Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Фармакологические свойства компонентов, входящих в состав анальгезирующих и спазмолитических лекарственных средств 11
1.2. Применение физико-химических методов в анализе многокомпонентных лекарственных средств 16
1.2.1.ВЭЖХ-анализ кофеина в сложных лекарственных смесях 21
1.2.2.ВЭЖХ-анализ парацетамола в сложных лекарственных смесях 27
1.2.3.ВЭЖХ-анализ кодеина и папаверина в сложных лекарственных смесях 30
1.2.4.ВЭЖХ-анализ эфедрина и атропина в сложных лекарственных смесях 34
1.2.5.ВЭЖХ-анализ фенобарбитала и бромизовала в сложныхлекарственных смесях 37
Заключение 46
ГЛАВА 2. Изучение хроматографического поведения компонентов, входящих в состав сложных таблетированных лекарственных форм 47
2.1. Объекты исследования 47
2.2. Спектральные характеристики 50
2.3. Аппаратура и методы расчета 56
2.4. Выбор хроматографической системы и критериев оптимизации 58
2.4.1 Влияние вида сорбента 60
2.4.2.Влияние величины рН 63
2.4.3.Влияние состава подвижной фазы 68
ГЛАВА 3 Применение метода ВЭЖХ для анализа таблетированной лекарственнй формы "Спазмоспардеин" 74
3.1. Идентификация лекарственных веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин" 74
3.2.Идентификация и полуколичественное определение эфедрина гидрохлорида 78
3.3. Количественное определение кофеина, парацетамола, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала в таблетках "Спазмоспардеин" 83
3.4 Применение разработанной методики ВЭЖХ для проведения теста "Растворение" 94
3.5.Применение метода ВЭЖХ для определения однородности дозирования действующих веществ в таблетках "Спазмоспардеин" 98
3.6. Изучение стабильности таблеток "Спазмоспардеин" при хранении 99
ГЛАВА 4. Применение метода ВЭЖХ в контроле качества Таблеток Тлюферал 104
4.1 Идентификация компонентов, входящих в состав таблеток Тлюферал 107
4.2. Количественное определение компонентов, входящих в состав таблеток 'Тлюферал" 110
4.3. Применение метода ВЭЖХ для определения показателя "Растворение" в таблетках Тлюферал" 119
4.5.Применение метода ВЭЖХ для определения показателя "Однородность дозирования" в таблетках Тлюферал 123
Выводы к главе 4 124
Общие выводы 126
Использованная литература 128
Приложения 155
- Применение физико-химических методов в анализе многокомпонентных лекарственных средств
- Выбор хроматографической системы и критериев оптимизации
- Количественное определение кофеина, парацетамола, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала в таблетках "Спазмоспардеин"
- Применение метода ВЭЖХ для определения показателя "Растворение" в таблетках Тлюферал"
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Создание и внедрение новых высокочувствительных методик контроля качества лекарственных средств является одной из главных задач фармацевтической науки.
Эффективность анализа лекарственных средств непосредственно связана с использованием физико-химических методов исследования. Все большее практическое значение находят хроматографические методы, в том числе высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которая обеспечивает высокую чувствительность, специфичность и экспрессность анализа.
Этот метод вошел в нормативную документацию Российской Федерации, стран СНГ, а также используется в фармакопеях США, Британской, Немецкой и Европейской.
В современной медицинской практике применяется широкий ассортимент готовых лекарственных форм анальгетического и спазмолитического действия. Большинство из них представляют собой многокомпонентные лекарственные средства, в состав которых входят вещества, относящиеся к различным классам химических соединений - алкалоиды, барбитураты, производные п-аминофенола и др. Разработка методов оценки качества данных лекарственных средств является сложной задачей, которая может быть решена с применением метода ВЭЖХ, позволяющим совместить стадии разделения, идентификации и количественного определения.
Объектами наших исследований выбраны сложные таблетированные лекарственные формы "Спазмоспардеин" и Тлюферал". Таблетки "Спазмоспардеин", состоящие из 8 компонентов, разработаны в ГУП МБА МЦ УД Президента РФ. Зарубежный аналог таблеток "Спазмоспардеин " -близкие по составу таблетки "Спазмовералгин", содержащие 6 компонентов и выпускаемые фирмой "Словакофарма". В НД для оценки качества таблеток "Спазмовералгин" предлагается метод мицеллярной электрокинетической хроматографии, который в настоящее время малодоступен, или альтернативный метод ВЭЖХ с использованием двух различных методик для определения 4 компонентов и метод ТСХ для двух компонентов, что увеличивает трудоемкость и время анализа.
Таблетки Тлюферал" выпускаются в настоящее время в Республике Грузия. По действующей НД анализ таблеток Тлюферал" проводится с помощью химических методов и спектрофотометрии после предварительного разделения и выделения действующих веществ методом экстракции, что связано с использованием значительных количеств растворителей, реагентов и длительностью анализа. Подлинность компонентов устанавливается только на основе общегрупповых реакций. Предлагаемая для количественного определения альтернативная методика ВЭЖХ несовершенна, т.к. не позволяет получить достоверные воспроизводимые результаты и объективно оценить качество препарата. Условия хроматографирования подобраны эмпирически и не имеют теоретических обоснований.
В связи с вышеизложенным представляется актуальным провести теоретические исследования по подбору оптимальных условий анализа многокомпонентных лекарственных средств спазмолитического и анальгетического действия методом ВЭЖХ. На основе полученных теоретических данных появится возможность научного подхода при создании унифицированной методики оценки качества сложных лекарственных форм.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью работы является проведение исследований, по оптимизации условий анализа методом ВЭЖХ и созданию высокоэффективных и научно обоснованых методик качественного и количественного определения лекарственных форм сложного состава, содержащих алкалоиды, барбитураты, производные п-аминофенола и другие органические соединения различных химических классов
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Изучить и проанализировать данные литературы о физико-химических методах определения лекарственных веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин" и Тлюферал".
Провести исследования по изучению хроматографического поведения на различных сорбентах кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала, парацетамола и бензоата натрия.
Определить основные хроматографические характеристики изучаемых веществ при различных значениях рН подвижной фазы.
Исследовать зависимость между составом подвижной фазы и эффективностью разделения анализируемых веществ.
Использовать результаты теоретических иследований для разработки высокоэффективных ВЭЖХ-методик, применимых для качественного и количественного анализа, определения показателей "Растворение" и "Однородность дозирования" многокомпонентных лекарственных форм -таблетки "Спазмоспардеин" и таблетки 'Тлюферал".
Разработать проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" и проект "Изменения" на таблетки Тлюферал".
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Методом сравнительной оценки даных по изучению хроматографического разделения кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала, парацетамола и бензоата натрия в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ на различных типах сорбентов (октил-, октадецил-, цианопропил-силаны), в подвижных фазах с различным соотношением компонентов и различным значением рН выявлены факторы, влияющие на оптимальное проведение анализа в условиях изократического режима элюирования.
Определены основные хроматографические параметры для изучаемых веществ: время удерживания, фактор удерживания, спектральные соотношения; оптимизированы условия идентификации изучаемых веществ, которые основаны на прямой зависимости величины удерживания от значения рН и концентрации органического компонента в подвижной фазе.
С учетом хроматографического поведения исследуемых веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин", определены оптимальные условия их разделения, и разработана унифицированная ВЭЖХ-методика, пригодная для оценки качества препарата по показателям: "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования", "Количественное определение".
На основе проведенных исследований разработана унифицированная ВЭЖХ-методика для анализа и стандартизации лекарственного средства таблетки "Глюферал" по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение'.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. На основе проведенных исследований разработаны и внедрены: унифицированная методика ВЭЖХ-анализа и стандартизации шести компонентов нового с южного лекарственного средства "Таблетки "Спазмоспардеин" (кофеина, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола) по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дотирования", "Количественное определение" (отзыв на методику от 1 і 12.2001 г). проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" (акт внедрения от 15. 01.2002). унифицированная методика анализа и стандартизации лекарственного средства "Таблетки Тлюферал" (акт апробации методики от 13.12.2001). проект "Изменения №1 к ФС 121/96" на таблетки Тлюферал" (принят к рассмотрению Фармакопейным комитетом Республики Грузия, письмо АО "Тбилхимфарм" №01-10/117 от 13.12.2001 г).
ПУБЛИКАЦИИ.
По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.
Основные результаты исследований доложены на VI, VII Российских национальных Конгрессах "Человек и лекарство" (Москва 1999, 2000 годы). На Международной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск 2000 г).
СВЯЗЬ ЗАДАЧ И ИССЛЕДОВАНИЙ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК.
Диссертационная работа выполнялась в соответствии с Государственной комплексной программой "Фундаментальные науки - медицине", № Государственной регистрации 01.9.700001593 и соответствует тематике проблемной комиссии по фармации № 36.08 РАМН МЗ РФ.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ: - результаты теоретических исследований по оптимизации условий ВЭЖХ-анализа кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола в составе многокомпонентных лекарственных форм. унифицированная методика анализа и стандартизации 6 компонентов нового сложного лекарственного средства таблетки "Спазмоспардеин" (кофеина, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола) по показателям: "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования", "Количественное определение; унифицированная методика анализа и стандартизации лекарственного средства таблетки Тлюферал" (кофеин-бензоат натрия, фенобарбитал, бромизовал) по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение".
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.
Диссертационная работа изложена на 154 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы и 23 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы 209 наименований, из них 160 на иностранных языках. В приложении представлены материалы по внедрению.
Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.
Первая глава (обзор литературы) содержит краткие сведения по фармакологическому действию кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола. Представлен обзор литературных данных по применению физико-химических методов определения изучаемых лекарственных средств, а также метода ВОЖХ в анализе сложных лекарственных смесей, содержащих в своем составе кофеин, кодеина фосфат, атропина сульфат, эфедрина гидрохлорид, папаверина гидрохлорид, фенобарбитал, бромизовал и парацетамол.
Вторая глава посвящена изучению хроматографического поведения кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала, парацетамола и бензоата натрия в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ на различных типах сорбентов (октил-, октадецил-, цианопропилсиланы), в подвижных фазах с различным соотношением компонентов и различным значением рН. Кроме того, представлены оптимальные условия разделения изучаемых компонентов.
В третьей главе представлены результаты исследований по разработке унифицированной ВЭЖХ-методики, пригодной для оценки качества нового лекарственного средства "Спазмоспардеин" по показателям: "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования", "Количественное определение".
Четвертая глава посвящена разработке унифицированной методики качественного и количественного определения действующих веществ таблеток Тлюферал" и ее применению для оценки качества препарата
Применение физико-химических методов в анализе многокомпонентных лекарственных средств
В опубликованной литературе описаны различные методы количественного и качественного определения изучаемых веществ, в том числе и в многокомпонентных смесях.
Наряду с такими традиционными химическими методами анализа, как характерные цветные реакции для идентификации и титриметрия в различных вариантах - иодометрия, броматометрия, титрование в неводных средах [3], в последнее время наиболее широкое распространение получили физико-химические методы оценки качества [9, 26].
Так, полярографический метод использовался для количественного определения папаверина [11]. Однако, при этом требуется предварительное разделение компонентов лекарственной формы методом ТСХ, что значительно усложняет анализ.
Наличие в ультрафиолетовой области характерных спектральных полос поглощения у изучаемых веществ позволяет с высокой точностью проводить количественное их определение в индивидуальных лекарственных формах методом спектрофотометрии. Однако, в многокомпонентных лекарственных смесях определение ингредиентов методом прямой спектрофотометрии очень затруднено из-за перекрывающихся максимумов поглощения. В таких случаях применяют экстракционное разделение компонентов между водной и органической фазой и дальнейшее титриметрическое или спектрофотометрическое определение в ультрафиолетовой области [8, 12, 23, 41].
Известны работы с применением метода производной и дифференциальной спектрофотометрии для определения действующих веществ в сложных лекарственных формах [5, 7, 13]. Ряд авторов предлагают предварительное разделение определяемых компонентов методом тонкослойной хроматографии на различных сорбентах (на силикагеле, полиамидном слое) с последующим элюированием пятен и спектрофотометрическим определением [29, 30, 40, 44].
Описаны методики определения многокомпонентных лекарственных смесей, основанные на разделении компонентов в тонком слое силикагеля с последующим использованием денситометрии [46]. Несмотря на то, что этот метод имеет достаточно высокую точность и воспроизводимость, для проведения анализов требуется достаточно сложное и трудно доступное импортное оборудование.
Наряду со спектрофотометрическими методами в последнее время наиболее широкое распространение в области фармацевтического анализа получил метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [6, 48]. Интенсивное развитие этого метода и внедрение его в аналитическую практику было обусловлено развитием высоких технологий, позволяющих усовершенствовать метод традиционной колоночной хроматографии низкого давления. Совершенствование технологии получения сорбентов с размером частиц 10 мкм и менее, обеспечивающих увеличение активной удельной поверхности сорбента, привело к созданию современных аналитических колонок с эффективностью разделения, достигающей 100000 теоретических тарелок, и сравнимой с высокоэффективной капиллярной ГЖХ. Применение динамических смесителей подвижной фазы обеспечило точное смешение компонентов при использовании как градиентного, так и изократического режима элюирования, и привело к высокой воспроизводимости результатов анализа. Важную роль сыграли также разработка теоретических основ ВЭЖХ и организация выпуска растворителей и реагентов высокой степени очистки [6, 28,33, 164,207].
В сравнении с другими аналитическими методами, и в особенности с методом ГЖХ, ВЭЖХ имеет ряд принципиальных преимуществ [42]. Метод ВЭЖХ позволяет анализировать как соединения с небольшой молекулярной массой, так и высокомолекулярные белки, ферменты и др. [1,2, 48, 164,]. При этом разделение проводится при комнатной или близкой к ней температуре с использованием инертных растворителей и при отсутствии контакта с кислородом. Все это делает метод ВЭЖХ особенно пригодным для анализа многих термически и химически неустойчивых соединений [24, 35, 207]. Метод обладает высокой эффективностью и селективностью. В отличие от метода ГЖХ, где основными факторами, влияющими на разделение, являются температура, свойства неподвижной жидкой фазы и вид детектора [14], метод ВЭЖХ обеспечивает боле широкие возможности по оптимизации селективности разделения изучаемых соединений [43]. При подборе условий анализа существует возможность варьирования как неподвижной фазы (сорбентов), так и подвижной фазы. При подборе состава подвижной фазы существует возможность изменения концентрации органического и неорганического компонентов, ионной силы, кислотности или основности. Метод характеризуется высокой скоростью проведения анализа [1, 2, 6, 103]. Возможность использования различных типов детекторов значительно расширяет область применения ВЭЖХ и позволяет проводить обнаружение соединений, относящихся к широкому спектру химических классов (от ионов до высокомолекулярных соединений). В анализе используются ультрафиолетовый, флуориметрический, электрохимический, рефрактометрический детекторы, а так же быстросканирующий спектрофото-метрический детектор с диодной решеткой [10, 127, 129, 154]. Кроме того, метод отличается высокой воспроизводимостью, чувствительностью и точностью [168]. Правильный выбор сорбента, подвижной фазы, оптимальной длины колонки и длины волны позволяет достичь высокой точности методик [42, 48].
Универсальные возможности ВЭЖХ находят все более широкое применение в медицине [21, 22]. В фармацевтическом анализе метод ВЭЖХ с успехом применяется для разделения и количественного определения лекарственных веществ в многокомпонентных смесях [15]. Метод ВЭЖХ включен в Государственную фармакопею XI издания и много лет является одним из основных аналитических методов, описанных в зарубежных фармакопеях.
Фармакопея США 23 изд. для большинства препаратов, содержащих изучаемые компоненты, приводит методики определения с применением метода ВЭЖХ [45]. Капсулы, содержащие кофеин, парацетамол и ацетилсалициловую кислоту, анализируются с использованием термостатируемои колонки с сорбентом С18 и подвижной фазой состава: вода - метанол - ледяная уксусная кислота (69:28:3).
Выбор хроматографической системы и критериев оптимизации
Исследования проводились на жидкостном хроматографе модели LC-10 А фирмы "Шимадзу" (Япония). Оптимизация разделения лекарственных средств, содержащих изучаемые соединения, проводилась в изократическом режиме. Скорость потока подвижной фазы составляла 1 мл/мин.
Прибор снабжен однолучевым ультрафиолетовым детектором с диапазоном длин волн от 190 до 900 нм и масштабом измерения оптической плотности в пределах от 0,001 до 4,00 единиц.
Ввод анализируемой пробы осуществлялся микрошприцем с помощью стандартного инжектора производства фирмы "Rheodine" с дозирующей петлей ввода объемом 20 мкл. Количественное определение анализируемых компонентов проводилось по площадям пиков на хроматограммах с использованием интегратора "SP 4100" производства фирмы "Spectraphysics", США. Идентификация пиков осуществлялась по временам удерживания. Используемая для исследований хроматографическая система включала в себя аналитические колонки из нержавеющей стали длиной 25 см и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненные сорбентами Zorbax Cg 5мкм, Ultrasphere ODS 5мкм и Ultrasphere CN 5 мкм. При описании хроматографических исследований в работе использовали следующие общепринятые основные хроматографические понятия: длина колонки (L), время удерживания (tR ), мертвое время (tM), приведенное время удерживания ( / д ), фактор удерживания ( к ), число теоретических тарелок (N), эффективность (Н), фактор разделения (а) и разрешение пиков ( Rs ). Определение перечисленных параметров проводилось по формулам 1 -6: Эффективность колонки (H) определяется числом теоретических тарелок. Этот показатель зависит от химической структуры сорбента и других его физико-химических свойств, от размеров колонки, а также от состава подвижной фазы, правильный выбор которой ведет к повышению эффективности. С повышением эффективности колонки уменьшается ширина пика определяемого вещества, а вследствие этого повышается чувствительность и точность методики. Другим важным параметром хроматографической системы является фактор разделения, который характеризует разделительную способность колонки и определяется отношением приведенных времен удерживания пиков анализируемых веществ. Фактор разделения зависит от многих параметров, включая химическую природу сорбента, состав подвижной фазы, химическую структуру и свойства определяемых веществ. На этот фактор необходимо обращать особое внимание при подборе хроматографических условий, учитывая взаимодействие разделяемых веществ с подвижной и неподвижной фазами. Для разделения многокомпонентных смесей веществ важным параметром также является разрешение пиков ( Rs ). Этот параметр связывает времена удерживания пиков определяемых веществ и их ширину, и определяется селективностью, коэффициентом емкости и эффективностью аналитической колонки. Из приведенной выше формулы (6) видно, что разрешение будет возрастать при увеличении селективности и при увеличении эффективности. Разрешение пиков показывает, насколько полно разделяются пики на хроматограмме. Полнота разделения непосредственным образом влияет на правильность подсчета площадей пиков и как следствие точность количественного анализа. По своей химической структуре болынинствао изучаемых компонентов являются диссоциирующими веществами, которые относятся к азотистым основаниям, способным протонироваться в водных средах. Исследуемые вещества являются сложными органическими соединениями, имеющими по несколько структурных групп, которые определяют их физико-химические и хроматографические свойства. Поэтому предварительно были учтены лишь преобладающие факторы, позволяющие в некоторой степени прогнозировать условия хроматографического разделения исследуемых веществ. На основании вышеперечисленных особенностей хроматографирования изучаемых соединений был выбран наиболее распространенный в настоящее время вариант хроматографии - ВЭЖХ. В наших исследованиях использованы преимущества ВЭЖХ, а именно: возможность влиять на разделение изучаемых веществ, изменяя состав органических компонентов и их концентрацию в подвижной фазе, а также меняя значение ее рН, ионную силу или добавляя ион-парные реагенты Исследования проводили, используя в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и 0,05 М фосфатного буфера с различными значениями рН. Применяемая концентрация буферного раствора обеспечивает стабильность времен удерживания при вводе проб различного состава. Исходя из химической структуры и коэффициентов диссоциации исследуемых веществ, нами было предположено, что наиболее оптимальными для определения являются кислые значения рН. Выбор концентрации органического компонента в составе подвижной фазы определялся следующими основными условиями: 1) фактор удерживания должен быть не менее 0,5; 2) время анализа не должно превышать 30 минут 3) коэффициент разрешения пиков изучаемых веществ должен быть не менее 1. Анализ литературных данных показал, что парацетамол и кофеин имеют малые времена удерживания при содержании органического компонента в подвижной фазе выше 25 %, что не обеспечивает их удовлетворительного разделения. В связи с этим, предварительные исследования проводились с использованием подвижной фазы с содержанием ацетонитрила около 20 %.
Количественное определение кофеина, парацетамола, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала в таблетках "Спазмоспардеин"
В соответствии с требованиями ГФ XI таблетки, содержащие в своем составе действующие вещества в количестве 0,05 г и менее, должны тестироваться на однородность дозирования. Разработанная нами методика ВЭЖХ может быть применена для одновременного определения однородности дозирования четырех компонентов таблеток: кофеина, фенобарбитала, кодеина фосфата и папаверина гидрохлорида.
Каждую из 10 отобранных таблеток помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл 50% раствора ацетонитрила в воде и обрабатывают на ультразвуковой бане до полного диспергирования таблеток. Затем раствор в колбе охлаждают, доводят до метки тем же растворителем и фильтруют. 1 мл полученного раствора помещают в колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки подвижной фазой.
Определяют содержание кофеина, фенобарбитала, кодеина фосфата и папаверина гидрохлорида методом ВЭЖХ в условиях, описанных на ранее. Расчет в % от номинального содержания проводят по формуле: Сет - содержание стандартного вещества в растворе РСО (г/мл) в - номинальное содержание определяемого вещества в таблетке, г Результаты определения показателя "Однородность дозирования" компонентов таблеток приведены в табл. 6.3. Представленные в таблице результаты свидетельствуют о том, что таблетки "Спазмоспардеин" соответствуют требованиям ГФ XI по показателю "Однородность дозирования". По результатам иследований подготовлен проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин". Поскольку таблетки "Спазмоспардеин" являются новой лекарственной формой, необходимо изучить их устойчивость в процессе хранения. С течением времени при хранении лекарств происходят различные изменения свойств компонентов. Эти изменения могут быть следствием самых различных процессов: физических (температура, свет), химических (влажность, присутствие кислорода или углекислого газа), микробиологических, протекающих с различной скоростью. Влияние различных факторов может приводить к снижению содержания действующих веществ, уменьшению их активности, появлению продуктов распада, изменению физико-химических показателей лекарственной формы. Именно эти характеристики определяют качество препарата, его безопасность. Поэтому для лекарственной формы особенно важен показатель стабильности, т.е. способность отвечать требованиям нормативно-технической документации в течение определенного периода хранения.
Для определения срока годности препарата используют как хранение в естественных условиях, так и метод "ускоренного старения". Метод "ускоренного старения" основан на зависимости скорости реакции от температуры. При повышенных температурах различные процессы, протекающие в лекарственных формах и приводящие к ухудшению их качества, обычно ускоряются. Поэтому промежуток времени, в течение которого не изменяются показатели качества лекарственной формы, искусственно сокращается. Это позволяет сократить время, необходимое для установления срока годности.
Для установления срока годности таблетки "Спазмоспардеин" упаковывали в бумажные стрипы и закладывали на хранение. Количественое содержание действующих веществ определяли через определенные промежутки времени с помощью разработанной ВЭЖХ-методики.
На первоначальном этапе таблетки после предварительного количественного анализа были заложены на хранение при температуре 60 С. Через 11 суток хранения, что соответствует 6 месяцам, образцы были повторно проанализированы. Результаты количественного определения компонентов показали, что содержание бромизовала и кодеина фосфата значительно снизилось и не соответствует допустимым нормам содержания.
Следующая партия таблеток была заложена на хранение при температуре 40 С. Первый контроль проводили через 46 суток, что соответствует -101 месяцам хранения в естественных условиях. Содержание бромизовала и кодеина фосфата находилось на нижнем пределе допустимых норм содержания. Содержание остальных веществ находилось в пределах норм. Последующий анализ был проведен еще через 46 суток (1 год хранения в естественных условиях). Установлено заниженное содержание бромизовала и кодеина фосфата, а количество папаверина гидрохлорида находилось на нижнем пределе. Поэтому партию таблеток заложили на хранение в естественных условиях. Результаты количественного определения компонентов таблеток представлены в табл. 7.3. Как видно из табл. 7.3 таблетки "Спазмоспардеин" при хранении в естественных условиях сохраняют стабильность в течение года. Дальнейшие наблюдения продолжаются.
Применение метода ВЭЖХ для определения показателя "Растворение" в таблетках Тлюферал"
Показатель качества "Растворение" является одним из важных для твердых дозированных лекарственных форм и регламентируется в соответствии с требованиями общей фармакопейной статьи "Растворение" 42-0003-00. Этот показатель характеризует динамику высвобождения действующих веществ из лекарственной формы, которая, с одной стороны определяет терапевтическую эффективность препарата, а с другой служит показателем, характеризующим стабильность ряда технологических параметров на производстве, позволяющих выпускать препараты, мало различающиеся по качеству от серии к серии.
Разработанная методика с применением метода ВЭЖХ позволяет быстро и с достаточной точностью определять содержание практически всех действующих веществ, входящих в состав таблеток "Глюферал", перешедших в раствор.
Несмотря на то, что фенобарбитал и бромизовал имеют низкую растворимость в воде, соотношение объема растворителя и содержания этих веществ в таблетке, а также температура растворителя позволяют добиться практически полного высвобождения этих веществ из лекарственной формы. В связи с этим, было решено в нормативную документацию включить тест "Растворение" с определением уровня высвобождения по трем основным действующим веществам: фенобарбиталу, бромизовалу и кофеин-бензоату натрия.
Методика. Определение показателя "Растворение" проводили на приборе, типа "вращающаяся корзинка". В качестве среды растворения использовали воду дистиллированную. Объем среды растворения 1000 мл, Температура 37 ± 1 С. Скорость вращения корзинки 100 об/мин.
В корзинку прибора помещают 1 таблетку, опускают корзинку в среду растворения и через 45 минут полученный раствор фильтруют в коническую колбу вместимостью 100 мл. 10 мл полученного фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем колбы до метки подвижной фазой и перемешивают. 20 мкл полученного раствора хроматографируют в условиях, описанных выше. Параллельно в тех же условиях хроматографируют раствор РСО, приготовленный как указано выше.
Полученные результаты показали, что высвобождение всех определяемых веществ из таблеток "Глюферал" находилось в пределах от 86 до 101 %, и ни в одном испытании результат высвобождения не опускался ниже 70 %. Таким образом, было установлено, несмотря на то что фенобарбитал и бромизовал мало растворимы в воде, соотношение количества этих веществ в таблетке и объема среды растворения, а также ее температуры позволяет проводить тест "Растворение" для этих веществ с достаточной точностью. В нормативную документацию было предложено ввести требования к нормам высвобождения в следующей редакции: "Количество каждого из растворенных компонентов за 45 минут должно составлять не менее 75% от номинального содержания"
Была исследована динамика высвобождения исследуемых компонентов из таблеток в описанных выше условиях. Для этого в процессе проведения теста "Растворение" из исследуемого раствора через каждые 5 минут отбирали пробы, которые анализировали с применением вышеописанной методики ВЭЖХ. Рассчитывали количество каждого вещества, перешедшее в раствор за промежуток времени. По полученным данным строили графики, характеризующие скорость высвобождения определяемых веществ.
Как видно на рис. 23.4 наибольшая скорость высвобождения наблюдается для кофеин-бензоата натрия. Уже в первые 10 минут его содержание в растворе достигает 72%. Но и остальные вещества имеют хорошую биодоступность. Через 20 минут содержание их в растворе достигает 70% и более.
В соответствии с требованиями ГФ XI таблетки, содержащие в своем составе действующие вещества в количестве 0,05 г и менее, должны тестироваться на однородность дозирования. Разработанная нами методика ВЭЖХ может быть применена для одновременного определения однородности дозирования кофеина-бензоата натрия и фенобарбитала, содержание которых в таблетках "Глюферал" значительно меньше 0,05 г .
Каждую из 10 отобранных таблеток помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл 50% смеси ацетонитрила с водой и обрабатывают на ультразвуковой бане до полного диспергирования таблеток. Затем раствор в колбе охлаждают, доводят до метки тем же растворителем и фильтруют. 2,5 мл полученного раствора помещают в колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки подвижной фазой.
Определяют содержание кофеина, фенобарбитала и бромизовала методом ВЭЖХ в условиях, описанных выше. Расчет (в % от номинального содержания) проводят по формуле: Со - концентрация стандартного вещества в растворе РСО, г/мл в - номинальное содержание определяемого вещества в таблетке.
