Введение к работе
Актуальность тени. Разработка высокочувствительных иммунохи-іических методов анализа наркотических и одурманивающих веществ является актуальной проблемой современной наркологии и токсиколог;..-, в России эта проблема лриобрела особо острое значение, так как l сп.^эи с прс::схс;.;:хими социально-политическими и экономическими переменами р^зко возросло число случаев потребления наркотических и одурнаплзаклгсх веществ, а для своевременного выявления лип, злоупотреблявших этими вешествами, как известно, необходимы эффективные методі' экспресс-анализа биологически жидкостей, обычно ночи, как наиболее доступного объекта исследования. Причем, учитывая то, что за немедицинское потребление наркотических и одурманивающих веществ законодательством предусмотрена различная мера ответствекности, необходимо точно дифференцировать эти Еекества относящиеся порой к одной Фармакологической группе. Так, из рассматриваемых нами в данной работе двух" производных барбитуровой кислоты, получивших наибольшее распространение, одно соединение - барбамил, приравнено к наркотическим веиества, другое - фенобарбитал, относится к одурманивающим.
в настоящее вреня для обнаружения этих барбитурзтов широко применяются физико-химические нетоды анализа: фотометрия, тонкослойная хронатография, газовая хроматография и др. однако эти методы длительны по времени исполнения, требует предварительной обработки образцов и зачастую недостаточно чувствительны, поэтому создание быстрых, простых, чувствительных и специфичных ИМНУНО-химических методов определения изучаемых соединений является актуальной задачей, тем 5олее что, такие нетоды количественного определения фенобарбитала и барбамила в ноче практически не разработаны ни у нас в стране ни за рубежом.
цель и задачи исследования- Нелью настоящего исследования является разработка специфичных экспресс-нетодик поляризационного Флуороиммуноанализа ШФИА) фенобарбитала и барбанила в моче.
для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
осуществить синтез иммунохимических реагентов - инмуногенов и меченных флуоресцеинон производных фенобарбитала и барбанила;
получить васокоспепифические поликлоналыше антисыворотки к исследуемым соединениям;
изучить вшнние различных Факторов на-результаты анализа и с учетон полученных данных разработать наиболее оптимальные методики ПФИА, предназначенные для качественного и количественного определения Фенобарбитала и барбанила в моче;
определить аналитические характеристики разработанных методик и апробировать їх на модельных смесях и экспертной материале;
сравнить результаты поляризационного Флуороиннуноанализа фенобарбитала и барбанила с результатами других нетодов исследования;
изучить стабильность калибровочных зависимостей и сохранность разработанных тест-систем.
научная аовизна. Впервые синтезированы коныогаты барбанила с бычьин сывороточным альбумином (иннуноген) и флуоресцеинтиокар-банил этиленюанинои (трейсер). Способ получения инмуногена и структура трекера барбанила защищены авторскини свидетельствани. Впервые получена высокоспецифическая поликлональная антисыворотка к барбамилу- Ізучено влияние величины разведения антисыворотки, концентрации раствора трейсера, состава и рН буфера на результаты поляризационного Флуороиммуноанализа фенобарбитала и барбанила. Впервые разработаны высокочувствительные и " специфичные нетодики ПФИА, предназначенные для идентификации и количественного определения изучаемых соединений в моче.
практическая значимость работы, на основе полученных реагентов и проведенных исследований были созданы высокоэффективные тест-системы для определения фенобарбитала и барбаиила. В настоящее время эти тест-системы успешно прошли испытания и внедрены в практику работы Приморского краевого наркологического диспансера (г.Владивосток), Центрального военно-морского госпиталя но РФ (г. Купавна) и Всесоюзного научно-исследовательского центра охраны здоровья натери и ребенка (г. Москва).
материалы диссертационной, работы включены в методические рекомендации "Поляризационный флуороинмуноанализ веществ, вызывающих одурманивание", утвергденные нз СССР. Данные рекомендации предназначены для лабораторий наркологических диспансеров, токсикологических центров и бюро судебно-медицинских экспертиз.
Апробация работы, основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции, посвященной 25-летию Фармацевтического Факультета курского медицинского института (Курск, 1991г.), научных семинарах Центральной химико-токсикологической лаборатории кна им.и. н. сеченоза (Носква, і99іг. ), косковском обществе судебных медиков, секции судебных химиков (Носква, 1991г. ), мехкафедраліной конференции фармацевтического факультета ННА им. и. Н. Сеченова (Носква, 1993г.).
публикации. По теме диссертации опубликовано б работ, получены г авторских свидетельства.
положения, выдвигаемые на зашиту. На зашиту выносятся:
синтез икмунохинических реагентов.. - инмуногенов и меченных Флуоресцеином антигенов;
разработка методик поляризационного Флуороинмуноанализа Фено-баритала и барбанила в моче;.
оптимизация условий проведения анализа и определение характеристик предлагаемых тест-систем.
Структура и объем диссертации- диссертационная работа сос
тоит из введения, обзора литературы, эксперементальной части
(5 глав), выводов и списка цитируемой литературы (163 источника).
Работа изложена на 145 страницах машинописного текста, содержит
14 таблиц и зо рисунков. ,
