обработке яиц щавелевой кислотой результаты инкубации были несколько ниже, чем при использовании янтарной кислоты, но лучше, чем в контроле.
R.E. Sacco et al. (1989) в экспериментах по сравнительному испытанию различных способов дезинфекции инкубационных яиц установили, что наиболее высокой эмбриональная выживаемость была при обработке яиц аммонием.
С целью получения эффекта стимуляции роста птицы М.Б. Башардост (1990) рекомендует использовать перед инкубацией однократное воздействие на куриные яйца парааминобензойной кислотой и хлорнокислым аммонием в дозе 10 г на одно яйцо .
В последнее время как за рубежом, так и в нашей стране для санобработки инкубационных яиц всё чаще используют дезинфицирующие препараты, создаваемые на основе четвертичных аммониевых соединений.
В отличие от препаратов хлора, йода, формальдегида, а также средств облучения и озонирования, традиционно используемых в птицеводстве, дез-средства нового поколения не оказывают вредного влияния на здоровье обслуживающего персонала и развитие эмбриона, а также разрушающего действия на поверхность скорлупы и оборудования инкубаториев. К препаратам этой группы относится и септодор, производства израильской фирмы «Дорвет ЛТД», применяемый в ветеринарии и медицине.
Испытания септодора в производственных условиях для обработки инкубационных яиц кур и уток были проведены О. Косенко и др. (2000). Опытные партии яиц обрабатывали путём орошения тёплым (20-50 С) 0,05-0,1%-ым раствором септодора при норме расхода 0,4-0,5 л/м , а контрольные - парами формальдегида по общепринятой методике. Было проинкубировано по 2500 куриных и утиных яиц. Определяли общую микробную обсеменён-ность скорлупы до и после обработки яиц перед закладкой, а также на 7, 11 и 18 сутки инкубации - куриных и 8, 13 и 24 - утиных. Учитывали также интенсивность развития эмбрионов по указанным дням инкубации и выводимость яиц.
До дезинфекции общая микробная обсеменённость куриных яиц в среднем составляла около 1450, а утиных - около 3500 микробных тел на 1 см2 поверхности скорлупы. После обработки обсеменённость как опытных, так и контрольных партий яиц снижалась в 25-30 раз и оставалась на таком уровне до конца первого периода инкубации, после чего вновь возрастала. Но если в опытных группах это происходило сравнительно медленно и к концу третьего периода инкубации количество микробных тел на поверхности яиц составляло 17 % от первоначального, то в контрольных уровень об-семенённости яиц повышался значительно быстрее и к концу третьего периода инкубации достигал уже 50 % от исходного.
По результатам биологического контроля можно было заключить, что интенсивность развития эмбрионов в яйцах опытных партий была выше по сравнению с контрольными. Выводимость яиц, обработанных септодором, также оказалась на 1,5-2,5 % выше.
Испытания, таким образом, показали, что септодор является эффективным дезинфицирующим средством пролонгированного действия, не влияющим отрицательно на развитие эмбрионов и выводимость яиц птицы.
В литературных источниках имеется много сведений о применении в качестве дезинфектанта озона. Так, по сведениям Р.Е. Whistler et al. (1989) после орошения инкубационных яиц водой с последующим озонированием при концентрации озона 2,83 % по массе число микроорганизмов на поверхности скорлупы яиц было более чем в 200 раз меньше, чем на скорлупе контрольных яиц (не обработанных озоном). В то же время обработка яиц озоном увеличивала эмбриональную смертность и снижала выводимость цыплят (87,5 %), по сравнению с контролем (89,4 %). По мнению исследователей это обусловлено высокой проницаемостью скорлупы яиц для озона, который оказывает неблагоприятное воздействие на эмбрион.
Состояние клеточных мембран иммунных и пищеварительных органов у цыплят-бройлеров
Для изучения функциональных особенностей клеточных мембран иммунных и пищеварительных органов (фабрициевая сумка, костный мозг, тимус, слепые отростки, печень, желудок) мы использовали метод радиоактивных изотопов.
С этой целью за 10 минут до убоя птице в подкрыльную вену вводили 0,5 мл радиоактивного трития. Через 2 минуты после введения трития цыплят убивали, отбирали кусочки органов и проводили исследования на проницаемость их мембран радиоактивными изотопами. Изотопы трития определяли с использованием счётных камер. Результаты исследований отражены на рисунке 4, из данных которого видно, что проницаемость тканей наиболее высокой была у цыплят в 30- и 40-суточном возрасте. При этом самой высокой проницаемостью обладали ткани костного мозга.
Проницаемость и кумулятивные свойства тканей пищеварительных органов у цыплят-бройлеров в различном возрасте представлены на рисунке 5. Анализ данных, отражённых на рисунке, указывает на то, что максимальные значения проницаемости и кумулятивных свойств тканей желудка и печени у цыплят отмечались в 30- и 40-суточном возрасте. При этом проницаемость и кумулятивные свойства тканей желудка были выше, чем печени.
В комплекс наших исследований входило также изучение влияния различных способов предынкубационной обработки яиц на проницаемость и кумулятивные свойства тканей тимуса у цыплят в различном возрасте.
В ходе исследований было установлено (рис. 6), что после обработки куриных яиц перед закладкой в инкубатор жидким азотом проницаемость и кумулятивные свойства тканей тимуса были относительно выше, чем у контрольных цыплят. При этом динамика изучаемого показателя у опытных и контрольных цыплят была одинаковой и характеризовалась резким подъёмом на 40 сутки и снижением на 60 сутки.
На рисунке 7 представлены данные исследований проницаемости тканей тимуса цыплят полученных из яиц подвергавшихся перед инкубационной обработкой вибрацией. Как видно из рисунка проницаемость тканей тимуса как у опытных, так и контрольных цыплят к 40-суточному возрасту достигала наивысшей степени. Однако у цыплят контрольной группы накопление изотопа в тканях было на 25-50% меньше, чем у цыплят, полученных из яиц, обработанных вибрацией. В свою очередь нами было установлено, что проницаемость и кумулятивные свойства тканей тимуса у цыплят значительно возрастали, если яйца перед инкубацией подвергались вакуумированию (рис. 8).
Таким образом, результаты наших экспериментов свидетельствуют, что обработка яиц перед инкубацией жидким азотом, вибрацией и вакуумирова-нием повышает проницаемость и кумулятивные свойства тканей тимуса, а это, в свою очередь, указывает на интенсивность обменных процессов в тимусе цыплят.
Микроструктура иммунных органов цыплят, полученных из яиц подвергавшихся воздействию низкой температуры
Микроструктура тканей тимуса 10-суточных цыплят-бройлеров, полученных из яйца, подвергавшегося обработке жидким азотом изображена на рисунке 13.
На гистологических срезах тканей тимуса видно, что тимус состоит из крупных, компактно расположенных полиморфных по размерам и конфигурации долек, не имеющих границ между корковым и мозговым веществом, соотношение между которыми равно 1:5.
Гистоструктура тимуса цыплёнка, полученного из яйца, подвергавшегося обработке жидким азотом. Хорошо выражено микроциркулярное русло долек (окраска гематоксилин-эозином об. 40; ок. 10)
Выделить корковое и мозговое вещество в дольках не удаётся, так как граница между ними отсутствует и дольки представлены однородными скоплениями лимфоцитов, среди которых располагаются многочисленные очаги опустошения элементами лимфоидного ряда и дегенерации эпителиальных клеток.
Междольковые прослойки соединительной ткани составлены из двух источников: во-первых, из проникающей со стороны капсулы и, во-вторых, из сильно развитого скопления рыхлой соединительной ткани в центре железы, прорастающей из центра к периферии между дольками.
Из междольковых прослоек соединительная ткань врастает тяжами внутрь долек, то есть имеются процессы склерозирования железистой ткани.
Васкулярная система железы имеет характерные особенности. В её периферических зонах, прилежащих непосредственно к хорошо выраженной капсуле с большим количеством жировых клеток, располагаются субкапсу-лярные капиллярные аркады. Из междольковой соединительной ткани в дольки устремляются артериолы и капилляры по типу кисточки за счёт ответвления многочисленных боковых ветвей междолькового кровеносного сосуда в вещество дольки.
Гистоструктура тканей фабрициевой сумки 10-суточных цыплят-бройлеров, полученных из яиц, обработанных жидким азотом, показана на рисунке 14.
При анализе гистосрезов было обнаружено, что лимфоидная ткань бурсы чётко ограничена в виде долек, переполненных элементами лимфоидного ряда.
Гистоструктура тканей фабрициевой сумки цыплёнка, полученного из яйца, подвергавшегося обработке жидким азотом. Прослойки междольковой соединительной ткани утонченные и содержат небольшое количество кровеносных сосудов артериального значения. Лимфоидная ткань бурсы чётко ограничена в виде долек, переполненных элементами лимфоидного ряда (окраска гематоксилин-эозином об. 40; ок. 10)
Морфологические особенности иммунных органов у цыплят-бройлеров после применения биологических стимуляторов
После выздоровления цыплят с ожогами и травмами нами были исследованы у них фабрициевая сумка, тимус и селезёнка.
Гистоструктура тканей фабрициевой сумки 20-дневных цыплят-бройлеров, у которых был ожог бедренных мышц, представлена на рисунке
Гистоструктура тканей фабрициевой сумки цыплёнка, полученного из яйца, подвергавшегося обработке биостимулятором. Отмечается полиморфизм компактных долек фабрициевой сумки (окраска гематоксилин-эозином об. 40; ок. 10)
Анализ гистосрезов показал, что фабрициевая сумка выглядит в виде комплекса, с преобладанием мощно развитых крупных долек, компактно заполненных огромным количеством клеток лимфоидного ряда.
Сами дольки чётко ограничены, окружаются тонкими уплотнёнными соединительными прослойками с большим количеством кровеносных сосудов малого калибра. Однако эти артериолы и капилляры не образуют сплетений, а проходят чаще всего обособленно, давая одиночные боковые ветви, проникающие внутрь долек.
Гистоструктура тканей тимуса 20-дневных цыплят-бройлеров, с ожогами бедренных мышц представлена на рисунке 22, из которого видно, что тимус чаще всего состоит из одной крупной центрально расположенной дольки, окружённой по периферии 5-8 дольками малого размера, создавая таким образом конфигурацию розетки.
Мелкие дольки имеют однородную структуру (без разделения на корковое и мозговое вещество) с компактным расположением клеток лимфоидного ряда. Кровеносные сосуды их имеют малый диаметр и относятся к арте-риолам, венулам и капиллярам, распределённым равномерно по всей массе дольки.
В крупных дольках, в которых периферическое корковое вещество без чёткой границы переходит в просветлённую центральную часть - (мозговое вещество), кровеносные сосуды с относительно большим диаметром заложены в центральной зоне, а малокалиберные артериолы и венулы - по периферии.
Среди компактно и диффузно расположенных лимфоцитов находятся группы набухших гидрофильных клеток со светлой цитоплазмой, с кариоли-зисом, то есть подвергавшиеся различным стадиям дегенерации.
Гистоструктура тимуса цыплёнка, подвергавшегося обработке биостимулятором после получения ожога бедренных мышц. Отмечается увеличение количества лимфоцитов в мелких дольках зобной железы (окраска гематоксилин-эозином об. 40; ок. 10)
Гистоструктура селезёнки цыплёнка, подвергавшегося обработке биостимулятором после полученного ожога бедренных мышц. В венулах селезёнки имеются массовые стазы (окраска гематоксилин-эозином об. 40; ок. 10)
Гистологическое строение тканей селезёнки 20-дневного цыплёнка-бройлера, подвергнутого ранее лечению при ожогах с использованием изготовленных нами биопрепаратов, представлено на рисунке 23.
После выздоровления цыплёнка в тканях его селезёнки фолликулы белой пульпы хорошо выражены, контуры их слегка размыты. Между ними имеются уплотнённые участки ретикулярной ткани, заполненные лимфоид-ными элементами, напоминающими мякотные шнуры лимфатических узлов. Центральные артерии ярко выражены. Венозное русло характеризуется многочисленными стазами, тонкими стенками венозных сосудов и сильным расширением венул. Это особенно демонстративно проявляется на фоне многочисленных тонкостенных трабекулярных артерий и артерий капсулы селезёнки.
Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют, что препараты изготовленные из фабрициевой сумки и тимуса практически безвредны, не обладают анафилактическим и токсическим действием и их можно рекомендовать для использования в практике ветеринарной медицины.
