Содержание к диссертации
Введение
Часть 1. Обзор литературы глава
1. Морфологическая и ультраструктурная характеристика клеток некоторых микроорганизмов.
1.1. Морфофункциональная характеристика Mycobacterium tuberculosis l 2
1.2. Морфофункциональная характеристика Mycobacterium lufu 15
1.3. Морфофункциональная характеристика Mycobacterium leprae 16
1.4. Общая характеристика Staphylococcus aureus 21
ГЛАВА 2. Растительные клетки, несущие биологически активные вещества
2.1. Характеристика биологически активных веществ растительных клеток 23
2.2. Особенности клеточных компонентов некоторых растений Астраханской области с противомикробными и иммуномодулирующими свойствами 29
2.3. Особенности лектиновых белков клеток растительных организмов 3 9
ГЛАВА 3. Материалы и методы исследования 48
Часть 2. Результаты собственных исследований
ГЛАВА 4. Изучение морфофункциональных особенностей клеток микобактерий и фагоцитов под влияния биологически активных веществ растений
4.1. Морфологические изменения клеток микобактерий в норме и под влиянием биологически активных веществ растений ; 59
4.2. Ультраструктурные изменения клеток микобактерий под влиянием клеточных биологически активных веществ растений 69
4.3. Оценка функционального состояния фагоцитов мышей, зараженных внутрибрюшинно Mycobacterium tuberculosis под действием
биологически активных веществ растений 75
ГЛАВА 5. Изучение морфофункциональных особенностей клеток Mycobacterium leprae в организме экспериментальных животных под влиянием растительных биологически активных веществ
5.1. Изменение ультраструктуры клеток Mycobacterium leprae в макрофагах экспериментальных животных под влиянием биологически активных веществ растений 78
5.2. Изучение развития микобактерий и иммунных клеток крови мышей, зараженных Mycobacterium leprae под влиянием биологически активных веществ растений 82
ГЛАВА 6. Исследование изменений морфологических особенностей клеток Staphylococcus aureus при воздействии клеточных веществ различных растительных экстрактов 86
ГЛАВА 7.Обсуждение результатов исследования 95
Выводы 109
Приложение 111
Список литературы
- Морфофункциональная характеристика Mycobacterium lufu
- Особенности клеточных компонентов некоторых растений Астраханской области с противомикробными и иммуномодулирующими свойствами
- Ультраструктурные изменения клеток микобактерий под влиянием клеточных биологически активных веществ растений
- Изучение развития микобактерий и иммунных клеток крови мышей, зараженных Mycobacterium leprae под влиянием биологически активных веществ растений
Введение к работе
Известно, что животные и растительные организмы состоят из совокупности клеток, которые составляют тканевые или органные композиции, связанные между собой гуморальными и нервными формами регуляции. Однако, клетки микроорганизмов по своей структуре и функциям, являют собой полноценный одноклеточный организм, отвечающий за физиологическую регуляцию и саморепродукцию (В.Б.Сбойчаков, 2007).
Поэтому в нашей работе изучались клетки микроорганизмов как самостоятельные саморегулирующие и самовоспроизводящие структуры, а также взаимосвязи бактериальных клеток с организмом-хозяином, динамика изменений морфологии и функции микробных клеток под влиянием компонентов биологически активных веществ, выделяемых клетками ряда дикорастущих растений.
К клеткам микобактерий, вызывающим патологию в отношении человеческого организма, относятся клетки Mycobacterium leprae и Mycobacterium tuberculosis. Естественным окружением клеток микобактерий лепры в случае взаимоотношении с тканями организма -хозяина являются клетки подкожной клетчатки и лимфы большинстве случаев макрофаги. По мнению P.Draper, в случае инфицирования Mycobacterium leprae, претерпевают изменения не только клетки хозяина, в том числе макрофагальные клетки, но и структура самой микобактерий видоизменяется в сравнении с «типичной» (P.Draper, 1986).
Механизм действия современных химиотерапевтических препаратов на микробную клетку сложен и многообразен. Он связан с их влиянием на ферментативную систему микроба, интенсивность дыхания, обмен веществ, а в результате этого на процессы размножения и жизнедеятельности бактерий. Однако те же средства оказывают влияние на состояние нервной и эндокринной систем организма-хозяина,
тканевое дыхание, обмен витаминов в организме, а также на течение воспаления. Именно с общим и органотропным действием химиотерапевтических средств связаны, в частности, возникающие во время лечения аллергические и токсические проявления в виде дисфункции нервной системы, желез внутренней секреции, печени, желудочно-кишечного тракта, нарушения нормального кроветворения и т.д. (А.В.Забелин, 1882).
В связи с неблагополучной ситуацией по туберкулезу в последние годы стало увеличиваться число клеток M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью к наиболее распространенным химическим антибиотикам изониазиду и рифампицину. По мнению многих ученых фтизиатров, это вызывает интерес к изучению структуры и особенностей клеточной организации этих микобактерий, их взаимодействия с химическими препаратами в организме (О.А. Иртуганова, 2006). Известно так же, что в организме, инфицированном M.tuberculosis отмечается дефект функциональной активности моноцитов периферической крови, в частности, по показателям угнетения их поглотительной способности (В.А. Шатров с соавт., 1985).
Актуальность использования лекарственных растений неизмеримо возросла в последние десятилетия. Это связано с высокой активностью некоторых компонентов растений по отношению к клеткам-возбудителям и меньшей степенью резистентности микроорганизмов к растительным веществам (Л.Т.Сухенко с соавт., 2007).
В последнее время описаны химические структуры и биологическая активность комплекса компонентов внутриклеточного содержимого растительных организмов. Некоторые белковые соединения растений, такие как лектины, являющиеся аналогами антител животного и человека так же могут обладать иммуномодулирующими свойствами (В.М.Лахтин, 1987-1989). Изучение взаимодействия углеводных компонентов
поверхностей клеточных стенок прокариот с биологически активными веществами растений, может дать информацию о лектинах, содержащихся среди них, а также обосновать применение растительных препаратов при лечении инфекционных заболеваний (А.Антонюк, 1987).
Поэтому, необходимость дальнейшего и более тщательного изучения воздействия биологически активных клеточных веществ растений на морфологические особенности бактериальных клеток, в том числе микобактерий и их структурные компоненты не вызывает сомнений.
Результаты изучения влияния этих растительных компонентов на структуры клеток патогенных бактерий позволят предложить новые формы противомикробных препаратов, которые будут губительно действовать на микроорганизмы. Понимание структур микобактерий, возможно, поможет разработать такие растительные препараты, которые наилучшим образом смогут проникать внутрь бактериальных клеток и их разрушать или инактивировать.
Цель настоящего исследования:
Изучить влияние биологически активных клеточных компонентов дикорастущих лекарственных растений Астраханского региона на структуру бактериальных клеток, в том числе микобактерий.
Задачи исследования:
Методами световой и электронной микроскопии изучить морфологические и ультраструктурные особенности клеток микобактерий M.tuberculosis, M.lufu и M.leprae без действия и под влиянием клеточных компонентов растений.
Изучить влияние биологически активных растительных веществ на функциональную активность перитонеальных макрофагов мышей, зараженных внутрибрюшинно M.tuberculosis.
Изучить миелопероксидазную способность системы фагоцитов
повышать иммунопротективный эффект в присутствии биологически активных веществ.
Провести сравнительное изучение морфологических особенностей клеток Staphylococcus aureus в норме и при воздействии биологически активных веществ некоторых растений Астраханской области.
Изучить возможность использования биологически активных веществ экстрагируемых из клеток растений для оптимизации лечения ряда инфекционных заболеваний в эксперименте.
Научная новизна исследования:
Впервые проводилось изучение морфологических особенностей бактериальных клеток (Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium lufu, Mycobacterium leprae и Staphylococcus aureus) под влиянием биологически активных веществ дикорастущих растений Астраханского региона.
Впервые изучено влияние на ультраструктурные особенности различных видов патогенных и условно-патогенных микобактерий биологически активных веществ ряда дикорастущих растений Астраханского региона.
Обнаружены лектин - углеводные взаимодействия между углеводными рецепторами Staphylococcus aureus и лектиноподобными компонентами клеток растений Астраханской области, способные инактивировать и разрушать клетки микроорганизмов.
Практическая значимость работы:
Получены новые данные о взаимодействии с клетками микобактерий биологически активных веществ растений, что может быть использовано в комплексной терапии микобактериозов
Результаты данной работы вошли в инновационный проект, финансируемый фондом развития малых форм предприятий в научно-технической сфере (ФРМФНП) «Старт 2007»: «Разработка новых растительных препаратов «ГЛИЦИР-ФИТ>> с антибактериальным
действием».
В результате научных разработок предложены способы ингибирующего влияния нативных растительных веществ на клетки микобактерий, обладающие, как профилактическим, так терапевтическим действием.
Получено положительное решение Федерального института промышленной собственности (ФИПС) на заявку: «Экстракты солодки голой, обладающие противотуберкулезной активностью».
Апробация работы:
Основные результаты исследования обсуждались на международных конференциях в Российской федерации, Украины, материалы работы доложены на заседании Астраханского областного научно-практического общества микробиологов и эпидемиологов (2005 - 2006 гг.); на ученом совете НИИ по изучению лепры (2007 - 2008 гг.).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ в РФ и за рубежом, 3 из которых в изданиях перечня ВАК РФ.
Основные положения, выносимые на защиту.
Показано, что клетки микобактерий под воздействием биологически активных веществ растений подвергаются изменениям. Обнаружено изменение морфологических признаков клеток микобактерий: M.tuberculosis, M.lufu in vitro и Mycobacterium leprae in vivo под влиянием биологически активных веществ экстрактов из соцветий Helichrysum arenarium L.. Achillea micrantha W., корня, стебля и листьев Glycyrrhiza glabra. Показано, что клетки микобактерий под влиянием биологически активных веществ экстрактов, подвергаются фрагментации, а основные структурные компоненты клеток (клеточная стенка, плазматическая мембрана, цитоплазма, рибосомы, включения) были разрушены.
Показано, что в основе механизма действия биологически
активных растительных веществ лежит повышать функциональную активность перитонеальных макрофагов и увеличивать активность фермента миелопероксидазы, входящей в состав одной из основных бактерицидных систем фагоцитов.
Биологически активных вещества растительных экстрактов повышают миелопероксидазную активность нейтрофилов крови экспериментальных животных зараженных МЛергае и тем самым, оказывают иммунопротективное действие. Кроме того, эти вещества способствуют стимуляции клеточного иммунитета, усиливая фагоцитарные функции макрофагов.
Под воздействием биологически активных веществ растительных экстрактов клетки Staphylococcus aureus изменяли свою морфологическую структуру по сравнению с интактными клетками, а также способствовали склеиванию их в конгломераты, при резком сокращении клеток в поле зрения. Установлено, что в экстрактах растений Астраханской области содержатся лектиноподобные белковые компоненты, способные связываться с синтетическими лектинузнающими углеводами клеточных стенок бактерий.
5. На основании проведенных исследований предложена
возможность использования биологически активных веществ экстрактов
растений для противотуберкулезной терапии в эксперименте.
Часть 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. Морфологическая и ультраструктурная характеристика клеток
некоторых микроорганизмов.
1.1. Морфофункциональная характеристика Mycobacterium tuberculosis Клетки Mycobacterium tuberculosis имеют вид прямых или слетка изогнутых палочек. В литературе описаны зернистые, гомогенные, булавовидные, нитевидные и ветвящиеся формы с булавовидными утолщениями на концах, длинные формы в виде грибов. Форма микобактерий не является постоянной и изменяется под влиянием внешней среды (А.И.Каграмов, 1955; R.Radanov, 1971). Микобактерий туберкулеза неподвижны, спор и капсул не образуют. Грамположительны, спирто- и кислотоустойчивы, окрашиваются по Цилю-Нильсену в красный цвет (В.Б. Сбойчаков, 2007). Ряд авторов (В.В.Ерохин и др., 1971, 1972; Л.Н. Кац и др., 1972) наблюдали кислотоподатливые палочки M.tuberculosis, что предполагает существование у них сложного жизненного цикла. В литературе описаны фильтрующиеся и L-формы микобактерий (L-формы микобактерий туберкулеза, 1980). Однако вопрос о роли и значении этих форм еще мало изучен.
M.tuberculosis размножаются путем поперечного деления. Растут они довольно медленно (одно деление за 14 часов) при температуре 3-3 8 С на искусственных и полусинтетических питательных средах (глицериновых, картофельных, яичных, овощных). Известно, что M.tuberculosis нестрогие аэробы. Микобактерий содержат никотиновую кислоту. Из ферментов -цитохромоксидазу, дегидрогеназу, каталазу, пероксидазу, уреазу, никотинаминазу, пираминаминазу, нитратредуктазы, арилсульфатазу, липазу, фосфатазу, р-галактозидазу, редуктазу, уреазу (А.К.Маслов, 1982). Первыми электронномикроскопическими исследованиями были изучены только величина и форма целых клеток (А.И.Каграмов, 1955;
Г.Г.Цембалару, 1967). Из деталей внутреннего строения были отмечены на концах клеток гранулы и вакуоли. Цитоплазма молодых клеток гомогенна, старых — зерниста. Исследования, выполненные с применением метода ультратонких срезов, показали сложность внутреннего строения клеток M.tuberculosis (А.К.Маслов, 1982).
На поверхности клеток определяется умеренно электронноплотный слой, имеющий бахромчатое строение - «микрокапсула». Внутри от микрокапсулы расположен электроннопрозрачный слой клеточной стенки, повидимому, состоящий из липидов (Л.Н. Кац, 1972). Электронноплотная часть клеточной стенки выявлялась в виде одноконтурного электронноплотного образования, тесно прилегающего к наружному слою плазматической мембраны. Плазматическая мембрана состоит из двух электронноплотных слоев, разделенных электроннопрозрачный (В.В. Ерохин и др., 1971, 1972; Л.Н. Кац и др., 1972). Методом напыления на поверхности M.tubereulosis учеными выявлены фибриллярные структуры (R.Radanov, 1971; А.А. Авакян и др., 1972).
Электронноплотная часть клеточной стенки фактически состоит из двух слоев, неодинаковых посвоему химическому составу. Наружный слой имеет липополисахаридо-липидо-протеиновую природу. Полисахариды в этом слое представлены маннозой, глюкозой, галактозой и арабинозой. Внутренний слой содержит липополисахаридо-мукопептидный комплекс (Imaeda Т. et ai, 1968; М.Р.Дж. Солтон, 1960).
По мнению П.Дж.Бреннана и Ф.Дрепера пептидогликан-арабиногалактан миколат формирует так называемый скелет клеточной стенки. С ним связано большое число различных липидов, гликолипидов и протеинов. Их состав существенно отличается у различных видов микобактерий, но анатомическую ситуацию M.tuberculosis не изменяет и влияние его на ультраструктуру остается неясным.
Клеточная стенка, по литературным сведениям (П.Дж.Бреннан с соавт., 2002), состоит из трех слоев. Внутренний слой имеет умеренную электронную плотность и, вероятнее всего, содержит пептидогликан; его умеренная электронная плотность соответствует известным особенностям окрашиваемо сти этих молекул, содержащих карбоксиловые группы (диаминопамеликовая кислота), связывающие ионы металлов.
Средний электронно-прозрачный слой более широкий, по-видимому, образован арабиногалактан-миколатом — липополисахаридом, формирующим наиболее значительную часть стенок микобактерий. Его прозрачность для электронов, скорее всего, объясняется высокой гидрофобностыо этого вещества, а также недостаточным содержанием реактивных химических групп, способных связывать красители.
Наружный электронно-непроницаемый слой идентифицирован как отдельное образование - микрокапсула. Данный слой бывает весьма вариабельный по толщине и по виду, что зависит от содержания определенных веществ. Окрашивание данного слоя рутениумом красным оказывает на присутствие в нем полисахаридов.
Хроматиновые структуры (ДНК) выявляющиеся на ультратонких
срезах в виде нитей, выполняют функцию ядра. Электроннопрозрачная
зона, заключающая хроматиновые структуры (нуклеоид) не ограничена
мембраной от окружающей цитоплазмы (В.В. Ерохин с соавт., 1971,
А.А. Авакян с соавт., 1972). Цитоплазма клеток M.tuberculosis содержит
рибосомы и включения различных размеров сферические гранулы,
непроницаемые для электронов (зерна метафосфата);
электроннопрозрачные вакуоли, ограниченные мембраной (включения липидов, экстрагированных из клетки в процессе препарирования) и гранулы с умеренной электронной плотностью («гомогенные тельца»), роль которых до настоящего времени остается невыясненной (H.Kolbel, 1958; А.К.Маслов, 1982.). Инвагинируя внутрь цитоплазмы M.tuberculosis,
плазматическая мембрана образует мезосомы. Мезосомы часто обнаруживаются около перегородки деления и часто связаны с ней и нуклеоидом (R.Radanov, 1971, В.В. Ерохин и др., 1971, Л.Н.Кац, 1978). Деление M.tuberculosis осуществляется путем врастания поперечной перегородки от периферии к центру клетки. Кроме того, деление M.tuberculosis, может осуществляться путем перетяжки (А.А. Авакян и др., 1972; Л.Н. Кац и др., 1978; А.К.Маслов, 1982.). Деление M.tuberculosis может происходить также путем «растрескивания» цитоплазмы в центре бактериальной клетки, и в дальнейшем Формирование перегородки происходит от центра к периферии (А.А. Авакян и др., 1972). Однако такой способ деления представляется маловероятным ввиду отсутствия морфологической основы образующейся перегородки.
1.2. Морфофункциональная характеристика Mycobacterium lufu
Mycobacterium lufu были впервые выделены из почвы в Заире в 1980 году Portaels (F. Portaels, 1980). Таксономическое положение этих микроорганизмов пока не определено. Они охарактеризованы как сапрофитные, медленно растущие (на плотных питательных средах M.lufu дает рост на 4-6-й неделе при оптимальной температуре 31 С), кислотоустойчивые микроорганизмы (F. Portaels, 1980; J.K. Seydel, 1982). До настоящего времени M.lufu не классифицированы и некоторыми авторами предполагается, что M.lufu являются внеорганизменной частью популяции M.leprae (М.Ю.Юшин, 2007).
Чувствительность M.lufu к действию сульфонов, сравнимая с таковой у M.leprae предполагает возможность использовать их в качестве тест-штамма для скрининга химических соединений с потенциальной противолепрозной активностью (О.А Иртуганова с соавт., 1984), а также для создания комбинаций уже известных противолепрозных средств с
изучением их синергидного, аддитивного или антагонистического действия (М.Ю.Юшин, 2007). На бесклеточных фалат-сингезирующих экстрактах, выделенных из M.lufu, изучали механизм действия дапсона (О.А Иртуганова с соавт., 1984).
В большинстве указанных: работ были использованы как сульфоночувствительные штаммы M.lufu, так и штаммы с высокой резистентностью к дапсону. Исследований по экспериментальному заражению животных M.lufu проводилось в НИИ по изучению лепры, где культура M.lufu была получена в 1981 году от профессора J.K. Seydel (ФРГ) при содействии ВОЗ. В опытах in vivo было доказано, что M.lufu, выращенные на среде Левенштейна-Иенсена, способны размножаться в падушечках лап мышей при интраплантарном заражении по методу С. Shepard (М.Ю.Юшин с соавт., 1994). Некоторыми учеными НИИ по изучению лепры проводились исследования морфологии M.lufu методом электронной микроскопии и биологических свойств этих микроорганизмов методами биохимии и гистохимии (М.Ю. Юшин с соавт., 1997, 2007). Изучение морфологических характеристик M.lufu показало, что они представляют собой грамположительные кислотоустойчивые палочки, дающие при люминесцентной микроскопии золотистое свечение (О.В. Калянина с соавт., 2000).
1.3. Морфофункциональная характеристика Mycobacterium leprae
При исследовании с помощью микроскопа Mycobacterium leprae имеют вид палочек с закругленными концами. Микобактерии Ганзена характеризуются полиморфизмом. Еще A. Hansen (1880) находил в препаратах из лепромы палочки различных размеров и форм, расположенные внутриклеточно группами параллельно друг другу, в виде так называемых «глоби». В литературе имеются описания различными
исследователями (М. Nishiura et al, 1969; А.А. Авакян и др., 1972)
нитевидных, булавовидных, кокковидных, овоидных и ветвистых форм
микобактерии лепры. Микобактерии Ганзена кислото- и
спиртоустойчивы, окрашиваются в красный цвет по методу Циля-Нильсена. В препаратах с кожных поражений больных микобактерии лепры встречаются, в основном, в виде двух форм: гомогенной (равномерно окрашенные палочки) и зернистой (палочки, состоящие как бы из цепочки зерен). Вопрос о жизнеспособности и активности зернистых форм не раз дискутировался в печати. Некоторые авторы склоняются к признанию зернистых форм как дегенеративных (M.F.R.Waters, 1967; А.А.Ющенко, 1970).
Вопрос о культивировании М. leprae, все еще остается нерешенным. Попытки культивирования М. leprae в клеточных системах оказались безуспешными так же, как и в бесклеточных. Со времени открытия микобактерии лепры, предпринимались многочисленные попытки заражения ими животных. Наиболее употребительными являются модели лепры на мышах (интраплантарное заражение мышей и тимэктомированные мыши) (С.С. Shepard, 1960), а также модель лепры на девятипоясных броненосцах (W.F. Kirhheimer, 1971).
Морфофункциональные свойства М. leprae изучены биохимическими методами недостаточно. Это связано, как с методическими трудностями получения М. leprae, очищенных от компонентов тканевых клеток, так и с ограниченным количеством материала. Известны работы (В.М. Braganca, 1960; К. Prabhakaran, 1967; А.К.Маслов, 1982) по обнаружению в клетках возбудителя лепры сукцинатдегидрогеназы, цитохромоксидазы и других ферментов пути переноса электронов. Активность обнаруженных ферментов оказалась низкой. В 1966 г. было сообщено об избирательном окислении диоксифенилаланина ДОФА микобактериями лепры (К. Prabhakaran, 1966, 1967). Исследования этих и других авторов
подтвердили уникальность окисления ДОФА (К. Prabhakaran с соавт.,
1972, 1976). Однако, в печати не раз появлялись сообщения о том, что это
лишь погрешности метода и наличие ДОФА - оксидазы не столь
уникально для М. leprae (O.K. Srinsnes, 1975;
L. Kato, 1973). В частности, отрицательный результат был получен при попытке продемонстрировать гистохимическими ДОФА - оксидазную активность у М. leprae из материала, взятого от больного лепрой лепроматозного типа. Вслед за этим группа авторов пришла к аналогичному выводу после серии биохимических исследований, в которых была показана способность гиалуроновой кислоты реагировать с ДОФА и другими фенольными соединениями, с образованием производных, характерных для маркеров на ДОФА - оксидазу (K.Prabhakaran с соавт., 1975,1980). Сам же автор метода (K.Prabhakaran, 1986) считает, что последние отрицательные результаты ряда исследователей связаны с погрешностями или отклонениями от метода выявления ДОФА - оксидазы.
Со времени внедрения метода ультратонких срезов рядом отечественных и зарубежных авторов были разработаны общие положения, касающиеся основных структурных компонентов возбудителя лепры. Так, можно считать доказанным существование наружного капсулярного слоя (микрокапсулы), имеющего фибриллярный вид и, следовательно, значительно варьирующего по толщине (5-50 нм). Этот слой хорошо заметен при окрашивании рутениевым красным, что демонстрирует его мукополисахаридную природу (А.К.Маслов, 1982; П.Дж.Бреннан с соавт., 2002). Методом напыления хромом или платиной-палладием было показано, что наружная поверхность клеток М. leprae имеет вид сети из лентовидных или нитевидных возвышений и состоит из парных фиброзных структур (Nishiura и др. 1969) пептидогликолипидной природы (Т. Imaeda,1963). Клеточная стенка М. leprae состоит из 3-х слоев.
Наружный электропрозрачный слой определяется в виде равномерной каемки по всему периметру среза M.leprae. Электронноплотный слой клеточной стенки выявлен в виде одноконтурного образования, плотно прилегающего к плазматической мембране. На частично лизированных клетках, однако, удавалось проследить разделение этого слоя на два, что показывает двухслойный характер этого слоя клеточной стенки (А.А.Ющенко, 1970). Мембранный аппарат микобактерий представлен плазматической мембраной и мезосомами. На ультратонких срезах микобактерий плазматическая мембрана определялась в виде трехслойного образования. Внутренний и наружный слои плазматической мембраны -электронно-плотные, а разделяющий их слой - электроннопрозрачный. (R. Radanov с соавт., 1971; А.А.Ющенко, 1970), В отдельных местах бактериальной клетки плазматическая мембрана инвагинировала в сторону цитоплазмы, образуя внутрицитоплазматические структуры - мезосомы. Эти структуры могут принимать различную форму и иметь различные размеры. Чаще всего это трубчатые, везикулярные, гроздевидные, пластинчатые и петлеобразные конфигурации мезосом. По величине они могут быть малыми в виде только одного витка, либо занимают весь поперечник бактериальной клетки. Иногда, инвагинируя внутрь цитоплазмы бактериальной клетки, мезосомы образуют полость, открытую в сторону клеточной стенки. Однако это случается редко, так как петли мезосом обычно тесно прилегают друг к другу. Морфологическим субстратом мезосом является трехслойная мембрана по строению соответствующая плазматической мембране. Это обусловлено тем, что мезосомы являются инвагинатами плазматической мембраны и анатомически связаны с ней.
Мезосомы встречались, в основном, в области формирующейся перегородки деления бактериальной клетки. Нередко удавалось наблюдать связь мезосом с врастающей перегородкой. Обычно мезосомы достигали
области нуклеоида и даже проникали в нее. Учитывая отсутствие ядерной мембраны нельзя отрицать возможность прямого контакта мезосом с ядерным веществом. В лизированных клетках мезосом обычно не обнаруживалось. Цитоплазма М. leprae представлена мелкогранулярным умеренно электронноплотным веществом, заключенным между плазматической мембраной и нуклеоидом. Она заполнена мелкими электронноплотными гранулами, характер которых соответствует рибосомам (S. Sato, 1968, А.А.Ющенко, 1970, В.В. Ерохин с соавт.,1972). Рибосомы М. leprae округлой или несколько овальной формы. Довольно часто рибосомы образуют скопления или цепочки - полирибосомы. Они расположены, в основном, вокруг зоны нуклеоида. Из включений в цитоплазме клеток М. leprae отмечены электронно-прозрачные вакуоли, ограниченные мембраной, умеренно электронно-плотные и электронноплотные гранулы различных размеров. Электронноплотные включения, округлые или несколько овальные, характеризовались значительной электронной плотностью. По внешнему виду эти гранулы аналогичны метахроматиновым гранулам (волютину) других видов бактерий. Эти гранулы располагались в различных местах цитоплазмы, не заходя в область нуклеоида. Количество их на клетку в некоторых случаях было значительным. Следующий вид включений, обнаруженных автором в клетках микобактерий лепры - гранулы с низшей электронной плотностью по сравнению с окружающей их цитоплазмой - «гомогенные тельца». Они не ограничены мембраной и электронная плотность их постепенно от центра к периферии сравнивается с электронной плотностью цитоплазмы. Кроме вышеописанных включений А.К.Маслов (1982) в клетках М. leprae обнаружил электроннопрозрачные вакуоли, ограниченные трехслойной мембраной. Форма включений округлая или слегка вытянутая. Ядерный аппарат M.leprae (нуклеоид) расположен в центре клетки и представлен веществом низкой электронной плотности, в котором заключены
волокнистые структуры - фибриллы ДЬЖ. На ультратонких срезах клеток М. leprae нуклеоид нечетко отделен от окружающей цитоплазмы. Довольно часто в область нуклеоида вдаются «гомогенные тельца».
1.4. Общая характеристика Staphylococcus aureus.
Стафилококки — бактерии рода Staphylococcus (от греч. staphyle — виноградная гроздь); входят в состав нормальной микрофлоры тела человека, обитая в носоглотке, ротоглотке и на коже: разделяются на виды: Staphylococcus aureus (наиболее патогенный для человека), S. epidermidis, S. saprophyticus и др. Коагулазаотрицательные стафилококки колонизируют кожу, в т.ч. S. hominis, S. haemolyticus, S. warneri, S. capitis (на лбу, лице), S. saprophyticus, S. caprae, S. Saccharolyticus, S. pasteuri, S. lugdunensis, S. simulans, S. xylosis, S. auricularis (колонизирует наружный слуховой канал). Вызывают гнойно-воспалительные заболевания и пищевую токсикацию (Большая медицинская энциклопедия, 1985; Определитель бактерий Берджи, 1997; В.Б.Сбойчаков, 2007).
Чрезвычайная острота и важность проблемы стафилококковых
инфекций, называемых «стафилококковым бедствием, стафилококковой
чумой», обусловлена широким распространением во всех странах
антибиотикоустойчивых штаммов стафилококков. Стафилококки
устойчивее других бактерий к действию жара, света, высушивания, экстремальных температур и химических агентов. Они выдерживают 60С в течение часа, а отдельные штаммы даже 80С в течение 30 минут, хотя большинство вегетативных форм бактерий погибают при воздействии 60С в течение 30 минут. (С.Е.Коштоян, 1981; Р.В.Измайлова, 1982; А.В.Забелин и др., 1882).
При исследовании; в световом микроскопе препаратов, окрашенных по Граму, цитоплазма окрашивается гомогенно в фиолетовый цвет, спор не имеют, капсул обычно не образуют. Патогенен, образует экзотоксины.
Встречается при раневых инфекциях. Вызывает фурункулез, сепсис, остеомиелит, пневмонию, пищевые отравления. (А.В. Алеушина, 2003; В.Б.Сбойчаков, 2007).
А.А. Авакяном, Л.Н. Кац и И.Б.Павловой (1972) было замечено, что на ультратонких срезах стафилококка, выделенного от инфицированных мышей, выявляется фибриллярный материал микрокапсулы. А у клеток, выращенных на питательной среде, микрокапсула не выявляется. Клеточная стенка имеет четко выраженный электронноплотный внутренний слой. Иногда слегка уплотнен ее наружный слой. Реже клеточная стенка имеет гомогенное строение. Общая толщина ее 25—33 нм.
А.А. Авакяном с соавторами обнаружено, что цитоплазматическая мембрана стафилококка обычно выявляется как одноконтурная. Однако в некоторых местах, особенно в местах формирования перегородок у делящихся клеток, можно наблюдать двухконтурную (трехслойную) цитоплазматическую мембрану толщиной 7—8 нм. Особенно четко двухконтурная структура цитоплазматической мембраны видна на лизированных клетках и на клетках, подвергавшихся действию пенициллина (А.А. Авакян и др., 1972).
Морфофункциональная характеристика Mycobacterium lufu
При исследовании с помощью микроскопа Mycobacterium leprae имеют вид палочек с закругленными концами. Микобактерии Ганзена характеризуются полиморфизмом. Еще A. Hansen (1880) находил в препаратах из лепромы палочки различных размеров и форм, расположенные внутриклеточно группами параллельно друг другу, в виде так называемых «глоби». В литературе имеются описания различными исследователями (М. Nishiura et al, 1969; А.А. Авакян и др., 1972) нитевидных, булавовидных, кокковидных, овоидных и ветвистых форм микобактерии лепры. Микобактерии Ганзена кислото- и спиртоустойчивы, окрашиваются в красный цвет по методу Циля-Нильсена. В препаратах с кожных поражений больных микобактерии лепры встречаются, в основном, в виде двух форм: гомогенной (равномерно окрашенные палочки) и зернистой (палочки, состоящие как бы из цепочки зерен). Вопрос о жизнеспособности и активности зернистых форм не раз дискутировался в печати. Некоторые авторы склоняются к признанию зернистых форм как дегенеративных (M.F.R.Waters, 1967; А.А.Ющенко, 1970).
Вопрос о культивировании М. leprae, все еще остается нерешенным. Попытки культивирования М. leprae в клеточных системах оказались безуспешными так же, как и в бесклеточных. Со времени открытия микобактерии лепры, предпринимались многочисленные попытки заражения ими животных. Наиболее употребительными являются модели лепры на мышах (интраплантарное заражение мышей и тимэктомированные мыши) (С.С. Shepard, 1960), а также модель лепры на девятипоясных броненосцах (W.F. Kirhheimer, 1971).
Морфофункциональные свойства М. leprae изучены биохимическими методами недостаточно. Это связано, как с методическими трудностями получения М. leprae, очищенных от компонентов тканевых клеток, так и с ограниченным количеством материала. Известны работы (В.М. Braganca, 1960; К. Prabhakaran, 1967; А.К.Маслов, 1982) по обнаружению в клетках возбудителя лепры сукцинатдегидрогеназы, цитохромоксидазы и других ферментов пути переноса электронов. Активность обнаруженных ферментов оказалась низкой. В 1966 г. было сообщено об избирательном окислении диоксифенилаланина ДОФА микобактериями лепры (К. Prabhakaran, 1966, 1967). Исследования этих и других авторов подтвердили уникальность окисления ДОФА (К. Prabhakaran с соавт., 1972, 1976). Однако, в печати не раз появлялись сообщения о том, что это лишь погрешности метода и наличие ДОФА - оксидазы не столь уникально для М. leprae (O.K. Srinsnes, 1975; L. Kato, 1973). В частности, отрицательный результат был получен при попытке продемонстрировать гистохимическими ДОФА - оксидазную активность у М. leprae из материала, взятого от больного лепрой лепроматозного типа. Вслед за этим группа авторов пришла к аналогичному выводу после серии биохимических исследований, в которых была показана способность гиалуроновой кислоты реагировать с ДОФА и другими фенольными соединениями, с образованием производных, характерных для маркеров на ДОФА - оксидазу (K.Prabhakaran с соавт., 1975,1980). Сам же автор метода (K.Prabhakaran, 1986) считает, что последние отрицательные результаты ряда исследователей связаны с погрешностями или отклонениями от метода выявления ДОФА - оксидазы.
Со времени внедрения метода ультратонких срезов рядом отечественных и зарубежных авторов были разработаны общие положения, касающиеся основных структурных компонентов возбудителя лепры. Так, можно считать доказанным существование наружного капсулярного слоя (микрокапсулы), имеющего фибриллярный вид и, следовательно, значительно варьирующего по толщине (5-50 нм). Этот слой хорошо заметен при окрашивании рутениевым красным, что демонстрирует его мукополисахаридную природу (А.К.Маслов, 1982; П.Дж.Бреннан с соавт., 2002). Методом напыления хромом или платиной-палладием было показано, что наружная поверхность клеток М. leprae имеет вид сети из лентовидных или нитевидных возвышений и состоит из парных фиброзных структур (Nishiura и др. 1969) пептидогликолипидной природы (Т. Imaeda,1963). Клеточная стенка М. leprae состоит из 3-х слоев.
Наружный электропрозрачный слой определяется в виде равномерной каемки по всему периметру среза M.leprae. Электронноплотный слой клеточной стенки выявлен в виде одноконтурного образования, плотно прилегающего к плазматической мембране. На частично лизированных клетках, однако, удавалось проследить разделение этого слоя на два, что показывает двухслойный характер этого слоя клеточной стенки (А.А.Ющенко, 1970). Мембранный аппарат микобактерий представлен плазматической мембраной и мезосомами. На ультратонких срезах микобактерий плазматическая мембрана определялась в виде трехслойного образования. Внутренний и наружный слои плазматической мембраны -электронно-плотные, а разделяющий их слой - электроннопрозрачный. (R. Radanov с соавт., 1971; А.А.Ющенко, 1970), В отдельных местах бактериальной клетки плазматическая мембрана инвагинировала в сторону цитоплазмы, образуя внутрицитоплазматические структуры - мезосомы. Эти структуры могут принимать различную форму и иметь различные размеры. Чаще всего это трубчатые, везикулярные, гроздевидные, пластинчатые и петлеобразные конфигурации мезосом. По величине они могут быть малыми в виде только одного витка, либо занимают весь поперечник бактериальной клетки. Иногда, инвагинируя внутрь цитоплазмы бактериальной клетки, мезосомы образуют полость, открытую в сторону клеточной стенки. Однако это случается редко, так как петли мезосом обычно тесно прилегают друг к другу. Морфологическим субстратом мезосом является трехслойная мембрана по строению соответствующая плазматической мембране. Это обусловлено тем, что мезосомы являются инвагинатами плазматической мембраны и анатомически связаны с ней.
Особенности клеточных компонентов некоторых растений Астраханской области с противомикробными и иммуномодулирующими свойствами
Гистологические признаки солодкового корня также своеобразны (рис. 2.1, 2.3). При микроскопическом исследовании поперечного среза особое значение имеют ткани богатые глицирризином: сердцевидные лучи, расширяющиеся во вторичной коре деформированного луба, группы лубяных волокон с сильно утолщенными стенками, окруженных кристаллоносной обкладкой; сосуды древесины разного диаметра окружены группами склеренхимных волокон с кристаллоносной обкладкой (Д.А.Муравьева и др., 2002; Г.П. Яковлев, 2006).
Некоторые авторы (Д.А.Муравьева и др., 2002; Г.П.Яковлев, 2006; И.А.Самылина, 2007) утверждают, что корневища содержат больше глицирризина, чем корни. Кроме того, в них найдены птерокарпаны, куместаны, стильбены, неолигнаны, глициты, циклитолы, гетероциклические соединения группы фурана и пирана. Корневища концентрируют Fe, Sr, Se.
Из солодкового корня вырабатываются экстракты (густой и сухой) и ряд других галеновых препаратов (сироп, эликсир и др.). Используется также сам корень (очищенный) в резаном виде в многочисленных сборах и в испорошкованном виде — в сложных порошках и таблетках. Препараты солодки длительное время применялись как классическое отхаркивающее и мягчительное средство при катаральных заболеваниях дыхательных путей, как слабительное при хронических запорах и как средство, корригирующее вкус многих лекарств (Н.П. Максютина и др., 1995; М.Д.Машковский, 2002). Эмульгирующие свойства экстракта (из-за глицирризиновой кислоты) широко использовались при приготовлении по многим прописям пилюль и микстур. По мнению Г.П.Яковлева, глицирризиновая кислота проявляет противовирусное действие.
Инактивирует вирусы вне клеток, блокирует внедрение активных вирусных частиц внутрь клетки и нарушает способность вируса к синтезу новых структурных компонентов (Г.П. Яковлев, 2006).
Интересные перспективы открываются также в связи с возможным использованием травы солодки (обоих видов) для наработки сапонино-флавоидных препаратов и препарата, обладающего эстрогенным свойством. В последнее время ученые разных стран интенсивно исследуют новую, сравнительно недавно открытую группу гормонально активных веществ кормовых трав — фитоэстрогены и фитогонадотропины (Д.А.Муравьева, 2002).
Другой важной группой БАВ в клетках солодкового корня являются флавоноиды. По мнению И.А.Самылиной с соавторами, (2007) их количество может достигать 3—4%, но в значительных количествах они накапливаются лишь в ограниченном количестве растений. Наиболее интересными являются растения, содержащие рутин, кверцетин близкие к ним флавоноиды, обладающие Р-витаминной активностью. Высокой спазмолитической активностью обладают флавоноиды солодки, рекомендуемые для лечения язвы желудка (С.Я.Соколов, 1990). Выделены флавоноиды, обладающие гипотензивным, мочегонным и другими физиологическими проявлениями (Д.А.Муравьева и др., 2002; Г.П. Яковлев, 2006; И.А.Самылина, 2007).
К наиболее известным соединениям по мнению фармакологов (Д.А.Муравьева и др., 2002; Г.П. Яковлев, 2006; И.А.Самылина, 2007) нужно отнести гликозиды флаванонолов (фолерогенин) и флавонолов . Присутствие в солодковом корне флавоноидных соединений (свыше 55%) послужило основанием к разработке ряда лечебных препаратов, обладающих противовоспалительными, спазмолитическими, противоязвенными и антисекреторными действиями (М.Д.Машковский, 2002). Применяют эти средства при гиперацидных гастритах, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Недавно обнаружены радиопротекторные свойства биологически активных веществ солодки (2002; Г.П. Яковлев, 2006).
Цмин песчаный (Helichrisum arenarium) - это многолетнее травянистое растение 15-30 см высотой. Цветоносных побегов от 5 до 10, они прямостоячие у основания с остатками отмерших листьев. Междоузлия вегетативных бесплодных побегов укороченные, вследствии чего побег имеет вид розетки. Листья очередные, простые, цельнокрайние с маленьким острием на верхушке. Шаровидные корзинки жестких цветков собраны в щитковидные соцветия. Листочки оберток корзинок пленчатые, лимонно-желтые, цветет в июне-августе. Растет на песчаных почвах и по склонам бугров. В качестве лекарственного сырья используются соцветия (B.C. Новиков, 2004).
Ультраструктурные изменения клеток микобактерий под влиянием клеточных биологически активных веществ растений
Таким образом, изучение морфологических признаков клеток микобактерий (M.tuberculosis и M.lufu) и изменения их под влиянием экстрактов соцветий Helichrysum arenarium L и Achillea micrantha W., корня, стебля, соцветий и листьев Glycyrrhiza glabra показывает, что даже при низких концентрациях микробные клетки претерпевают значительное разрушение. Биологически активные растительные вещества способны либо повреждать клеточные оболочки и микрокапсулу микобактерий, либо приводить к нарушению деления клеток, вызывая появление удлиненных морфологически измененных форм, либо адсорбироваться на поверхности, вызывая их агглютинацию. Неокрашенные клетки, возможно, свидетельствуют нарушению синтеза кислотоустойчивых липидов или изменения проницаемости клеточной оболочки, которые обычно обеспечивают кислотоустойчивость. Все эти изменения морфологических особенностей потребовали более детального изучения действия биологически активных веществ растений на внутриклеточные структуры и надмембранные компоненты клеток микобактерий (что было изучено и описано в разделе 4.2).
Для получения полного представления об изменении клеток микобактерий нами была изучена ультраструктура микобактериальных клеток и более детально показано негативное действие активных веществ экстрактов исследуемых растений на клетки. уранилацетатом и цитратом свинца. Увел, х 100000. Изученные интактные клетки M.tuberculosis H37R-V имели вид палочковидных клеток с закругленными концами. На поверхности клеток микобактерий выявлялся слой низкой электронной плотности (микрокапсула), имеющий кнаружи нечеткие, расплывчатые контуры, а внутри вплотную прилегающий к следующему за ними электронно -оптически прозрачному слою клеточной стенки (рис.4.14).
С внутренней стороны от микрокапсулы определялась клеточная стенка, состоящая из 2-х слоев. Наружный слой — электронно-оптически прозрачный - полностью рассеивал электроны, и его присутствие становилось заметным лишь при оттенении поверхностно расположенной микрокапсулы. Электронно-оптически прозрачный слой определялся в виде равномерной каемки по всему периметру микобактериальной клетки. Толщина слоя оказалась одинаковой на всем его протяжении. Электронно-оптически плотная часть клеточной стенки выявлялась в виде одноконтурного электронноплотного образования Толщину клеточной стенки микобактерий, ввиду тесного контакта с ней наружного слоя плазматической мембраны можно было определить только у частично лизированных клеток. Мембранный аппарат микобактерий представлен плазматической мембраной и мезосомами Плазматическая мембрана определялась в виде трехслойного образования. Внутренний и наружный слои плазматической мембраны - электронно-плотные, средний электронно-прозрачный, одинаковой толщины. В цитоплазме были обнаружены нуклеоид, рибосомы, и включения. Нуклеоид микобактерий представлял собой расположенную в центре клетки электронно-прозрачную зону, содержащую нити ДНК. В клетках M.tuberculosis мы отмечали включения трех видов: умеренно электронно-плотные гранулы ("гомогенные тельца"), электронно-плотные гранулы (зерна волютина) и вакуоли, окруженные мембраной (гранулы липидов).
При воздействии на клетки культуры M.tuberculosis H37RV клеточных компонентов экстракта корня Glycyrrhiza glabra было обнаружено большое количество клеток со значительными изменениями структуры на разных этапах разрушения (рис. 4.15 и 1.16). На рис.4.15 видно, что микрокапсула M.tuberculosis, в основном, сохранилась.
Клеточная стенка была размыта, и наблюдались разрывы. Разрушению подвергалась и плазматическая мембрана. Наблюдалось разрежение цитоплазмы. У ряда клеток наблюдалось конденсация цитоплазмы. Рибосомы не обнаруживались, включения отсутствовали.
На рис. 4.16 наблюдалось разрежение цитоплазмы вплоть до полного просветления. Исчезли клеточные структуры цитоплазмы и нуклеоид, были видны разрушенные компоненты, содержимое было слабо структурировано. Практически остались одни лишь клеточные стенки с остатками содержимого клетки внутри них. Все эти изменения констатируют необратимую гибель клеток М. tuberculosis (H37RV) под воздействием экстрактов растений.
При электронно-микроскопическом изучении Mycobacterium lufu было обнаружено, что их ультратонкое строение, в принципе, сходно со строением Mycobacterium tuberculosis. На поверхности интактных бактериальных клеток определялась микрокапсула (рис. 4.17).
Под микрокапсулой определялась электронно-оптически прозрачная и электронно-оптически плотная части клеточной стенки. Вплотную к электронно-оптически плотной части клеточной стенки примыкала трехслойная цитоплазматическая мембрана. Нуклеоид был выражен. В цитоплазме умеренно электронно-оптической плотности располагались рибосомы (в основном по периферии клетки) и включения с низкой электронно-оптической плотностью («гомогенные тела»)
Изучение развития микобактерий и иммунных клеток крови мышей, зараженных Mycobacterium leprae под влиянием биологически активных веществ растений
Наличие преципитирующих линий, между экстрактом соцветий Achillea micrantha и исследуемыми углеводами, между экстрактом семян Glycyrrhiza glabra и лектинузнающим углеводом Gal-ПАА; нечеткое «облако» преципитации между экстрактом Helichrysum arenarium и углеводом Gal-ПАА, экстрактом семян Glycyrrhiza glabra и углеводом Lec-ПАА можно объяснить наличием в клетках растений семейства Asteraceae лектиноподобных белков в соцветиях, а также подтверждает известный факт наличия лектиновых белков в семенах семейства Fabaceae (О.Е. Галанина и др., 1992, Р.Е. Крогулевич, 2000, Л.В.Карпунина, 2002).
Обнаруженное двойное кольцо преципитата между экстрактом семян Glycyrrhiza glabra и углеводом Lee - ПАА, подтверждает данные наличия лектинов в семенах, листьях и в корне Glycyrrhiza glabraa (Р.Е. Крогулевич, 2000).
Исследования В. А. Антонюк и др. (1987) выполненные с использованием лектинов растений показали, что Staphylococcus aureus аглютинируется лектином Limulus polyphaemus СопА, лектином сои, лектином зародышей пшеницы и Magnifera indica. В ходе наших исследований показана специфичность лектинов растений Астраханского региона (Glycyrrhiza glabra, Helichrysum arenarium, Achillea micrantha) к углеводам клеточной стенки Staphylococcus aureus, которые либо могут соединять полисахаридные группы поверхностей соседних клеток, образуя конгломераты, либо могут вызвать ряд изменений в самой бактериальной клетки.
На рис. 4 показаны результаты чувствительности M.tuberculosis (H37RV) к клеточным компонентам экстрактов из соцветий Helichrysum arenarium. Как видно, рост M.tuberculosis отсутствовал только в пробирке с разведением экстракта 1:4. В остальных пробирках с разведениями (1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128) экстракта микобактерии были умеренно устойчивы в отношении компонентов соцветий Helichrysum arenarium
Результаты чувствительности M.tuberculosis (H37R-V) к клеточным компонентам экстрактов из соцветий Helichrysum arenarium L и Achillea micrantha W., а также из различных органов (корень, стебель, соцветия и листья) Glycyrrhiza glabra представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1 наибольшую противотуберкулезную активность проявляет экстракт из корня и соцветий Glycyrrhiza glabra, где только в пробирке с разведением экстракта 1:128 во всех повторениях было обнаружено до трех колоний микобактерии. Наименьшая чувствительность наблюдается у компонентов из стебля Glycyrrhiza glabra, где уже при разведениями экстракта 1:64 наблюдается колония M.tuberculosis. В пробирках с меньшими разведениями рост колоний микобактерии не обнаружен. Микобактерии туберкулеза (H37R.V) к клеточным компонентам экстрактов из соцветий Helichrysum arenarium и Achillea micrantha оказались умеренно устойчивыми. Как видно, рост M.tuberculosis отсутствовал только в пробирке с разведением экстракта Helichrysum arenarium 1:4, в остальных пробирках с разведениями экстрактов обнаруживалось до 40 колоний микобактерии.
Аналогичные исследования чувствительности микобактерии к биологически активным веществам растений были проведены в отношении M.lufu. Результаты занесены и представлены в таб.2.
Из таблицы 2 видно, что наиболее чувствительным M.lufu оказались к клеточным компонентам экстракта из корня и соцветий Glycyrrhiza glabra (менее 3 колоний при разведении экстракта 1:128). Меньшую чувствительность M.lufu проявляли к экстрагированным биологически активным веществам из листьев и стеблей Glycyrrhiza glabra.
Таким образом, микобактерии оказались более чувствительными к клеточным компонентам экстрактов из различных частей Glycyrrhiza glabra, а особенно к биологически активным веществам корня Glycyrrhiza glabra. Возможно, биологически активные клеточные компоненты исследуемых экстрактов Glycyrrhiza glabra могут связываться с соответствующими углеводами стенок микобактерии, инактивируя и впоследствии разрушая их. В условиях ухудшения эпидемиологической обстановки по туберкулезу, поиск новых лекарственных средств из растительного сырья привлекает рядом положительных свойств, которыми обладают фитопрепараты. Некоторые фитопрепараты снижают побочные реакции, возникающие в результате длительного течения заболевания, применения химиопрепаратов, в том числе и антибиотиков (А.К.Маслов, 2007), способствуют нормализации температуры, гемограммы, оказывают антибактериальное действие и уменьшают полости распада при туберкулезе (А.М.Убайдуллаев с соавт., 2008). Однако все перечисленные достоинства фитопрепаратов не принижают достоинства синтетических лекарственных средств и, естественно, терапия должна быть комплексной. В результате данных исследований запатентован метод выделения биологически активных веществ экстракта корня солодки голой, обладающего противотуберкулезной активностью, и, в дальнейшем, применение его для оптимизации и лечения, больных туберкулезом.
