Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Слюнные железы и основные их функции (обзор литературы) 14
1.1. Элементы морфологии слюнных желез 14
1.2. Состав и свойства слюны 22
1.3 Роль слюны в пищеварении 30
1.4 Непишеварительные функции слюноотделения и слюны 32
1.5 Регуляция саливации 38
1.6 Саливадиагностика, возможности и перспективы 42
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 49
2.1. Вводные замечания 49
2.2.1. Методика получения ротовой жидкости.. 50
2.2.2. Методика получения слюны 50
2.2.3. Методика получения венозной крови 51
2.3. Методы определения гормонов в слюне, ротовой жидкости и сыворотке крови 52
2.4. Контроль качества проводимых исследований 55
2.5. Методы определения ферментов и общего белка в биологических жидкостях 59
2.6. Методы статистической обработки результатов 60
2.7. Характеристика контингента добровольцев, принявших участие в работе 61
2.8. Объем проведенного исследования 61
ГЛАВА 3. Гормоны в составе слюны околоушных, поднижнечелюстных и подъязычных желез человека 65
3.1. Вводные замечания 65
3.2. Гормоны, ферменты и общий белок сыворотки крови и слюны натощак 67
Гормоны в сыворотке крови и слюне разных желез натощак 69
3.3. Ферменты и гормоны слюны при пищевой стимуляции саливации 70
3.4. Постпрандиальные реакции слюнных желез 76
3.5. Соотношение гормонов и ферментов в слюне и сыворотке крови 84
3.6. Констатирующие выводы 89
ГЛАВА 4. Тиреоидные гормоны и тиреотропин в составе ротовой жидкости 91
4.1. Вводные замечания 91
4.2 Тиреоидные гормоны и тиреотропин у клинически здоровых лиц 95
4.3. Тиреоидные гормоны и тиреотропин у лиц с гипо - и гипертиреозом 96
4.4. Констатирующие выводы 99
ГЛАВА 5. Репродуктивные гормоны в составе ротовой жидкости 100
5.1. Вводные замечания 100
5.2. Половые различия содержания репродуктивных гормонов и кортизола в составе ротовой жидкости 103
5.2. Зависимость выделения репродуктивных гормонов слюнными железами от функционального состояния половых желез 105
5.3. Констатирующие выводы 106
ГЛАВА 6. Гормоны ротовой жидкости и сыворотки крови у ликвидаторов последствий аварии на чернобыльской АЭС 107
6.1. Вводные замечания 107
6.2. Характеристика контингента ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС по результам динамического наблюдения 112
6.3. Гормоны ротовой жидкости и сыворотки крови ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС 114
6.4. Констатирующие выводы 117
ГЛАВА 7. Происхождение гормонов слюны и ротовой жидкости, их диагностическая информативность (обсуждение результатов) 119
Заключение 142
Выводы 144
Список литературы 146
- Элементы морфологии слюнных желез
- Методы определения гормонов в слюне, ротовой жидкости и сыворотке крови
- Ферменты и гормоны слюны при пищевой стимуляции саливации
- Тиреоидные гормоны и тиреотропин у лиц с гипо - и гипертиреозом
Введение к работе
(общая характеристика работы)
Актуальность исследования
Секреты пищеварительных желез содержат не только продукты, синтезируемые их гландулоцитами, но и рекретируемые из крови. Кроме того, экзосекреторные железы содержат инкреторные гландулоциты. Названные причины лежат в основе исключительно сложного состава всех секретов пищеварительных желез. Это относится и к слюнным железам, их секрету - слюне, а также к ротовой жидкости, основным компонентом которой является слюна.
В слюне человека идентифицировано более 30 гормонов [Vining R.E., Мс Ginley Р.А., 1986; Шубникова Е.А., 2001]. Одни из них рекретируются из крови, и слюнные железы участвуют в поддержании их гомеостаза в организме, другие синтезируются самими железами. Гормонам слюны отводится прямая и опосредованная трофическая роль, независимо от их происхождения в полости рта [Шубникова Е.А., Коротько Г.Ф., 1986; Шубникова Е.А., 2001]. В целом же происхождение и физиологическая значимость гормонов в секретах пищеварительных желез, в том числе слюнных, исследованы недостаточно, хотя определение гормонов в ротовой жидкости все шире внедряется в клинико-диагностическую практику.
Функциональное состояние желез определяют по количеству и качеству их экзосекретов и содержанию инкретируемых железами продуктов в крови и лимфе. Инкретированные эндокринными железами и отдельными эндокринными гландулоцитами гормоны с различным полупериодом их существования в организме человека и животных циркулируют с кровотоком в свободном состоянии и в связанном с транспортными белками крови. Гомеостаз гормонов поддерживается по тому же принципу, что и гомеостаз ферментов, то есть, их концентрация в циркулирующей крови определяется количеством поступающих в нее
8 гормонов, их депонированием, разрушением и выведением из организма. Это сближает эндо- и экзосекрецию и служит аргументом общности их эволюционного происхождения [Уголев A.M., 1985; ШубниковаЕ.А., 1996]. Надо полагать, что по общей закономерности транспорта ферментов и гормонов кровью те и другие рекретируются из кровотока экзокринными железами [Коротько Г.Ф., 2003]. Представляло интерес исследование возможного рекреторного механизма происхождения гормонов, исследование соотношения в слюне и крови некоторых ферментов.
В числе недостаточно исследованных вопросов стоят физиологические причины вариабельности гормонов слюны, в чем определенную роль играют изменения активности желез-продуцентов соответствующих гормонов и физиологического состояния слюнных желез, выделяющих эти гормоны из крови по механизму рекреции. Решение данного вопроса имеет принципиальное методологическое значение в оценке диагностической информативности определения гормонов ротовой жидкости и слюны. Актуальность данного исследования обусловлена тем, что разработка неинвазивных технологий определения функционального состояния здорового и больного человека в настоящее время является приоритетной задачей [Лопухин Ю.М., Парфенов А.С., 1997; Титов В.Н., 1997; Гильямирова Ф.Н. и соавт., 2002].
Учитывая вышеизложенное, целью работы явилось определение принципиальных возможностей рекреции гормонов слюнными железами и функциональной гормоносаливадиагностики на примере гипофизарно-гонадо-надпочечниковых и тиреоидных гормонов.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
изучить зависимость выделения гормонов в составе ротовой жидкости (смешанной слюны) от их содержания в крови у клинически здоровых добровольцев;
оценить возможности определения гормонов в слюне иммуноферментным методом с использованием усиленной люминесценции;
изучить выделение гормонов разными слюнными железами натощак и при стимуляции саливации у клинически здоровых добровольцев;
изучить постпрандиальные гормональные трансформации крови и слюны;
исследовать тиреоидные гормоны и тиреотропин крови и смешанной слюны у лиц с тиреоидной патологией (с гипер- и гипофункцией щитовидной железы);
исследовать репродуктивные гормоны и кортизол крови и смешанной слюны у женщин в активном репродуктивном возрасте и постменопаузе, по периодам менструального цикла и у мужчин;
исследовать гормоны крови и смешанной слюны ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС;
изучить и соотнести выделение гормонов и ферментов слюнными железами в зависимости от их содержания в крови и проницаемости гематосаливарного барьера;
сравнить диагностическую информативность гормонов ротовой жидкости, слюны и сыворотки крови;
Новизна результатов исследования
Установлена прямая, в разной мере выраженная, зависимость содержания тиреотропина, тиреоидных и репродуктивных гормонов и кортизола в ротовой жидкости, слюне околоушных, поднижнечелюстных и подъязычных слюнных желез от концентрации вышеперечисленных гормонов в сыворотке крови и проницаемости гематосаливарного барьера.
Слюнные железы участвуют в специфическом динамическом действии пищи, выраженность которого может быть оценена по выделению ферментов и гормонов в составе смешанной слюны.
Околоушные, поднижнечелюстные и подъязычные железы выделяют слюну разного ферментного и гормонального состава, что свидетельствует о разном механизме происхождения разных гормонов и ферментов в составе слюны.
10 Основные положения диссертации, выносимые на защиту
Содержание гормонов в сыворотке крови, ротовой жидкости (смешанной слюне) и слюне связано в разной мере выраженной прямой зависимостью.
Выделение гормонов в составе смешанной слюны отражает функциональное состояние эндокринных желез-продуцентов.
Возможно определение содержания уровня гормонов в слюне иммуноферментным методом с использованием усиленной люминесценции.
Содержание тиреоидных гормонов и тиреотропина в ротовой жидкости и слюне изменяется при гипо- и гиперфункции щитовидной железы однонаправленно с изменением содержания гормонов в сыворотке крови.
Содержание репродуктивных гормонов в ротовой жидкости и слюне изменяется у женщин по периодам менструального цикла и у мужчин параллельно с изменением содержания в сыворотке крови.
Выделение гормонов и ферментов слюнными железами является компонентом специфического динамического действия пищи.
Наличие в той или иной мере выраженной прямой зависимости между содержанием гормонов в сыворотке крови и смешанной слюне при более высоком их содержании в сыворотке крови, чем в слюне, свидетельствует о рекреторном происхождении гормонов в слюне.
Теоретическая значимость исследования. В происхождении в составе слюны и ротовой жидкости человека ряда гормонов и ферментов существенную роль играет рекреция, имеющая в своей основе механизмы активного и пассивного транспорта, в неодинаковой мере присущие разным слюнным железам. О разном механизме происхождения разных ферментов и гормонов в составе слюны свидетельствует выделение околоушными, поднижнечелюстными и подъязычными железами слюны разного гормонального и ферментного состава. Выраженность
специфического динамического действия пищи может быть оценена по выделению ферментов и гормонов в составе ротовой жидкости (смешанной слюны).
Практическая значимость исследования. Впервые изучены и установлены возможности саливадиагностики в характеристике функционального состояния гипофизарно-тиреоидной и гипофизарно-гонадо-надпочечниковой систем. Установлены закономерности параметров выделения гормонов в составе слюны от вида и функционального состояния слюнных желез, регламентирующие протокол саливадиагностического исследования.
Проведен сопоставительный анализ известных и вновь выявленных
диагностических критериев, адекватность и информативность
предлагаемых методов гормоносаливадиагностики в оценке состояния
гипофизарно-тиреоидной и гипофизарно-гонадо-надпочечниковой систем.
Внедрение методов гормоносаливадиагностики представляет неивазивную
диагностическую альтернативу анализу тиреоидных гормонов и
тиреотропина в сыворотке крови при мониторинге пациентов с патологией
гипо- и гиперфункции щитовидной железы. Определение репродуктивных
гормонов и кортизола в ротовой жидкости позволяет проводить
дифференциальную неинвазивную диагностику нарушений
функционального состояния репродуктивной системы, проводить детекцию овуляции (эстрадиол, прогестерон) и служить для мониторинга влияния циркадианных ритмов на адреналовую активность (кортизол), что способствует сохранению и восстановлению репродуктивного здоровья населения. Сведения о практическом использовании результатов исследования
На основании полученных фактов предложены практические рекомендации, используемые для оценки функционального состояния слюнных желез на кафедрах Кубанской государственной медицинской академии (приложение 2.1), Российском центре функциональной хирургической гастроэнтерологии МЗ РФ (приложение 2.2), в Краснодарской
12 краевой клинической больнице №1 им. проф. СВ. Очаповского (приложение 2.3), Краснодарском городском центре скорой медицинской помощи (приложение 2.4). По материалам исследований опубликовано 4 статьи в реферируемых журналах и 5 тезисов.
Материалы диссертации доложены на 3-й конференции молодых ученых Кубани "Актуальные проблемы гастроэнтерологии", г. Краснодар, 1999 г.; Международной конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем", г. Санкт-Петербург, 2001 г.; Всероссийской научно-практической конференции "Физиологические науки - клинической гастроэнтерологии", г. Ессентуки, 2001 г.; 18-ой Всероссийской конференции с международным участием "Физиология и патология пищеварения", г. Геленджик, 2002 г.
Завершая вводную часть диссертации, считаю своим приятным долгом выразить признательность и благодарность всем глубокоуважаемым коллегам, принявшим участие в моей научной работе. Приношу искреннюю благодарность научному руководителю профессору доктору биологических наук Геннадию Феодосьевичу Коротько за ценные советы, которыми я пользовалась, начиная от определения темы до оформления диссертации и представления ее к защите.
Большое спасибо врачам Центра радиационной и профессиональной патологии Лызь Елене Николаевне и Авдеевой Светлане Николаевне, всему коллективу эндокринологического отделения Краевой клинической больницы №1 им. проф. Очаповского под руководством главного врача профессора доктора медицинских наук Мануйлова Александра Михайловича за предоставленную возможность наблюдения эндокринологических больных и ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС, деловое обсуждение полученных результатов.
Благодарю Еричева Илью Валерьевича за профессиональную помощь стоматолога в освоении метода сбора слюны разных слюнных желез.
Мне доставляет удовольствие выразить искреннюю признательность коллективу Российского центра функциональной хирургической гастроэнтерологии руководимому профессором, доктором медицинских наук, Лауреатом государственной премии РФ в области науки Владимиром Ивановичем Оноприевым, чью помощь и моральную поддержку я неизменно ощущала в ходе работы над диссертацией.
Благодарю за неоценимую помощь, которую мне оказали мои коллеги: Тихонова Татьяна Ивановна - в организации подбора групп клинически здоровых добровольцев при профессиональном осмотре на предприятии ООО "Стекло и Мир", Саборов Виктор Семенович - в организации подбора групп клинически здоровых добровольцев при профессиональном осмотре военнослужащих.
Элементы морфологии слюнных желез
Слюнные железы представлены тремя парами крупных слюнных желез: околоушными, поднижнечелюстными и подъязычными, и многочисленными мелкими железками: губными, щечными, язычными, небными, десенными. У человека слюнные железы имеются также на слизистой миндалин и носоглотке [Бабаева А.Г., Шубникова Е.А., 1979; Коротько Г.Ф., 1987]. Крупные железы лежат вне слизистой оболочки и выводят свой секрет на ее поверхность посредством протоков, мелкие слюнные железы диаметром 1-5 мм располагаются группами в ее толще [Быков В. Л., 1998]. Наибольшее количество их в под слизистой основе губ, твердого и мягкого неба [Боровский Е.В., 2001].
По гистологической классификации все слюнные железы - сложные альвеолярные или альвеолярно-трубчатые железы, состоящие из секреторных концевых отделов (ацинусов) и системы выводных протоков, которая включает вставочные протоки, исчерченные протоки (слюнные трубки), междольковые протоки и общий выводной проток. Основными функциональными элементами желез являются их секреторные клетки -гландулоциты. [Герловин Е.Ш.,1978; Быков В.Л., 1998; Улумбеков Э.Г., 2001; Гемонов В.В., 2001].
Секрет из гландулоцитов ацинусов слюнных желез поступает в сложную систему постепенно укрупняющихся протоков, собирающихся в выводной проток, выносящий несколько измененную (количественно и по составу) слюну в полость рта [Коротько Г.Ф., 1987].
Крупные слюнные железы построены по единому плану и относятся к категории сложных разветвленных желез [Гемонов В.В., 2001]. Они имеют вид объемных органных образований, покрыты соединительнотканной капсулой, от которой вглубь железы отходят прослойки, разделяющие ее на дольки [Быков В.Л., 1998]. В каждой железе различают паренхиму -эпителий концевых отделов и выводных протоков, и строму - рыхлую волокнистую неоформленную соединительную ткань с кровеносными сосудами и нервами [Мяделенец О.Д., 2002].
Околоушная железа - самая большая из крупных слюнных желез -сложная альвеолярная (по данным Э.Г. Улумбекова и Ю.А. Челышевой (2001г.) - альвеолярно-трубчатая) разветвленная железа, секретирует чисто белковую слюну [Быков В.Л., 1998]. В связи с этим слюна околоушных желез жидкая, вязкость ее низкая (1,5 с.п.). Она не содержит мукоидных компонетов. Сухой остаток меньше, чем 0,5% [Пожарицкая М.М., 2001]. Как и другие большие слюнные железы, это дольчатый орган. Каждая долька содержит концевые отделы одного типа - белковые, а также вставочные и исчерченные внутридольковые протоки [Мяделенец О.Д., 2002]. Вставочные протоки длинные, сильно разветвленные. Исчерченные протоки хорошо развиты. В состав концевых отделов входят клетки двух типов: серозные (сероциты) и миоэпителиоциты. Сероциты - базофильные клетки пирамидной формы с центрально расположенным или несколько смещенным базально ядром, хорошо развитым синтетическим аппаратом, крупными белковыми секреторными гранулами в апикальной части цитоплазмы [Быков В.Л., 1998], матрикс которых содержит плотные включения. В базальной части клетки находится гранулярная эндоплазматическая сеть, комплекс Гольджи. Между секреторными клетками находятся межклеточные канальцы, по которым эвакуируется секрет [Мяделенец О.Д., 2002].
Миоэпителиальные клетки - уплощенные, звездчатой формы, располагаются в концевых отделах между базальной мембраной и секреторными клетками. Внешняя клеточная мембрана образует многочисленные кавеолы и пиноцитозные пузырьки; в отдельных участках выявляются десмосомы, связывающие миоэпителиальные клетки с секреторными. Сокращение миоэпителиальных клеток способствует выведению слюны из концевых отделов.
Выводные протоки околоушной железы делятся на вставочные, исчерченные, междольковые и общий выводной проток. Вставочные протоки - начальный отдел протоковой системы. Они выстланы низким кубическим эпителием или плоским эпителием, в составе которого содержатся малодифференцированные клетки. Снаружи находятся миоэпителиоциты, а за ними - базальная мембрана. В клетках, прилежащих к ацинусу, обнаруживаются электронно-плотные гранулы, содержащие мукополисахариды, здесь же расположены тонофиламенты, рибосомы и агранулярная эндоплазматическая сеть. Исчерченные выводные протоки являются продолжением вставочных и располагаются также внутри долек.
Исчерченные протоки ветвятся и образуют ампулярные расширения. Они выстланы однослойным призматическим эпителием, второй слой образован миоэпителиоцитами. В апикальной части клеток видны микроворсинки, секреторные гранулы с содержимым различной плотности, аппарат Гольджи. В базальных частях эпителиальных клеток отчетливо выявляется базальная исчерченность, образованная митохондриями, расположенными в цитоплазме между складками цитолеммы перпендикулярно к базальной мембране. В исчерченных протоках выявлены циклические изменения, не связанные с ритмом пищеварительного процесса [Быков В.Л, 1998; Гемонов В.В.,2001]. Междольковые протоки образуются в результате слияния исчерченных протоков и располагаются в междольковой соединительной ткани.
Методы определения гормонов в слюне, ротовой жидкости и сыворотке крови
В исследованиях определение гормонов в сыворотке крови проводилось иммуноферментными методами параллельно с определением этих же гормонов в ротовой жидкости или слюне в соответствии с поставленными задачами на базе клинико-диагностической лаборатории Краевой клинической больницы с использованием иммунодиагностической системы "Амерлайт"фирмы Amersham (Великобритания) с использованием стандартных наборов фирмы Amersham, Kodak Clinical Diagnostiks (USA) и АмерКард (Россия).
Иммуноферментный анализ (ИФА) является одним из наиболее активно развивающихся направлений химической энзимологии. Это обусловлено тем, что в нем уникальная детекция ферментной метки сочетается с высокой специфичностью иммунохимического анализа. В твердофазном иммуноферментном анализе один из специфических реагентов (антиген или антитело) иммобилизируют на твердой фазе. Затем последовательно добавляют другие специфические реагенты, проводя после инкубации каждого из них промывку с целью удаления несвязавшихся компонентов. Один из специфических реагентов, так называемый конъюгат, содержит ферментную метку. Поэтому ферментативная активность образовашегося на твердой фазе специфического комплекса будет пропорциональна концентрации каждого компонента этого комплекса ("сэндвич комплекса"), один из которых подлежит определению. Наибольшее распространение в иммуноферментном анализе среди ферментов получили пероксидаза из корня хрена, щелочная фосфатаза и бетта-Д-галактозидаза. Разработанные варианты ИФА различаются типом твердой фазы и способом присоединения к ней первого специфического реагента, числом и последовательностью добавления остальных специфичесикх реагентов, способом твердой фазы, способом получения конъюгата, типом используемого субстрата и т.д. Применение в анализе меченных антивидовых антител упрощает процедуру получения реагентов для анализа, т. к позволяет, используя одни и те же конъюгаты, осуществлять определение разных антигенов и антител различной специфичности. Оптимальные условия анализа (концентрация реагентов, длительность инкубации, время детекции ферментной метки и т.д.) должны определяться для каждого соединения индивидуально, т.к. они зависят от количественных закономерностей взаимодействия антигена с антителом [Егоров A.M. с соавт., 1991].
По своей чувствительности иммуннохимические методы микроанализа значительно превосходят классические методы определения. Их применение дает возможность определять следовые количества веществ, измерение которых ранее представляло большие трудности, а вряде случаев практически было невозможно [Кауфман А.С, 1995].
Анализатор "Амерлайт" - это автономный, управляемый микрокомпьютером прибор, предназначенный для измерения люминесцентного свечения и обработки полученных данных при проведении твердофазного иммуноферментного анализа. Качественные и количественные определения различных антигенов в сыворотке крови, плазме и других жидкостях биологического происхождения основаны на использовании метода усиленной люминесценци и продуктов ферментного окисления при проведении конкурентных и иммунометрических определений (варианты ИФА) с использованием моно- и поликлональных антител [Гончаров В.П. с соавт., 1998].
В наборе Амерлайт ТТ4 для определения общего тироксина в сыворотке крови использован конкурентный иммунометрический метод, основанный на усиленной люминесценции. В этом методе осуществляется конкуренция между присутствующим в образце тироксином и меченной пероксидазой хрена тироксином (конъюгат) за ограниченное количество мест связывания специфичных к тироксину антител (антитела овцы к тироксину). Влияние связывающих белков ограничено использованием соответствующего буфера с блокирующим агентом (8-анилино-1-нафтаенсульфоновая кислота). Антитела овцы к тироксину присутствуют в жидкой фазе (реагент), и в процессе инкубации они связываются со вторыми антителами (осла против овцы), сорбированными на лунках. Доля конъюгата, связавшаяся на лунках к концу инкубации, обратно пропорциональна концентрации тироксина в образце. По окончании инкубации несвязавшийся конъюгат удаляется отсасыванием и промывкой. Пероксидазная активность конъюгата измеряется по реакции испускания усиленной люминесценции. Для инициирования реакции испускания света в лунки добавляется сигнальный реагент, содежащий люминогенные субстраты (производные люминола и соль перкислоты) и усилитель (замещенный фенол), увеличивающий интенсивность света и продлевающий его испускание. Световые сигналы считываются анализатором. Измеряя количество связанного в присутствии стандартов конъюгата, можно определить концентрацию тироксина в образцах. Все процедуры анализа проведены по инструкции, приложенной к набору.
Количественное определение свободного тироксина (СТ4), общего триийодтиронина (ТТЗ), свободного трийодтиронина (СТЗ), тиреотропного (тиреостимулирующего - ТСГ), эстрадиола, прогестерона, тестостерона, пролактина, ЛГ, ФСГ также проведено иммуноферментным методом на основе усиленной люминесценции в соответствии с инструкцией, прилагаемой к наборам Амерлайт.
В проведенных исследованиях использовался иммуноферментный набор для определения кортизола в слюне - Cortizol EI A (for saliva) DSL-10-67100 (USA). Метод основан на конкуренции между немеченным антигеном и фермент-меченым антигеном за ограниченное число мест связывания на антителах.
Ферменты и гормоны слюны при пищевой стимуляции саливации
Полученные результаты показали, что концентрация гормонов в слюне при непищевой и пищевой стимуляции ее секреции может быть выше, ниже и не различаться. Причем, для разных желез это может выразиться неоднозначно. Так, концентрация ТТ4 в слюне околоушных желез при обоих видах стимуляции саливации была одинаковой, а смешанная слюна четырех желез при пищевой стимуляции их секреции содержала этот гормон в большей концентрации. В принципе ту же закономерность имела концентрация в слюне прогестерона и ТТГ. Концентрация в слюне СТ4 была выше при пищевой стимуляции саливации и околоушных, и смешанных желез. Концентрация ТТЗ, пролактин, ЛГ, ФСГ в слюне всех трех пар слюнных желез при обоих видах стимуляции их секреции статистически достоверных отличий не имели.
Существенно ниже была концентрация эстрадиола, тестостерона и кортизола в слюне ПЧ и ПЯ желез при их пищевой стимуляции, а по тестостерону это было только в смешанной слюне этих желез, тогда как по эстраднолу и кортизолу - и в слюне околоушных желез.
Сравнение результатов не позволяет утверждать, что пищевая стимуляция является принципиально иной для секреции всех гормонов слюнными железами. Но таковые отличия есть. Из этого можно сделать два заключения. Во-первых, в гормоносаливадиагностике следует унифицировать вид стимуляции саливации или собирать ротовую жидкость при спонтанной саливации, как это результативно делается в нашей лаборатории при учете негормональных параметров саливации [Коротько Г.Ф., Чен Н.А., 2002]. В противном случае могут получаться результаты, не поддающиеся сравнению. Во-вторых, два типа стимуляции саливации имеют принципиальные регуляторные отличия и проявляются в секреции разных слюнных желез. Данный вопрос должен стать предметом специального исследования.
Проведенный нами корреляционный анализ показал наличие прямой связи в секреции каждого из гормонов всеми тремя парами слюнных желез с величиной г от 0,6 до 0,9. Это свидетельствует о том, что ведущая причина, определяющая выделение гормонов слюнными железами лежит не столько в них и не в виде гормона, сколько вне их, хотя названные выше причины регуляторных и гландулярных различий полностью исключить нельзя. Основной же "несаливарной причиной" может быть варьирование содержания гормонов в крови, на что было обращено внимание в обзоре литературы.
В таком заключении принципиально, что гормоны слюны, не являясь, в отличие от ферментов, компонетом непосредственной реализации гидролитического конвейера, не имеют четкой срочной реакции увеличения их секреции в ответ на прием пищи, а если это и происходит, то может быть результатом закономерного увеличения кровоснабжения слюнных желез и повышения проницаемости гематосаливарного барьера, что доказано и описано в обзоре литературы и мы попытаемся показать в последующих разделах диссертации. Это могло иметь в своей основе и постпрандиальные повышения концентрации тех или иных гормонов в крови, но такая реакция отставлена во времени из-за инертности гормонального механизма регуляции.
Представлялось важным сравнение выделения гормонов разными слюнными железами путем корреляционного анализа. Корреляционные связи количественно охарактеризованы между гормонами в каждой из групп слюнных желез при непищевой и пищевой стимуляции саливации. Наиболее выраженная связь наблюдалась между концентрацией ТТГ в слюне, полученной при непищевой и пищевой стимуляции саливации (между левыми околоушными железами г=0,81, правыми околоушными железами - г=0,90, в слюне поднижнечелюстных и подъязычных желез г=0,63) и тестостерона (левой околоушной железы- г=0,95, правой околоушной железы - г=0,96, в слюне поднижнечелюстных и подъязычных желез г=0,91), что может свидетельствовать о зависимости выделения гормонов в составе слюны всеми слюнными железами не столько от вида применяемого стимулятора саливации, сколько от причин, лежащих вне самих желез. О том же могла свидетельствовать и выраженная прямая связь между концентрацией гормонов в слюне поднижнечелюстных и подъязычных желез в непищевой и пищевой саливации по эстрадиолу (г=0,54), пролактину (r=0,55), ТТ4 (г=0,62), ТТЗ (г=0,88), что также может свидетельствовать о зависимости секреции поднижнечелюстных и подъязычных желез от вида примененного раздражителя. Концентрация прогестерона (г=0,56) в слюне правой околоушной железы, ЛГ (г=0,65) в слюне левой околоушной железы (г=0,65).
Дебиты всех гормонов в слюне правых околоушных желез имели прямую связь между непищевой и пищевой стимуляцией саливации (по эстрадиолу г=0,59, по остальным гормонам - г=0,55).
Объем натощаковой саливации и концентрация в слюне практически всех учтенных гормонов не имели определенной статистически значимой зависимости. Спустя 1 и 3 часа после еды во многих наблюдениях была отмечена слабая обратная связь и в 4-х наблюденях значимая (по эстрадиолу, ФСГ и кортизолу выраженная связь с отрицательными коэффициентами корреляции: от -0,56 до -0,65). Столь же нерегуляная корреляция наблюдалась между объемом стимулированной приемом завтрака саливация и концентрацией в слюне гормонов (прямая корреляция с г=-0,60 ЛГ в слюне правой, г=0,50 в слюне левой околоушных желез; обратная корреляция с г от -0,63 до -0,75 по слюне одной из желез в концентрации эстрадиола, прогестерона и ФСГ). Столь же эпизодически были статистически значимые коэффициенты корреляции в прямой или обратной связи дебитов и концентрации гормонов в слюне натощак, при еде и спустя 1 и 3 часа после нее. Но дебиты гормонов и объем (скорость) саливации были связаны прямой зависимостью с высокими коэффициентами корреляции (табл. 3.5).
Тиреоидные гормоны и тиреотропин у лиц с гипо - и гипертиреозом
Для решения вопроса о зависимости содержания тиреоидных гормонов и тиреотропина в РЖ от функционального состояния щитовидной железы у 27 больных с гипо - и 28 - с гиперфункцией щитовидной железы, госпитализированных в эндокринологическое отделение Краснодарской краевой клинической больницы исследованы тиреоидные гормоны и тиреотропин в СК и РЖ.
В группу больных с синдромом первичного гипотиреоза вошли пациенты с диагнозами: послеоперационный гипотиреоз (11 человек), идиопатический гипотиреоз (1 человек), хронический тиреоидит с гипофункцией (3 человека), аутоиммунный тиреоидит с гипофункцией (5 человек), ятрогенный гипотиреоз (1 человек - в рузультате бесконтрольного приема L-тироксина), субклинический гипотиреоз (1 человек), гипотиреоз некомпенсированный тяжелой формы (5). Среди них один мужчина в возрасте 57 лет, остальные женщины - 25 человек в возрасте от 33 до 69 лет.
В группе больных с гиперфункцией щитовидной железы самым распространенным диагнозом был диффузный токсический зоб (ДТЗ) различной степени тяжести - 18 человек. Пациентов с диагнозом смешанный токсический зоб - 6 человек, с аутоиммунным тиреоидитом с гиперфункцией - 2 человека, с эндемичным смешанным зобом - 1 человек. Из них - 4 мужчин в возрасте 15-43 лет, остальные 24 человека - женщины в возрасте 15-75 лет.
Как видно из представленных в таблице 4.1. данных, у клинически здоровых испытуемых содержание в СК ТТ4, СТ4, ТТЗ, СТЗ и ТТГ соответствует норме (Меньшиков В.В., 1999). У больных гипотиреозом -существенно и достоверно снижено содержание в сыворотке крови тиреоидных гормонов и более, чем в 50 раз повышена концентрация ТТГ, у больных гипертиреозом столь же характерно многократно и достоверно увеличено содержание тиреоидных гормонов и снижена концентрация в СК ТТГ и практически не отличалось от концентрации в сыворотке крови.
У больных с гипертиреозом (таблица 4.1) была многократно и статистически достоверно повышенная концентрация СТ4, СТЗ в РЖ (в 3,5 раза). Появление ТТ4 и ТТЗ при незначительном увеличении ТсвГ(п=10) в РЖ (0,39±0,08) у этой группы больных, видимо, связано с резко возросшей их концентрацией в крови и повышением проницаемости гематосаливарного барьера при метаболических нарушениях. Содержание ТТГ в РЖ при гипертиреозе существенных изменений не претерпело.
При гипотиреозе (табл. 4.1) концентрация СТ4 и СТЗ в РЖ уменьшилась в 1,4 раза при повышенном уровне ТТГ в 2,8 раза. Предполагается, что гипотиреоз сопровождается задержкой выведения из клеток биологически активных веществ [Луцик А.Д., Ященко A.M., Детюк Е.С., 1987]. Аналогичное угнетение экзоцитоза на фоне гипотиреоза описано для В-инсулоцитов поджелудочной железы [Утехин В.И., Герловин Е.Ш., 1978].
Содержание ТсвГ(п=10) в СК 24,7±0,5 мкг/мл, в РЖ - 0,25 мкг/мл. При незначительном увеличении (на 28,6%) ТСвГ в СК, в РЖ концентрация осталась без изменений, что объясняется замедленным клиренсом ТСвГ [Singer Р.А., 1999]. Известно, что преобладающее количество ТТ4 (75%) и ТТЗ (80%) в СК прочно связано с транспортными белками, в первую очередь с тироксинсвязывающим глобулином (ТСвГ). Скорость продуцирования этого белка может снижаться как при гипотиреозе (клиренс замедляется), так и при тяжелом тиреотоксикозе (клиренс усиливается). При повышении в СК концентрации ТСвГ уровни ТТ4 и ТТЗ возрастают, а при снижении -уменьшаются; уровни СТ4 и СТЗ при этом не меняются. (Singer Р.А., 1999), но изменяется механизм связывания тиреоидных гормонов [Браунвальд Е. и соавт., 1997]. Итак, при патологии щитовидной железы концентрация СТ4, СТЗ и ТТГ в РЖ изменяется в прямой зависимости от функционального состояния щитовидной железы и в прямой зависимости от изменений содержания этих гормонов в СК, что позволяет рекомендовать определение свободных тиреоидных гормонов и тиреотропина в РЖ. Это может представлять ценную неинвазивную альтернативу анализу данных гормонов в сыворотке крови при мониторинге пациентов с гипо- и гиперфункцией щитовидной железы. Сказанное подтверждается результатами корреляционного анализа - величина положительных коэффициентов корреляции между концентрацией этих гормонов в СК и РЖ и достаточно высокая: ТТГ -г-0,64; ТТЗ -г=0,53 и СТ4-г=0,41; СТЗ -г=0,33. Полученные результаты позволяют заключить, что слюнные железы участвуют в обеспечении гормонального тиреоидного гомеостазиса организма и достаточно информативны о нем. У больных с гипофункцией щитовидной железы концентрация тиреоидных гормонов в составе сыворотки крови и ротовой жидкости уменьшается, при гиперфункции -увеличивается, что отражает функциональное состояние щитовидной железы. Слюнные железы участвуют в поддержании гомеостазиса тиреоидных гормонов организма; гормоны РЖ информативны о нем, давая дополнительную и прогностическую информацию о функциональном состоянии гипофизарно-тиреоидной системы. 1. Ротовая жидкость здоровых добровольцев содержит свободный тироксин, свободный трийодтиронин, тиреотропный гормон и тироксинсвязывающий глобулин. В ротовой жидкости концентрация свободного тироксина выше (42,8 %), чем в слюне околоушных желез и почти не отличается от концентрации в слюне поднижнечелюстных и подъязычных желез; концентрация свободного трийодтиронина в РЖ выше (6,9%), чем в слюне околоушных желез и ниже (30,1%),чем в слюне поднижнечелюстных и подъязычных желез; концентрация тиреотропного гормона в РЖ ниже (42,5%), чем в слюне околоушных желез и в 4 раза ниже, чем в слюне поднижнечелюстных и подъязычных желез. 2. У больных с гипофункцией щитовидной железы концентрация свободных тиреоидных гормонов в СК и РЖ уменьшается, при гиперфункции - увеличивается. 3. При гиперфункции щитовидной железы в РЖ обнаруживаются ТТ4 и ТТЗ, не определяемые в ней в норме и при гипофункции щитовидной железы. 4. У больных с гипофункцией щитовидной железы концентрация ТТГ в СК и РЖ многократно повышено, при гиперфункции - в СК существенно снижено, а в РЖ мало отличается от уровня, характерного для здоровых добровольцев. 5. Между концентрациями тиреоидных гормонов в СК и РЖ имеется прямая связь с разным коэффициентом корреляции (ТТГ-г=0,64; ТТЗ-r=0,53; CT4-r=0,41; СТЗ -1=0,33).
