Введение к работе
Актуальность темы. К настоящему времени накоплен обширный материал, посвященный изучению репаративной регенерации легких ( Романова Л. К., 1987, Есипова И. К. , 1976, Перельман М. И. , Бойков А. К., Корнилова 3. X, 1989, Fisher J. М. , Simnett J. D. , 1973). Показано, что несмотря на значительные компенсаторно - приспособительные возможности легких, их регенерация характеризуется лишь частичным восстановлением архитектоники поврежденного органа с формированием в области дефекта рубцовой ткани. Поиск способов регуляции восстановительных процессов в легочной ткани позволил установить, что наиболее перспективным является использование в терапевтических целях регуляторных пептидов, принимающих участие в осуществлении физиологических процессов организма (Ашмарин И. П., Обухова М.Ф. , 1986, Замятнин А. А. , 1989, Иванов В. Т., 1981, Полонский Е М., Булгаков С. А. , Титов М. И. , 1981, . Rogers D., Barnes P. D., 1989. Корнилова 3. X., 1993).
О целью коррекции процессов важивления ран легких был изучен ряд пептидов (инсулин, даларгин, карно8ин, фактор роста нервов), среди которых наиболее эффективным окаэался дипептид карнозин (Корнилова 3. X , Перельман М. И., Пауков ЕС, 1989, Перельман М. И. , Корнилова 3. X , 1991). Местное введение карноэина в область раны легкого в момент повреждения приводило к ускорению процессов заживления и формированию минимальных Рубцовых изменений, благодаря ранней активации пролиферации фибробластов. Этот факт позволил предположить наличие ростостимулирующих свойств у дипептида карно-зина, которые требовали доказательств.
- г -
До настоящего времени неизвестны также внутриклеточные механизмы действия карнозина на процессы активации пролиферации фиб-робластов, не отработаны оптимальные довы пептида и сроки его введения. Изучение этой проблемы представляется особенно важным, так как открывает пути целенаправленной регуляции функциональной активности фибробластов, определяющих направление и исходы восстановительных процессов в поврежденных тканях.
Цель работы. Изучение ростостимулирующих свойств дипептид; карнозина и отдельных аспектов внутриклеточного механизма его действия і n vi tro.
Задачи исследования.
-
Изучить влияние карнозина на митотическую активность куль тивируемых лёгочных эмбриональных фибробластов человека (ФЛЭЧ)..
-
Определить влияние карноэина на синтез ДНК в растущих покоящихся клетках культуры ФЛЭЧ.
-
Изучить влияние различных концентраций карнозина на состо яние внутриклеточного рН (рНк) культивируемых'фибробластов и выя вить концентрацию препарата и сроки его введения в клетки культур ФЛЭЧ, при которых изменения рНк максимальны.
-
Установить влияние степени химической очистки карнозина t состояние рНк фибробластов.
Научная новизна. Впервые на модели культуры лёгочных эмбрис нальных фибробластов человека.доказаны ростостимулирующие свойсті карнозина Покаэано, что череэ 24 часа после введения карнозина среду обитания культивируемых фибробластов их митотическая актиі
- з -ность возрастает в среднем в полтора раза. Отмечено, что под действием карновина в растущей культуре фибробластов происходит увеличение синтеза ДНК.
Впервые показано, что карнозин вызывает увеличение рНк, типичное для действия других митогенных факторов и приводит к активации пролиферативных процессов в фибробластах.
Выявлено, что препарат в концентрации 10 мкг/мл вызывает максимальное увеличение рНк фибробластов. Оптимальными сроками воздействия карнозина на фибробласты следует считать 1 и 7 сутки культивирования клеток.
Показано, что карнозин, содержащий примеси тяжёлых металлов, вызывает неспецифическую реакцию культивируемых фибробластов в виде снижения рНк, которая нарастает по мере увеличения количества примесей в препарате.
Теоретическая значимость. На клеточном уровне доказана способность карнозина выступать в качестве фактора роста, что дополняет имеющиеся представления о его спектре действия и является обоснованием для применения карнозина в качестве средства, улучшающего заживление ран.
Показано, что увеличение внутриклеточного рН культивируемых фибробластов является одним из ввеньев механизма активирующего действия карнозина на пролиферацию этих клеток. Представление о процессах, происходящих в клетках при введении карнозина, создает теоретическую основу для научно обоснованного применения препарата.
Практическая ценность работы. Показано, что метод прижизненной рН-метрии индивидуальных клеток является быстрым и удобным
- 4 -способом определения оптимальной концентрации пептида на уровне клетки. Этот метод может найти применение в клинической фармакологии при оценке эффективных до8 препарата. Наряду с этим метод может использоваться как экспресс-тест для оценки качества исследуемого пептида, в частности, наличия в нём примесей металлов.
Апробация. Основные положения диссертации доложены на Всесою-ном совещании " Биоантиоксидант'Ч Москва, 1992), а также на научных конференциях кафедры фтиеиопульмонологии ММА им. И. М. Сеченова (1992, 1993).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 работы.
Объём и структура работы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста. Она состоит иэ введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа иллюстрирована 5 таблицами и 17 рисунками. Библиография содержит 102 источника на русском языке и 135 источников на иностранных явыках.
