Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Фармакология
1.1.1. Фармакодинамика
1.1.2. Фармакокинетика
1.2. Токсикология 1.
1.3. Исследование биоэквивалентности на людях
Глава 2. Количественный анализ анастрозола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Глава 3. Фармакокинетика анастрозола после однократного перорального приема у мини-свиней
3.1. Тактика исследования
3.2. Расчёт фармакокинетических параметров и статистическая обработка полученных результатов
3.3. Фармакокинетические параметры анастрозола умини-свиней после однократного введения 2 мг
Глава 4. Фармакокинетика анастрозола после однократного перорального введения у собак
4.1. Тактика исследования
4.2. Расчёт фармакокинетических параметров и статистическая обработка полученных результатов
4.3. Фармакокинетические параметры анастрозола у собак после однократного введения 2 мг
Общие выводы
Список литературы
Приложение
- Фармакодинамика
- Количественный анализ анастрозола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
- Расчёт фармакокинетических параметров и статистическая обработка полученных результатов
- Расчёт фармакокинетических параметров и статистическая обработка полученных результатов
Введение к работе
Актуальность темы
Лекарственные средства занимают важное место в лечение злокачественных заболеваний. Насыщение фармацевтического рынка противоопухолевыми лекарственными средствами является весьма актуальной проблемой [52]. Появление в клинической практике эффективных и доступных лекарственных средств возможно осуществить с помощью дженериков, то есть препаратов, содержащих одно и то же лекарственное вещество в одинаковой дозе и в той же лекарственной форме, что и соответствующее оригинальное лекарственное средство, но выпускаемыми на разных производствах. Доступность дженерических лекарственных средств связана с упрощенной процедурой регистрации лекарственного средства, за счет отсутствия проведения ряда исследований, включая широкомасштабные клинические исследования. В связи с этим актуальной проблемой становится терапевтическая эквивалентность аналогов оригинальным препаратам. Оценка биоэквивалентности или фармакокинетической эквивалентности лекарственных средств, в настоящее время считается основным видом медико-биологического контроля качества дженериковых препаратов [6]. Эти исследования предполагают, что биоэквивалентные оригиналу дженериковые препараты обеспечивают одинаковую биодоступность лекарственного вещества, (то есть степень, в которой лекарственное средство всасывается в кровоток и скорость, с которой этот процесс происходит). Считается, что равная биодоступность двух лекарственных форм должна означать и терапевтическую эквивалентность. Большинство исследований биоэквивалентности проводится с участием здоровых людей, однако в соответствии с методическими указаниями по проведению качественных исследований биоэквивалентности лекарственных средств, если после однократного приема лекарственного средства высока вероятность возникновения серьезных побочных эффектов, исследования по биоэквивалентности могут быть заменены оценкой относительной биодоступности препарата на крупных лабораторных животных [Кукес В.Г. с соавт,
2004]. Использование различных видов животных может отразиться на результатах исследования, что диктует необходимость проведения сравнительного анализа фармакокинетических показателей для выявления наиболее оптимальной модели исследования.
В связи с предстоящим внедрением таблеток лекарственных средств-дженериков анастрозола в лечебную практику представляется актуальным изучение их фармакокинетики и относительной биодоступности, для чего необходима постановка воспроизводимой, чувствительной методики определения анастрозола в биологических жидкостях.
Все выше изложенное определило цель и задачи настоящего исследования.
Цель и задачи исследования Цель исследования: разработать методику определения анастрозола в плазме крови животных с последующим ее использованием в изучении сравнительной фармакокинетики и относительной биодоступности генерических таблеток анастрозола. Задачи исследования:
Исследовать хроматографическое поведение анастрозола и разработать методику хроматографического анализа анастрозола в растворах и плазме крови.
Определить фармакокинетические параметры анастрозола после однократного перорального приема таблеток Анастера.
Определить фармакокинетические параметры анастрозола после однократного перорального приема таблеток Веро-анастрозол.
Провести сравнительное изучение фармакокинетики препаратов Аримидекс и Анастера.
Провести сравнительное изучение фармакокинетики препаратов Аримидекс и Веро-анастрозол.
Определить относительную биодоступность дженерических препаратов анастрозола.
7. Сопоставить фармакокинетические параметры анастрозола, получаемые на различных видах животных с аналогичными параметрами у людей.
Научная новизна
Разработана высокочувствительная ВЭЖХ - методика определения анастрозола в плазме крови животных.
Впервые изучены фармакокинетические параметры и биоэквивалентность новых таблеток анастрозола Анестера и Веро-анастрозол.
Впервые проведен сравнительный анализ фармакокинетических показателей при исследовании биоэквивалентности препаратов анастрозола у двух видов животных (собаки, мини-свиньи) и людей.
Практическая значимость
На основании результатов изучения хроматографического поведения анастрозола выбраны оптимальные условия количественного определения анастрозола в плазме крови животных методом ВЭЖХ.
Определенны значения основных фармакокинетических параметров анастрозола после однократного приема новых дженерических таблеток Анестера и Веро-анастрозол. Для решения вопроса о разрешении медицинского применения препаратов Анестера и Веро-анастрозол показана их биоэквивалентность по отношению к препарату Аримидекс.
Внедрение в практику
Методика анализа анастрозола в плазме крови внедрена в Филиале «Клиническая фармакология» НЦ Биомедицинских технологий РАМН и Институте клинической фармакологии ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора.
По результатам изучения фармакокинетики и биоэквивалентности таблеток Веро-анастрозола и Анестера по-сравнению с препаратом Аримидекс составлены итоговые отчеты, представленные на утверждение в Росздравнадзор, с целью разрешения медицинского применения препаратов Анестера и Веро-анастрозол.
Апробация работы
Апробация работы проведена на совместной научно-практической конференции кафедр клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней и фармацевтической химии ММА имени И.М.Сеченова, Института клинической фармакологии ИЦ ЭСМП, филиала «Клиническая фармакология» НТТ Биомедицинских технологий РАМН.
Связь исследования с проблемным планом
Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным направлением кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней «Оптимизация фармакотерапии заболеваний внутренних органов посредством разработки рациональных методов контроля клинически значимых параметров фарма-кокинетики лекарственных средств» (номер государственной регистрации -01.206.110468).
Публикация результатов исследования
По результатам исследований опубликовано 3 печатных работы.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Методика количественного определения анастрозола в растворах и плаз
ме крови животных.
Результаты изучения фармакокинетики и относительной биодоступности таблеток Веро-анастрозол.
Результаты изучения фармакокинетики и относительной биодоступности таблеток Анестера.
Сравнение фармакокинетических параметров анастрозола у собак. Мини-свиней и людей.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 96 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы из 91 названия (84 из которых зарубежные). Работа иллюстрирована 34 рисунками и 13 таблицами.
Во введении раскрыта актуальность темы, определены цели и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость.
В первой главе, на основании анализа литературных данных, рассмотрены особенности фармакокинетики и фармакологического действия анастрозола; представлены методы анализа анастрозола; дана характеристика новых дженери-ческих таблеток анастрозола российского производства.
Вторая глава посвящена подбору хроматографических условий определения анастрозола, выбору условий изолирования анастрозола из плазмы крови собак и мини-свиней, оценке воспроизводимости и пригодности разработанной методики.
В третьей главе представлены результаты динамики концентрации, фарма-кокинетических параметров и относительной биодоступности препарата Веро-анастрозол после однократного перорального введения у животных по-сравнению с препаратом Аримидекс.
В четвертой главе представлены результаты фармакокинетического исследования и относительной биодоступности препарата Анестера у животных по-сравнению с препаратом Аримидекс.
В пятой главе обсуждаются данные по фармакокинетике анастрозола, полученные у животных (собаки, мини-свиньи) с ретроспективными данными у человека после однократного перорального приема анастрозола.
Результаты экспериментов обработаны статистически, обобщены в таблицах, проиллюстрированы графиками и рисунками.
Фармакодинамика
Анастрозол демонстрирует эффективность и избирательность в отношении ингибирования синтеза эстрогена как in vitro, так и in vivo [18, 53]. Анастрозол имеет высокий присущий ему потенциал in vitro и ингибирует плацентарную ароматазу человека в IC50 (концентрации, позволяющей подавить 50% активности) 15 нМ. В том же количественном определении он был в 200 раз действеннее, чем аминоглутетимид (АГ), в два раза действеннее, чем 4-ОНА (4-гидроксиандростендион), и на одну треть так же действенен, как фадрозол [21].
Количественное определение ингибирования ароматазы яичников крысы производилось с использованием эталонных ингибиторов ароматазы анастрозола, фадрозола, летрозола и CGS 18320В in vitro. У крысы преимущественным местом активности ароматазы является яичник. У половозрелых крыс яичники удалялись и гомогенизировались. Микросомы яичников крысы использовались как источник энзимов, поскольку исследования с разрушением эндокринных желез наиболее часто проводятся на этом виде. Активность ароматазы ингибировалась in vitro анастрозолом, фадрозолом, летрозолом и CGS 18320В при IC5oS 25, 7, 7 и 5 нМ соответственно. Это количественное определение, как оказалось, имеет хорошую чувствительность к ингибиторам ароматазы и может быть полезным как общее скрининговое исследование [26, 57, 59].
Изучалось действие анастрозола In vitro на некоторые CYP-энзимы, участвующие в метаболизме лекарственных средств (цитохром Р450) и находящиеся в печени человека. Микросомы печени человека инкубировались совместно с анастрозолом и субстратами пробы для CYP1A2 (фенацетина), CYP2A6 (кумарина), CYP2C9 (толбутамида), CYP2D6 (декстрометорфана), and CYP3A (нефедипина). Анастрозол не ингибировал деятельность CYP2A6 и CYP2D6 в концентрациях менее 500 мкМ, это соединение ингибировало деятельность CYP1A2, CYP2C9 и CYP3A со значениями Кі в 8, 10 и 10 мкМ соответственно. Хотя анастрозол может подавлять каталитическую деятельность, опосредованную CYP1A2 (ICso=30 мкМ), 2С9 (1С50=48 мкМ) и ЗА (1С50=27 мкМ), не предполагается, что это соединение приведет к клинически значимым взаимодействиям с другими лекарственными средствами, метаболизируемыми CYP, в физиологически релевантных концентрациях, достигаемых в ходе терапии 1 мг анастрозола [38].
У взрослых крыс пероральная доза 0,1 мг/кг анастрозола, получаемая на второй или третий день цикла, полностью блокировала овуляцию. В этом отношении он был в 200 раз действеннее АГ, но сравним по действенности с фадрозолом, несмотря на свою более низкую активность in vitro [24].
У крыс в пубертатный период пероральная доза 0,1 мг/кг, получаемая в течение 3 дней, полностью блокировала стимулируемое андростендионом образование матки. Это действие может быть приписано ингибированию нормального предовуляторного подъема синтеза фолликулярного эстрогена у взрослых самок и ингибированию метаболизма экзогенного андростендиона незрелыми яичниками самок в допубертатный период [48, 68].
Введение перорально 0,1 мг/кг анастрозола дважды в день свинохвостым макакам ингибировало периферическую ароматазу, тем самым снижая концентрации циркулирующего эстрадиола на 50-60% [69]. Избирательность действия Расщепление боковой цепочки холестерола
Отсутствуют свидетельства гипертрофии надпочечников или иных гистологических изменений надпочечников у крыс и собак, получавших 10 мг/кг анастрозола в течение 7-21 дня. Это показывает, что анастрозол не взаимодействует с действием холестерол 20,22-десмолазы in vivo при превышении в сто раз своей максимально эффективной ароматаза-ингибиторной дозы у крыс и обезьян [19, 66].
Анастрозол является слабым ингибитором ГТВ-гидроксилазы надпочечников жвачных животных in vitro (1С50 приблизительно 11,8 мкМ), не вызывает увеличения концентраций 11-дезоксикортикостерона (11-ДОК) у обезьян в дозе 3 мг/кг два раза в день, и не вызывает ни гипокалиемии, ни гипертрофии надпочечников у собак в дозе 10 мг/кг. Таким образом запас избирательности анастрозола для 11-гидроксилазы является по крайней мере 30-кратным у обезьян и 100-кратньгм у собак [66].
Ингибирование этого энзима ведет непосредственно к снижению синтеза альдостерона. Чтобы оценить прямое действие на 18-гидроксилирование, изучалось действие однократно большой дозы на уровни альдостерона в плазме, через 2 часа после введения дозы. Пероральные дозы до 20 мг/кг анастрозола незначительно изменяли концентрации альдостерона в плазме у самцов крыс, что показывает по крайней мере 200-кратныИ запас избирательности [22, 42].
Анастрозол (10 мг/кг) не оказывал действия на экскрецию натрия или калия у крыс. Поскольку такое действие может проистекать от сопутствующего ингибирования 11- и 18-гидроксилирования другими ингибиторами ароматазы, отсутствие такого действия при введении анастрозола подкрепляет его продемонстрированную избирательность действия [9, 46]. В дозе 1 мг/кг анастрозол не оказывает никакого фармакологического действия вне своей предназначенной терапевтической области. В дозе 10 мг/кг анастрозол вызывает небольшое снижение кровяного давления и сокращение интервала Q электрокардиограммы у собак, а также небольшое подавление задержанной реакции гиперчувствительности у мышей в сознании [43,52].
С целью демонстрации противоопухолевого действия in vivo была создана модель на животных для изучения ингибиторов ароматазы. Эта модель на животных (на мышах) имитирует пациентов, страдающих раком груди в постменопаузе, имеющих эстроген-зависимые опухоли. В модели используются клетки эстроген-зависимого рака груди человека с внедренным геном ароматазы (MCF-7(CA)), которые вводятся подкожно в матригеле бестимусным мышам с удаленными яичниками. Эстрогенположительные клетки производят путем ароматизации достаточное количество эстрогена для стимуляции своей пролиферации и формирования опухолей у мышей [54, 55].
Действие антиэстрогенов, тамоксифена и фаслодекса, а также ингибиторов ароматазы, анатрозола и летрозола на рост опухолей изучалось на бестимусных мышах. В этой модели клетки эстроген-зависим ого рака груди человека MCF-7 с устойчиво внедренным геном ароматазы были привиты каждой мыши в четыре точки. Клетками производится достаточное количество эстрогена путем ароматизации добавки андростендиона (0,1 мг/мышь/день) для стимуляции своей пролиферации, формирования опухоли и сохранения матки, похожей на матку нетронутых мышей.
Количественный анализ анастрозола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
В настоящее время метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) получил широкое распространение в медицине и фармации. Он включен в виде общих статей или их разделов в Фармакопею США, Британскую Фармакопею, Международную Фармакопею, Государственную Фармакопею СССР XI-го издания. Метод ВЭЖХ незаменим при количественном определении препаратов в биологических жидкостях.
В нашей работе использован высокоэффективный жидкостной хроматограф "Gilson" (Франция) с УФ-спектрофотометрическим детектором с переменной длиной волны, оборудованный петлей ввода на 100 мкл и оснащенный компьютерной программой обработки данных «702». Разработка методики количественного определения любого лекарственного препарата в биологической жидкости методом ВЭЖХ включает в себя: - выбор типа детектора и условий детектирования; - подбор хроматографической колонки и условий разделения на ней; - подбор условий изолирования; - выбор метода количественного анализа. Спектрофотометрические детекторы, получившие наиболее широкое распространение, позволяют с высокой чувствительностью обнаруживать вещества, поглощающие свет в области от 100 до_600 нм, и обладают достаточной стабильностью по отношению к изменениям скорости потока элюента и температуры. Широкий диапазон измерений даёт возможность определять как большие, так и следовые количества препаратов. УФ-спектрофотометрические детекторы позволяют проводить измерения либо в максимуме полосы поглощения, либо при длине волны, обеспечивающей максимальную селективность.
УФ-спектры анастрозола характеризуются чётко выраженными максимумами при 215 нм, поэтому в нашей работе мы проводили определение при данной длине волны. При выборе типа колонки мы учитывали физико-химические свойства анастрозола, а также тот факт, что анализ фармацевтических препаратов методом ВЭЖХ чаще проводится с применением обращено-фазных сорбентов, основным из которых является сорбент на основе силикагеля. Это обусловлено тем, что, меняя состав элюента (обычно путем изменения содержания воды), можно добиться кардинального изменения картины элюирования. Кроме того, силикагель обладает большой устойчивостью к высокому давлению. Нами была выбрана обращено-фазная хроматографическая колонка: LC-18-OB 4,5 150 (Россия).
Подбор условий разделения на колонке включал в себя выбор оптимального состава подвижной фазы и скорости потока элюента. При подборе состава элюента мы исходили из соображений наилучшего отделения пика анастрозола от пиков соэкстрактивных веществ, а также доступности растворителей для фармацевтического анализа, простоты и быстроты приготовления подвижной фазы. При выборе подвижной фазы использовали элюенты разного состава и соотношения: метанол - вода, ацетонотрил - фосфатный буфер, метанол - дигидрофосфатный буфер, ацетонитрл - дигидрофосфатный буфер.
Результаты исследования показали, что при использовании колонки LC-18-OB 4,5 150, оптимальное разделение исследуемых веществ наблюдается в подвижной фазе состава: ацетонитрил и 0,01 М раствор КН2РО4 в объёмном соотношении 27:73. Подвижную фазу перед использованием дегазировали под вакуумом. Разделение проводили при комнатной температуре.
Скорость потока мобильной фазы выбирали исходя из времени анализа и давления на хроматографической колонке, которое не должно превышать 3000 psi. Оптимальной по указанным параметрам была скорость потока элюента 1 мл/мин. Изолирование анастрозола из плазмы крови проводили методом жид-кофазной экстракции. В качестве органического экстрагента использовали дихлорметан. Для подбора условий разделения и калибровки прибора использовали образец субстанции анастрозола. Количественный анализ анастрозола проводили методом абсолютной калибровки. С этой целью строили калибровочный график зависимости площади хроматографического пика анастрозола от количества препарата в пробе. Уравнение регрессии имело вид: у = а + Ьх, где у - концентрация анастрозола (нг/мл), х - площадь хроматографического пика анастрозола.
Таким образом нами были подобраны следующие условия анализа анастрозола в крови животных. Экстракция. К 1 мл плазмы добавляли 5 мл дихлорметана, экстрагировали при энергичном встряхивании 10 минут, затем центрифугировали 10 минут при 4500 об/мин. Органический слой переносили в колбы для упаривания и упаривали досуха под вакуумом. К сухому остатку добавляли 250 мкл подвижной фазы, фильтровали и аликвоту (100 мкл) использовали для хромато-графирования. Хроматографический анализ. Анализ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе "Gilson" с УФ-спектрофотометрическим детектором с переменной длинной волны при длине волны 215 нм. Использовалась хроматографическая колонка LC-18-OB 4,5 150. Элюирование проводили подвижной .фазой состава: ацетонитрил - 0,01 М КН2Р04 в соотношении 27-73. Подвижную фазу перед использованием дегазировали под вакуумом. Скорость элюирования составляла 1,0 мл/мин. Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки по высоте пиков. Калибровочная зависимость в диапазоне концентра-ций 10 - 200 нг/мл носила линейный характер (у = -2,02708 + 2,159638 х; г" = 0,9987). Из полученного уравнения видно, что точка пересечения калибровочного графика с осью "у" практически совпадает с точкой "0", а коэффициент корреляции близок к 1. Таким образом, данная методика отвечает основным требованиям, предъявляемым к аналитическим методам. На рисунке 2 приведен образец хроматограммы анастрозола. Достоверность результатов количественного определения анастрозола оценивали, рассчитывая метрологические характеристики данной методики по результатам 6 параллельных измерений концентрации трех растворов анастрозола. Произведенные измерения и расчеты показывают, что относительная погрешность среднего результата составляет не более 7,9 %. Разработанная методика количественного определения анастрозола свободна от систематических ошибок.
Расчёт фармакокинетических параметров и статистическая обработка полученных результатов
Фармакокинетические параметры анастрозола, характеризующие его биодоступность были рассчитаны модельно-независимым методом статистических моментов с помощью программы M-IND для персонального компьютера.
Рассчитывали следующие внемодельные параметры: максимальную концентрацию анастрозола в плазме крови Стах, время её достижения Ттач, площадь под фармакокинетической кривой AUC0.f Рассчитывали также отношение максимальной концентрации к площади под фармакокинетической кривой Cmax/AUC0 (как характеристику скорости всасывания).
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью программы "Systat w5" для персонального компьютера, рассчитывая среднее арифметическое значение (Mean), среднее геометрическое значение (Geom Mean), стандартное отклонение среднего результата (SD), медиану (Median). Оценку достоверности различий между парными и независимыми выборками проводили с использованием t-критерия Стьюдента с помощью программы EXCEL. Различия считались достоверными при р 0,05. 3.3. Фармакокинетические параметры анастрозола у мини-свиней после однократного введения 2 мг в Динамика индивидуальных значений концентрации анастрозола в плазме крови животных после однократного перорального введения таблеток Ве-ро-анастрозол ("Верофарм", Россия) в дозе 2 мг представлена в таблице 3. Графики индивидуальных фармакокинетических кривых представлены на рисунке 3, а усреднённая фармакокинетическая кривая - на рисунках 5 и 6.
Из приведенных данных следует, что пик концентрации анастрозола (74,8 нг/мл) достигался через 2 часа после приёма препарата. Затем концентрация анастрозола снижалась, и через 48 часов после приёма препарат обнаруживался в плазме крови животных в незначительном количестве 4,5 нг/мл (при этом у 2 животных препарат не обнаружен). Обращает на себя внимание значительный разброс индивидуальных значений концентрации (CV=40-71%). Фармакокинетические параметры анастрозола после однократного перорального введения таблеток Веро-анастрозол представлены в таблице 4. Из представленных данных следует, что максимальная концентрация составила 77,6+42,1 нг/мл, время её достижения - 2,1+0,2 ч, площадь под фармакокинетической кривой - 882,3+375,5 нг ч/мл. « Динамика индивидуальных значений концентрации анастрозола в плазме крови животных после однократного приёма 2 таблеток Аримидекс ("Ас-траЗенека ЮК Лимитед", Великобритания) в дозе 2 мг представлена в таблице 5. Индивидуальные фармакокинетические кривые животных представлены на рисунке 4, а усреднённая фармакокинетическая кривая - на рисунках 5 и 6.
Из представленных данных следует, что после приёма этой лекарственной формы пик концентрации анастрозола (71,6 нг/мл) наблюдался через 2 часа после приёма препарата. Затем его концентрация в плазме крови жи вотных снижалась и через 48 часов после приёма составляла 4,2 нг/мл (при этом у 3 животных препарат не обнаружен). Анализируя индивидуальные значения концентрации анастрозола необходимо отметить значительный разброс (CV= 30-82). Фармакокинетические параметры анастрозола после однократного приёма таблеток Аримидекс (2 мг) представлены в таблице 6. Из приведённых данных видно, что максимальная концентрация препарата в плазме крови составила 80,4+30,0 нг/мл, время её достижения — 2,3+0,3 ч, площадь под фармакокинетической кривой — 907,2+323,1 нг ч/мл. Из приведённых данных, очевидно, что фармакокинетические кривые препаратов Веро-анастрозол и Аримидекс практически совпадают, средние значения концентрации анастрозола в плазме крови животных для каждого момента времени статистически достоверно не различаются.
Результаты расчётов фармакокинетических параметров Веро-анастрозола и Аримидекса показали, что значения фармакокинетических параметров двух изучаемых препаратов статистически достоверно не различаются.
Параметры относительной биодоступности анастрозола после однократного введения мини-свиньям 2,0 мг таблетированных лекарственных форм Веро-анастрозол и Аримидекс, содержащих 1,0 мг препарата, представлены в таблице 7.
Из приведенных данных видно, что индивидуальные значения относительной степени всасывания (Г) препарата Веро-анастрозол по сравнению с прапаратом Аримидекс у всех животных колеблются в диапазоне 84-128 %. Обращает на себя внимание незначительный разброс индивидуальных значений относительной степени всасывания (CV =13 %). Среднее значение относительной биодоступности препарата Веро-анастрозол по отношению к препарату Армимидекс составляет 96 :Н),13 %, то есть находится в допустимом интервале (90-110%). Индивидуальные значения f" препарата Веро-анастрозол по сравнению с препаратом Аримидекс у всех животных колеблются в диапазоне 81-114%. Имеет место умеренный индивидуальный разброс значений f (CV = 27 %). Среднее значение f препарата Веро-анастрозол по отношению к препарату Аримидекс составляет 94 ±_25 %, то есть находится в допустимом интервале (85-115%).
Значения отношений максимальной концентрации к площади под фар-макокинетической кривой Cmax/AUCo Для препаратов Веро-анастрозол и Аримидекс статистически достоверно не различаются и составляют в среднем 0,089+0,009 и 0,092+0,008 соответственно, а индивидуальный разброс значений невелик (CV = 28-36 %). Значения Ттйх для тестируемого препарата и препарата сравнения также статистически достоверно не различаются. Приведённые данные свидетельствуют о том, что скорости всасывания ана-строзола из таблеток Веро-анастрозол и Аримидекс статистически достоверно не различаются.
Таким образом, из результатов настоящего исследования относительной биологической доступности двух препаратов, показано, что испытуемый препарат Веро-анастрозол производства "Верофарм", Россия, содержащий 1 мг анастрозола в одной таблетке, является биоэквивалентным на мини-свиньях препарату сравнения Аримидекс фирмы "АстраЗенека ЮК Лими-тед", Великобритания, содержащему 1 мг анастрозола в одной таблетке.
Расчёт фармакокинетических параметров и статистическая обработка полученных результатов
Фармакокинетические параметры анастрозола были рассчитаны мо-дельно-независимым методом статистических моментов с помощью программы M-IND для персонального компьютера.
Рассчитывали следующие внемодельные параметры: максимальную концентрацию анастрозола в плазме крови Стах, время её достижения Ттах, площадь под фармакокинетической кривой AUCo- Рассчитывали также от- ношение максимальной концентрации к площади под фармакокинетической кривой Cmax/AUCo (как характеристику скорости всасывания).
Для изучения относительной биодоступности (биоэквивалентности) препаратов рассчитывали достоверность различий между значениями Ттах для тестируемого препарата и препарата сравнения, относительную степень всасывания f, а также Г . Относительную степень всасывания препарата рассчитывали по- формуле: f =AUC0.t (Т) /AUCo (ер) 100%, где AUCo (T)- площадь под фармакокинетической кривой для тестируемого препарата - Анастера; AUCo (сР) - площадь под фармакокинетической кривой для препарата сравнения - Аримидекс. f -Cmax (T)/Cmax(cp, 100%, ГДЄ Стах (Т) - максимальная концентрация тестируемого препарата — Анастера; Стах (Ср) - максимальная концентрация препарата сравнения - Аримидекс. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью программы "Systat w5" для персонального компьютера, рассчитывая среднее арифметическое значение (Mean), среднее геометрическое значение (Geom Mean), стандартное отклонение среднего результата (SD), медиану (Median). Оценку достоверности различий между парными и независимыми выборками проводили с использованием t-критерия Стьюдента с помощью программы EXCEL. Различия считались достоверными при р 0,05.
Динамика индивидуальных значений концентрации анастрозола в плазме крови животных после однократного перорального введения таблеток Анастера ("Лаборатория ТЮТОР С.А.С.И.Ф.И.А. произведено Блипак С.А., Аргентина", Россия) в дозе 2 мг представлена в таблице 9. Графики индивидуальных фармакокинетических кривых представлены на рисунке 7, а усреднённая фармакокинетическая кривая - на рисунках 9 и 10. Из приведенных данных следует, что пик концентрации анастрозола (130,7 нг/мл) достигался через 2 часа после приёма препарата. Затем концентрация анастрозола снижалась, и через 48 часов после введения препарат все еще обнаруживался в плазме крови животных - около 20,1 нг/мл. Обращает на себя внимание большой разброс индивидуальных значений концентрации анастрозола (CV до 65 %). Фармакокинетические параметры анастрозола после однократного перорального введения таблеток Анастера в дозе 2 мг представлены в таблице 10. Из представленных данных следует, что максимальная концентрация составила 139,3 ±_20,7 нг/мл, время её достижения - 2,3 :L0,3 ч, площадь под фармакокинетической кривой - 2195,7 + 329,0 нг ч/мл. Динамика индивидуальных значений концентрации анастрозола в плазме крови животных после однократного перорального введения 2 таблеток Аримидекс ("АстраЗенека ЮК Лимитед", Великобритания) в дозе 2 мг представлена в таблице 11. Индивидуальные фармакокинетические кривые животных представлены на рисунке 8, а усреднённая фармакокинетическая кривая - на рисунках 9 и 10.
Из представленных данных следует, что после приёма этой лекарственной формы пик концентрации (71,6 нг/мл) наблюдался через 2 часа после приёма препарата. Затем его концентрация в плазме крови собак снижалась и через 48 часов после приёма составляла 4,2 нг/мл (при этом у 3 животных препарат не обнаружен). Анализируя индивидуальные значения концентрации анастрозола необходимо отметить значительный разброс (CV до 82 %). Фармакокинетические параметры анастрозола после однократного пе-рорального введения таблеток Аримидекс (2 мг) представлены в таблице 12. Из приведённых данных видно, что максимальная концентрация препарата в плазме крови составила 137,4 + 21,5 нг/мл, время её достижения -2,1 + 0,2 ч, площадь под фармакокинетической кривой - 2210,8 + 302,4 нг ч/мл. Из полученных результатов, очевидно, что фармакокинетические кривые препаратов Анастера и Аримидекс практически совпадают, средние значения концентрации анастрозола в плазме крови животных для каждого момента времени статистически достоверно не различаются. Значения фармакокинетических параметров двух изучаемых препаратов также статистически достоверно не различаются. Параметры относительной биодоступности анастрозола после однократного перорального введения 2,0 мг таблетированных лекарственных форм Анастера и Аримидекс, содержащих по 1,0 мг препарата, представлены в таблице 12. Из приведенных данных видно, что индивидуальные значения относительной степени всасывания (f) препарата Анастера по сравнению с препаратом Аримидекс у всех животных колеблются в диапазоне 84 — 128 %. Обращает на себя внимание незначительный разброс индивидуальных значений относительной степени всасывания (CV =13 %). Среднее значение относительной биодоступности препарата Анастера по отношению к препарату Аримидекс составляет 96+13 %, то есть находится в допустимом интервале (90-100%). Индивидуальные значения f препарата Анастера по сравнению с препаратом Аримидекс у всех животных колеблются в диапазоне 66 - 140 %. Имеет место умеренный индивидуальный разброс значений максимальной степени всасывания (CV = 27 %). Среднее значение f препарата Анастера по отношению к препарату Аримидекс составляет 94 +_25 %, то есть находится в допустимом интервале (85-115%).
Значения отношений максимальной концентрации к площади под фар-макокинетической кривой Cmax/AUC0 для препаратов Анастера и Аримидекс статистически достоверно не различаются и составляют в среднем 0,089 + 0,009 и 0,092 + 0,008 соответственно, а индивидуальный разброс значений невелик (CV = 28-36 %). Различия между значениями Tmd4 для тестируемого препарата и препарата сравнения статистически недостоверны. Полученые данные свидетельствуют о том, что скорости всасывания анастрозола из таблеток Анастера и Аримидекс статистически достоверно не различаются.
Таким образом, из результатов настоящего исследования относительной биологической доступности двух препаратов, очевидно, что испытуемый препарат Анастера производства "Лаборатория ТЮТОР С.А.С.И.Ф.И.А. произведено Блипак С.А., Аргентина", содержащий 1 мг анастрозола в одной таблетке, является биоэквивалентным у собак препарату сравнения Аримидекс фирмы "АстраЗенека ЮК Лимитед", Великобритания, также содержащему 1 мг анастрозола в одной таблетке.
