Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1 Распространение и вредоносность вирусов 5
1.2. Основные афидофильные вирусы картофеля 11
1.3. Особенности распространения вирусов тлями 22
1.4. Приемы оздоровления растений картофеля от вирусов 27
1.5. Заключение по обзору 37
ГЛАВА 2. Экспериментальная часть
2.1. Методикаи материалы исследований 39
2.2. Результаты исследований и их обсуждение 41
2.2.1. Распространение афидофильных вирусов на разных сортах картофеля и их вредоносность
2.2.2. Особенности биологии тлей на картофеле 46
2.3. Некоторые приемы по ограничению распространения вирусных инфекций
2.3.1. Влияние препарата F-760 на вирофорность тлей-переносчиков.. 75
2.3.2. Роль кокцинеллид в снижении численности тлей-переносчиков 76
2.3.3. О получении безвирусных растений методом культуры тканей.. 77
Выводы 82
Список литературы
- Особенности распространения вирусов тлями
- Приемы оздоровления растений картофеля от вирусов
- Распространение афидофильных вирусов на разных сортах картофеля и их вредоносность
- Влияние препарата F-760 на вирофорность тлей-переносчиков..
Введение к работе
з
Актуальность работы. Картофель - относится к важнейшим :ельскохозяйственным культурам. Роль его в решении мировой іродовольствешюй проблемы очень велика ю-за высокой потребительской и питательной ценности.
Клубнії содержат практически все необходимые для человека пггагелыше вещества. По общим энергетическим запасам картофель зашшает штое место после пшешщы, кукурузы риса и ячменя. Он также является істочіпіком виташша С и витаминов группы В (В і, Bj, Вб). В нем содержатся :аротиноиды и витамины РР и К.
Значительные потерн урожая картофеля, которые вызывают различные іирусьі, а также многие виды тлей-переносчиков, могут достигать 60-90%.. Уставный перенос вігрусов тлями происходит вследствие ряда биолопгческпх юобенностей последних: массовое и быстрое размножение, высокая юдвижность при миграции и чередование кормовых растений-хозяев, строение ютовых органов и характера питания. Картофельные вирусы переносятся іолее 30 различными видами тлей (Фисенко и Лебедева, 1985). Последние вляготся важным звеном в их циркуляции, в значительной мере определяя іаспространеіше и развитие заболевашгй, и, в конечном итоге, выбор системы ащитных мероприятий.
Взаимодействие вирусов и насекомых-хозяев на популяционном уровне тличается большим разнообразием. Появляются новые варианты вирусов и >иотнпы переносчиков, различающиеся по своим свойствам, изменяется оотношение их в популяциях. Происходит активное формирование новых [отологических связей у векторов и вирусов с новым! хозяевами (Валентюк, 986; Heuvel, 1995). Их вредоносность и широкое распространение, отсутствие ффективных приемов оздоровления насаждений от инфекции в полевых
условиях повышают значимость и актуальность профилактически: мероприятий.
Цель и задачи исследований. Целью работы является изученн особенностей циркуляции афидофильных вирусов и некоторы: функциональных параметров тлей в агроценозах картофеля и других овощны культур, выращиваемых в севооборотах с ним, и усовершенствование ме борьбы с ними. Для достижения указанной цели были поставлены следующи задачи:
уточнить характер распространения афидофильных вирусов н картофеле, определить фауну тлей, участвующих в и распространении, выявить спектр основных и дополнительных видо переносчиков;
определить по экологическим параметрам (динамика численности структура популяции, кормовые связи) доминирующие виды тлей;
оценить устойчивость различных сортов к тлям - переносчикам;
оценить роль полезных организмов, как фактора интегрированно защиты, в сокращении численности тлей;
уточнить влияние инфекции на стадии производства здорової посадочного материала в культуре тканей и возможности уведичеш его выхода.
Научная новизна. Доказана возможность переноса У-вирус картофеї двумя новыми видами тлей (Aphis роті и Criptomyzus ribis), в том чис; на древесные растения. Найдено, что антивирусный препарат F-7( способен влиять на вирофорность тлей-переносчиков, питавшихся і обработанных им инфицированных растениях. Впервые вьіявлеї стимулирующее действие вируса М-картофеля на клубнеобразование. Практическая значимость работы. Данные о сроках миграции тле переносчиков, видовом составе природных резерваторов среди сорт
растительности дают возможность оптимизировать систему
профилактических мероприятий в конкретном регионе возделывания
картофеля.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы
обсуждались на заседаниях кафедры при годовых отчетах и
докладывались на научной конференции РУДН в 2000 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 2 научные
статьи.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 3
Особенности распространения вирусов тлями
В разных странах, возделывающих картофель, потери не одинаковы, что связано с климатическими условиями в период вегетации культуры, особенностями технологий по ее выращиванию, а также уровнем распространения того или иного вируса. Так, в США потери от возбудителя веретеновидности 1 штамма составили 22%, 2 штамма- уже 64%. Причем при степени поражения 20% урожай снижается на 13%, при 40% - 17% и 50% - на 34%. Ущерб от X или S вируса составляет в среднем 25%, У вируса- до 80%, скручивания листьев или аукуба-мозаики-до 50% (Haraur, 1975, Кучумов, Князев, 1978).
С другой стороны, в Чехии в зависимости от сорта потери урожая картофеля колеблются в пределах 9,8 -39%. Сокращается и выход семенной фракции клубней (Бойко и др., 1975). Более того, выращивание инфицированного картофеля становится низкорентабельным, а в отдельные годы при неблагоприятных условиях для культуры даже убыточным делом.
По данным Амбросова (1975) при 10% средней зараженности посевов картофеля урожайность снижается на 0,4-0,47 т/га.
Обследования посадок картофеля в Венесуэле выявили 100% поражае-мость сортов Pasilla и Sebago вирусом скручивания листьев, снизившего урожайность на 48,3% (Debrot, 1975). Некоторые возбудители способны снижать товарные качества клубней. Например, вирус rattle (или погремково-сти табака) вызывает некрозы в мякоти, а ВСЛК - сетчатый некроз клубней (Кучумов, Князев, 1978). В результате резко снижается содержание крахмала. По данным Hunnius (1976) при поражениях ВСЛК его уровень падает на 2%, У- вирусом - 1,8%. У + S -2,6%, А - 1,6%, М- вирусом - 1,9%, М + S - 2,1%, Х-вирусом -1,6% и S-вирусом - 0,9%. В опытах Шмыгли и Абрамовой отмечается недобор урожая от вируса М в 17-35% и крахмала -1-2%. На долю только S- вируса картофеля приходится 10-25% общих потерь урожая, на М-вирус - 15-45% и У- вирус -40-80%. Причем сильные штаммы более вредоносны. Так, слабый штамм вируса X снижает урожай на 12%, тогда как сильный -на 45%.
В клубнях картофеля, зараженных X, S и М вирусами, снижается по сравнению со здоровыми и содержание сухого вещества и витаминов -на 2,0% и 3,2% соответственно. Происходят и другие физиолого-биохимические изменения. В частности, отмечается уменьшение размеров крахмальных зерен в пораженных тканях, кислотность крахмала и содержание амилазы (Ки-рюхин, Галеева, Парфенова, 1971).
Важно подчеркнуть, что и при скрытых формах инфекции отмечается патологическое воздействие вирусов на растение. Так, по данным Амбросова (1975) при латентном поражении вирусом У содержание крахмала в клубнях снижалось на 0,3-0,8%.
Значительные нарушения метаболизма наблюдаются в углеводном, азотном и окислительно-восстановительных процессах, содержании хлорофилла, общего азота, аскорбиновой кислоты, что, в конечном итоге, способствует ухудшению пищевых свойств клубней (Рейфман и др., 1966, Корзуно-ва, 1966, Андреева, 1966,1981, Ганшина, 1978, Андреева, 1977, Романова и др., 1978).
По проблеме защиты картофеля от вирусных болезней собрана обширная информация. Однако решение ее остается актуальным и сегодня. В различных регионах, например, на Камчатке и Карелии, республике Коми систематически фиксируются факты об обнаружении в указанных местах на картофеле ранее неизвестных патогенов вирусной природы, новых их комплексов, с измененной вирулентностью (Ряховская, 1994, Кузиванова, 1995). Отмечается появление новых штаммов с измененными свойствами у вирусов М и S (Gavileer,1995). В Аргентине выделен изолят Х-вируса серологически родственный типичному серотипу, но отличающийся по электрофоретиче-ской подвижности, способный поражать ранее устойчивые сорта (Tozzim et al, 1994). 3 группы штаммов этого же вируса, различающиеся по вирулентности, обнаружены в Литве (Урбанавичене и др.,1997).
По итогам оценки пораженности коллекционных посадок картофеля вирусом У выявлено большее распространение некротического его штамма. Из 45 протестированных сортообразцов обнаружено только 3 устойчивых и 10 толерантных (Dedic et al, 1996). Широкая интродукция новых сортов способствовала расширению ареала мозаичных инфекций на образцах иностранной селекции (Блоцкая, 1995).
В последнее время акцентируется внимание на таком вредоносном объекте, как Potato leaf roll virus, дианостика которого значительно затруднена из-за отсутствия механической передачи и низкой антигенной активности возбудителя (Palmans et al, 1993, Difonzo et al, 1994). Дискутируется вопрос об участии в патогенезе скручивания листьев картофеля вируса западной желтухи свеклы (Ells Peter, Smith, 1995). Не меньше проблем создает производству и широко распространенный У-вирус картофеля (PVY), проявляющийся в виде морщинистости листьев и полосчатой мозаики в Польше и Финляндии (Fiedorow et al, 1994, Valkonen et al, 1996, Tapio et al, 1997). В Германии зараженность им различных сортов колеблется от 4% до 58% (АЬ-mann et al, 1998). В различных регионах России (Татарстан, Уральские и Приморские области) уровень распространения его варьирует от 3% до 20-30% (Крылов, 1992, Замалиева и др., 1996, Семенчин и др., 1997). Потери урожая от этого заболевания составляют 20-30%, достигая в отдельные годы 50% (Обручков, 1993). В Великобритании на семенных и товарных плантациях распространен штамм вируса, вызывающий некротические поражения (Barcer, 1994). Важно подчеркнуть, что уровень инфицирования возрастает при наличии механических повреждений поверхностных тканей растений (Morelli et al, 1996).
Приемы оздоровления растений картофеля от вирусов
В настоящее время в большинстве стран, производящих картофель, основой в борьбе с вирусными болезнями является четко налаженная система семеноводства на безвирусном семенном материале (Фисенко, Лебедева, 1987).Однако ее внедрение в конкретном регионе практически невозможно без оценки его фитосанитарного состояния.
В течение двух лет (1998-1999 г.г.) мы проводили оценку зараженности местных и перспективных сортов картофеля на сортоучастке Тарасково (Тульская обл.).Для анализа 9 сортов (табл. 5) применяли визуальный осмотр, индикаторный и серологический метод.
Визуальные обследования проводили в фазу бутонизации и цветения растений картофеля рано утром, либо при пасмурной погоде. При серологическом анализе использовали антисыворотки против SBK, МВК и YBK. Афидофильные вирусы на картофеле (У, S и М-вирусы) были идентифицированы на основе их биологических, физических и серологических параметров, а также векторной специфичности. Сравнительный анализ патогенности изолятов вируса М, выделенных из представителей сорной растительности (вьюнок полевой, щавель кислый), произрастающих в агроценозе картофеля, а также сорта Москворецкий, на индикаторах, специфичных для данного возбудителя (Ch. quinoa, G. globosa, D. metel, L. esculentum, N. debney) свидетельствует о том, что по типу реакции и характеру внешних симптомов изучаемые формы отличались от стандартных образцов незначительно в пределах штаммовых вариаций. Их физические показатели (ТТИ 51-52С и время сохранения инфекционности в соке 45-48 ч.) также соответствовали стандартам. Изолят У-вируса, выделенный из бессимптомных растений осота, имеет ряд отличий, в частности, более короткий период сохранения in vitro (36-38 ч.), характеризуется отсутствием некрозов на G. Globosa, более слабой мозаикой на других индикаторах (табл.4).
Повидимому в результате спонтанных пассажей из природной популяции произошел отбор более патогенных для картофеля форм У-вируса картофеля. Его изоляты, распространенные на культуре и выделенные из растений с признаками посветления жилок, а также бессимптомных, но с положительной серологической реакцией со специфической антисывороткой, идентифицируются на индикаторах и картофеле и по основным физическим свойствам как нормальные штаммы. На представителях естественной флоры, кроме нормального, циркулирует также некротический щтамм У-вируса обычно в комплексе с S и М-вирусами. Они зарегистрированы на паслене черном с симптомами резкой морщинистости и деформации листьев. В экспериментальных условиях показана восприимчивость изучаемых сортов картофеля к природным изолятам, причем и непоражаемых в поле (табл.5). Из данных таблицы следует, что эффективность передачи, спектр признаков заражения и динамика накопления вирусов определяются штаммовыми и сортовыми особенностями.
Наиболее часто в посадках обнаруживался S-вирус картофеля и У-вирус картофеля. В 1999 г. общая зараженность по сравнению с предыдущим годом была значительно ниже, что, вероятно, связано с худшими погодными условиями для миграции тлей-переносчиков и, следовательно, распространению инфекции. Результаты двухлетних исследований показали, что все сорта были заражены афидофильными вирусами, но в разной степени. К наиболее восприимчивым отнесен сорт Москворецкий (38-49% зараженных растений) и Рядник (27 38%), а к устойчивым - сорт Весник (1-3%).
Анализ данных 1999 г. показал приблизительно такой же результат: самый восприимчивый - Москворецкий (38% зараженных растений), наименее восприимчивый - Вестник (1%).
Природные резерваторы вирусов картофеля. Сорные растения являются резерваторами многих вирусов, очагами вирусной инфекции и служат промежуточными хозяевами для насекомых переносчиков (Barrier, 1970).
В условиях совхоза-техникума "Богословское" на картофельных полях и по их обочинам обнаружено около 30 видов сорной растительности (табл.6), в том числе известные как резерваторы афидофильных вирусов. С помощью специфических сывороток к ним нами выявлена достаточно высокая степень зараженности и показано их распределение на различных видах сорняков.
Из данных таблицы видно, что из 26 видов растений 13 видов сорняков содержат S и М вирусы картофеля, причем 8 видов - сразу 2 вируса.
Преимущественное распространение имеют 14 видов сорных растений, а именно: вьюнок полевой, осот розовый, осот полевой, щавель кислый одуванчик лекарственный, подорожник средний, подорожник большой, полынь горькая, марь белая, пырей ползучий, ромашка пахучая, хвощ полевой, молочай ложный, одуванчик обыкновенный. Остальные встречаются в единичных экземплярах.
Очевидно, что важным звеном, участвующим в циркуляции вирусов и, следовательно, обуславливающим первичное инфицирование возделываемых культур особенно однолетних ,в частности, картофеля, является наличие их промежуточных хозяев -сорняков, которые становятся источниками сохранения вирусов в природе (Власов, 1967). Всего было проанализировано более 80 образцов сорных растений, произрастающих вблизи и на поле, где возде-лывался картофель. Зараженность определялась серологически с помощью специфических сывороток к афидофильным вирусам (1998-1999 гг.).
Распространение афидофильных вирусов на разных сортах картофеля и их вредоносность
Изучение роли тлей e распространении вирусов картофеля. В современной экологической ситуации наблюдается формирование новых патологических связей с растениями у вредных организмов различного уровня, включая вирусы и их векторы (Сонин и др., 1985). Наметилась тенденция расширения круга растений хозяев и у картофельных вирусов. Так, вирус У передан механически на 120 видов растений представителей Fabales, Chenopodiaceae, Amaranthaceae, Compositae и др., что демонстрирует тем самым потенциальные возможности возбудителей (Edwardson, 1985). Данный вирус был выделен из растений Ribes rubram (сорт Голландская красная) с симптомами желтой сетчатости. Изолят передавался тлями, посещающими картофель, в частности, A. fabae и A. gossypii на сеянцы R. glossularia и R. nigrum (Келдыш, 1978). В латентной форме вирус S картофеля обнаружен на Rubus idaeus, а вирус М- на Ribes nigrum. Афидофильные вирусы картофеля выявляются и на других растениях, в том числе многолетних древесных (Келдыш, Помазков, 1985). В целом возросла частота встречаемости различных вирусов на несвойственных видах растений (Horvath, 1985). На картофеле также выявляются "новые" вирусы, которые ранее не играли существенной роли и не считались приуроченными к культуре, например, вирус мозаики люцерны, вирус погремковости табака (Haraur, 1975, Александрова, 1988).
Тли-переносчики играют важную роль в эпидемиологии вирусных инфекций и относятся к основным факторам, способствующим расширению спектра поражаемых видов растений. Нами продемонстрирована возможность переноса афидофильных вирусов на картофель с различных видов сорной растительности (табл.18), встречаемых в междурядьях.
Выявлена сортовая дифференциация на инфицирование одним и тем же изолятом. Показано, что наибольшей вирулентностью обладают изоляты У-вируса с одуванчика и подорожника, тогда как патогенность М- вирус из испытанных источников практически одинакова.
Известно, что воздействие антропогенных факторов (внедрение интенсивных технологий, применение повышенных доз удобрений, пестицидов, биологически активных препаратов, интродукция новых видов и сортов, внедрение устойчивых форм и др.) влияет на адаптивные свойства вектора, характер их взаимодействия с источниками питания. Это связано с трансформацией фауны переносчиков, соотношения и численности их отдельных видов, трофических связей, равно как и спектра восприимчивых растений для переносимых возбудителей. Усиливается роль несвойственных переносчиков в распространении вирусов на сельскохозяйственных культурах (Halbert et al, 1994, Келдыш и др., 2000). Для вирусов картофеля также установлены подобные факты о связях с неспецифическими векторами, в частности, для СЛК, У, М и S- вирусов с видами тлей Aphis grossularia, Hyalopterus pruni, Acyrtosiphon coraganae, Ac.pisum, Brachycaudus helichrysi, Phorodon humuli (Fritshe et al, 1972). В условиях Индии в качестве переносчиков СЛК и У-вируса картофеля отмечены A. gossypii и A. rumicis (Haraur, 1985). При этом эффективность передачи вирусов неспецифическими векторами может быть достаточно существенной, например, в системе PVV - Н. pruni -21%, а с А. fabae - до 35% (Келдыш, Помазков, Червякова, 1999). С другой стороны, такой приуроченный к картофелю вид как Aulacortum solani играет значительную роль в распространении вирусов на других культурах (свекла, соя, табак, лук, нарцисс) (Fritche et al, 1972). Эффективное распространение вирусов тлями неспецифических видов Ishii (1972) объясняет тем, что мигранты одинаково в процессе поиска посещают как свои кормовые, так и несвойственные им растения, делая пробные уколы стилетом, которые и ориентируют переносчиков в выборе подходящих (с точки зрения их биологических требований) видов. При этом, как подчеркивает автор, и происходит заражение стилетными вирусами.
Как было установлено нами (табл.9 и 10) на картофеле (Тульская обл.) встречается 13 видов тлей. Причем образуют колонии на культуре только 3 -M.persicae, A. frangulae и A. nasmrtii. Собственно картофельные виды (Mac.solanifolii и A.solani) встречались лишь в отдельные годы и в единичных экземплярах. Другими словами, около 60% тлей в сборах составляли несвойственные для картофеля виды, являющиеся типичными компонентами энтомокомплекса других культур, в т.ч. и древесно-кустарниковых. В частности, на картофеле зарегистрированы факты питания таких видов как A.fabae, Hyperomyzus lactucae, Н. pallidus, Ac.pisum. Аналогичные случаи отмечены для Br. helichrysi, мигрирующей на картофель, но не образующей на нем колоний (Дьяконов, 1982).
Таким образом, наблюдается процесс реализации в различных направлениях адаптивных свойств векторов (и новых инфекций), обусловленный комплексом факторов паразитарной системы.
Видовой состав тлей, отлавливаемых с помощью чашек Мерике, а также отмеченные изменения трофических связей во многом предопределяются наличием сорной растительности на полях, разнообразием флоры вокруг них (в пределах досягаемости крылатых форм и особенно с наветренной стороны). Именно поэтому возникает необходимость оценки восприимчивости картофеля к несвойственным видам тлей и определения их роли в распространении вирусной инфекции (табл.19).
Проведенные исследования 5 сортов картофеля, различающихся по полевой поражаемости вирусами У, М и S, показали, что некоторые виды тлей могут питаться на картофеле в течение периода, достаточного для приобретения вирофорности и передачи стилетных вирусов.
Влияние препарата F-760 на вирофорность тлей-переносчиков..
В последние годы кокцинеллиды, или божьи коровки получили широкое применение в биологической борьбе с вредными насекомыми. Их жуки и личинки за период развития съедают от 40 до 800 особей тлей, щитовок, клещей (Кузнецов, 1987; Помазков, Заец, 1998).
Для определения прожорливости местной формы кокцинеллид в лабораторных условиях в садки с колониями тлей с листьев картофеля известной численностью подсаживали по одной личинке или жуку энтомофага в 3-х кратной повторности.
Результаты исследований показали, что в лабораторных условиях каждый жук может в течение суток съедать около 6 тлей, а личинка - около 5, что подтверждает известные расчеты по их прожорливости в естественных условиях.
Поэтому важным и перспективным направлением в использовании кокцинеллид и других энтомофагов является сохранение местных видов в природе и повышение их полезной роли.
Для получения здоровых растений в вирусологическую практику прочно вошел метод оздоровления, основанный на выделении апикальных меристем (Бутенко, 1971, Morel, Martin, 1952). Особенность строения апикальных меристем, в частности, отсутствие сосудистой системы, исключает быстрое распространение инфекции по растущим тканям и ее медленный транспорт осуществляется только через плазмодесмы (Журавлев, 1979). Однако использование современных методов (ИФА, электронная микроскопия, ПЦР) тем не менее обнаруживает наличие вирусов в меристеме различных растений, подтверждая общеизвестный факт, что эффект оздоровления обеспечивается лишь при включении в технологию дополнительных приемов для подавления или снижения активности их репродукции. Важным элементом технологии получения здоровых клонов является использование объективных методов тестирования на всех ее этапах. Противоречивость данных по этому вопросу, на которых мы остановились в литобзоре, свидетельствуют о сложности механизмов, лежащих в основе взаимоотношений патогенов в растении и необходимости их более глубокого исследования.
Основные элементы технологии и методика оздоровления картофеля достаточно полно описаны в методических указаниях по оздоровлению и ускоренному размножению сортов картофеля (Трофимец и др., 1985). С ее помощью в течение сравнительно короткого периода (около 1 года), начиная с вычленения меристем, удается получить исходный оздоровленный материал для выращивания элиты. Применяемые методики дифференцируются в зависимости от длительности (20-30 дн.) режимов термообработки клубней (35-37С при относительной влажности около 75% , размеру выделенных экс-плантов (от 0,1 до 0,5 мм), составу питательных сред, добавкам биогормонов и антивирусных ингибиторов и др. Наиболее часто используют среду Мура-сиге-Скуга с различными добавками, стимулирующими рост меристемы и дифференциацию (Acruta, 1977, Муромцев, Бутенко, Тихоненко, Прокофьев, 1990). Выявлены сортовые различия в реакции на условия выращивания. По мнению Трофимца (1980) сортовая реакция на тканевом уровне может быть обусловлена либо использованным составом питательной среды, либо условиями культивирования меристемы в целом. В конечном счете, именно эти факторы часто определяеют количество сохранившихся меристем после вычленения и время, необходимое для оздоровления конкретного сорта картофеля.
В наших экспериментах вычленялось по 30 меристем каждого сорта согласно общепринятой методике (Бутенко, 1964, Трофимец и др.,1985).
Первичный эксплант должен быть полностью освобожден от вирусов, микоплазм, бактерий и грибов, т.к дальнейшее его культивирование требует абсолютной асептики, поскольку многие посторонние микроорганизмы способны ингибировать рост клеток и вызывают их отмирание.
Манипуляции с объектом обычно проводят в ламинарбоксах, где асептика достигается подачей отфильтрованного стерильного воздуха в рабочий объем. Методы стерилизации самих эксплантов разнообразны. Выделенные фрагменты растений обычно тщательно промывают водой с мылом, затем следует процедура поверхностной обработки их в растворах дезинфицирующих средств (сулема, диацид, гипохлориды кальция, натрия или калия) с добавлением эмульгаторов, например, Твин-20 (одна капля на 100 мл раствора). Затем экспланты промываются (тремя порциями стерильной воды по 10 минут в кваждой смене). Иногда наружный слой клеток удаляется ,например, ланцетом, так как он может быть поврежден после дезинфекции. В работе используется только стерилизованные посуда, инструмент и материалы. Иногда, кроме поверхностной стерилизации, для уничтожения микробной флоры внутри тканей приходиться прибегать к антибиотикам.
Размер экспланта является одним из факторов, обеспечивающих успех микроразмножения. От этого зависит его регенерационная способность и возможность освобождения от инфекции. Оптимальная величина определяется в зависимости от сорта и свойств донора. В колеоптиле злаков, например, размеры участков, еще не сформировавших сосудистую систему, могут достигать 0,25 мм (у картофеля используют экспланты размером 0,1-0,5 мм).
