Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 13
«Молекулярные механизмы действия женских половых стероидов и их антагонистов в норме и при патологии"
2. Материалы и методы 46
2.1 Используемые реактивы 46
2.2 Объекты исследования 50
2.3 Получение клеточных фракций (плазматических мембран и цитозоля) из тканей матки экспериментальных животных и биоптатов миометрия и эндометрия человека
2.4 Анализ чистоты получаемой фракции плазматических мембран
2.5 Определение активности Na+-K+-AT Da3bi 53
2.6 Определение неорганического фосфата по методу лоури в модификации В.П.Скулачева (1962)
2.7 Определение специфического связывания 3Н-эстрадиола в плазматических мембранах
2.8 Определение специфического связывания 3Н-эстрадиола в цитозольной фракции
2.9 Определение специфического связывания 3Н-прогестерона в цитозольной фракции
2.10 Оценка относительной связывающей активности соединений с рецепторами прогестерона в цитозоле
2.11 Оценка относительной связывающей активности соединений с глюкокортикоидными рецепторами цитозоля
2.12 Оценка относительной связывающей активности соединений с рецепторами андрогенов в цитозоле
2.13 Жидкостная сцинтилляционная радиометрия 58
2.14 Изучение фракционного состава липидов плазматических мембран
2.15 Тест на «несохранение беременности» 60
2.16 Регистрация сократительной способности миометрия 61
2.17 Изучение влияния пентаранов на чувствительность миометрия к окситоцину
2.18 Высокомеченные тритием 5а- и 50- [4,5-3Н]прегнан-3,20- дионы и способ их определения в плазме крови.
2.19 Определение утеротропной активности прегна-Б -пентаранов. 73
2.20 Изучение рецепторотропной активности прегна-D - пентаранов.
2.21 Определение уровня циклических нуклеотидов в тканях матки
2.22 Определение концентрации половых стероидов в плазме крови
2.23 Исследование активности фосфолипаз А2 и С. 74
2.24 Антиокислительная активность соединений 75
2.25 Антифертильная активность соединений 76
2.26 Токсичность препаратов. 76
2.27 Овриэктомия крыс 76
2.28 Статистическая обработка результатов. 76
3 Результаты исследования. 76
3.1 Молекулярно-фармакологический анализ активности гормональных препаратов. 3.1.1. Эстрогены.
Специфическое связывание с плазматическими мембранами клетки-мишени
Влияние 17р-эстрадиола, эстрона и эстриола на липидный состав плазматических мембран клеток миометрия крыс.
Рецепторотропное действие 17р-эстрадиола .
Влияние эстрогенов на концентрацию цАМФ в миометрии крыс
Аналоги 8-изоэстрогенов 81
Относительная конкурентная способность аналогов 8- 82
изоэстрогенов.
Эстрогенная активность аналогов метилового эфира изоэстрона и 8-изоместранола
Влияние аналогов 8-изоместранола и метилового эфира изоэстрона на содержание липидов в плазме крови.
Влияние метилового эфира 6-окса-В-гомо-8-изоэстрона на липидный состав плазматических мембран миометрия крыс
Рецепторотропная активность аналогов метилового эфира изоэстрона.
Анализ антиокислительной активности аналогов 8- 90
Относительная конкурентная способность нистранола к рецепторам эстрадиола
Антифертильная и эстрогенная активность нистранола. 93
Рецепторотропное действие нистранола. 94
Нитрогест. 95
Токсичность нитрогеста 97
3.1.2 Антиэстрогены - селективные модуляторы рецепторов эстрадиола тамоксифен. 99
Относительная связывающая способность тамоксифена с плазмомембранными рецепторами эстрадиола эндометрия человека.
Относительная связывающая способность тамоксифена с цитозольными рецепторами эстрадиола миометрия человека.
Рецепторотропное действие тамоксифена. 101
Трифенилэтилены. 102
Относительная конкурентная способность производных 103
трифенилэтиленов.
Относительная конкурентная способность производных 104
трифенилэтиленов с рецепторами эстрадиола нормального и
патологически измененного миометрия.
Изучение токсичности производных трифенилэтиленов. 105
Относительная конкурентная способность производных 109
трифенилэтиленов к рецепторам эстрадиола эндометрия при гиперплазиях.
3.1.3 Гестагены. ПО
Прогестерон 111
Цитозольные и плазмомембранные рецепторы прогестерона миометрия овариэктомированных крыс
Влияние женских половых гормонов на параметры рецепции прогестерона в миометрии крыс
Влияние прогестерона на липидный состав плазматических мембран миометрия овариэктомированных крыс
группа прегна-d -nehtapahob 115
Утеротропное действие nperHa-D -пентаранов. 116
Рецепторотропное действие прегна-С-пентаранов. 116
Относительная связывающая активность прегна-D - 118
пентаранов с рецепторами прогестерона
Производные прегна-D -пентаранов 123
Антигестагенная активность. 123
Рецепторотропное действие. 124
Относительная связывающая активность производных прегна- D -пентаранов с цитозольными рецепторами прогестерона миометрия крыс.
Исследование относительной связывающей активности прегна-Б -пентаранов с глюкокортикоидными рецепторами в цитозольной фракции миометрия крыс.
Исследование относительной связывающей активности прегна-D-пентаранов с андрогенными рецепторами в цитозоле миометрия крыс.
Влияние препаратов на спонтанную сократительную активность миометрия крыс.
Влияние прегна-D -пентаранов на чувствительность миометрия беременных крыс к окситоцину. Влияние препаратов на спонтанную сократительную активность миометрия человека.
Влияние препаратов на содержание цГМФ в цитозоле миометрия беременных крыс
Влияние прегна-D -пентаранов на перекисное окисление липидов.
Исследование относительной связывающей активности производных прегна-D -пентаранов с рецепторами
прогестерона эндометрия человека при гиперплазиях.
4 Обсуждение результатов 196
5 Выводы 249
6 Список литературы 253
7 Список сокращений
- Получение клеточных фракций (плазматических мембран и цитозоля) из тканей матки экспериментальных животных и биоптатов миометрия и эндометрия человека
- Антиокислительная активность соединений
- Рецепторотропное действие 17р-эстрадиола
- Относительная конкурентная способность производных
Получение клеточных фракций (плазматических мембран и цитозоля) из тканей матки экспериментальных животных и биоптатов миометрия и эндометрия человека
Половым стероидам присущи многие физиологические функции с преимущественно геномными аспектами действия [91]. Согласно классической теории действия стероидов гормоны связываются со специфическими рецепторами, которые являются внутриклеточными транскрипционными факторами и вызывают положительный или отрицательный эффект на экспрессию генов-мишеней [58]. Дополнительно к геномному эффекту стероиды проявляют различные внегеномные свойства [87]. Впервые быстрый эффект стероидов был обнаружен в 1942 году Гансом Селье, который описал проявление незамедлительного анестетического действия прогестерона при его интраперитониальной аппликации крысам [162]. Началом новой истории по изучению внегеномных эффектов половых стероидов стали работы Pietras и Szego, которые засвидетельствовали быстрый эффект эстрадиола на вход кальция в клетки эндометрия [146]. Несмотря на столь давние сообщения, пристальное внимание исследователей негеномные эффекты стероидов привлекли лишь 10-15 лет назад, когда стало ясно, что далеко не весь спектр биологической активности укладывается в рамки классической теории.
В последнее время все чаще стали появляться публикации, доказывающие, что начальным этапом реализации гормонального сигнала в биологический ответ клетки является специфическое "узнавание" и связывание гормона с плазматической мембраной (ПМ). Наличие специфических мест связывания на ПМ клеток-мишеней для стероидных гормонов было доказано исследованиями, проведенными на кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии медико-биологического факультета РГМУ им. Н.И.Пирогова.
Академиком П.В.Сергеевым в 1979 году были опубликованы основные положения мембраинорецепторной теории действия стероидных гормонов. В - обзор литературы - 14 соответствии с этой теорией: 1) стероид узнается плазматической мембраной клетки-мишени, 2) плазматическая мембрана связывает и осуществляет перенос лиганда в клетку; включает систему вторичных посредников, 3) в распознавании и транслокации гормона принимают участие мембраны субклеточных органелл; 4) в превращении химического гормонального сигнала в биологический ответ клетки-мишени первостепенное значение имеют процессы транскрипции и трансляции.
В 1998 году в Германии состоялась Первая международная конференция, посвященная быстрым ответам на стероидные гормоны, где была предложена схематическая классификация эффектов стероидов с учетом их внегеномного действия (рис.1). Приведенные в схеме варианты ответов присущи гормональным агонистам и антагонистам. Отсутствуют лишь примеры для эффектов типа BI и ВИа.
Специфические негеномные эффекты зависят от типа стероида, клетки, ткани и вида животного. Тем не менее, сигнальные каскады внутри клетки, обеспечивающие такой ответ, на удивление постоянны и неразнообразны. Это -колебания уровня Са++ и цАМФ, активностей протеинкиназы С, митогенактивируемых киназ (МАПК), фосфолипазы С, рН и другие традиционные вторичные передатчики.
Помимо классических тканей мишеней объектами действия эстрадиола и прогестерона являются практически все ткани и органы, которые различаются по степени выраженности в них эффекта половых стероидов. Иллюстрацией такому заявлению служит то, что гормонзаместительная терапия у постменопаузальных женщин носит выраженный остеопротективный характер, значительно снижает риск развития кардио-васкулярных заболеваний и предупреждает развитие отдельных патологий ЦНС (болезнь Альцгеймера) [53, 85]. Выяснение различий в ткане-специфических механизмах действия половых стероидов позволит получить новые модуляторы рецепторов стероидов для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, остеопороза, заболеваний репродуктивного тракта и гормон-зависимых опухолей.
Следует иметь в виду, что некоторые эффекты могут прямо инициироваться как на плазматической мембране, так и на посттранскрипционных этапах: на уровне стабильности некоторых мРНК и их процессинга, на уровне трансляции, на посттрансляционном уровне (стимулирующий эффект эстрогенов на выброс простагландинов или активация ими глутаматдегидрогеназы в клетках матки). Эти эффекты обусловлены возможностью специфического взаимодействия некоторой части гормонов или гормон-рецепторных комплексов с акцепторами, локализованными вне генома, - в хроматине, информосомах, рибосомах, плазматической мембране, структурах цитоскелета. Эстрадиол
Быстрые мембранные эффекты - открытие ионных каналов, агрегация мембранных рецепторов или изменение уровня фосфорилирования белков -лишь небольшая, но крайне важная часть внегеномных эффектов стероидов. Многие сигнальные пути, включающие цитоплазматические белки, ростовые факторы и/или мембрано-инициируемые ответы вносят свой вклад в эстрогенное действие [102].
Остановимся на отсутствии удовлетворительной классификации альтернативных путей действия этрадиола. Определение «негеномные» не - обзор литературы - корректно, так как многие цитоплазматические сигнальные каскады, включенные в эстрогенное действие, вызывают активацию генной транскрипции, тогда как другие эстроген-медиируемые события не зависят от транскипции. Более того, цитоплазматические сигнальные каскады, вовлеченные в передачу эстрогенного сигнала, факт доказанный - поэтому неприемлем термин - «неклассический» путь.
Различные эстроген-зависимые сигнальные пути принято эмпирически разделять в зависимости от: субклеточной локализации рецепторного комплекса, кинетики ответа, специфики рецептора или его части, вызывающей ответ, вовлечение регулирующих протеинов, чувствительности к действию фармакологических агентов и физиологической представленности путей in vivo. Например, нейрон отвечает на эстроген изменением ионной проницаемости в течение 2 минут. Цитоплазматические эффекты, связанные с активацией киназ, регистрируются в пределах 2-5 минут [133], временной промежуток фосфорилирования рецепторов эстрадиола исчисляется часами (обычно до 4 часов). Эффекты эстрадиола на генную транскрипцию, инициируются в первые 30-45 минут [163], но требуют 4-8 часов для трансляционного (доступного измерению) эффекта [148, 149]. Приведем эмпирическую классификацию цитоплазматических сигнальных путей, вовлеченных в эстрогенный эффект [161].
Антиокислительная активность соединений
Экстрагированные липиды из ПМ и плазмы крови, растворенные в известном объеме смеси хлороформ-метанол (1:1 по объему), наносили с помощью микрошприца в виде пятна диаметром 0,3 см на стартовую полосу пластины "Silufol UV-254", подвергнутую предварительной активации. Для разделения на фракции общих липидов брали 25 мкл раствора липидов, для фосфолипидов - 50 мкл. После испарения хлороформа пластинки помещали в камеру с насыщенной системой растворителей. Для общих липидов -нормальный гексан:диэтиловый эфир: ЛУК (80:20:2 по объему); для разделения фосфолипидов - хлороформ: метанол: вода (65:25:4 по объему).
После того, как фронт растворителя поднимался на 10-12 см, пластинки вынимали из камеры, и сушили на воздухе до исчезновения запаха хлороформа и уксусной кислоты.
Идентификация и количественная оценка липидов. Обнаружение липидных пятен на пластинах проводили с помощью окрашивания фосфорномолибденовой кислоты. С этой целью хорошо высушенные пластины опрыскивали 10% спиртовым - материалы и методы - 60 раствором фосфорномолибденовой кислоты и проводили тепловую обработку в термостате при 100С в течение 3 минут. Липиды выявлялись в виде четких синих пятен на желтом фоне.
Выявленные пятна сопоставлялись с определенными липидами в соответствии со значениями Rf и с помощью высокоочищенных стандартов. В качестве стандартов применяли коммерческие препараты фирмы "Sigma": фосфатидилхолин, сфингомиелин, фосфатидилэтаноламин, холестерин, холестеринстеарат. Для количественной оценки содержания каждого класса липидов в липидном экстракте пластинки денситометрировали в отраженном свете при 560 нм с помощью денситометра фирмы "Карл Цейс Йена" (Германия). На полученных денситограммах подсчитывали площадь пиков соответствующих фракций липидов [136]. Для определения абсолютного количества липидов строили калибровочные кривые. В качестве контроля окрашивания использовали дорожку с нанесенным на старте чистым растворителем.
Антигестагенную активность соединений изучали на самках белых крыс с 4-5 дневным эстральным циклом, массой 160-190г. Исследуемые вещества вводили с 7-го дня беременности животных. Внутрибрюшинное введение препаратов в виде маслянных растворов в дозе 10 мг/кг массы тела осуществляли в течении 3-х суток. На 10-е сутки оба рога матки иссекались сразу после забоя животного эфирным наркозом. Подсчитывали количество мест имплантации зародышей в матке, которые выглядят как характерные - материалы и методы четкообразные утолщения. Для каждого животного определяли количество мест имплантации в матке. Показатель антигестагенной активности выражали в %. В тесте использовалась группа животных, получавших только подсолнечное масло. В каждой экспериментальной и контрольной группе было по 15 животных.
Оценивали наличие у исследуемых препаратов и новых химических соединений способности абортивного эффекта, сравнивая средние значения показателей антигестагенной активности в экспериментальных и контрольных группах. 2.16. Регистрация сократительной способности миометрия.
Исследование сократительной способности тканей матки проводили по общепринятой методике Блатнер Р., Классен X. [1983]. Полоску миометрия человека или крысы помещали в камеру из плексиглаза, закрепляя одним концом лигатуры к штоку механоэлектрического датчика, другим - к вмонтированному в дно камеры крючку. Мышцу постоянно перфузировали оксигенированным физиологическим раствором (Рингер-Локка). Биоптат миометрия растягивали примерно на 1/3 исходной длины.
Полоску миометрия непрерывно перфузировали раствором Рингер-Локка следующего состава (мМ): NaCl -153; КС1 - 5.6; СаС12 - 1.9; NaHC03 - 2.38; глюкоза - 5.55. рН раствора поддерживали в пределах 7.3 - 7.5. Опыты проводили при температуре 37 ± 0.5 С. Экспериментальная установка включает систему, предназначенную для регистрации сократительной активности миометрия. Регистрацию изометрического напряжения полоски миометрия осуществляли с помощью лампы-механотрон типа 6МХ1С (М), выход которого подключали к одному из каналов двухлучевого осцилографа С1-18 для визуального контроля. Для регистрации - материалы и методы - 62 спонтанной сократительной активности использовали двухкоординатный самописец NE-230. Обработке подвергались следующие параметры сократительного ответа: амплитуда и частота спонтанных сокращений миометрия.
Изучение влияния пентаранов на чувствительность миометрия крыс к окситоцину. Изучено влияние пентаранов на чувствительность миометрия беременных крыс к окситоцину и определение пороговой дозы окситоцина, вызывающей внеочередное сокращение с использованием изолированных отрезков тканей матки беременных крыс в условиях ex vivo [46]. Пентараны вводили беременным крысам в дозе 10 мг/кг, внутрибрюшинно. Сократительную активность изучали на изолированных отрезках миометрия беременных крыс через 24 часа после введения пентаранов. Окситоцин вводили в перфузионный раствор Рингер-Лока в концентрацииях: 0,001, 0,005 и 0,01 ЕД/мл. Регистрировали амплитуду и частоту сокращений миометрия.
Рецепторотропное действие 17р-эстрадиола
Антиокислительная активность аналогов 8-изоэстрадиола в 10-100 раз ниже чем у природного эстрадиола, но, несмотря на это, их также можно отнести к группе сильных антиоксидантов (на порядок активнее токоферола). Аналоги 8-изо-местранола обладают средневыраженной антиоксидантнои активностью. Модификация молекулы местранола приводит к снижению его антиокислительной активности.
Химическая модификация структуры эстрогенов, как указывалось выше, может приводить к изменению антиокислительной активности. Показатель антиокислительной активности метил-0-гомо-8-изоэстрона и 6-окса-8-изоэстрона на порядок превышает этот параметр у эстрона.
Изучение токсичности метилового эфира 6-окса-0-гомо-8-изоэстрона показало отсутствие у изучаемого соединения токсических и других - результаты исследований - 93 побочных эффектов в диапазоне доз значительно превышающем терапевтический ("терапевтическая доза" составляет 0,2 мг/кг веса тела в день , т.е. не менее чем в 1000 раз меньше изученной).
Анализ структурно-функциональной связи в ряду производных 8-изоаналогов эстрогенов позволил нам утверждать, что снижение эстрогенной активности связано с введением кислорода в шестое положение стероидной молекулы, а повышение гиполипидемических свойств зависит от наличия эфирной группировки.
Таким образом, направленный отбор позволил нам выделить метиловый эфир 6-окса-0-гомо-8-изоэстрона, проявляющий низкую эстрогенную активность, отрицательное рецепторотропное действие и высокий гиполипидемический эффект в качестве потенциального компонента моно-гормонзаместительной терапии у пациенток с посткастрационным синдромом и в качестве препарата выбора у женщин постменопаузального периода, относящихся к группе повышенного риска развития атеросклеротических процессов. НИСТРАНОЛ.
Направленный пойся веществ с выраженной эстрогенной активностью, привел к созданию соединения, синтезированного в ЭНЦ РАМН (работы проведены под руководством д.х.н. Ржезникова В.М.), 11Ь-нитроокси-9а-гидроокси-этинилэстрадиол-диацетат(нистранол).
Для выяснения возможностей клинического использования высокоактивного эстрогена - нистранола - нами было предпринято изучение эстрогенного, антифертильного и рецепторотропного действия этого соединения.
Отностительная конкурентная способность нистранола к ЕР Критерием способности нистранола конкурировать с эстрадиолом за связывание в цитозольнои фракции ткани матки крыс in vitro служил показатель относительной связывающей активности нистранола. Данные - результаты исследований - 94 анализа относительной конкурентной способности (ОКС) представлены в табл.№19.
Этинилэстрадиол 150+16.8 17р-эстрадиол 100+0.04 11 ь-нитроокси-9а-гидроокси-этинил-эстрадиол-диацетат 0.15±0.02 Из представленных результатов видно, что исследуемое вещество слабо связывается с рецепторами эстрадиола in vitro. Однако в опытах in vivo нистранол является активным эстрогеном. Следовательно, в результате метаболических превращений в организме нистранол преобретает эстрогенную активность и относится к так называемым пролекарствам. Таким образом, при отборе новых гормональных веществ необходимо использовать сочетание методов радиолигандного анализа в условиях in vivo и in vitro - для избежания ложноотрицательных результатов. Антифертильная и эстрогенная активность нистранола
Сравнительная оценка антифертильной и эстрогенной активности нистранола и этинилэстрадиола (ЭЭ) (табл.№20) показала, что эффективная доза нистранола, необходимая для ингибирования беременности, в 24.5 раза ниже таковой для ЭЭ, а показатель его эстрогенной активности превосходит в 4.5 раза.
Из данных таблицы видно, что эффективная доза (ИБ50) этинилэстрадиола в 24.5 раза превосходит таковую нистранола, в то время как эстрогенная активность нистранола выше, чем у этинилэстрадиола, в 4.5 раза.
Отсутствие у нистранола способности конкурировать с эстрадиолом за связывание в цитозольной фракции ткани матки in vitro и наличие выраженного влияния на связывание эстрадиола и прогестерона цитозольной фракцией in vivo (табл.21), наряду с выраженным утеротропным эффектом, позволяет предположить, что нистранол проявляет свое эстрогенное действие либо превращаясь в активный(е) метаболит(ы), который(ые) взаимодействует(ют) с цитозольными эстрогенсвязывающими местами, либо воздействует(ют) на другие структуры клетки .
Приведенные данные позволяют утверждать, что при отборе препаратов с эстрогеннои активностью необходимо использовать сочетание методов исследования in vivo и in vitro для избежания ложно отрицательных результатов.
Нистранол по показателям эстрогеннои и антифертильной активности и выраженному влиянию на связывание половых стероидов в ткани матки является предпочтительнее этинилэстрадиола. Нистранол может быть использован в качестве компонента комбинированных контрацептивных препаратов.
Новый контрацептивный препарат, содержащий в качестве эстрогенного компонента нистранол, и гестагенного - ацетомепрегенол (ЦХЛС-ВНИХФИ), получил название нитрогест.
В качестве препаратов сравнения нами были использованы тризистон (этинилэстрадиол-левоноргестрел) и отечественный препарат - эгестренол (этинилэстрадиол - ацетомепрегенол).
Сравнительный анализ влияния комбинированного соединения, со-держащиего оригинальный отечественный эстроген - нистранол и гестаген -ацетомепрегенол, и известного контрацептивного средства - тризистона на клеточное звено регуляции фертильности - связывание эстрадиола в ткани матки овариэктомированных крыс (табл.№22) показал, что препараты, - результаты исследований - 97 содержащие нистранол и ацетомепрегенол, проявляют более высокую активность, по сравнению с тризистоном, выражающуюся в подавлении цитозольного связывания эстрадиола в ткани матки.
Следовательно, использование новых веществ в качестве компонентов контрацептивных средств позволяет при достаточной эффективности, сравнимой с действием тризистона, снизить дозовую эстрогенную нагрузку. При этом, замена только гестагенного составляющего - левоноргестрела на ацетомепрегенол в эгестреноле уменьшает чувствительность ткани матки к эстрогенам на 60 и 90%, соответственно дозам.
Относительная конкурентная способность производных
Концентрация рецепторов прогестерона в миометрии в латентную фазу родов (12,7 ± 2,7 фмоль/мг белка) не изменялась по сравнению с показателем накануне родов (12,6 ± 2,1 фмоль/мг белка), достоверно повышаясь в активную фазу родов до 24,9 ± 2,2 фмоль/мг белка (р 0,001). Следовательно, развитие регулярной родовой деятельности сопровождается изменением рецепции половых стероидов в миоцитах матки, что необходимо для успешного завершения родов.
Наиболее важным показателем для прогноза родов является чувствительность миометрия к половым стероидам, а именно уровень рецепторов прогестерона и эстрадиола и их соотношение. При физиологически протекающих родах величина соотношения РП/РЕ в конце беременности равнялось 1,2; в латентную фазу - 2,4 и в активную фазу родов - 6,7. Увеличение коэффициента РП/РЕ в латентную фазу родов -результаты исследования- 172 происходило за счет снижения уровня рецепторов эстрадиола на фоне практически неизменного содержания рецепторов прогестерона, свидетельствующее о том, что пусковым механизмом в развитии родовой деятельности в большей степени является содержание эстрадиола и чувствительность миометрия к нему. В дальнейшем влияние эстрадиола продолжает возрастать, поскольку происходит дальнейшее уменьшение концентрации цитозольных рецепторов эстрадиола. В то же время, увеличение уровня рецепторов прогестерона в 2 раза в активную фазу родов говорит об уменьшении влияния прогестерона на сократительную деятельность матки в родах. Аналогичную динамику соотношения РП/РЕ мы наблюдали в процессе родов у пациенток с оперированной маткой: в конце беременности его величина равнялась 1,0; в латентную фазу - 2,4 и в активную фазу родов - 3,5. Однако, в контрольной группе коэффициент РП/РЕ увеличивается в активную фазу родов в 2,8 раза, а у рожениц с рубцом на матке только в 1,5 раза. Такое непропорциональное изменение соотношения РП/РЕ свидетельствует о том, что на этом этапе родов происходит изменение биохимических взаимоотношений в оперированной матке. Поскольку клинически мы не наблюдали в этой группе отклонений от физиологического течения родов и ни в одном случае не зарегистрировали аномалий сократительной деятельности матки, подобные изменения можно считать компенсированными, но рожениц с рубцом на матке следует отнести к группе высокого риска развития аномалий родовой деятельности, особенно - в активную фазу родов.
Для прогнозирования благоприятного исхода родов наибольшее значение имеет соотношение РП/РЕ накануне родов. Величина этого показателя в конце беременности у пациенток с интактной и оперированной маткой при самопроизвольных родах, протекавших без нарушений сократительной деятельности матки, и при абдоминальном родоразрешении у беременных с состоятельным рубцом на матке и в контрольной группе варьировала от 1,0 до 1,6. - результаты исследования- 173
Проведенный индивидуальный анализ показал, что изменение коэффициента РП/РЕ в утеромиоцитах накануне родов от 1,0 до 2,0 свидетельствует об оптимальном соотношении рецепторов половых стероидов в конце беременности и, соответственно, функциональной состоятельности миометрия. Изменение данного параметра выше 2,0 или ниже 1,0 является неблагоприятным для прогноза исхода родов. В частности, повышение РП/РЕ до 2,4 в конце беременности у пациенток с несостоятельным рубцом на матке свидетельствует о функциональной несостоятельности матки. Роль половых стероидов и чувствительность миометрия к ним в генезе нарушений сократительной деятельности матки.
Для определения значения половых стероидов и чувствительности миометрия к ним в патогенезе слабости родовой деятельности была обследована 101 пациентка с доношенным сроком гестации (37-41 неделя), течение родов которых осложнились нарушением сократительной деятельности матки, а именно слабостью родовой деятельности (СРД), требующей медикаментозной коррекции. Диагноз слабости родовой деятельности был поставлен на основании клинических данных - отсутствия положительной динамики открытия шейки матки и продвижения предлежащей части плода, и параклинических - кардиотокографического наблюдения за характером родовой деятельности и состоянием плода.
На основании ретроспективного анализа исхода родов все пациентки были разделены на 2 группы: в одной роды были закончены абдоминальным путем (IB группа), во второй - через естественные родовые пути (ИВ группа).
Результаты исследований показали (табл.№62), что содержание эстрадиола и прогестерона в плазме периферической крови у рожениц с СРД достоверно не отличалось от аналогичных показателей в контрольной группе. - результаты исследования- 174 Концентрация половых стероидов в плазме крови у рожениц со слабостью родовой деятельности, родоразрешенных абдоминальным путем (М±т) Группа п Эстрадиол (нМ) Прогестерон (нМ) СРД 76 112,1 ±4,4 657,0 ± 36,5 Контрольная 38 103,7 ±6,5 779,3 ± 64,0 В отличие от этого уровень рецепторов эстрадиола в миометрии у рожениц со слабостью родовой деятельности был достоверно выше, чем в контрольной группе (р 0,05), равняясь в среднем 5,3 ±0,3 фмоль/мг белка (рис.№36).
Во ИВ группу были включены 25 беременных, у которых роды закончились через естественные родовые пути. Полученные нами результаты исследований показали, что содержание эстрадиола в плазме периферической крови в конце беременности и в латентную фазу родов достоверно не отличалось от показателей в контрольной группе. В активную фазу родов его величина достоверно снижалась, составляя 90,2±3,4 нМ (р 0,01)(табл.№63).
Концентрация прогестерона накануне родов также достоверно не отличалась от аналогичного параметра при физиологических родах, составляя в среднем 732,4±47,2 нМ. С развитием регулярной родовой деятельности его уровень незначительно уменьшился, достоверно снижаясь в активную фазу родов (р 0,001) и равняясь в среднем 530,2±17,9 нМ (табл.№ 64).
Похожие диссертации на Молекулярные механизмы действия женских половых стероидов и их антагонистов
