Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Механизмы регуляции мозгового кровообращения 12
1.2. Роль селена и витамина Е в организме. Фармакологическая характеристика селенсодержащих соединений и токоферола ацетата 18
1.2.1. Селен 18
1.2.2. Токоферола ацетат (витамин Е) 30
ГЛАВА.2. Материалы и методы исследования 39
2.1. Регистрация мозгового кровотока методом водородного клиренса 39
2.2. Методика оценки поведения животного в тесте «открытое поле» 40
2.3. Методы изучения противогипоксической активности 41
2.4. Методика воспроизведения постишемических церебро -васкулярных феноменов 43
2.5. Условия экспериментальных исследований 45
2.6.Статистическая обработка данных 46
ГЛАВА 3. Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на церебральную гемодинамику и системное артериальное давление условиях экспериментальной нормы 47
3.1 Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на мозговой кровоток 47
3.2 Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на системное артериальное давление 52
ГЛАВА 4. Изучение противогипоксической активности исследуемых соединении и их эффективности в условиях экспериментальных цереброваскулярных расстройств 58
4.1 Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на устойчивость животных к гипоксической гипоксии 59
4.2 Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на устойчивость животных к циркуляторной гипоксии мозга, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий 64
4.3 Изучение влияния натрия селенита, витамина Е и их совместного введения на устойчивость животных к тотальной ишемии мозга, вызванной критическими гравитационными перегрузками 67
4.4 Изучение влияния исследуемых соединений на мозговой кровоток у наркотизированных белых крыс в условиях глобальной ишемии мозга 70
4.5 Влияние натрия селенита, витамина Е и их комбинированного введения на артериальное давление и сопротивление мозговых сосудов в условиях экспериментальной патологии 77
ГЛАВА 5. Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на психоневрологический статус интактных животных и в условиях тотальной ишемии мозга 88
5.1 Изучение влияния натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на познавательную, двигательную и эмоциональную активность белых интактных крыс 88
5.2 Оценка поведения белых крыс, подвергшихся воздействию гравитационных перегрузок, в тесте «открытое поле» при профилактическом введении натрия селенита и токоферола ацетата и их комбинации 93
Заключение 99
Общие вьшоды 109
Список литературы 110
- Роль селена и витамина Е в организме. Фармакологическая характеристика селенсодержащих соединений и токоферола ацетата
- Методы изучения противогипоксической активности
- Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на системное артериальное давление
- Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на устойчивость животных к циркуляторной гипоксии мозга, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий
Введение к работе
цереброваскулярных заболеваний до сих пор остается одной из актуальных проблем медицины. Среди всех видов сосудистой патологии мозга преобладают ишемические инсульты (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001; Джибладзе Д.Н., 2002; Верещагин Н.В. и соавт., 2003; Скворцова В.И., Стаховская Л.В., 2004; Суслина З.А., Пирадова М.А., 2008). Многочисленные экспериментальные и клинические исследования показали, что одним из ведущих факторов патогенеза ишемического поражения мозга является оксидантный стресс (Федин А.И., 2001; Поварова О.В. и соавт., 2003; Зайцев В.Г.и соавт., 2003). При длительной ишемии мозга происходит истощение антиоксидантных систем и накопление продуктов перекисного окисления липидов. В связи с этим важным направлением нейропротекции становится антиоксидантная терапия. Арсенал средств, обладающих антиоксидантной активностью, невелик. Наиболее широко используемые в медицине антиоксиданты - доноры протонов, главным представителем которых является токоферола ацетат, - эффективны преимущественно против перекисного окисления липидов, но слабо защищают от окислительного повреждения белки и нуклеиновые кислоты. Кроме того, клинический эффект токоферола ацетата начинает проявляться лишь после длительного лечения (несколько недель). При быстром течении болезни такой подход может оказаться неэффективным. Наибольшие перспективы клинического применения имеют антиоксиданты, способные катализировать элиминацию активных форм кислорода без образования новых свободных радикалов и известные под названием «имитаторы ферментов» (Зайцев В.Г. и соавт., 2003). К последним относится селен, играющий ведущую роль в процессе ингибирования перекисного окисления липидов мембран клеток путем повышения активности фермента глютатионпероксидазы. В литературе
накопилось достаточно убедительных данных о высокой антиоксидантной активности натрия селенита (Кузнецов Г.П., Лебедев П.Л., 1995). По данным А.Н.Кудрина (1994) натрия селенит оказывает выраженный терапевтический эффект при инфаркте миокарда. Есть положительные результаты о комбинированном применении натрия селенита и токоферола ацетата в кардиологии (Dawn С. Schwenke, Stephen R. Behr, 1998; Швецов И.М. и соавт., 2004)). Под действием этой комбинации динамика выздоровления больных инфарктом миокарда ускоряется при уменьшенных размерах рубца за счет ограничения поражения миокарда в околоинфарктной зоне. Поскольку в современном обществе наблюдается резкое возрастание ишемических заболеваний мозга, становится все более острым вопрос о новых подходах в поддержании антиоксидантного статуса. Исходя из этого, весьма актуальным как с теоретической, так и с практической точки зрения является изучение влияния комбинированного применения натрия селенита и токоферола ацетата в малых терапевтических дозах на показатели церебральной гемодинамики. Предполагается, что использование комбинации двух антиоксидантов с разными механизмами вследствие потенцирования эффектов обеспечит защиту нейронов от действия повреждающих факторов при ишемии мозга.
Цель работы: изучить влияние натрия селенита и токоферола ацетата на показатели церебральной гемодинамики и оценить целесообразность их совместного применения в качестве нейропротекторов.
Задачи исследований:
1. Изучить влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их
комбинированного введения на мозговой кровоток и системное артериальное
давление интактных животных.
2. Исследовать антигипоксическую активность отдельных изучаемых
соединений и их комбинации на различных моделях гипоксии.
3. Провести сравнительный анализ эффективности исследуемых
соединений и их комбинированного введения в минимальных
терапевтических дозах в условиях глобальной ишемии мозга.
4. Оценить поведение белых интактных крыс в тесте «открытое поле»
при профилактическом введении натрия селенита, токоферола ацетата и их
комбинации.
5. Изучить влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их
совместного введения на двигательную активность и эмоциональные реакции
крыс в тесте «открытое поле» в условиях тотальной ишемии мозга,
вызванной критическими гравитационными перегрузками.
Научная новизна исследований
Впервые проведено исследование церебропротекторного действия натрия селенита и токоферола ацетата при их комбинированном введении на различных моделях ишемии головного мозга. Установлено, что исследуемая комбинация двух известных антиоксидантов в малых терапевтических дозах повышает устойчивость животных к гипоксической и циркуляторной гипоксиям. Доказано, что антигипоксическая активность при совместном применении натрия селенита и токоферола ацетата является значительно более выраженной, чем таковая каждого компонента в отдельности.
Впервые выявлено, что предварительное одновременное введение натрия селенита (50 мкг/кг) и токоферола ацетата (50мг/кг) до ишемии мозга уменьшает степень падения мозгового кровотока в условиях окклюзии общих сонных артерий, сглаживает проявление фазы гиперперфузии и тормозит развитие стадии невосстановления мозгового кровотока.
Впервые изучено влияние натрия селенита в сочетании с токоферола ацетатом на мозговое кровообращение у интактных животных. Установлено, что данная комбинация достоверно уменьшает мозговой кровоток в среднем на 12-15%, кратковременно повышает уровень системного артериального
давления на 7-13%.
Научно-практическая значимость работы
Полученные в экспериментальных исследованиях данные представляют теоретический и практический интерес, поскольку раскрывают неизученные эффекты натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на мозговое кровообращение и психоневрологический статус в условиях нормы и при патологических состояниях. Экспериментально доказана выраженная антигипоксическая активность комбинации натрия селенита и токоферола ацетата, а также способность исследуемых соединений уменьшать фазу гиперперфузии и тормозить развитие постишемического цереброваскулярного феномена невосстановления мозгового кровотока. Представленные результаты дают обоснование для разработки рекомендаций по рациональному совместному использованию натрия селенита и токоферола ацетата в комплексном лечении нарушений мозгового кровообращения в качестве нейропротекторов.
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты исследования нашли отражение в информационном письме «Обоснование комбинированного применения натрия селенита и токоферола ацетата в комплексном лечении нарушений мозгового кровообращения» и включены в лекционный материал для слушателей и провизоров - интернов факультета последипломного образования, в научно-исследовательскую работу и учебный процесс кафедр фармакологии и биологии, физиологии и патологии Пятигорской ГФА.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Комбинированное введение исследуемых соединений (натрия селенита 50мкг/кг и токоферола ацетата 50 мг/кг) достоверно уменьшает мозговой кровоток у интактных животных в среднем на 12-15%.
Совместное применение малых доз натрия селенита и токоферола ацетата вызывает умеренное повышение артериального давления с 20 по 40 мин наблюдения в среднем на 7-13% с последующей тенденцией к восстановлению.
Натрия селенит, токоферола ацетат и их комбинация повышают устойчивость животных к гипоксической и циркуляторной гипоксиям. Антигипоксическая активность при совместном применении исследуемых антиоксидантов является значительно более выраженной, чем таковая каждого компонента в отдельности
4. Предварительное одновременное введение натрия селенита и
токоферола ацетата до ишемии мозга уменьшает степень падения мозгового
кровотока в условиях окклюзии общих сонных артерий, сглаживает
проявление фазы гиперперфузии и тормозит развитие стадии
невосстановления мозгового кровотока.
5. В условиях острой сосудистой патологии мозга натрия селенит
(50мкг/кг) и токоферола ацетат (50мг/кг) повышают двигательную и
ориентировочно-исследовательскую активность животных.
Комбинированное введение натрия селенита (50мкг/кг) и токоферола ацетата
(50мг/кг) снижают смертность животных в 2 раза по сравнению с контролем,
уменьшают уровень эмоционального напряжения.
Апробация работы
Материалы исследования доложены на 2-nd Russian - Chinese international scientific conference on pharmacology Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice 2006; Perm Russia, на 62-й и 64-й межрегиональных конференцияхпо фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2007, 2009г.г.).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 5 в центральной печати.
Объём и структура диссертации
Материал диссертации изложен на 122 страницах машинописного текста, иллюстрирован 26 таблицами и 14 рисунками. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, трех глав собственных результатов исследований, заключения, вьюодов и списка литературы. Список литературы содержит 127 источников, из них отечественных 74.
Роль селена и витамина Е в организме. Фармакологическая характеристика селенсодержащих соединений и токоферола ацетата
Селен - элемент 4 группы главной подгруппы периодической системы Менделеева, во многом повторяющий химические свойства серы. Селен способен замещать серу в серосодержащих аминокислотах с образованием селеноаминокислот, которые активнее в биологическом отношении, и являются более сильными протекторами ионизирующей радиации, чем серосодерлсащие аминокислоты. Кроме того, селеноаминокислоты способствуют уменьшению количества свободных радикалов, нарушающих активность и свойства ферментов и аминокислот [47,48,49]. Селен является эссенциальным микроэлементом для человека и животных. Это один из биологически важных микроэлементов, присутствующих в организме человека и участвующих в метаболических, биофизических и энергетических реакциях организма, обеспечивающих жизнеспособность и функции клеток, тканей, органов и организма в целом. Особенно важна роль селена для функциональной активности таких органов как сердце, печень, почки и др. Селен поступает в организм человека из почвы с продуктами растениеводства и животноводства, что определяет зависимость уровня обеспеченности микроэлементом от геохимических условий проживания [50].У растений важнейшей химической формой селена является селенометионин. Большая часть селена в животных тканях присутствует в виде селенометионина и селеноцистеина[51]. Биохимические функции селена определяют селенсодержащие белки (СБ). Недостаток микроэлемента может приводить к нарушению клеточной целостности, изменению метаболизма тиреоидных гормонов, активности биотрансформирующих ферментов, усилению токсического действия тяжёлых металлов, повышению концентрации глютатиопа в плазме [52]. Характерной особенностью СБ млекопитающих является то, что опи, по-видимому, связаны с окислительно-восстановительными процессами, проходящими внутри клетки и вне ее [53, 54, 55, 56]. Данные изотопного анализа и результаты теоретических исследований позволяют предполагать, что в организме млекопитающих может насчитываться от 20 до 100 СБ [57]. Повышение заболеваемости раком и сердечно-сосудистыми заболеваниями при дефиците селена, бесплодие у мужчин и увеличение риска смерти от СПИДа могут быть связаны со снижением биосинтеза СБ и нарушением соответствующих биохимических процессов [48].
Согласно современным представлениям, общей регулируемой формой селена в организме является селенид, который образуется из селеноцистеина под действием Sec-p-лиазы [58, 59]. Предшественником селеноцистеина может являться селенометионин. Неорганический селен (селенит) реагирует с восстановленной формой глутатиона (GSH) также с образованием селенида [60]. Последний частично включается в биосинтез СБ и тРНК в результате реакции с селенфосфатсинтетазой (SPS), частично экскретируется из организма преимущественно в виде метилированных форм с мочой и дыханием. Фосфорилирование селенида осуществляется с участием АТФ Регулирование реакции фосфорилирования селенида определяет возможность депонировать селен - явление, наблюдаемое при дефиците микроэлемента. Ингибирование реакции приводит к увеличению концентрации селенида и как следствие, к увеличению экскреции селена. Эта ситуация наблюдается, когда селен доступен в количествах больших, чем необходимо для синтеза селенопротеинов [60, 61]. Всасывание селена происходит в тонкой кишке, среди сегментов которой несколько большую скорость транспорта обеспечивает двенадцатиперстная кишка, откуда низкомолекулярные формы селена способны перейти в кровь уже через 1 минуту после поступления в кишку. Абсорбция натрия селенита происходит отлично от органических соединений. Экспериментальные данные указывают на то, что селен вступает в неферментативную реакцию с GSH с образованием селенидиглутатиона [62, 63], который может служить субстратом для у-глутамилтрансферазы и таким образом переносится через мембраны клеток. При дефиците селена уровень СБ снижен, однако включение микроэлемента осуществляется в первую очередь в наиболее важные белки и ткани - репродуктивные и эндокринные органы, мозг. Скелетные мышцы и сердце снабжаются селеном медленнее [59] Гомеостатическое регулирование уровня селена в различных органах и тканях приводит к тому, что при введении высоких доз селена уровень СБ превышает достигаемый при адекватном потреблении. У человека активность pGPX достигает максимума при потреблении всего 50 мкг селена в сутки [64]. После введения радиоактивного селена значительная его часть связывается белками плазмы крови. При этом оказалось, что эритроцитам в данном процессе принадлежит ведущая роль, так как Se в виде селенита чрезвычайно быстро, в пределах нескольких секунд проникает через их мембраны. Уже через 1-2 минуты в эритроцитах концентрируется 50-70% всего селена крови. На модели in vitro показана временная зависимость перераспределения селена между элементами крови. Есть основания полагать, что к 4 минуте концентрация микроэлемента достигает максимума. Затем в течение 15-20 мин почти весь селен выходит из эритроцитов, связываясь сначала с альбуминами, а затем с глобулинами плазмы крови [48, 64]. В эритроцитах человека и ряда животных присутствует селеновый «насос».
Под влиянием системы глутатион - глутатионпероксидаза селенит подвергается превращению с образованием комплекса селена с глутатионом. При последущем восстановлении селен катализирует транспорт электронов к кислороду. Выйдя из эритроцита, возможно, в составе селеноглутатионового комплекса, этот микроэлемент фиксируется в белках плазмы. Кроме того, сниженная активность глутатионпероксидазы в эритроцитах, по-видимому, способствует образованию окислительных форм белков, например гемоглобина (HbSSG). Дефицит селена может приводить к гемолизу эритроцитов [64]. У соединений селена выявлена различная биодоступность. Установлено, что селен, содержащийся в большинстве исследованных соединений обладает меньшей биодоступностью по сравнению с натрия селенитом [65]. Селен выводится из организма в основном с мочой, фекалиями и выдыхаемым воздухом (чесночный запах). Среди путей выведения доминирующим является первый, а последний характерен при остром и хроническом отравлении. При токсикозах альтернативным путём выведения селена можно считать его накопление в волосах и ногтях [60]. Обычно неорганические соли легче выводятся из организма, что делает их более безопасными при потреблении, чем органические соединения. Есть данные, свидетельствующие о низком уровне выведения органических форм селена и, следовательно, о наибольшей опасности отравления при потреблении аномально высоких доз [47, 65]. Дефицит селена вызывает ряд эндемических заболеваний у человека и
Методы изучения противогипоксической активности
В патогенезе острых нарушений мозгового кровообращения ведущее значение припадлежит различным видам гипоксии [119, 125, 126]. Гипоксии возникают как в условиях дефицита кислорода во внешней среде, так и в результате самых разных патологических состояний, связанных с нарушением функции дыхательной, сердечпо-сосудистой систем, а также трапспортиой функции крови. Во всех случаях в конечном счете происходит снижение доставки кислорода к тканям до уровня, недостаточного для поддержания функции, метаболизма и структуры клетки. Согласно современным представлениям, гипоксические состояния возникают практически при любой патологии. Именно это определяет постояшю нарастающий интерес к проблеме защиты оргапизма от гипоксии с помощью антигипоксантов, которые используются в экстремальных состояниях и ситуациях, связанных с острой кислородной иедостаточиостыо. В условиях цереброваскулярной недостаточности может наблюдаться иной тип реакций сосудов мозга на фармакологические вещества, чем у интактных животных. В связи с этим изучение влияния исследуемой комбинации натрия селенита и токоферола ацетата на устойчивость животных к кислородному голоданию в наших исследованиях проводилось на различных моделях гипоксии. Нормобарическая гипоксия с гиперкагшией (т.п. «баночная гипоксия») является наиболее простым методом оценки антигипоксической активности. Животных одинакового веса (разброс не более 2 г на группу) помещали в герметически закрытые (крышки смазывали вазелином) оапки 750 см . По мерс потребления кислорода животными, его концентрация в сосуде снижается, что приводит к их гибели.
Во всех случаях регистрировали продолжительность жизни животпых, по которой судили об эффективности исследуемых веществ. [119, 124, 125]. Циркуляторпую гипоксию воспроизводили па белых крысах билатеральной окклюзией общих сонных артерий с использованием наркоза (хлоралгидрат, впутрибрюшишю, 300 мг/кг массы тела). Крыс фиксировали на станке, препарировали общие сонные артерии, накладывали лигатуры, наблюдали в течение 3 суток с регистрацией числа выживших аіітигипоксичсского действия исследуемых соединений была выживаемость Часть опытов проводили на пспаркотизироваппых животных. гравитационными перегрузками в кранио-каудальном положении животных. Известно, что продольные гравитационные перегрузки, создаваемые центрифугой, вызывают нарушения кровоснабжения головного мозга, степень и характер которых зависит от величины и вектора ускорения. Проведенные исследования показали, что при моделировании гравитационных перегрузок в кршшокаудальном направлении происходит снижение артериального давлеїшя в сонной артерии до 0 мм рт. ст., т.е. у животных имеет место тотальная ишемия мозга. Бодрствующие крысы помещались в отдельные продольные ячейки, прикрепленные к концам рычагов центрифуги. Объем ячеек соответствовал размеру животных и не давал возможности самопроизвольно отклоняться от заданного вектора ускорения. Животные подвергались перегрузкам величиной 18 g в течение 5 минут (градиент нарастаїшя и спада нагрузки Центрифуга представляет собой мотор с приводом установленный на станине. К приводу сверху крепится коромысло длиной 2,0 м, по краям которого расположены камеры для животных. Также имеется пульт управления, позволяющий контролировать число оборотов, градиент нарастания и спада перегрузок [127]. Критерием нейропротскторпого действия исследованных соединений и их комбинации являлось увеличение выживаемости крыс опытной группы относительно контрольных животных. цергброваекуляриых феноменов
Известно, что в постишсмичсском периоде возникают характерные постишсмичсскис цсрсброваскулярныс феномены: избыточной перфузии и гипоперфузии, о динамике развития которых судят по изменению мозгового кровотока [6, 7]. Возникновение постишемической гиперемии (" роскошной перфузии ") связано не только с обильным поступлением крови через коллатерали или реканализациеи закупоренной артерии, но и с высвобождением из ишемизированной ткани вазоактивных и провоспалитсльных метаболитов, снижением вязкости крови, изменением нейрогенных вазодилататорных механизмов. Наблюдающийся при этом избыток кровотока не соответствует метаболическим потребностям ткани мозга, что сопровождается уменьшением фракции экстрагированного кислорода. Вслед за стадией гиперемии происходит снижение мозгового кровотока ниже доишемического уровня (постишемическая гипоперфузия), что также является результатом отсроченных метаболических изменений в ишемизированной ткани, вызванных активацией микроглии и синтезом большого количества провоспалительных факторов, ведущих к тяжелым изменениям микроциркуляции, микроваскулярной обструкции. Данный феномен получил название "невосстановленный кровоток" (no-reflow). Основными механизмами его формирования являются повышение вязкости и внутрисосудистой свертываемости крови, развитие микроваскулярных окклюзии за счет сдавления капилляров мозга расположенными вокруг отечными астроцитами, повышение внутричерепного давления, формирование отечности эндотелия сосудистого русла и образование эпдотелиальных микроворсин, а также постишемическая гипотензия. Чем длительнее дореперфузионный период, тем меньше вероятность быстрой нормализации микроциркуляции в ишемизированной зоне и тем выше риск дополнительного реперфузионного повреждения вещества мозга: оксидантного, обусловленного включением кислорода в процессы свободнорадикального окисления, и осмотического, вызванного нарастанием
Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинированного введения на системное артериальное давление
Известно, что снижение уровня артериального давления, а следовательно, и перфузионнного давления у больных с ишсмическим инсультом, вызывает дальнейшее ухудшение ишемизированных областей мозга. Поэтому нейропротекторы не должны обладать выраженным гипотензивным эффектом. В связи с этим следующим этапом нашей работы было изучение влияния исследуемых веществ на системное артериальное давление у экспериментальных животных. Эксперименты проведены на 18 нормотензивных крысах обоего пола, массой 220 - 250г. Исследуемые соединения вводили внутрибрюшинно, однократно: натрия селенит в дозе 50 мкг/кг, токоферола ацетат - 50 мг/кг, комбинацию веществ вводили в тех же дозах. Внутрибрюшинное введение натрия селенита или токоферола ацетата не вызывало достоверного изменения АД по сравнению с исходным уровнем у животных в течение всего срока наблюдения. Однако необходимо отметить, что при введении натрия селенита отмечалась некоторая тенденция к снижению АД в среднем на 6%, а при введении токоферола ацетата -недостоверное увеличение АД в среднем на 5%. Комбинированное введение натрия селенита и токоферола ацетата в дозах 50мкг/кг и 50 мг/кг, соответственно, вызывало умеренно выраженную гипертензивную реакцию: артериальное давление достоверно повышалось на 20, 35 и 40 мин эксперимента на 7-13%, а к концу наблюдения имело тенденцию к восстановлению. о Примечание: - достоверно относительно исходных данных, р 0,05. Рисунок 3.2- Динамика изменения артериального давления (АД) у белых крыс при профилактическом введении натрия селенита (50 мкг/кг), токоферола ацетата (50 мг/кг) и их комбинации
Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что исследуемые антиоксиданты по-разному влияют на ооъемную скорость мозгового кровотока: натрия селенит значительно уменьшает, токоферола ацетат практически не влияет на этот показатель. Комбинация исследуемых соединений вызывает умеренную констрикторную реакцию со стороны мозговых сосудов и незначительное повышение АД. На фоне отдельного введения натрия селенита и токоферола ацетата не наблюдалось достоверного изменения уровня артериального давления. . ххаірла wjivufii о ДО С v MJM./KI УЬиЬіЬаСі v vvxitiv iviO-ді ч/Шил COvj M - Bs приводя к достоверному снижению уровня МК у наркотизированных ІЯ.П1ЛЛ1П.01Л КрЫЧ/ о vpvДIlvГvl па AUU/O, 2. іокоферола ацетат в дозе : и МГ/КГ существенно нс изменяет уровень объемной скорости мозгового кровотока. 3. Комбинированное введение исследуемых соединений достоверно уменьшает мозговой кровоток в среднем на 12-15%. 4-. Натрия селенит (50 мкг/кг) и ток оферола ацетат (50 мг/кг) не оказывают существенного влияния на уровень артериального давления у интактных животных при их самостоятельном введении. 5. При совместном введении малых доз натрия селенита (50мкг/кг) и токоферола ацетата (50мг/кг) отмечается умеренное повышение артериального давления с 20 по 40 мин наблюдения в среднем на 7-13% с последующей тенденцией к восстановлению. ГЛАВА 4 ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОГИПОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИССЛЕДУЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ИХ ЭФФЕКТИВНОСТИ В УСЛОВИЯХ ЗКСПЕРИГУІЕНТАЛЬНЬІХ ЦЕРЕБРОВАСКУЛИРНЫХ РАССТРОЙСТВ При длительной ишемии мозга происходит истощение антиоксидантных систем и накопление продуктов перекисного окисления липидов. В патогенезе органических повреждений головного мозга ведущее значение принадлежит циркуляторным расстройствам, при этом вследствие уменьшения кровотока ограничивается поступление кислорода в ткань мозга. Происходит нарушение дыхательной цепи митохондрий с повышением уровня восстановленности её компонентов. При этом резко возрастает поток свободных электронов, прюодящий к образованию АФК (активных форм кислорода). В дальнейшем при углублении ишемии нарушаются все жизненно важные функции клетки, усиливаются процессы свободнорадикального окисления, развивается состояние «оксидантного стресса» [41,42,43]. Известно, что антиоксиданты существенно ослабляют нарушения, связанные с гипоксией и ишемией, особенно в постгипоксическом (постишемическом) периоде. Профилактическая антиоксидантная защита является частью стратегии по коррекции энергетического аппарата при гипоксии. Разработка тактики применения антиоксидантов при различных формах кислороддефицитных состояний с учетом стадии процесса и определение их роли в антигипоксической защите организма чрезвычайно актуальна. В связи с этим представляло интерес изучить влияние исследуемых соединений и их комбинации на выживаемость животных в условиях нормобарической гипоксии с гиперкапнией, а также на устойчивость белых крыс к циркуляторной гипоксии, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий и критическими
Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на устойчивость животных к циркуляторной гипоксии мозга, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий
Циркуляторную гипоксию воспроизводили на 32 белых беспородных крысах, обоего пола, массой 220 - 250 г. путем двусторонней перевязки обеих сонных артерий. Критерием эффективности антигипоксического действия была выживаемость животных в течение 72 часов после воздействия. Исследуемые вещества и их комбинацию вводили внутрибрюшинно в течение 14 дней и за 30 минут до начала эксперимента в дозах 50 мкг/кг натрия селенита и 50 мг/кг токоферола ацетата. В контрольных опытах внутрибрюшинно вводили эквивалентный объем физиологического раствора. Результаты контрольной серии опытов показали, что большинство животных погибло в течение первых суток. Через 72 часа после операции в контрольной группе число выживших животных составило 25%. При длительном профилактическом введении и за 30 мин до ишемии натрия селенита выживаемость животных на 2-3 сутки составила 62,5%. В опытах с предварительным введением токоферола ацетата через 72 часа наблюдения выжило 4 крысы из 8, и выживаемость составила 50%. Повторное многократное введение двух антиоксидантов одновременно значительно повышало выживаемость животных, через 72 часа после перевязки сонных артерий число выживших животных составило 75%. Результаты экспериментов представлены в таблице 4.3. и на рисунке 4.3. Таким образом, полученные результаты свидетельствую! о том, что натрия селенит и токоферола ацетат обладают антигипоксической активностью, увеличивают процент выживаемости животных при циркуляторной гипоксии, особенно эффективным оказалось многократное профилактическое введение комбинации исследуемых веществ. животных к тотальной ишемии мозга, вызванной критическими гравитационными перегрузками Учитывая антигипоксическую активность исследуемых соединений при циркуляторной гипоксии мозга, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий представляло интерес изучить их действие на устойчивость организма белых крыс к критическим гравитационным перегрузкам. Известно, что продольные гравитационные перегрузки, создаваемые центрифугой, вызывают нарушения кровоснабжения головного мозга, протекающее по типу ишемической гипоксии.
При кранио-каудальном векторе ускорения (положительные радиальные ускорения) происходит перемещение крови в каудальном направлении, в результате чего давление в сосудах мозга снижается и возникает его ишемия. Степень проявления цереброваскулярных нарушений зависит от величины и продолжительности перегрузки, а также от градиента её нарастания и спада, что позволяет их дозировать [127]. Исследования проведены на белых крысах одного возраста и примерно одной массы 220-250г. Белые крысы являются наиболее пригодным объектом для таких исследований, поскольку у них отмечается довольно чёткая зависимость между выживаемостью и величиной перегрузок. Животных помещали в отдельные продольные ячейки, объём ячеек соответствовал размеру животных и не давал возможности самопроизвольно отклоняться от заданного вектора ускорения. В эксперименте было использовано 48 белых крыс, по 12 в контроле и в опытах с профилактическим введением натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации. Оба вещества и их комбинация вводились внутрибрюшинно в дозе натрия селенит 50 мкг/кг, токоферола ацетат 50 мг/кг в течение 14 дней профилактически и в день эксперимента за 30 минут до перегрузок. Изучение устойчивости животных к гравитационным перегрузкам проводили при кранио-каудальном векторе ускорения. Животные подвергались перегрузкам величиной 18 g в течение 5 минут. Результаты проведённых исследований статистически обработаны и приведены в таблице н-.ч-. и на рисунке t.4. Как следует из данных, представленных в таблице 4.4, в контрольной группе погибли 7 крыс из 12 (выживаемость 41,7%). При длительном профилактическом введении натрия селенита из 12 крыс погибло 4, выживаемость составила 66,7 %. Токоферола ацетат проявлял менее выраженный защитный эффект в сравнении с таковым у натрия селенита, из 12 выжило 6 крыс, выживаемость составила 50%, что выше, чем в контроле. При комбинированном профилактическом введении натрия селенита и витамина Е выжили все 12 крыс. Примечание: -достоверно относительно физ.раствора, (р 0,05) Рисунок 4.4 - Влияние натрия селенита, токоферола ацетата и их комбинации на устойчивость белых крыс к гравитационным нереї руікам в кранио-каудальном направлении Таким ооразом, в результате проведённых исследований оыло установлено, что натрия селенит (50мкг/кг) и токоферола ацетат (50мг/кг) при их самостоятельном введении значительно увеличивают устойчивость животных к гравитационным перегрузкам в кранио-каудальном направлении. Особенно эффективным было комбинированное введение исследуемых соединений в тех же дозах. По литературным данным повышение выносливости вызывают препараты, оказывающие вазопрессорный эффект.
Как показали наши исследования на ннтактных животных, натрия селенит и токоферола ацетат при совместном введении повышают уровень АД и, по-видимому, способны удерживать системное артериальное давление на исходном уровне при действии на организм гипергравитаций. Для уточнения механизма антигйпоксического действия исследуемых веществ изучено их влияние на кровоснаиженне головного мозга в постишемическом периоде. 4. ихзучение влияния исследуемых соединений на мозговой кровоток у наркотизированных белых крыс в условиях глобальной ишемии мозга Эксперименты выполнены на 32 беспородных крысах, наркотизированных хлоралгидратом (300 мг/кг, внутрибрюшинно), разделенных на 4 группы по 8 животных в каждой. Контрольной группе вводили физиологический раствор. Крысам второй и третьей группы внутрибрюшинно вводили натрия селенит и токоферола ацетат в дозах 50 мкг/кг и 50 мг/кг, соответственно. Четвертая группа получала натрия селенит в дозе 50 мкг/кг и одновременно масляный раствор альфа-токоферола (внутрибрюшинно) в дозе 50 мг/кг. Все исследуемые соединения и их комбинация вводились за 30 мин до ишемии. Объемную скорость мозгового кровотока регистрировали методом водородного клиренса с помощью вживленного платинового электрода,
![Влияние фитопрепаратов на системную гемодинамику, тонус резистивных и емкостных сосудов у больных с артериальной гипертонией I и II степени [Электронный ресурс]](/i/i/4715/186064.png "Влияние фитопрепаратов на системную гемодинамику, тонус резистивных и емкостных сосудов у больных с артериальной гипертонией I и II степени [Электронный ресурс] Данилов Василий Александрович")
![Влияние комбинированного применения циклофосфана и эмоксипина на степень эндотоксикоза и рост холангиоцеллюлярного рака РС-1 и меланомы В-16 в эксперименте [Электронный ресурс]](/i/i/4590/210620.png "Влияние комбинированного применения циклофосфана и эмоксипина на степень эндотоксикоза и рост холангиоцеллюлярного рака РС-1 и меланомы В-16 в эксперименте [Электронный ресурс] Скопин Павел Игоревич")
