Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Этиология 11
1.2. Эпидемиология 18
1.3. Лечение чесотки 23
1.4. Профилактика и дезакаризационные мероприятия 37
Глава 2. Материалы и методы исследований 49
2.1. Исследование акарицидной активности действующих веществ и препаративных форм 49
2.1.1. Объекты исследований 49
2.1.2. Методы культивирования и сбора клещей 51
2.1.3. Методы лабораторных исследований in vitro акарицидной активности на P. cuniculi и S. scabiei 53
2.1.4. Методы исследований акарицидной активности in vivo 56
2.1.5. Материалы 57
2.2. Эпидемиологические исследования в очагах чесотки в воинских частях 63
2.2.1. Контингент обследованных военнослужащих 63
2.2.2. Выявление и паразитологическое обследование больных 64
2.2.3. Исследование проб пыли в очагах чесотки на наличие клещей 65
2.3. Статистическая обработка результатов 66
Глава 3. Разработка лабораторной модели для изучения акарицидной активности скабицидов 67
3.1. Обоснование выбора модельного объекта 69
3.2. Разработка методов лабораторных исследований 72
Глава 4. Изучение скабицидной активности средства "медифокс" в лабораторных и клинических условиях 74
4.1. Обоснование выбора действующего вещества и препаративной формы скабицида для лечения чесотки 74
4.2. Изучение скабицидной активности в экспериментах in vitro на изолированных клещах S. scabiei 81
4.3. Изучение скабицидной активности средства "Медифокс" в экспериментах in vivo 85
4.4. Клинические испытания средства "Медифокс" 92
4.5. Оптимизация схемы лечения чесотки средством "Медифокс" 94
Глава 5. Изучение средств для дезакаризации в очагах чесотки 98
Глава 6. Анализ особенностей паразитизма s. scabiei и очаговости чесотки в условно-закрытом организованном коллективе (на примере воинских подразделений) 108
6.1. Заболеваемость в выборке 108
6.2. Особенности паразитизма чесоточного клеща на военнослужащих... 109
6.2.1. Оценка локализации чесоточных ходов по индексам встречаемости и обилия 110
6.2.2. Динамика численности клещей на военнослужащих 113
6.3. Особенности очаговости чесотки в условно-закрытом организованном коллективе 116
Глава 7. Профилактика заражения чесоткой в закрытых коллективах 128
Заключение 137
Выводы 141
Практические рекомендации 143
Список литературы 144
Приложения 163
- Профилактика и дезакаризационные мероприятия
- Методы лабораторных исследований in vitro акарицидной активности на P. cuniculi и S. scabiei
- Разработка методов лабораторных исследований
- Изучение скабицидной активности в экспериментах in vitro на изолированных клещах S. scabiei
Введение к работе
Актуальность темы исследования. На протяжении последнего десятилетия в России официально регистрируемый показатель пораженности чесоткой на 100 тыс. населения колебался в интервале 135-290. Высокий уровень заболеваемости обусловлен рядом социально-экономических факторов -миграция населения, рост численности социально неадаптированных слоев и низкий санитарно-гигиенический уровень населения и др.
Мировая дерматологическая практика свидетельствует о постоянном расширении арсенала скабицидов на основе современных эффективных действующих веществ (Meinking, Elgart, 2000). В то же время в России на протяжении десятилетий для лечения чесотки в основном используют серную мазь и бензилбензоат (Соколова, 1992а). Разработка новых скабицидов для лечения чесотки является актуальной задачей.
Изучение эффективности скабицидов, как правило, проводят по динамике клинических проявлений заболевания непосредственно у человека, реже - по воздействию на возбудителя - Sarcoptes scabiei (Linnaeus, 1746) (Acariformes: Sarcoptidae) (Walton et al., 2000). Результаты доклинических исследований эффективности зачастую являются весьма ориентировочными и значительно корректируются во время проведения клинических испытаний. В ветеринарной практике для первичного исследования акарицидов используют клещей-накожников рода Psoroptes Gervais, 1841. В медицине при исследовании скабицидов используют как S. scabiei, отмечая при этом сложности в работе и интерпретации данных, так и других членистоногих, совершенно далеких в систематическом и биологическом плане (Timon-David, 1982). В настоящее время нет методов лабораторного культивирования S. scabiei или модельного объекта для этих клещей на животных (Walton et al., 2000). Учитывая специфические особенности биологии чесоточного клеща S. scabiei (постоянный тип паразитизма, кратковременность переживания вне хозяина)
5 актуальным является выбор модельного объекта и методов работы с ним для проведения первичных исследований и получения достоверных данных.
В последнее время дискутируется вопрос о дезинфекционных мероприятиях в очагах чесотки. Обсуждается как сама необходимость их проведения, так и методы и средства дезинсекции (Соколова, 19926; Бондарев, 2001). Оценив инвазионную контактность различных коллективов, изучив типы очагов и пути передачи возбудителя в них, можно с уверенностью указать на те ситуации, когда для санации очага дезинсекция необходима. Очаговость чесотки в целом разработана для гражданского населения (Соколова, 19926). Показано, что распределение возбудителя имеет очаговый характер, очаги складываются соответственно образу жизни и поведению людей. Развитие патологического процесса во времени предложено оценивать по паразитарному индексу (ПИ) - числу репродуктивных чесоточных ходов на боль- . ном или в очаге (Соколова, 1985а). Изучение специфики эпидемиологии чесотки среди контингентов условно-закрытых организованных коллективов до настоящего исследования не проводили.
Анализ состояния дезинфекционных мероприятий в очагах различных заболеваний по России свидетельствует о недостаточной оснащенности лечебно-профилактических учреждений и ведомств дезинфекционными камерами, и как следствие этого - необходимости разработки и внедрения в практику средств для химического метода дезакаризации белья, одежды, мебели и других предметов в очагах чесотки.
Принципиально новым способом профилактики чесотки является использование при определенных санитарно-эпидемических ситуациях в организованных коллективах импрегнированных (обработанных инсектоакари-цидом) вещей, приводящих к разрыву механизма передачи возбудителя.
В современных условиях необходимо совершенствование комплекса лечебно-профилактических мероприятий. Оптимизация схем лечения скаби-цидами необходима не только с экономической точки зрения, но и для пре- дупреждения возможного формирования резистентности к акарицидам у возбудителя чесотки S. scabiei.
Цель работы
Разработка лабораторной модели (биообъект и методы изучения специфической активности акарицидов) и исследование новых скабицидных средств с использованием лабораторной модели, а также совершенствование профилактических мероприятий с применением этих средств в очагах чесотки.
Задачи исследования
Обоснование выбора модельного биообъекта для изучения потенциальных скабицидов.
Разработка методов лабораторных исследований специфической ака-рицидной активности веществ и средств, применяемых в практике медицинской дезинсекции.
Исследование эффективности и разработка режима применения нового скабицидного средства для лечения чесотки.
Исследование эффективности и разработка режимов применения современных средств для дезакаризационных мероприятий в очагах чесотки.
Анализ особенностей паразитизма чесоточного клеща S. scabiei и специфики эпидемиологии чесотки в условно-закрытом организованном коллективе (на примере воинских подразделений).
Совершенствование профилактических мероприятий при чесотке в условно-закрытых организованных коллективах, предупреждение заражения чесоткой путем обработки (импрегнации) инсектоакарицидным средством одежды и вещей спецконтингентов.
Научная новизна
1. Обосновано использование в медицинской дезинсекции ушного чесоточного клеща кроликов Psoroptes cuniculi (Delafond, 1859) (Acariformes:
7 Psoroptidae) в качестве модельного лабораторного биообъекта для первичной оценки скабицидов, в том числе и предназначенных для непосредственного лечения чесотки.
Разработанные методы изучения на модельном объекте акарицидной активности потенциальных скабицидов в зависимости от форм применения и назначения дают возможность адекватной оценки акарицидного эффекта.
Изучен универсальный отечественный препарат на основе пиретрои-да перметрина "Медифокс" и внедрен в практику для лечения чесотки и проведения дезакаризационных мероприятий в очагах этого заболевания.
Для проведения дезакаризационных мероприятий в очагах чесотки изучены и рекомендованы современные отечественные инсектоакарицидные средства: концентраты эмульсий ("Медифокс", "Медифокс-Супер", "Акро-мед", "Цифокс", "Актор"), средства в аэрозольной упаковке ("Вираж", "Дих-лофос-Супер-Део").
Впервые в условно-закрытом организованном коллективе (на примере военнослужащих) изучены особенности паразитизма чесоточного клеща, выявлены различные типы очагов, установлены пути передачи возбудителя.
6. Сформулированы основные направления профилактических меро приятий в условно-закрытых организованных коллективах, разработан новый метод профилактики чесотки - обработка (импрегнация) одежды и вещей спецконтингентов инсектоакарицидным средством "Медифокс-Супер".
Практическое значение
Создана адекватная лабораторная модель для исследования скабицидов in vitro, что позволило стандартизовать эксперимент. Разработано и внедрено в практику отечественное средство "Медифокс" для непосредственного лечения чесотки, а также ряд средств для проведения дезакаризационных мероприятий в очагах. Изучены особенности эпидемиологии и очаговости заболевания в условно-закрытых коллективах на примере военнослужащих, что позволило усовершенствовать методы профилактики чесотки и ее лечения, в
8 частности, обоснована необходимость проведения дезакаризации в очагах заболевания, внедрен новый метод импрегнации.
Утверждены: Инструкция по применению Медифокса - для лечения чесотки; 9 Методических указаний и Инструкций по применению инсектоа-карицидных средств для дезакаризации очагов; две инструкции для проведения профилактических мероприятий в очагах чесотки с применением импрегнации вещей спецконтингентов условно-закрытых коллективов.
Апробация работы
Основные результаты работы были доложены на V съезде дезинфекционистов России (Москва, 1996); VII Всероссийском съезде эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 1997), заседаниях Секции дезинфектологии Московского Отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002, 2003); Всероссийской научной конференции, посвященной 70-летию НИИД МЗ РФ "Задачи современной дезинфектологии и пути их решения" (Москва, 2003); семинарах "ДДД Специализированная выставка Дезинфекция, дезинсекция, дератизация" (Москва, 2004); семинаре 4-й Всероссийской выставки "Российские производители и снабжение Вооруженных сил" (Москва, 2004), на заседаниях Методической комиссии по проблемам дезинсекции и дератизации и Ученого совета НИИД (1994-2005).
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 168 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературных источников (85 отечественных и 130 зарубежных). Диссертация иллюстрирована 19 таблицами и 22 рисунками.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 20 работ.
Профилактика и дезакаризационные мероприятия
Разрыв механизма передачи возбудителя чесотки представляет наибольший интерес для ее профилактики. Однако в публикациях, учебной литературе и инструктивно-методических материалах по борьбе с чесоткой недостаточно уделяется внимания санитарным мероприятиям, а зачастую они вообще не рассматриваются, отсутствуют критерии для оценки эффективности этих мероприятий. Профилактические мероприятия, отраженные в нормативных документах, касаются мер личной гигиены (мытье, смена белья, обеспечение средствами индивидуальной гигиены), а также регулярности медицинских осмотров на чесотку в организованных коллективах разных типов и при обращении граждан в органы здравоохранения. К сожалению, нередко даже эти требования не выполняются. В организации профилактики недостаточное внимание уделяется вопросам санитарного просвещения. Существует явная диспропорция между лечебными и профилактическими мероприятиями, специфическая профилактика используется недостаточно или практически отсутствует.
Ряд мероприятий, применяемых на практике, устарел, малоэффективен или их выполнение сопряжено с трудностями социально-экономического порядка. Это указывает на необходимость конструктивного пересмотра действующих и разработку новых простых, дешевых и доступных мероприятий, направленных на эффективную борьбу с чесоткой.
При разработке профилактических мероприятий необходимо учитывать социально-экономические условия жизни и поведенческие особенности тех контингентов, для которых они разрабатываются. Также необходимо количественно оценивать эпидемиологическую значимость разных путей передачи инвазионного материала при распространении чесотки в различных очагах.
Профилактические мероприятия (в комплексе или в отдельности) имеют определенный лимит эффективности воздействия на тот или иной путь передачи, а каждый из этих путей, по-видимому, имеет свой определенный уровень эпидемиологической значимости в условиях данного очага. В том случае, когда лимит определенного профилактического мероприятия исчерпан или путь потерял свою эпидемиологическую значимость, дальнейшее усиление (увеличение объема) таких мероприятий вряд ли целесообразно и рентабельно. Это весьма важно с экономической точки зрения, так как позволит исключить необоснованные материальные затраты в отношении уже "выключеных" путей (Романенко, Красильников, 1986).
При обследовании помещений, в которых проживали больные чесоткой, в 44% образцов пыли из домов пациентов обнаружили клещей. На момент анализа образцов пыли живые клещи присутствовали в 64% этих проб. Живые клещи были собраны чаще всего с пола спальни или с поверхностей кресел и кушеток. Плотность живых и мертвых клещей колебалась от 1 до 5 особей/0,1 г пыли или 1-9 особей/м обследованной поверхности (Arlian et al, 1988).
Клещи, находящиеся вне хозяина в окружающей среде, могут быть вероятным источником заражения (Arlian et al., 1984а). Содержащие клещей фрагменты эпителия больных норвежской чесоткой попадают в окружающее пространство и могут оставаться инвазионными в течение нескольких дней, так как яйца защищены от высыхания и могут оставаться живыми по крайней мере 10 суток (Estes, Arlian, 1981). Жизнеспособные клещи на разных стадиях развития были собраны на поверхностях постельного белья, занавесок, пола, стен, детских мягких игрушек и мягкой мебели (Carslaw et al., 1975). Присутствие клещей на вещах и предметах обстановки, связанное с их выживанием и поисковым поведением хозяина (Arlian et al, 19846), указывает, что человек может быть инвазирован находящимися свободно клещами в зараженном доме, школе, рабочих помещениях (Arlian et al, 1988).
В более, чем 300 экспериментах на добровольцах установлено, что 1,3% заразились чесоткой после пребывания в постели, где ранее спали больные с паразитарным индексом около 20. Инвазирование повышалось до 15%, если паразитарный индекс составлял более 50 (Mellanby, 1944і). Роль одежды в передаче чесотки пытались установить в аналогичном эксперименте, в ходе которого из 38 человек, надевавших нательное белье больного чесоткой сразу после того, как он его снял, заболели только двое (5,2%), на постельных принадлежностях типичных больных единичных клещей находили крайне редко - в 4 случаях из 58 (Palicka, 1982). Роль предметов и одежды в передаче чесотки дискутируется и окончательно не прояснена (Samsinak et al., 1974; Elgart, 1990). Однако отмечено, что чесотка распространяется в тех домах и коллективах, в которых есть высокая частота близкого персонального контакта или большое количество предметов обстановки; при этом передача через вещи и предметы обстановки является основным путем при внутрибольничных вспышках чесотки (Burkhart et al, 2000).
Согласно действующим в России Санитарно-эпидемиологическим правилам СП 3.5.1378 (2003), дезинфекционные мероприятия - это работы по профилактической дезинфекции (дезинфекция, дезинсекция, дератизация), очаговой дезинфекции (текущая и заключительная дезинфекция, дезинсекция, дератизация), а также по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения. При чесотке проводят дезинсекционные мероприятия, обеспечивающие регуляцию численности членистоногих и включающие в себя комплекс инженерно-технических, санитарно-гигиенических, собственно истребительных или защитных мероприятий, а также мероприятия по учету численности членистоногих и контролю эффективности дезинсекции (СП 3.5.1378, 2003). Таким образом, по современной терминологии мероприятия при чесотке следует именовать профилактической и очаговой (текущая и заключительная) дезинсекцией, однако по устоявшейся традиции практические работники пользуются термином дезинфекция в широком смысле, подразумевая под этим не только уничтожение микроорганизмов, но и весь комплекс дезинфекционных мероприятий, проводимых в зависимости от конкретной нозоформы заболевания.
Методы лабораторных исследований in vitro акарицидной активности на P. cuniculi и S. scabiei
Оборудование: микроскоп бинокулярный типа МБС-1 и МБИ-3, чашки Петри (0 100 и 36 мм), бакпечатки, микропробирки, препаровальные и инъекционные иглы, тонкие кисточки, пинцет, скальпели, предметные стекла обычные и с лункой, покровные стекла, экспозиметры, фильтровальная бумага, бязь, вата.
В зависимости от препаративной формы средства оценку скабицидной активности проводили тремя методами, описанными ниже. При исследовании концентрированного средства - образец интенсивно взбалтывали и на весах отбирали навеску для приготовления серии рабочих концентраций. Путем разбавления водой готовили необходимые концентрации. Готовые препаративные формы испытывали без разведения.
В эксперименте использовали самок клещей P. cuniculi по 10 особей на одну повторность, активные стадии и яйца других клещей (в т.ч. и S. scabiei) - в тех количествах, которые удавалось собрать с хозяев единовременно. Тест-объекты помещали в "фунтик", свернутый из фильтровальной бумаги, погружали на 1 мин в исследуемые растворы, суспензии или эмульсии средств серии концентраций (не менее 5). Затем клещей переносили в чистую пробирку: P. cuniculi - со вложенной в неё фильтровальной бумагой, S. scabiei - в пробирку с физиологическим раствором. Через 24 часа определяли количество погибших клещей и рассчитывали величину СК50 (%) - концентрацию инсектицида, вызывающую гибель 50% клещей в эксперименте при заданной экспозиции подопытных организмов в растворах (Мельников и соавт., 1995). Опыты ставили при комнатной температуре в трех повторно-стях. В качестве контрольного варианта использовали необработанных клещей (контроль качества биоматериала), а также клещей, обработанных растворителем или основой средства для исследования их акарицидных свойств.
Для характеристики эффективности средств в аэрозольных упаковках и рабочих водных эмульсий концентратов определяли острое акарицидное действие. Исследования проводили в камерах объемом 1 м3, снабженных вентиляционной системой. Дно камеры выстилали фильтровальной бумагой. Температура в камере при проведении экспериментов составляла 22-25 С при относительной влажности не менее 50% и не более 70%. P. cuniculi подсаживали в чашки Петри на впитывающую (фильтровальная бумага) и невпитывающую (стекло) поверхности, после чего чашки Петри размещали в камере в пяти точках и обрабатывали акарицидом. Для распыления водных эмульсий использовали аппаратуру типа "квазар". На края чашек наносили вазелин, препятствующий расползанию клещей. Норму расхода подбирали экспериментально для достижения равномерности обработки и обеспечения эффективности. Через 10 минут чашки Петри вынимали из камеры, клещей пересаживали в чистые пробирки и проводили учет через 30 мин, 3-6 часов и 24 часа. В качестве контрольного варианта использовали необработанных клещей (контроль качества биоматериала), а также клещей, обработанных растворителем или основой средства для исследования их акарицидных свойств.
Для характеристики эффективности средств при нанесении на различные типы поверхностей определяли острое действие и длительность остаточного действия. Тест-объекты подсаживали на обработанную впитывающую (фильтровальная бумага) и невпитывающую (стекло) поверхности. Норму расхода и экспозицию варьировали для отработки режима применения. Затем клещей пересаживали в чистые пробирки и проводили учет через 24 часа, подсчитывая процент пораженных особей. Опыты проводили при комнатной температуре в трех повторностях, используя в качестве контрольного варианта необработанных клещей (контроль качества биоматериала), а также клещей после контакта с тестами, обработанными растворителем или основой средства для исследования их акарицидных свойств. Острое действие определяли при подсадке на поверхности непосредственно после испарения растворителя (1-2 часа после нанесения). Остаточное действие отложений средства определяли через 1, 3, 5, 7 суток и более после обработки. Стандартное время контакта клещей с обработанными поверхностями в экспозиметрах составляло 15 минут.
Для изучения овицидного действия яйца клещей S. scabiei инкубировали в висячей капле по методу, описанному Т.В.Соколовой с соавт. (1989). На инкубацию помещали яйца клещей после экспозиции в рабочей водной эмульсии. На покровное стекло стеклянной палочкой помещали каплю физиологического раствора, в которую при помощи кисточки вносили яйца клещей. Покровное стекло накрывали предметным стеклом с лункой, на края которой наносили тонкий слой вазелина. Приготовленный препарат переворачивали покровным стеклом вверх, в результате чего капля оказывалась висячей. Инкубировали в термостате при температуре (35±1)С. Стекла микро скопировали для учета состояний активных стадий и яиц клещей. Учет проводили через трое суток, что обусловлено длительностью эмбрионального развития.
Разработка методов лабораторных исследований
Метод считается стандартным в том случае, когда он прост, воспроизводим, наделсен, недорогостоящ и оперативен (Резистентность переносчиков..., 1995). В основу методик экспериментальной работы положены "Методические указания по испытанию пестицидов, предназначенных для борьбы с эктопаразитами животных" (1973).
Проведена адаптация методик применительно к различным препаративным формам, что позволило оценивать акарицидный эффект и подбирать эффективные концентрации и нормы расхода средств, оценивать длительность остаточного акарицидного действия на обработанных поверхностях. Подробно методы лабораторных исследований описаны в главе 2.
Для сравнительной оценки акарицидного эффекта разных действующих веществ предпочтителен стандартный метод погружения на 1 мин в растворы серий концентраций, с последующим вычислением величины СК50. Однако для инсектоакарицидных средств, применяемых на практике, необходимо исследование разных режимов с учетом ряда критериев: целевая эффективность - безопасность для человека - быстрота действия - дешевизна обработки. При этом необходимо подобрать оптимальный режим применения конкретного средства. Для данных целей нами рекомендованы методы орошения и подсадки на обработанные поверхности, при которых варьируются не только концентрации действующего вещества (за исключением готовых к применению форм), но и норма расхода, экспозиция. При исследовании жидких препаративных форм также можно использовать метод погружения, варьируя концентрацию действующего вещества или экспозицию.
Разработанные нами методы лабораторных исследований акарицидов (скабицидов) официально утверждены в ряде НТД (Приложение 2). Первоначально в качестве действующего вещества для скабицида был выбран d-фенотрин (сумитрин) - пиретроид I типа, инсектоакарицид с наименьшей токсичностью для теплокровных.
Методом погружения на 1 мин проанализирована акарицидная активность спиртовых растворов технического продукта (98%), диапазон исследованных концентраций составил 0,01% - 0,50%. Величина СК50 для самок P. cuniculi составила 0,09%. При воздействии сумитрина наблюдаются явления отравления, выражающиеся в наступлении паралича, затем обездвиживания и гибели клещей. В ходе экспериментальной работы установлено, что в контрольном варианте (необработанные клещи) в среднем погибает около 9% клещей. Далее исследовали нарастание токсического эффекта при увеличении времени контакта (экспозиции) с исследуемыми растворами. Так, при изучении 0,2% раствора сумитрина установлено, что при экспозиции 1 и 10 мин наблюдается поражение 70%, при экспозиции 2 часа - 98% клещей, при увеличении экспозиции до 5 часов наблюдали полную гибель клещей в эксперименте.
При исследовании овицидности 0,2% спиртового раствора методом погружения яиц на 1-10 мин наблюдали низкое овицидное действие, приводящее к гибели 20-30% эмбрионов, из остальных яиц отрождались жизнеспособные личинки. Погибшие яйца сморщивались, уплощались, менялись в цвете. Несмотря на то, что плотная оболочка не позволяет оценить развитие эмбриона, а также в силу невозможности различить отобранные в эксперимент яйца по сроку откладки, мы предполагаем, на основе наших знаний о действии перметрина и сумитрина на яйца вшей, что в первую очередь гибель эмбрионов происходит в свежеотложенных яйцах, когда формирование их только началось. Яйца со сформированными личинками самые устойчивые, однако пиретроиды вызывают так называемую ложную овицидность, когда личинка гибнет в процессе выхода из яйцевой оболочки после обработки яиц инсектицидом.
Далее была исследована препаративная форма - лосьон, содержащий 0,2% d-фенотрина. Лосьон представляет собой водно-спиртовую систему, содержащую, кроме действующего вещества, функциональные добавки. Ака-рицидная активность этой препаративной формы оказалась сходной с таковой спиртовых растворов действующего вещества (табл. 6).
Кроме того, была исследована препаративная форма в виде крема на основе вазелина. Изучены 3 образца, содержащие 1,0%, 2,5% и 5,0% d-фенотрина. Крем наносили на стекло или фильтровальную бумагу в норме расхода 1 г/100 см , подсаживали самок клещей P. cmiculi и наблюдали в течение 24 часов (табл. 7).
Применение вазелина в качестве основы для крема привело к снижению акарицидного эффекта - погружение в 0,2% спиртовой раствор сумитрина приводило к 100% гибели клещей в течение 5 часов контакта, тогда как в 5% креме при контакте 24 часа наблюдали только паралич 84-93% клещей. По-видимому, имеет место обволакивающее действие вазелина на кутикулу клещей, в связи с чем считаем нецелесообразным использование
Изучение скабицидной активности в экспериментах in vitro на изолированных клещах S. scabiei
Результаты исследований акарицидной активности 0,4% водной эмульсии средства "Медифокс" по отношению к самкам и личинкам чесоточного клеща S. scabiei в эксперименте in vitro отражены в табл. 8. После погружения самок и личинок в 0,4% водную эмульсию средства "Медифокс" на 1 мин. гибель через 24 часа наступила у 100% личинок и 78% самок (рис. 6). В течение двух суток после обработки погибли все самки. При температуре 34С в физиологическом растворе контрольные (необработанные) личинки выживали более 2 суток, самки - в среднем 4-7 дней. При изучении овицидного действия средства "Медифокс" при помощи светового микроскопа яйца клещей условно подразделили на три группы соответственно срокам эмбриогенеза (Соколова и соавт., 1989) для стандартизации материала. Первую группу составили яйца на "ранних" стадиях эмбриогенеза, соответствующих стадиям от начала дробления до закладки конечностей. Во вторую группу объединены яйца на "поздних" стадиях эмбриогенеза - расчленение и укорочение конечностей. К третьей группе отнесли яйца со сформированными личинками в яйцевых оболочках, в том числе с личинками на стадии разворота щетинок задних ног. При погружении яиц клещей в водную эмульсию на 20 минут не достигнут 100% овицидный эффект (суммарная гибель яиц всех групп составила 83%) (табл. 9). Максимальная гибель эмбрионов без продолжения развития отмечена в I группе яиц - погибло шесть из девяти яиц, тогда как в остальных трех развитие эмбрионов продолжилось - в двух яйцах до "поздних" стадий и в одном сформировалась личинка. На этих стадиях эмбриогенез прекратился и яйца погибли.
Из семи яиц на "поздних стадиях" эмбриогенеза в пяти сформировались личинки, однако выплод произошел в единственном случае при дораз-витии личинки из яйца II группы. В остальных случаях отрождения не произошло, хотя одна личинка прорвала яйцевую оболочку, но покинуть ее не смогла. Две сформированные личинки в яйцах III группы, в том числе одна личинка на стадии "разворота хет", сохранили жизнеспособность после обработки и смогли освободиться от яйцевых оболочек. При увеличении экспозиции до 40 минут общая овицидность практически не изменилась (табл. 10). Следует отметить, что в I и II группе погибли все яйца, однако отрождение личинок, сформированных на момент контакта с акарицидом, произошло в 50% случаев (рис. 7). Полная гибель яиц была достигнута при экспозиции 180 минут (табл. 11). Все яйца погибли на тех же стадиях эмбриогенеза, на которых они подверглись воздействию 0,4% рабочей эмульсии средства "Медифокс" в течение 3 часов. При этом погибли даже сформированные личинки в яйцевых оболочках. В контрольных вариантах гибели яиц не наблюдали.
При инкубировании шести яиц, не подвергавшихся действию акарицида, эмбриогенез завершился выходом жизнеспособных личинок. Кроме того, из литературы известно, что естественная эмбриональная смертность яиц составляет не более 2% (Соколова, Лопатина, 2003), что соотносится с контрольным вариантом нашего эксперимента. Данные по изучению акарицидной активности по отношению к активным стадиям (самки, личинки) после одно-, двух- и трехкратной обработки больных чесоткой представлены в табл. 12. Установлено, что при повторных нанесениях эффективность средства возрастает. Несмотря на то, что непосредственно после первой аппликации средства в ходах были обнаружены живые самки, гибель их наступила в течение суток после извлечения, что соотносится с лабораторным экспериментом, в котором гибель самок после погружения на 1 мин наступала в течение двух суток. В эксперименте in vivo скорость наступления гибели самок была выше, что связано с более длительным временем контакта. Это может свидетельствовать о гибели самок в течение суток после однократного применения средства. После второй обработки больных чесоткой в ходах живых самок не обнаружили, несмотря на хорошую сохранность ходов и высокий (до 20) паразитарный индекс больных. После одно-двукратной обработки больных в репродуктивных ходах обнаружены как уже погибшие после обработки личинки, так и только что вышедшие из яиц живые особи (рис. 8), что свидетельствует о неполной ови-цидной активности средства, в результате чего в части яиц продолжается развитие эмбрионов до выхода личинок.
