Содержание к диссертации
Введение
CLASS ГЛАВА I Обзор литературы CLASS 9
1.1. Особенности иммунологической реактивности человека в условиях Севера 9
1.2. Иммунокоррекция препаратами водорослевого происхождения 14
1.2.1. Характеристика нейтрального полисахарида 18
1.3. Краткая характеристика используемых в работе признаков,
определяющих состояние иммунной системы человека 21
ГЛАВА 2.Материалы и методы исследования 30
2.1. Общая характеристика исследуемых групп 30
2.2. Методы исследования показателей иммунологического гомеостаза 31
2.3. Методы математической обработки результатов исследования 36
CLASS ГЛАВ A 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 3 CLASS 7
3.1. Механизмы иммуномодулирующего эффекта ламинарина в условиях эксперимента 37
3.2. Механизмы иммуномодулирующего действия ламинарина у детей с воспалительными процессами 62
3.3. Механизмы иммуномодулирующего действия ламинарина у взрослых с онкологическими заболеваниями 79
3.4. Механизмы иммуномодулирующего действия ламинарина у взрослых с воспалительными процессами 92
Заключение 104
Выводы 114
Практические рекомендации 115
Список литературы 116
- Особенности иммунологической реактивности человека в условиях Севера
- Иммунокоррекция препаратами водорослевого происхождения
- Механизмы иммуномодулирующего эффекта ламинарина в условиях эксперимента
- Механизмы иммуномодулирующего действия ламинарина у детей с воспалительными процессами
Введение к работе
Актуальность исследования. Состояние здоровья человека, во многом определяется уровнем иммунологической реактивности. К настоящему времени уже окончательно сформировалось представление, что среди значительного числа жизнеобеспечивающих систем иммунная система выполняет защитную, регуляторную, стимулирующую процессы регенерации функции [92, 108].
Иммунологическая реактивность человека на Севере отличается повышенным уровнем лимфопролиферации и провоспалительных цитокинов, низким содержанием в крови функционально активных Т-лимфоцитов, IgA на фоне повышенной концентрации иммуноглобулинов М, Е, G, ЦИК и дефицитом содержания фагоцитарной защиты. Это приводит, с одной стороны, к торможению возрастного развития иммунной системы, а с другой — к сокращению резервных возможностей регуляции иммунного гомеостаза [29, 105],
Иммунокоррекция является одним из наиболее перспективных направлений лечения хронической рецидивирующей патологии, аутоиммунных заболеваний, онкологических процессов, аллергии [30]. В современной литературе часто обсуждаются вопросы эффективности иммунокоррекции и иммунореабилитации при различных патологических процессах без достаточно полного выяснения механизмов функционирования иммунной системы в условиях иммуностимуляции. В то же время, использование иммуностимулирующего фактора оправдано при достаточно четком знании объекта и спектра влияния препарата, механизма его воздействия, прямо и косвенно обусловленных реакций. Иммуномодуляторы растительного и водорослевого происхождения более эффективны, когда они получены из местного сырья. Мало того, использование местного сырья для получения биологически активных веществ экономически выгодно [68, 71].
Ламинария, бурая водоросль (Laminaria saccharina) образует обширные заросли на Белом, Карском и Баренцевом морях и запасы её имеют промышленное значение. Ламинарины, полученные из бурых водорослей, являются биологически активными веществами. Подробно изучены их противовоспалительные, антикоагуляционные, антиатеросклеротические свойства; сведения об их иммуномодулирующей способности единичны и касаются эффективности фагоцитоза, а также их использования для лечения онкологических заболеваний [29,71]. Представляет интерес исследование иммуномодулирующих свойств ламинарина (дополана), полученного по специальной методике с применением экологически чистых способов выделения водой и спиртом.
Цель и задачи исследования. Цель работы - выявить иммуностимулирующие свойства ламинарина в эксперименте и клинических исследованиях.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
Изучить изменение клеточного состава перитонеального экссудата и периферической крови, а также фагоцитоз нейтрофилами и моноцитами у мышей при внутрибрюшинном введении ламинарина (дополана).
В условиях эксперимента изучить влияние исследуемого препарата на лимфопролиферацию и дифференцировку иммунокомпетентных клеток периферических органов иммунитета.
Установить влияние полисахарида на процессы активизации и дифференцировки лимфоцитов периферической крови у людей.
Учитывая противоопухолевый эффект ламинарина, установить влияние его на параметры противоопухолевого иммунитета.
Под влиянием препарата выявить диспропорцию содержания иммуноглобулинов разных классов.
Положения, выносимые на защиту:
1. Повышение активности и эффективности фагоцитарной защиты под влиянием ламинарина происходит за счет активизации процессов миграции, хемотаксиса нейтрофилов, моноцитов и макрофагов, а также увеличения захватывающей и переваривающей способностей фагоцитов.
2. Ламинарии активирует процессы лимфопролиферации с развитием реакции в регионарных и отдаленных от места его введения лимфатических узлах, активирует экспрессию молекул CD3, CD5, CD25, CD71, HLA DR на мембране лимфоцитов.
3. Под воздействием испытуемого препарата увеличивается содержание в периферической крови Т-хелперов, цитотоксических лимфоцитов и естественных киллеров, снижаются концентрации РЭА и TNF-a, а также исправляется диспропорция содержания сывороточных иммуноглобулинов.
Научная новизна исследования. Впервые определены типы фагоцитов, которые активируются под воздействием нейтрального полисахарида. Впервые установлены механизмы стимулирующего влияния ламинарина на активность фагоцитоза (хемотаксис, захватывающую и переваривающую способности фагоцитов). Впервые установлено, что нейтральный полисахарид стимулирует пролиферацию лимфоцитов и экспрессию активирующих молекул иммунокомпетентных клеток. Выявлено влияние ламинарина на дифференцировку иммунокомпетентных клеток (Т-хелперов, цитотоксических лимфоцитов, естественных киллеров и В-лимфоцитов). Впервые установлено, что ламинарии снижает содержание в крови РЭА, TNF-a и исправляет диспротеинемию содержания сывороточных иммуноглобулинов.
Научно-практическая значимость исследования. Полученные в работе новые данные могут быть использованы в практическом здравоохранении при разработке схем применения ламинарина для лечения иммунодефицитных состояний при воспалительных процессах и онкологических заболеваниях, а также для профилактики экологически зависимых иммунодефицитов. Материалы диссертации рекомендуются для использования в учебном процессе в области физиологии, фармакологии, иммунологии, онкологии и на курсах подготовки биологов, фармакологов, врачей.
Результаты исследования внедрены в практику работы врачей медицинской компании «Биокор» для лечения иммунодефицитных состояний (акт внедрения от 5.09.2005 г.).
Диссертационное исследование выполнено в соответствии с комплексным планом НИР Института физиологии природных адаптации УрО РАН (номер государственной регистрации 01.2.00101811).
Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены и обсуждены на Всероссийской конференции с международным участием «Биологические аспекты экологии человека» (Архангельск, 2004); конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003); II симпозиуме с международным участием «Проблемы адаптации человека к экологическим и социальным условиям Севера» (Сыктывкар, 2004); 4-й Молодежной научной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2005); Второй Международной научно-практической конференции (Архангельск, 2005); Международном конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к терапии» (Москва, 2005); V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 2005); XII Международном совещании и VI школе по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006).
По материалам диссертации опубликовано 23 печатных работы.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста и состоит из введения, 3 глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение), заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 16 рисунками. Библиография включает 109 отечественных и 75 зарубежных публикаций.
Особенности иммунологической реактивности человека в условиях Севера
Состояние здоровья населения зависит не только от социально-экономической ситуации, но и от воздействия окружающей среды. Неблагоприятные климатические и географические условия, техногенная нагрузка приводит к перенапряжению и срыву защитных адаптационных резервов организма населения Архангельской области [1,2,5, 11,48]. Значимость влияния неблагоприятных климатических факторов на уровень заболеваемости опосредуется через их влияние на общую резистентность и иммунологическую реактивность [6, 11]. На Севере наиболее распространены болезни органов дыхания, они являются практически краевой патологией, составляя 47-58% случаев нетрудоспособности и до 45% случаев заболеваний, несущие неспецифический характер [6, 29]. Состояние здоровья детского населения Архангельской области можно охарактеризовать как низкое. Общая и первичная заболеваемость детей на протяжении последних 10 лет значительно превышала средние показатели РФ [26,38,87]. Заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертности у коренных жителей Крайнего Севера почти вдвое выше, чем в среднем по стране [20, 27, 29]. Состояние здоровья человека во многом определяется уровнем иммунологической реактивности. К настоящему времени уже окончательно сформировалось представление, что среди значительного числа жизнеобеспечивающих систем иммунная система выполняет защитную, цензорную, регуляторную, стимулирующую процессы регенерации функции [63,84,93].
Иммунологическая реактивность человека на Севере отличается наличием довольно высокой фоновой активности со стороны ряда параметров. У северян при отсутствии изменения общего содержания лейкоцитов регистрируется снижения числа сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов на фоне повышения абсолютного количества лимфоцитов, причем снижение как относительного, так и абсолютного содержания нейтрофилов сопряжено с дефектами их фагоцитарной активности, осмотической устойчивости фагоцитов, особенно в периоды повышения влажности [23, 33, 78, 106]. Установлено характерная для северян персистирующая неитропения, которая коррелируется в мембранных CD8+, CD 16+, CD4+, а также HLA DR+. Следовательно, неитропения на Севере возникает в результате клеточной и комплемент зависимой цитотоксичности с активацией экспрессии мембранных антигенов комплекса гистосовместимости класса II [13, 28, 29, 81, 105]. Выявлено угнетение пролиферативных процессов со стороны моноцитарной системы у жителей Севера, тогда как изменение уровня дифференцировки не установлено [27, 38, 106]. У детей по сравнению с взрослыми в меньшей степени выражены процессы пролиферации и, соответственно, ниже содержание молодых форм лимфоцитов, Т-клеток с рецепторами к трансферрину, лимфоцитов с антигенами ГКГС класса 2, а также концентраций ЦИК [38, 105, 106]. Региональные нормативы иммунологических показателей у северян характеризуются низким содержанием Т-лимфоцитов за счет клеток, несущих рецепторы CD3+ и CD5+ на фоне значительных концентраций В-лимфоцитов и IgM, а также снижением содержания сывороточного IgA [105,148]. Этот дефект иммунной системы ослабляет защиту против внутриклеточных паразитов и опухоли, а также создает риск хронических воспалительных процессов и развития инфекционной аллергии [26, 90]. Причем дефицит содержания Т-лимфоцитов формируется с течением времени и, являясь вторичным, среди детей встречается значительно реже, чем у взрослых, за счет резервов Т-лимфоцитов, клеток, еще не вовлеченных в иммунную реакцию [105,106].
Гуморальный ответ характеризуется низкой активностью антителообразования, что подтверждено относительно различных антигенов, в том числе бактерий, патогенных грибов, вирусов и тканевых детерминант, высокой частотой регистрации дефицита сывороточного IgA за счет его перераспределения и активного синтеза в коже и слизистых [3, 21, 97, 109]. В условиях Европейского Севера выявляется значительный уровень
аутосенсибилизации, что проявляется в регистрации аутогемагтлютининов, лейкоагглютининов, аутоантител к тиреоглобулину до 30% [29, 44]. Наличие столь высокого уровня аутоантител у практически здоровых лиц, вероятно, служит проявлением активных метаболических процессов в организме, в частности перекисного окисления липидов, в том числе и в коже [44, 93]. В литературных источниках существует достаточно много объяснений аутоиммунной перестройки в суровых северных условиях. По мнению Н.В. Васильева (1985) это могут быть микродеструктивные процессы в органах, подвергающихся функциональной перегрузке. Возможно, играет большую роль в этом процессе катаболический эффект глюкокортикоидов, резкое увеличение содержания в крови концентраций свободных жирных кислот [55, 92, 108]. Для Севера характерна высокая распространенность значительных концентраций IgM, IgG [ 14, 15, 38, 42, 52, 150, 180], что является не только отражением напряженности гуморальной защиты против возбудителей, но и аутосенсибилизацией, значительная частота которой является особенностью иммунного статуса северян [23, 38, 104]. В большом количестве работ, проведенных на Севере, нашел факт подтверждения наличия аномально высоких концентраций в крови IgE. Высокая частота выявления повышенных концентраций реагинов отмечается ни только при аллергии, но и при аутоиммунных, хронических воспалительных и злокачественных опухолевых процессах [4, 76,151].
В условиях повышенных концентраций сывороточных иммуноглобулинов формируется возможность высоких уровней содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) среди взрослых жителей, что влияет на уровень заболеваемости, который связан с нарушением микроциркуляции, клеточной кооперации и фагоцитоза [23, 38, 104]. При комбинированных дефектах Т- и В-клеток высок риск возникновения опухоли [29,108].
Условием, определяющим направленность формирования экологически зависимых иммунодефицитов, является состояние одного из важнейших инициирующих и заканчивающих процесс иммунной реакции механизмов защиты - фагоцитоз [66, 77, 94]. Дефицит фагоцитарной защиты это не только высокий уровень воспалительных процессов и их осложнений, но и нарушение обмена веществ, дефект внутриутробного развития, ускоренное старение, рост патологии аутоиммунного и онкологического профиля [26, 32, 46, 93, 108]. Фагоцитарная и функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов на Севере в значительной степени снижена за счет снижения активности фагоцитов в сочетании с нейтропенией, а также с функциональной недостаточностью Т-клеток [28, 33, 37]. Активность фагоцитарной защиты у взрослых менее выражена по сравнению с детьми [105,106].
В настоящее время признано, что состояние иммунной системы является одним из ранних и чувствительных показателей вредного воздействия на организм факторов окружающей среды. Снижение иммунной реактивности коррелирует с увеличением заболеваемости населения, проживающего в районах с повышенным загрязнением атмосферного воздуха [10, 20, 27, 87], в том числе выбросами предприятий по производству целлюлозы и продуктов микробиологического синтеза. Загрязнение атмосферного воздуха проявляется в усугублении имеющегося дефекта фагоцитарной защиты, Т-клеточного иммунодефицита, недостаточного уровня сывороточного IgA и повышенной аутосенсибилизации также способствует дальнейшей напряженности иммунных реакций, проявляющихся активацией реагинового механизма зашиты как крайнего, свидетельствующего о возможном срыве физиологического хода иммунных реакций [2, 82, 92, 103]. У детей, проживающих в городах с химическим и микробиологическим загрязнением атмосферного воздуха, особенно в зимнее - весенний период, в значительной степени изменяются показатели кожной аутомикрофлоры и коррелируют с дефицитом IgA [18, 89, 104].
Иммунокоррекция препаратами водорослевого происхождения
В последние годы для лечения больных с воспалительными процессами различной этиологии и локализации все большее распространение получают препараты растительного и водорослевого происхождения, которые обладают широким спектром лечебного воздействия [43, 91, 138]. Сокращение резервов иммунной системы на Севере обусловливает необходимость систематической иммунокоррекции, характер которой определяется возрастом продолжительностью жизни на Севере и сезоном года: в период биологических сумерек рекомендуется проводить иммунокоррекцию с использованием сорбентов, антиоксидантов и иммуномодуляторов, стимулирующих фагоцитоз [96,105].
Наука о водорослях — альгология - насчитывает более двухсот лет. Отцом русской науки о водорослях по праву считают академика Г. С.Гмелина, издавшего в 1768 году первую в стране книгу под названием "Historia fucorum", в которой он подробно описал более двадцати различных представителей морских водорослей, обитающих в наших водах [83,91,182].
Ламинария сахаристая, Бурая водоросль (Laminaria saccharina), произрастает в морях Северного Ледовитого океана, а также распространена в Северной Атлантике, западной части Балтики и реже встречается в Черном море. Основным действующим веществом ламинарий является полисахарид — альгиновая кислота, которая является линейным полимером, состоящим из остатков связанных Р-(1 4)-гликозидными связками D-маннуроновой и а-(1— 4)-гликозидными связками L-гулуроновой кислот (мол м. 200 кДа). В ламинариях содержится до 21% полисахарида ламинарина (ламинарана), состоящего из остатков р-1,3 — связанных единиц D-глюкозы 2,3,4,6- тетра -0- метилглкжозы 10%, 2,4,6 - три — 0 — метилглюкозы 65%, 2,3,4 - три — 0 -метилглюкозы 1%, ди- 0 метилглюкозы 21% и моно — 0 — метилглюкозы 3%. В молекуле ламинарина присутствует некоторое количество бета - 1,6 -связанных единиц D - глюкозы. Считают, что ламинарии у бурых водорослей является запасным питательным веществом. Известны две формы ламинарина, которые отличаются молекулярной массой и растворимостью в воде [30,31,91,162].
В ламинарии сахаристой идентифицированы разнообразные стерины, содержание которых составляет 0,2%. В составе стеринов преобладает фукостерин (87%), присутствуют также 24-метиленхолестерин (11%), холестерин (0,05%), 24-кетохолестерин (0,05%), сарингостерин (1,8%). Кроме перечисленных соединений, слоевище ламинарии содержит значительное количество L-фруктозы (до 2%), белки (до 9 %), следы жирного масла, витамины С (до 111 мг/г), В12 (0,04-0,05 мкг/г сухого вещества), Bl, В2, D, каротин, макро- и микроэлементы (марганец, медь, железо, мышьяк, кобальт, бром, бор). В бурых водорослях содержится, кроме хлорофилла А, хлорофуцин (хлорофилл С, или у-хлорофилл). Водоросли до 45% сухой массы содержат почти все известные неорганические элементы, встречающиеся на нашей земле. Ламинарии содержат 43 микро- и макроэлемента: 460 мг на кг калия, 70 мг натрия, 40 мг кальция, 30 магния, а также серу до 33 мг, фосфор - 11 мг, йод - 7 мг, железо - 1,5 мг, медь и бром по 0,4 мг. Водоросли очень богаты аминокислотами, содержат довольно много жирных ненасыщенных кислот [12,30,71,178].
Бурые водоросли представляют собой возобновляемый, легко культивируемый источник интересных по структуре и биологической активности полисахаридов: водорастворимых ламинаранов (1,3-P-D-глюканов), фукоиданов (высокосульфатированных a-L-фуканов) и альгиновых кислот. Эти биополимеры представляют большой практический интерес, поскольку проявляют разнообразные виды биологической активности. Широко изучаются противовоспалительные, антивирусные действие этих полисахаридов, а также их антикоагулятивная, тромболитическая активность [34, 30, 71, 135, 145, 172]. Сотрудники ООО «Альготех» разработали препараты полисахарид ной природы из ламинарий под названием «дополан» и «суполан». Необходимо отметить, что в России переработка бурых водорослей практически не развита. Более того, если для получения альгиновых кислот имеются хотя бы небольшие производства, то водорастворимые полисахариды - ламинараны, фукоиданы — теряются с отходами при переработке водорослей [68, 71]. В связи с этим, актуально совершенствовать способы комплексной переработки водорослей, позволяющие получать кроме альгинатов и маннита, не менее важные ламинараны, фукоиданы и полиманнуронаты [71]. В основе получения фукоидана лежит осаждение данного полисахарида кальциевыми солями, с последующей очисткой. Разработана специальная методика получения фукоидана на основе центрифугирования при 1000об/мин, позволяющая отделить более легкие фракции ламинарина. Способ дает возможность повысить выход фукоидана на 10%, сократить время получения препарата в 2 раза и снизить себестоимость на 30%.
Механизмы иммуномодулирующего эффекта ламинарина в условиях эксперимента
В условиях эксперимента изучали цитограммы иммунокомпетентных органов, региональные (мезентериальные) и отдаленные (паратрахеальные) лимфатические узлы, лимфопролиферативные и плазмоклеточные реакции, фагоцитоз (переваривающую активность и активность фагоцитоза), а также структуру и состав перитонеального экссудата и периферической крови мышей.
Эксперимент поставлен на беспородных белых мышах в количестве 168 объектов весом от 20 до 25 гр. Исследование проводили через 30, 60 минут, а также 1, 24, 48, 72, 96 часов. На каждый срок исследования использовали не менее 14 животных, которых содержали в обычных условиях вивария. Опыт сопровождали соответствующим контролем, с количеством животных равным опытному. Ламинарии вводили однократно внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг в объеме 1 мл физиологического раствора. Перитонеальныи экссудат получали путем неоднократного промывания физиологическим раствором в объеме 3 мл в брюшинной полости, из осадка экссудата делали мазки. Цитологическую структуру иммунокомпетентных органов изучали в мазках — отпечатках.
В таблице 1 представлены данные изменения цитограммы перитонеального экссудата и периферической крови мышей после введения 5 мг/кг массы тела изучаемого препарата - ламинарина.
Изучение цитологической структуры клеток экссудата, беспородных белых мышей, под влиянием внутрибрюшинного введения ламинарина дает основания считать, что препарат обусловливает изменения содержания в экссудате нейтрофилов. Наиболее рано, через 30 минут, наблюдается увеличение содержание нейтрофилов с 38,58±1,61 до 44,3 7± 1,07 % клеток экссудата (р 0,01) в месте введения препарата с максимумом через 60 минут — с 38,60±1,19 до 53,46±0,71% клеток (р 0,001) и с дальнейшим снижением в течение последующих 4 дней - с 53,46±0,71 до 26,58±0,59% клеток (р 0,05) в опытной группе наблюдения.
Моноцитарная реакция в перитонеальном экссудате выявлена через 48 часов с заметным увеличением содержания моноцитов в 1,2 раза с 33,67± 2,92 до 45,82±1,17% (р 0,01) клеток, с дальнейшим его снижением в последующие 2 дня до 32,08±0,76 % (р 0,001).
Общее содержание лимфоцитов, вероятно, не претерпевает заметных изменений на ранних этапах эксперимента. Увеличение содержания лимфоцитов в составе перитонеального экссудата наблюдали через 96 часов эксперимента в опытной группе до 43,97±0,97% (р 0,05) и контрольной до 40,53±2,38% (р 0,05) клеток.
В таблице 2 представлены функционально активные клетки перитонеального экссудата после внутрибрюшинного введения препарата.
Наиболее рано, через 30 минут, наблюдается увеличение содержания нейтрофилов в месте введения препарата с максимумом через 60 минут с 44,37±1,07 до 53,46±0,71% клеток (р 0,001) и дальнейшим снижением в течение последующих трех дней до 26,58±0,59% (р 0,05) клеток. Представляет интерес изменение моноцитограммы в перитонеальном экссудате после внутрибрюшинного введения препарата. Сравнение динамики изменения цитограммы и реакции, отражающей функционирование активных клеток, обусловливает совпадение нейтрофильной инфильтрации с уровнем увеличения моноцитов. Моноцитарная реакция в перитонеальном экссудате выявлена через 48 часов наблюдения с увеличением процента содержания моноцитов с 33,67±1,07 (р 0,001) до 45,82±0,51% (р 0,05) клеток. На ранних сроках в перитонеальном экссудате преобладают зрелые формы моноцитов в составе моноцитограммы до 29,53±1,20% клеток (р 0,001) с последующим снижением до 13,57±0,94% клеток. В более поздние сроки прослеживается отличительное повышение промоноцитов и полиморфноядерных моноцитов, соответственно с 3,14±0,24 (р 0,001) до 18,78±1,23% и с 1,95±0,13 до 5,19±0,24% клеток (р 0,05). Максимальное развитие моноцитарной реакции идет на фоне появления в экссудате лимфоретикулярных клеток и формирование розеток из лимфоцитов вокруг моноцита, а реакция со стороны лимфоидных клеток совпадает с развитием местной плазмоклеточной реакцией.
В структуре лимфоцитограммы экссудата под воздействием ламинарина наблюдается повышение относительного содержания больших лимфоцитов к 4 дню наблюдения. Так, на 4 сутки процент больших лимфоцитов увеличивается по сравнению с исходным уровнем с 6,83±0,62 до 23,78±1,87% (р 0,001). Это происходит за счет снижения относительного содержания малых лимфоцитов с 12,91±1,37 (р 0,001) до 8,65 ±0,79 % (р 0,01). Средние лимфоциты увеличиваются в два раза в течение периода эксперимента: через 60 минут с 1,83±0,23 до 2,35±0,24 % (р 0,01) и 96 часов с 1,84±0,14 (р 0,01) до 8,97±1,38 % клеток.
Проведен анализ фагоцитарной и переваривающей активности нейтрофилов и моноцитов (в перитонеальном экссудате) в динамике изучаемых реакций. Результаты исследований представлены в таблице 3.
Как видно из представленных данных, ламинарии стимулирует процент активных фагоцитов и интенсивность фагоцитоза, с заметным увеличением фагоцитарного числа. Процент активных нейтрофилов увеличивается через 30 минут после введения препарата и практически на таком повышенном уровне сохраняется до 4 дня опыта: через 30 минут процент активных нейтрофилов возрастает с 22,39±1,87 до 24,80±1,34%, максимум регистрируется через 3 суток с 35,88±1,39 до 46,10±1,28% клеток (р 0,001).
Механизмы иммуномодулирующего действия ламинарина у детей с воспалительными процессами
Среди большого числа жизнеобеспечивающих систем только одна система иммунитета исполняет роль защиты. Уникальность иммунной системы обеспечена ее функциональным многообразием: многочисленностью механизмов защиты, факторов резистентности, многоликостью реакций [29, 93]. Иммунологическая реактивность человека на Севере отличается наличием довольно высокой фоновой активности со стороны ряда параметров. Повышенная активность касается уровня лимфопролиферации, содержания в крови провоспалительных цитокинов, антителообразования, преимущественно за счет аутоантител. Это приводит, с одной стороны, к торможению возрастного развития иммунной системы, а с другой — к сокращению резервных возможностей регуляции иммунного гомеостаза[98,106].
Уровень заболеваемости у детей на Севере в значительной степени превышает таковой у лиц, проживающих в благоприятных климатических условиях. Развитие иммунной системы у детей на Севере отличается задержкой возрастного формирования иммунной системы (на 2-4 года) и высоким уровнем вторичных иммунодефицитов, развивающихся под влиянием техногенного загрязнения региона. Обследование в возрастной динамике 200 детей, родившихся и постоянно живущих на Севере, позволило нам создать некоторое представление об основных этапах формирования у детей вторичных, экологически обусловленных иммунодефицитов. Среди обследуемых наиболее значимыми по количеству были группы от 12 до 16 лет (средний возраст составил 13,11±0Д5 лет), из них 99 мальчиков (49,5%) и 101 девочка (50,5%). Установлено, что хронические воспалительные процессы сопровождаются нарушением функционирования иммунной системы и поэтому может быть охарактеризованы как многофакторные иммунопатологические процессы, которые способствуют развитию системных осложнений [28, 38, 42, 78, 89, 90].
В результате проведенных медико-биологических мероприятий проанализированы иммунологические исследования периферической крови детей до приема и после 4 недель приема ламинарина, в дозе 5 мг/кг массы. Параметры исследования иммунологического статуса детей с воспалительными процессами представлены в таблицах 10 и 11.
Заметное место среди дефектов иммунной защиты у детей на Севере занимает низкий уровень фагоцитарной защиты за счет снижения процента активных фагоцитов [20, 33, 38]. Фагоцитарная защита является основной для ребенка, поскольку специфические механизмы защиты находятся еще в процессе формирования. Фагоцитоз инициирует развитие защитного иммунного ответа организма, обеспечивая уровень его активности и длительности [29,93,106]. Как видно из представленных данных процент содержания активных в реакции фагоцитоза нейтрофильных лейкоцитов до лечения в средних результатах составляет 20,06±0,90% с фагоцитарным показателем 46,42±2,19%, что существенно ниже общепринятых значений. При этом страдает в основном не захватывающая способность фагоцитов, а их активность: фагоцитарное число, как правило, достаточно высоко, а % активно фагоцитирующих клеток, зачастую не достигает 40%. Сокращение резервных возможностей стимуляции фагоцитоза связано с дефицитом содержания IgA (г=0,56; р 0,05). Взаимосвязь сокращения резервных возможностей с дефицитом IgA свидетельствует о роли в этом процессе активизации системы комплемента альтернативным путем.
Оценивая состояние фагоцитарной защиты, установили, что после курса лечения происходит незначительное увеличение содержания функционально активных нейтрофилов до 26,91±1,72%. Выявлено влияние ламинарина на уровень фагоцитарной защиты: средние значения фагоцитарной активности составили 46,42±2,19%, а уровень фагоцитарного числа - 21,23±1,39 %; в присутствии ламинарина процент активных фагоцитов возрос до 60,19±2,28%, р 0,01 у 40,12 % детей с заметным снижением фагоцитарного числа до 13,98±1,00 %, р 0,05 (рис.5). Под воздействием нейтрального полисахарида происходит повышение активности фагоцитарной защиты путем увеличения процента активных фагоцитов, при этом интенсивность фагоцитоза, то есть нагрузка на фагоцитирующую клетку, заметно снижается (г =-0,42, р 0,05).
