Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Проблема обеспечения чистоты химико-фармацевтического производства (обзор литературы) 11
1.1. Современные требования к качеству лекарственных средств 11
1.2. Перекрестное загрязнение лекарственных средств и чистота фармацевтического производства: подходы по стандартизации и унификации 15
1.3. Аналитические методы определения лекарственных веществ при проведении фармацевтического контроля 28
ГЛАВА 2. Экспериментальная часть 39
2.1. Оборудование и аппаратура 39
2.2. Материалы, реактивы и объекты анализа 40
2.3. Методы и техника эксперимента 42
Глава 3. Разработка хроматографических методов контроля чистоты оборудования производства ряда химиотерапевтических, анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств 47
3.1. Разработка способов пробоотбора и пробоподготовки анализируемых компонентов при контроле чистоты оборудования .48
3.2. Выбор условий разделения некоторых анальгезирующих, противовоспалительных и антимикробных лекарственных веществ в обращенно-фазной ВЭЖХ 57
3.3. Аналитические характеристики ВЭЖХ определения некоторых анальгезирующих, противовоспалительных и антимикробных лекарственных веществ з
ГЛАВА 4. Разработка оптических методов контроля чистоты оборудования производства ряда антимикробных, анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств 72
4.1. Применение 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана как аналитического реагента для определения аминосодержащих лекарственных веществ и токсичных примесей в них 73
4.2. Спектрофотометрическое определение лекарственных веществ в смывах с оборудования 88
4.3. Контроль лекарственных веществ в смывах с оборудования методами рефрактометрии и поляриметрии 92
ГЛАВА 5. Валидация процесса очистки оборудования химико-фармацевтического производства 96
5.1. Разработка подходов по валидации процесса очистки оборудования 95
5.2. Разработка программы валидации и оценка валидационных параметров 101
Выводы 112
Литература
- Перекрестное загрязнение лекарственных средств и чистота фармацевтического производства: подходы по стандартизации и унификации
- Материалы, реактивы и объекты анализа
- Выбор условий разделения некоторых анальгезирующих, противовоспалительных и антимикробных лекарственных веществ в обращенно-фазной ВЭЖХ
- Спектрофотометрическое определение лекарственных веществ в смывах с оборудования
Введение к работе
Актуальность работы. Основные принципы обеспечения качества и контроля качества взаимосвязаны и имеют первостепенное значение в организации производства лекарственных средств (ЛС). Эта проблема является комплексной и ее решение требует реализации всех мер, направленных на достижение заданных требований к качеству ЛС.
В настоящее время в мировой практике одним из важнейших документов, определяющих требования к производству и контролю качества ЛС для человека и животных, являются «Правила производства ЛС» - «Good Manufacturing Practice for Medicinal Products (GMP)». Это означает, что условием обеспечения качества ЛС является их производство в соответствии с правилами GMP.
В основных требованиях GMP, предъявляемых к производству ЛС, является предотвращение их перекрестного загрязнения. ЛС могут быть загрязнены другими препаратами или активными фармацевтическими субстанциями, моющими или дезинфицирующими средствами, микроорганизмами, частицами пыли, смазочными материалами, вспомогательными веществами, промежуточной продукцией и др. В тоже время во многих случаях при производстве различных препаратов используется одно и то же оборудование. Поэтому для предотвращения контаминации каждого последующего препарата предыдущим или предыдущей серией того же наименования очень важным является проведение эффективной процедуры очистки оборудования, с обязательной оценкой степени его чистоты.
Все это обуславливает необходимость разработки более совершенных методов анализа лекарственных веществ (ЛВ) и вспомогательных компонентов технологических смесей для контроля перекрестного загрязнения готовой продукции, чистоты помещений и оборудования химико-фармацевтического производства. При этом сложный состав анализируемых матриц особенно при низких содержаниях ЛВ требует использования избирательных и чувствительных методов их определения. В то же время не менее значимым является требование высокой производительности, надежности и возможности получения большого объема аналитической информации при проведении фармацевтического анализа в производственных условиях. Таким требованиям удовлетворяют хроматографические и оптические методы анализа, которые все более широко используются в аналитической практике контроля процессов химико-фармацевтического производства.
В связи с этим разработку новых высокочувствительных, экспрессных и достаточно экономичных методов химического контроля чистоты поверхности фармацевтического оборудования следует считать актуальной проблемой. Ее решение позволит в полной мере реализовать требования GMP к производству ЛС и отсюда усовершенствовать систему валидации процесса очистки оборудования. Оценка ее ключевыми валидационными параметрами является основой для установления критериев приемлемости результатов контроля внутрипроизводственных процессов химико-фармацевтического производства. Именно поэтому совершенствование путей стандартизации и контроля качества ЛС, обеспечивающих их эффективность и безопасность применения, требует соответствующей разработки, унификации и валидации методов анализа ЛC на этапах их создания, производства и потребления.
Диссертационная работа выполнялась при поддержке Гранта Президента Российской Федерации (МД-2523.2008.3).
Цель работы состояла в создании комплекса высокочувствительных, избирательных и экспрессных способов химического контроля чистоты оборудования фармацевтического производства на примере ряда анальгезирующих, противовоспалительных и антимикробных лекарственных средств при использовании хроматографических и оптических методов анализа, а также разработке подходов к валидации процесса очистки оборудования.
Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:
- разработать способы и найти рабочие условия пробоотбора анализируемых компонентов при контроле чистоты оборудования, провести стандартизацию и унификацию самих процедур пробоотбора и подготовки образцов;
- обосновать условия ВЭЖХ разделения со спектрофотометрическим детектированием определяемых веществ и аналитические характеристики методик определения некоторых ЛВ анальгезирующего, противовоспалительного и антимикробного действия;
- изучить факторы, обеспечивающие чувствительность и избирательность определений ЛВ в смывах с технологического оборудования методами спектрофотометрии, рефрактометрии и поляриметрии, и обосновать выбор рабочих условий определения исследуемых веществ при проведении контроля чистоты химико-фармацевтических производств;
- оценить влияние компонентов анализируемой матрицы на регистрируемый аналитический сигнал и установить метрологические характеристики разработанных способов для подтверждения их соответствия требованиям, принятым для фармацевтического анализа;
- разработать подходы к валидации процесса очистки оборудования, программы валидации и провести оценку валидационных параметров.
Научная новизна:
- найдены и обоснованы условия пробоотбора ЛВ анальгезирующего, противовоспалительного и антимикробного действия методом мазков, смывов и их пробоподготовки при контроле чистоты оборудования;
- установлены условия ВЭЖХ определения метамизола натрия, нурофена, ортофена, аскорбиновой, салициловой и ацетилсалициловой кислот, метронидазола, празиквантела, цефалоспоринов, ципрофлоксацина, парацетамола, хлорфенирамина, фенилэфрина, кофеина при использовании доступных подвижных фаз на сорбентах типа С18;
- обоснованы рабочие условия чувствительного и избирательного спектрофотометрического определения сульфаниламидов, производных 4-аминобензойной кислоты, 4-аминофенола в смывах с технологического оборудования в виде окрашенных производных с 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксаном;
- найдены условия рефрактометрического и поляриметрического определения метамизола натрия, нурофена, аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот; разработана методика количественного определения этих веществ в смывах с оборудования и показана возможность ее использования для экспрессного внутрипроизводственного контроля;
- разработана программа валидации процесса очистки оборудования и обосновано ее использование во внутрипроизводственном контроле химико-фармацевтического производства.
Практическая значимость. Разработаны экспрессные и чувствительные методики хроматографического, спектрофотометрического, рефрактометрического, поляриметрического определения и способы пробоотбора ряда ЛВ химиотерапевтического, противовоспалительного и анальгезирующего действия в смывах с оборудования химико-фармацевтического производства.
Предложенные способы аналитического контроля могут быть использованы в процедуре валидации процесса очистки технологического оборудования и рекомендованы для применения на химико-фармацевтических производствах. Разработанные подходы позволяют повысить эффективность обеспечения чистоты фармацевтического производства в соответствии со стандартами GMP.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены на ОАО «Татхимфармпрепараты» (г. Казань), ЗАО «Интелфарм» (г. Чкаловск Нижегородской обл.) и в учебный процесс ГОУ ВПО «Казанский государственный технологический университет» в дисциплине «Контроль качества лекарственных препаратов».
На защиту выносится:
- способы пробоотбора ЛВ анальгезирующего, противовоспалительного и антимикробного действия методом мазков, смывов и их пробоподготовки при контроле чистоты оборудования;
- результаты исследований по хроматографическому разделению метамизола натрия, нурофена, ортофена, аскорбиновой, салициловой и ацетилсалициловой кислот, метронидазола, празиквантела, цефалоспоринов, ципрофлоксацина, парацетамола, кофеина в условиях обращено-фазной ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием;
- результаты изучения реакций сульфаниламидов, производных 4-аминобензойной кислоты и 4-аминофенола с аналитическим реагентом 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксаном, а также обоснование рабочих условий чувствительного и избирательного их спектрофотометрического определения в смывах с технологического оборудования;
- условия экспрессного количественного рефрактометрического и поляриметрического определения метамизола натрия, нурофена, аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот в смывах с оборудования;
- применение предложенного алгоритма по валидации процесса очистки оборудования на основе разработанных методик и установление критериев приемлемости на примере оборудования при производстве некоторых ЛС анальгезирующего, противовоспалительного и антимикробного действия;
- результаты исследования метрологических и валидационных характеристик разработанных способов определения, полученные путем обработки экспериментального материала, подтверждающие их соответствие требованиям, принятым для фармацевтических методов анализа.
Апробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007), XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), Всероссийской конференции «Химический анализ» (Москва, 2008), II Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2008), Всероссийской конференции «Теория и практика хроматографии. Хроматография и нанотехнологии» (Самара, 2009); III Всероссийской конференции «Аналитика России» (Краснодар, 2009); I Всероссийской конференции «Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции» (Москва, 2009), 65-ой Всероссийской конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2010), Всероссийской конференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез» (Краснодар, 2010).
Публикации: по материалам диссертации опубликовано 6 статей и 9 тезисов докладов.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, указателя литературы, включающего 173 источника. Работа изложена на 131 странице машинописного текста, иллюстрирована 23 рисунками, 24 таблицами.
Перекрестное загрязнение лекарственных средств и чистота фармацевтического производства: подходы по стандартизации и унификации
В большинстве стран лекарственный рынок регулируется государством. Всесторонняя оценка терапевтической или профилактической ценности ЛС, т.е. их эффективности и относительной безопасности (безвредности), проводится в отношении новых препаратов до начала их полномасштабного коммерческого производства [1]. Приемлемость же серийной продукции проверяется по показателям качества, т.е. по косвенным характеристикам, изложенным в фармакопейных или иных официальных стандартах. В отношении других потребительских товаров проверка приемлемости серийной продукции связана, хотя бы частично, с прямым определением потребительских свойств.
Приобретая лекарство, потребитель чаще всего не может защитить себя от потенциально опасного для здоровья и жизни товара, если таковой ему будет предложен. Он практически лишен возможности выбрать из имеющихся в продаже аналогичных товаров оптимальный для себя вариант по соотношению качество/цена. Во многих случаях он также не может и воздержаться от покупки, если не находит подходящий по этому показателю товар.
Поскольку основной вид контроля качества ЛС - разрушающий, крайне редко используется сортировка на основе 100% проверки сомнительных по качеству серий (партий) с удалением бракованных единиц продукции. По этой причине не только потребитель, но и производитель заинтересованы в том, чтобы исключить или хотя бы свести к минимуму вероятность изготовления некачественных ЛС [2].
Исходя из этих соображений во всех странах, имеющих дееспособные государственные органы здравоохранения, лекарственный рынок регулируется, прежде всего с целью обеспечить безопасность и эффективность обращающихся на нем препаратов, а также приемлемый уровень их качества.
В последние десятилетия содержание понятия "Качество фармацевтических продуктов" расширилось. Если раньше оно сводилось, в основном, к соответствию фармакопейным или иным официальным стандартам, то в настоящее время под качеством фармацевтических продуктов понимают их соответствие всем условиям регистрации по прописи, условиям изготовления (технология, производственная площадка, кадры) и свойствам. Лишь в этом случае можно рассчитывать на то, что каждое ЛС вызовет предсказуемый терапевтический или профилактический эффект [3,4].
Очевидно, следует также остановиться на различиях между понятиями "Обеспечение качества", которое лишь сравнительно недавно начало входить в обиход работников отечественного фармацевтического сектора, и более привычным "Контроль качества". "Обеспечение качества", полностью включая в себя понятие "Контроль качества" в виде одного, не самого главного компонента, нацелено на профилактику дефектов на основе комплексного подхода, и потому обращено в основном в будущее.
Высокое качество ЛС подразумевает: высокую химическую чистоту действующего вещества; точное соответствие содержания действующего вещества заявленному; высокое качество и безопасность дополнительных ингредиентов, служащих для правильного введения действующего вещества в организм; качество упаковки, соответствие реальной и заявленной даты производства, правильность транспортировки и хранения [5].
Согласно современным представлениям, необходимые потребительские свойства фармацевтических продуктов (качество, эффективность, безопасность) создаются в ходе их разработки и испытаний, поддерживаются в процессе серийного производства, а также государственного инспектирования. На каждом этапе создания, изготовления и распределения лекарств принимаются меры по недопущению ошибок и отклонений в работе, которые могут отрицательно повлиять на качество. Таким образом, можно говорить о цепочке обеспечения качества, охватывающей весь жизненный цикл лекарственного продукта, сутью которой является непрерывность.
Неотъемлемый элемент разработки эффективной системы обеспечения качества любой продукции — четкое и всестороннее определение их общих и специфических характеристик. Можно предложить структуру понятия «качество ЛС», включающая в себя фундаментальную и прикладную составляющую (рис. 1.1) [1].
Материалы, реактивы и объекты анализа
Часто в качестве реагента при СФЛ определениях аминосодержащих ЛВ часто используют о-фталевый альдегид [104,105]. Для получения других флуоресцирующих производных ЛВ можно использовать реакции их окисления и комплексообразования. При проведении этих реакций важно соблюдение условий и времени контакта реагирующих веществ, так как процесс окисления может сопровождаться деструкцией других соединений. Для СФЛ определения аминов различной степени замещения предложено использовать несколько реакций получения производных. Дериватизацию первичных аминов проводят о-фталевым альдегидом и 2-меркаптоэтанолом. Вторичные амины определяются в виде производных 7-хлор-4-нитробензо-2-окса-1,3-диазола, устраняя мешающее действие первичных аминов реакцией с о-фталевым альдегидом. Третичные амины определяют по их каталитическому эффекту на реакцию уксусного ангидрида с малоновой кислотой [106].
Перспективным способом расширения возможностей определения ЛВ служит фотохимическая дериватизация веществ. Она, вызывая появление разнообразных продуктов фотохимических превращений определяемого вещества, приводит к появлению или резкому возрастанию интенсивности регистрируемого сигнала. В качестве примера можно привести образование окрашенного продукта реакции эргоновина малеината с п-диметиламинобензальдегидом и Fe + в кислой среде [107], флуоресцирующего производного алколоида эметина в присутствии пероксида бария [108]. ПрО производных ЛВ можно улучшить при использовании химической реакции для возбуждения флуоресценции вместо УФ-облучения. Например, хемилюминесценция (ХЛ) производных адреналина регистрируется при его окислении щелочной среде, содержащей мицеллы ПАВ и ионы марганца (II) в качестве катализатора [109]. В других случаях используют ингибирующее влияние ЛВ на ХЛ. Описано определение прометазина с ПрО менее нмоль, основанное на его ингибирующем влиянии на реакцию щелочного окисления люминола действием пероксида водорода в присутствии Сг(Ш) в качестве катализатора [ПО]. Заслуживает интереса работа [111], в которой описано определение изониазида в препаратах, основанная на регистрации ХЛ люми-нол-гипохлоритной реакции с электрогенерацией последнего (ПрО 6 нг/мл).
Использование электрохимических сенсоров (ЭХС) при определении ЛВ на порядок чувствительнее спектрофотометрического варианта [114]. Широкое распространение получили методы амперометриии с химически модифицированными электродами, потенциометрии с ионселективиыми электродами (ИСЭ) и кондуктометрии. Описано также использование гидродинамической вольтамперометрии быстрого сканирования и циклической вольтамперометрии [112]. Возможность использования ЭХД основана на детектировании ЛВ, проявляющих электрохимические свойства (нитросоеди-нения, амины, фенолы, гидразины и др.). Во многих случаях, однако, необходима дериватизация определяемых ЛВ с введением в их молекулы электро-форных групп. При этом происходит повышение чувствительности и избирательности отклика ЭХС. Получение производных ацетаминофена, изоксут-рина и изониазида реакцией с 1-фтор-2,4-динитробензолом в мицеллярной среде использовано для детектирования выделившихся фторид-ионов [113]. ИСЭ использованы для определения дибазола, димедрола, но-шпы и других азотсодержащих ЛВ [115], бензоатов в лекарственных формах [116], аммонийного азота и глутамина после проведения ферментативной реакции с иммобилизованной глутаминазой [117]. Общей проблемой использования ЭХС является стабильность работы электродов при многократном вводе анализируемых проб. Для предотвращения загрязнения поверхности стеклоуглерод-ного электрода при определении хлорпромазина предложено использование ПАВ [118]. Описано применение кулонометрического детектирования при определении анальгина, содержание которого определяется по площади, ограниченной кривой зависимости ток-время [119].
Наиболее распространенным методом разделения в анализе ЛВ является экстракция. Таким образом анализировали хлориды бензэтония и бербе-рина в дезинфицирующих лекарственных препаратах после экстракции дихлорэтаном окрашенных продуктов реакции с бромхлорфеноловым синим и хинидином [120]. Описана методика оценки энантиомерной чистоты ЛВ, основанная на экстракции хлороформом и использовании комбинированного поляриметрического и УФ-детектирования [121]. Предложена экстракционная система для СФЛ - проточно-инжекционного определения сальбутамола после окислительного сочетания с 4-амино- Т,К-диметиланилином [122]. В ряде случаев применяют проточно-инжекционную однократную экстракцию с разделением фаз в варианте on-line. Такой вариант описан при определении висмута (III) в фармпрепаратах в виде ассоциата тетраиодидвисмута с сегментным разделением фаз (20 проб/час, ПрО 0,24 мкг/мл при объеме пробы 250 мкл) [123].
Для повышения селективности и чувствительности анализа ЛВ используют многократную экстракцию. При определении хлорида цетилпиридиния в лекарственных препаратах проводят многократную экстракцию ионного ассоциата ЛВ с этиловым эфиром тетрабромфенолфталеина при повышенной температуре [124]. Подобные экстракционные системы описаны для определения кофеина [125,126], кодеина [127]. Для устранения мешающего влияния веществ используют диализные системы [128].
Следует отметить, что в оценке степени чистоты химико-фармацевтического производства лекарственных средств методы анализа играют существенную роль. В международных стандартах [129-136] большое значение придается развитию высокопроизводительных и чувствительных аналитических методов для обеспечения контроля безопасности и эффективности лекарств не только в процессе их разработки и промышленного выпуска, но и в процессе распространения на фармацевтическом рынке [137]. Поэтому ВОЗ рекомендует продолжать разработку достаточно простых альтернативных методов тестирования лекарственных веществ с целью включения их в Международную фармакопею [135,136]. Необходимо отметить, что в ряде стран схема проведения испытаний лекарственных средств в значительной степени автоматизирована, в частности, с помощью систем ВЭЖХ.
Выбор условий разделения некоторых анальгезирующих, противовоспалительных и антимикробных лекарственных веществ в обращенно-фазной ВЭЖХ
Среди многих классов органических веществ, использующихся для получения производных анализируемых веществ, наиболее перспективными являются нитрозамещенные бенз-2,1,3-оксадиазола [165]. Большой интерес представляют работы, в которых обсуждаются реакции нитрогалогенопроиз-водных бензоксадиазола с аминосоединениями. Часть исследований посвящена использованию моногалоген (хлор-, фтор-) нитрозамещенных бенз-2,1,3-оксадиазола для определения аминокислот, алифатических аминов, тиолов и карбонильных соединений методом ВЭЖХ с флуоресцентным и спектрофотометрическим детектированием продуктов реакции [165,166].
Использование этих реагентов в анализе аминов имеет ряд преимуществ перед традиционно применяемыми реагентами (альдегиды, сульфо-хлориды, изоцианаты). Главным из них является то, эти реагенты взаимодействуют как с первичными, так и со вторичными аминами и обеспечивают чувствительность определений на уровне 1 пмоль. При этом при анализе смесей аминокислот нет необходимости прибегать к окислительным процессам для перевода вторичных аминокислот в первичные. При использовании о-фталевого альдегида эта операция является необходимым звеном полного аминокислотного анализа. Второе важное преимущество заключается в том, что в результате реакции образуются продукты одного состава. Реагент не взаимодействует с гидроксильной группой, что исключает образование С-0 связанных продуктов, как при дансилировании (дабсилировании). 4-фтор-7-нитробензофуразан более реакционноспособен чем хлорзамещенный реагент, что обусловлено более высокой эффективностью фторид-иона как уходящей группы [165,166]. Эти свойства удобны в аминокислотном анализе, поскольку избыток реагента в водных растворах быстро гидролизуется с образованием гидроксипроизводного и при элюировании в условиях ВЭЖХ не мешает идентификации производных аминокислот. Очевидным их недостатком является невозможность их использования для фотометрических определений. Это связано с низкой контрастностью продуктов реакции, а также появлением продукта гидролиза реагентов ( Шах=485 нм в водно-этанольных растворах при рН=9,2). Поглощение гидроксипроизводного накладывается на полосы поглощения производных соответствующих аминов, что практически исключает возможность фотометрического определения без разделения смеси.
Перспективными реагентами для получения производных аминосоеди-нений являются динитрохлорзамещенные бензофураксана [167,168]. Их высокая реакционная способность, спектральные характеристики образующихся в результате аналитических реакций производных указывают на потенциальную ценность использования этих соединений в перспективных направлениях развития анализа аминосоединений [167-170].
По сравнению с мононитрозамещенными дополнительная электроно-акцепторная нитрогруппа в динитропроизводных бензоксадиазола приводит к появлению дополнительного сдвига максимума поглощения продуктов реакции с аминосоединениями. Галогендинитропроизводные бензофуроксана (7-хлор-4,6-динитробензофуроксан и 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан (4,6-ДН-5,7-ДХБФО)) образуют с аминами в неводных и смешанных растворителях продукты реакции отличающиеся значительным сдвигом (до 250 нм) длинноволновых полос поглощения продуктов по сравнению со спектрами поглощения исходных продуктов реакции. Наличие N-оксидного фрагмента в фуразановом цикле вызывает дополнительный сдвиг полос поглощения ( мах=510-520 нм). Вторичные ароматические амины (дифениламин, индол) образуют продукты реакции с максимумом поглощения в области 530-630 нм, третичные амины (Ы, 1-диметиланилин, трифениламин) в области 630-650 нм. Столь значительная зависимость максимумов поглощения продуктов реакции от степени замещения аминогруппы позволяет проводить раздельное спектрофотометрическое определение структурнозамещенных ароматических аминов в реакционных смесях [168].
Перспективно использование хлординитрозамещенных бенз-2,1,3-оксадиазола в анализе аминосоединений различных классов методами спек-трофотометрии, ВЭЖХ, тест-методами, в системе проточно-инжекционного анализа [167,170]. В этих работах показана возможность избирательного и чувствительного определения гидразина, его замещенных, ароматических и гетероароматических аминов в присутствии органических соединений различных классов.
Описана также возможность применения в аналитических целях ди-хлординитрозамещешюго бенз-2,1,3-оксадиазола, который может выступать в качестве реагента в спектрофотометрическом анализе анилина и нитроани-линов [167]. Необходимо отметить, что привлекательность использования 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана (ДХДНБФО), наряду с достаточной реакционной способностью в реакциях с аминами, во многом обуславливается более простой технологией получения этого аналитического реагента по сравнению с монохлординитрозамещенными бенз-2,1,3-оксадиазола, что делает этот реагент доступным для аналитической практики
Спектрофотометрическое определение лекарственных веществ в смывах с оборудования
Однако, в условиях избытка аналитического реагента фиксируется только поглощение в длинноволновой области, что позволяет получать воспроизводимые результаты при аналитических определениях ЛВ.
Растворимость ЛВ и продуктов их взаимодействия с реагентом также определяет состав среды для проведения реакций получения производных. Для производных изученных ЛВ обнаруживается хорошая растворимость в водно-органических средах. Однако, сульфадимезин, сульфодиметоксин мало растворимы в воде. В связи с этим пробоподготовку этих ЛВ необходимо проводить путем их растворения в неводных средах (спирты, ацетонитрил). В некоторых случаях для проведения аналитической реакции в водной среде необходимо присутствие до 10 % органического растворителя (метанол, этанол) для обеспечения растворимости и высокой степени завершения реакции.
Необходимо отметить, что проведение аналитической реакции в спиртах и их водных смесях более предпочтительно с точки зрения спектральных характеристик производных ЛВ и времени ее завершения. Подобное влияние спиртов наблюдалось и для реакций дериватизации замещенных гидразина, ариламинов [167,168], что можно объяснить влиянием основности реакционной среды на скорость аналитической реакции.
Таким образом, с точки зрения сочетания спектральных свойств образующихся производных ЛВ, достаточной реакционной способности, доступности и экономичности синтеза аналитического реагента для избирательных и чувствительных определений аминосодержащих ЛВ практике внутрипроизводственного контроля предпочтительнее использование ДХДНБФО.
Спектрофотометрическому детектированию продуктов реакции ЛВ с аналитическим реагентом не мешают фенолы, карбоновые кислоты, спирты, другие органические соединения, неорганические соли. Аминокислоты, имеющие гипсохромно сдвинутые в область 400-440 нм полосы поглощения по сравнению с производными лекарственных веществ, также не влияют на результаты спектрофотометрических определений.
Экспериментально возможность спектрофотометрического определения производных ЛВ в анализируемых матрицах проверена в различных модельных и готовых лекарственных формах (табл. 4.1). Предварительно установлено, что вспомогательные вещества, входящие в состав таблеток, определениям не мешают. Результаты, приведенные в табл. 4.1, удовлетворительны по метрологическим характеристикам. Таблица 4.1
Таблетки сульфадимезина 0,5 г Сульфадимезин 0,49±0,02 0,48+0,02 В фармации широко используются новокаиновые соли препаратов группы пенициллина, которые нашли широкое применение как базовые антибиотики для лечения различных заболеваний [171]. Пролонгированности действия этих препаратов при создании длительно действующей терапевтической концентрации антибиотика в крови достигают использованием новокаиновой соли бензилпенициллина или ее смеси с N,N-дибензилэтилендиаминовой солью бензилпенициллина (бициллин-5)
Изучено влияние ряда органических веществ, являющихся потенциальными компонентами лекарственных форм, содержащих новокаиновую соль бензилпенициллина на интенсивность сигнала. Оказалось, что на определение вещества не оказывают влияния натриевая, калиевая и N,N-дибензилэтилендиаминовая соли бензилпенициллина, аминокислоты и другие органические соединения (табл. 4.2).
Возможность спектрофотометрических определений новокаиновой соли бензилпенициллина в анализируемых объектах проверена на примере анализа готовых лекарственных форм. Содержание новокаиновой соли бензилпенициллина в препаратах "Новокаиновая соль бензилпенициллина" и "Бициллин - 5" составило 99,9 и 20,2 % при относительном стандартном отклонении 0,04 и 0,05, соответственно. Разработанный подход можно использовать для контроля содержания новокаиновой соли бензилпенициллина и бициллина-5 на поверхностях технологического оборудования при производстве этих препаратов.
Реакция ДХДНБФО была использована для спектрофотометрического определения 4-аминофенола (АФ) в различных лекарственных препаратах. Эта примесь нормируется в препаратах, содержащих в качестве действующего вещества парацетамол. Это связано с тем, что АФ находит широкое применение в химико-фармацевтическом синтезе парацетамола, являющегося одним из базовых анальгетиков-антипиретиков в повседневной медицине [171]. В связи с высокой токсичностью АФ его содержание требует оперативного контроля в синтетических смесях при проведении технологического процесса, поверхности оборудования и в готовых лекарственных формах на основе парацетамола. Таблица 4.3 Влияние мешающих компонентов на результаты спектрофотометрического определения 4-аминофенола (п=4, Р=0,95)
Правильность определений оценивалась добавкой стандарта АФ в лекарственные смеси (табл. 4.3). Экспериментально возможность спектрофотометрического определения АФ в анализируемых смесях проверена в различных готовых лекарственных формах (табл. 4.4). 4.2. Спектрофотометрическое определение лекарственных веществ в смывах с оборудования
Спектральная область от коротковолновой ультрафиолетовой до видимой области спектра широко используется в фармацевтической химии для детектирования поглощения многих ЛВ. При этом ультрафиолетовые и видимые спектры вещества обычно не отличаются высокой степенью избирательности. Тем не менее, они могут быть использованы для количественных определений, а для многих веществ в фармацевтическом анализе служат дополнительным средством установления подлинности. Применение абсорбционной спектрофотометрии в видимой и ультрафиолетовой областях спектра для методик количественного определения основано на том факте, что поглощаемость вещества обычно является константой, независимой от интенсивности падающего излучения, длины кюветы и концентрации, вследствие чего концентрация может быть определена фотометрически [161-163].
Отклонения от приведенных выше величин могут быть обусловлены физическими, химическими или инструментальными переменными. Отклонения вследствие инструментальной ошибки могут быть вызваны влиянием ширины щели, рассеянием света или полихроматическим излучением [163]. Очевидные ошибки могут также появиться в результате изменения концентрации растворенных молекул вследствие ассоциации между молекулами растворенного вещества, между молекулами растворенного вещества и растворителя, а также вследствие диссоциации или ионизации [163].
Спектрофотометрическое определение ЛВ имеет ряд преимуществ для использования в качестве экспрессного, доступного для производственной практики способа контроля чистоты оборудования при проведении технологического процесса. Представленные в данной работе лекарственные препараты характеризуются интенсивным светопоглощением в УФ-области спектра и поэтому во многих не требуется дополнительных реакций по их переводу в окрашенные соединения. При этом метод УФ-спектрофотометрии с достаточной избирательностью и чувствительностью позволяет решить эти задачи при его применении во внутрипроизводственном контроле. Для этого может быть использован анализ смывов с рабочих поверхностей оборудования на присутствие основного вещества, входящего в лекарственный препарат, обрабатывавшийся последним.
