Введение к работе
доктор фарм. наук, профессор Садчикова Наталья Петровна
Актуальность темы. В настоящее время острой проблемой является рост заболеваний, объединяемых в группу метаболического синдрома – атеросклероза, ишемической болезни сердца, сахарного диабета 2-го типа и др. Необходимость коррекции таких патологических состояний обусловливает актуальность поиска рациональной фармакотерапии. В данном направлении большую известность приобрели флавоноиды – природные вещества, обладающие широким спектром фармакологического действия. На протяжении многих лет на кафедре органической химии в содружестве с другими научными учреждениями ведутся работы по созданию флавоноидсодержащих фитопрепаратов. Одним из них является получаемый из древесины лиственницы сибирской (Larix sibirica Ledeb.) и лиственницы Гмелина (Larix Gmelinii Rupr.) флавоноидный продукт «Дигидрокверцетин» – сырье для производства биологически активных добавок к пище (далее – продукт «Дигидрокверцетин») – с доминирующим содержанием индивидуального вещества - дигидрокверцетина, обладающего антиоксидантным и ангиопротекторным действием.
Банк присущих дигидрокверцетину фундаментальных фармакологических свойств обеспечивает ему базисный статус для создания на его основе композиций с другими компонентами с целью оптимизации определенных видов фармакологического действия. В этом отношении наряду с флавоноидами большой интерес представляют природные фенольные соединения – лигнаны. Одним из источников лигнанов, в частности, секоизоларицирезинола диглюкозида, являются семена льна обыкновенного Linum usitatissimum L. Известно, что секоизоларицирезинола диглюкозид обладает противоатеросклеротическим, противодиабетическим, гиполипидемическим, антихолестеринемическим действием, что в целом способствует нормализации показателей липидного профиля. Фармакологическое исследование экстракта семян льна, содержащего более 40% секоизоларицирезинола диглюкозида, выявило эндотелийпротекторные свойства, а также антитромбогенное и антитромбоцитарное действие, выразившееся в улучшении реологических показателей крови и структурно-функционального статуса эритроцитов. Композиция этого экстракта с продуктом «Дигидрокверцетин» обладает гиполипидемическим действием (НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН).
Появление новых композиций сложного состава ставит задачу поиска оптимальных путей их фармацевтического анализа.
Актуальность настоящего исследования определяется необходимостью обоснования оптимального состава композиции продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна и разработки методологического подхода к анализу и созданию валидированных методик для стандартизации рекомендованной композиции.
Цель исследования. Цель настоящей работы состояла в определении оптимальных по антирадикальной активности соотношений действующих веществ – дигидрокверцетина и секоизоларицирезинола диглюкозида – в составе новой двухкомпонентной композиции продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна, разработке единого методологического подхода к анализу и стандартизации выбранной композиции, а также в изучении химического состава экстракта семян льна.
Задачи исследования.
-
Обосновать подбор оптимального соотношения дигидрокверцетина и секоизоларицирезинола диглюкозида для создания новой композиции продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна, обладающей ценными фармакологическими свойствами.
-
Оценить антирадикальную активность продукта «Дигидрокверцетин», экстракта семян льна и их композиций, различных по соотношению действующих веществ – дигидрокверцетина и секоизоларицирезинола диглюкозида.
-
Разработать методику хроматографического анализа композиции продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна с учетом специфичности состава.
-
Валидировать предлагаемую методику в соответствии с принятыми валидационными характеристиками.
-
Провести исследование химического состава экстракта семян льна.
Научная новизна. Дана оценка антирадикальной активности продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна, охарактеризованная показателями IC50, TEAC и длительностью индукционного периода.
Получены кинетические кривые развития радикал-катионов ABTS+ в присутствии продукта «Дигидрокверцетин», экстракта семян льна и их композиций, охарактеризована степень и скорость, с которой исследуемые объекты восстанавливают данные радикал-катионы.
В результате скрининга антирадикальной активности ряда композиций, различных по мольным соотношениям действующих веществ, установлено, что суммарный эффект антирадикальной активности продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна при их одновременном присутствии зависит от количественных соотношений дигидрокверцетина и секоизоларицирезинола диглюкозида в композиции. Кинетическим методом установлено, что при равных мольных соотношениях действующих веществ, а также при превалирующем содержании секоизоларицирезинола диглюкозида происходит синергизм антирадикальных свойств.
Определены оптимальные хроматографические условия, разработана и оптимизирована по основным хроматографическим параметрам селективная и воспроизводимая методика одновременного качественного и количественного анализа дигидрокверцетина и секоизоларицирезинола диглюкозида в композиции методом ВЭЖХ.
Качественно проанализирован химический состав экстракта семян льна. Установлено, что помимо секоизоларицирезинола диглюкозида в его составе присутствуют также лигнаны матаирезинол, секоизоларицирезинол и ларицирезинола диглюкозид. Определены основные вещества, входящие в состав экстракта семян льна.
Разработан способ количественного анализа полисахаридов в экстракте семян льна.
Практическая значимость. На основании полученных экспериментальных данных композиция продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна при массовом соотношении действующих веществ 1:1 может быть рекомендована для получения биологически активной добавки к пище, обладающей антирадикальным и гиполипидемическим действием.
Разработанная селективная методика качественного и количественного анализа композиции на базе ВЭЖХ внедрена в учебный курс «Физико-химические методы исследования органических соединений» на кафедре органической химии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова.
Методика анализа методом ВЭЖХ может быть использована в целях стандартизации композиции.
Основные положения, выносимые на защиту.
Характеристика антирадикальной активности продукта «Дигидрокверцетин», экстракта семян льна и их композиций.
Результаты изучения кинетических зависимостей проявления антирадикальных свойств продукта «Дигидрокверцетин», экстракта семян льна и их композиций.
Результаты изучения хроматографических характеристик состава композиции продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна.
Оптимальные хроматографические параметры ВЭЖХ для одновременного анализа дигидрокверцетина и секоизоларицирезинола диглюкозида в композиции продукта «Дигидрокверцетин» и экстракта семян льна.
Результаты валидации методики стандартизации композиции методом ВЭЖХ.
Результаты качественного анализа химического состава экстракта семян льна.
Апробация работы. Основные положения работы доложены на VII Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2009), на XVII и XIX Российском национальном конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2010, 2012), на 4-й Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование 2010. Научные основы создания новых лекарственных средств» (Воронеж, 2010), на VIII Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2010).
Личный вклад автора. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки целей и задач, их экспериментальной реализации до аналитической и статистической обработки, научного обоснования, обобщения полученных результатов и рекомендаций по их внедрению.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках научно-исследовательской программы ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (номер государственной регистрации 01.2.006 06352). Тема включена в план научных исследований кафедры органической химии «Разработка способов анализа и стандартизации флавоноидсодержащих лекарственных средств, изучение их антиоксидантной активности и фармакокинетики».
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них 3 в изданиях, входящих в перечень ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах и состоит из введения, обзора литературы, двух глав, отражающих собственные экспериментальные данные автора, выводов, списка литературы и приложения. Работа содержит 29 таблиц, 34 рисунка и 12 схем. Библиографический список включает 222 источника литературы, из них 63 отечественных и 159 зарубежных.
