Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 11
1.1 Эмбриогенез и гистогенез эпителиальных тканей поджелудочной железы 11
1.2 Клетки - предшественницы экзокринной ткани поджелудочной железы 14
1.3 Клетки - предшественницы эндокринной ткани поджелудочной железы 16
1.4 Фенотип экзокринных клеток поджелудочной железы 22
1.4.1 Фенотип клеток протокового эпителия 23
1.4.2 Фенотип эндокринных клеток поджелудочной железы 25
1.4.3 Роль полипотентных клеток в неопластической трансформации эпителиальных тканей ПЖ 26
1.5 Адгезивные свойства клеток и роль адгезивных молекул в нормальном функционировании и неопластической трансформации ткани 28
1.5.1 Свойства и функции адгезивных молекул 28
1.5.2 Молекулы нейроадгезии 29
1.5.2.1 Молекулы CD56, или NCAM (N-CAM) 29
1.5.2.2 Молекулы Nr-CAM 31
1.5.2.3 Роль молекул нейроадгезии в канцерогенезе ПЖ 31
1.5.3 Кадхерины 32
1.5.3.1 Е-кадхерин 34
1.5.3.2 N-кадхерин 35
1.5.3.3 Роль молекул кадхеринов в неопластической трансформации 36
1.5.3.4 Роль кадхеринов в неопластической трансформации клеток ПЖ 39
1.5.4 Адгезивные молекулы Ер-САМ 40
1.5.5 Адгезивные молекулы семейства CD44 41
1.5.5.1 .Физиологическаяроль CD44 42
1.5.5.2 Роль молекул CD44 во взаимодействиях клеток с ЕСМ 42
1.5.5.3 Экспрессия CD44 в нормальных тканях ПЖ 43
1.5.5.4 Роль CD44 в канцерогензе 44
1.5.5.5 Роль CD44 в опухолях ПЖ 46
1.6 Межклеточные взаимодействия и роль экстрацеллюлярного матрикса в норме и при патологии 47
1.6.1 Роль металлопротеиназ в регуляции тканевого гомеостаза 52
1.6.2 Роль металлопротеиназ в ангиогенезе 55
1.6.3 Роль металлопротеиназ в новообразованиях различного генеза 58
1.6.4 Роль металлопротеиназ 2 и 9 в гомеостазе тканей и неопластической трансформации 59
1.6.5 Роль металлопротеиназ в обеспечении инвазивного потенциала новообразований ПЖ 60
1.7 Факторы, участвующие в регуляции клеточного цикла 62
1.7.1 Семейство протеинов bcl-2 63
1.7.2 Роль протеинов семейства bcl-2 в канцерогенезе 64
1.7.3 Роль регуляторных протеинов в канцерогенезе ПЖ 65
1.7.4 Экспрессия протеинов р53 и K-ras в новообразованиях ПЖ 67
2. Материал и методы исследования 70
2.1 Материал исследования 70
2.2 Методы исследования 71
2.2.1 Морфологические методы исследования 71
2.2.1.1 Гистологический метод 71
2.2.1.2 Иммуногистохимический метод 71
2.2.2 Системы оценки экспрессии различных ИГХ маркеров 73
2.2.3 Статистический метод 75
3. Изучение фенотипа клеток опухолей поджелудочной железы 76
3.1 Изучение фенотипа экзокринных опухолей ПЖ 76
3.1.1 Исследование фенотипа муцинозно-кистозных опухолей 77
3.1.2 Исследование фенотипа внутрипротоковых опухолей 83
3.1.3 Исследование фенотипа аденокарцином 84
3.1.4 Изучение фенотипа анапластических опухолей ПЖ 96
3.1.5 Исследование фенотипа клеток солидно-псевдопапиллярных опухолей 99
3.2 Исследование фенотипа нейроэндокринных новообразований 104
3.2.1 Исследование фенотипа клеток инсулином, глюкагном, смешанно- клеточных и нефункционирующих опухолей 104
3.2.2 Исследование фенотипа нефункционирующих НЭОПЖ 111
3.3 Исследование фенотипа клеток гастрином 114
4. Изучение факторов, участвующих в регуляции клеточного цикла 124
4.1 Определение пролиферативной активности опухолей поджелудочной железы 124
4.2 Изучение экспрессии протеинов, регулирующих клеточный цикл 127
4.2.1 Изучение экспрессии протеинов, регулирующих апоптоз - ВАХ и BclX 127
4.2.2 Определение "коэффициента апоптоза" 132
4.2.3 Изучение экспрессии протеина р53 134
4.3 Изучение особенностей экспрессии трансформирующего фактора роста - TGFfi... 135
5. Адгезивные свойства клеток опухолей поджелудочной железы 139
5.1 Экспрессия молекул нейроадгезии (CD56) в опухолях поджелудочной железы 139
5.2 Экспрессия молекул кадхеринов 140
5.2.1 Экспрессия N-кадхерина 140
5.2.2 Экспрессия Е-кадхерина 140
5.2.3 Экспрессия молекул CD44 (CD44H) 149
6. Взаимодействие и соотношение компонентов экстрацеллюлярного матрикса и паренхимы опухолей поджелудочной железы различного генеза 158
6.1 Экспрессия компонентов ЕСМ 158
6.1.1 Экспрессия коллагена IV типа 158
6.1.2 Экспрессия ламинина 164
6.2 Экспрессия матриксных металлопротеиназ ММР-2 иММР-9 166
6.2.1 Экспрессия ММР-2 166
6.2.2 Экспрессия ММР-9 170
7. Предопухолевые изменения эндокринной и экзокринной ткани поджелудочной железы 174
7.1 Опухолеподобные изменения в ткани поджелудочной железы при экзокринных опухолях 174
7.2 Опухолеподобные изменения в ткани поджелудочной железы при эндокринных опухолях 178
7.3 Опухолеподобные изменения во внеопухолевой ткани поджелудочной железы при гастриномах 181
Заключение 185
Выводы 197
Список литературы 200
Список сокращений 217
- Клетки - предшественницы экзокринной ткани поджелудочной железы
- Факторы, участвующие в регуляции клеточного цикла
- Исследование фенотипа нейроэндокринных новообразований
- Экспрессия N-кадхерина
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Поджелудочная железа (ПЖ) человека и млекопитающих является уникальным органом - одновременно экзокринным и эндокринным, что определяет многообразие его опухолевой патологии. До недавнего времени более 90% опухолей ПЖ относили к опухолям протокового происхождения, в первую очередь, к аденокарциномам. Применение современных методов морфологических исследований позволило верифицировать эти опухоли и вьщелить новообразования с более благоприятным прогнозом. Однако при определении степени злокачественности и прогноза смешанных экзо-эндокринных опухолей ПЖ, общепринятые в онкоморфологии критерии злокачественности часто не пригодны.
В последние годы рядом ведущих европейских патологов разработаны критерии оценки прогноза НЭОПЖ [98,171,202,312], на основе которых в 2000 г группой экспертов ВОЗ была разработана новая гистологическая классификация этих опухолей, дополненная рубрикой "опухоли с неопределенным потенциалом злокачественности" для медленно растущих, но потенциально способных к метастазированию новообразований. Тем не менее, диагностическая ценность некоторых из предложенных критериев злокачественности остается спорной, поэтому нужны дополнительные, более четкие критерии дифференциальной диагностики и прогнозирования опухолей ПЖ.
Все клетки ПЖ происходят от единой полипотентной клетки, имеющей протоковый фенотип [81-86,247,247,364]. Это делает ПЖ удобной моделью для изучения общих закономерностей опухолевого роста и инвазивного потенциала опухолевых клеток. Происхождение клеток всех эпителиальных тканей органа от единого предшественника позволяет предположить, что фенотип клеток опухолей является отражением этапов дифференцировки клеточных компонентов ПЖ в онтогенезе. Исследование фенотипа клеток различных опухолей ПЖ позволит не только ответить на этот вопрос, но и разработать ИГХ критерии их злокачественности.
Одними из самых неблагоприятных по прогнозу новообразований человека являются протоковые АК ПЖ, которые составляют 85-90% всех опухолей этого органа. Смертность от этих опухолей почти равна частоте их обнаружения и занимает пятое место среди причин смерти от рака в США и второе (после рака толстой кишки) среди новообразований желудочно-кишечного тракта. В клетках 70-90%) аденокарцином ПЖ и в 8% ацинарно-клеточных карцином, в отличие от НЭОПЖ, наблюдается сверхэкспрессия онкогена K-ras [289,302], в 90%»
аденокарцином и только в 7% НЭОПЖ - экспрессия онкопротеина с-егЬВЗ. Сверхэкспрессия регуляторного протеина р53 в результате мутации гена-супрессора опухолей р53, наблюдается в 40-60% аденокарцином, в 8% НЭОПЖ и не играет никакой роли в патогенезе солидно-псевдопапиллярньгх и ацинарно-клеточных карцином ПЖ [112].
Инвазивные свойства опухолевых клеток и их способность формировать метастазы в конечном итоге и определяет прогноз новообразований. Эти свойства опухолевые клетки приобретают в результате ряда последовательных мутаций, затрагивающих фундаментальные молекулярно-биологические механизмы - обмен веществ и информации с окружающей средой, рост, размножение и гибель. Миграция клеток опухоли за пределы первичного очага, то есть их способность к инвазии, является ключевым этапом опухолевого роста. Формирование метастазов происходит в результате ряда последовательных и независимых событий -новообразования сосудов, инвазии, эмболизации сосудов, миграции, адгезии к стенкам сосудов, пенетрации эндотелия сосудов, формирования собственного микроокружения и пролиферации клеток в органе-мишени. На каждом этапе канцерогенеза важную роль играют различные регуляторные факторы [91,212,213]. Важная роль в неопластической трансформации клеток и прогрессировании злокачественных новообразований принадлежит адгезивным молекулам [175,273,309], компонентам ЕСМ [76,89-91,357], матриксным металлопротеиназам и их ингибиторам [92,278,344], факторам, стимулирующим ангиогенез в опухоли тромбоспондинам, фактору роста эндотелия (VEGF) и некоторым другим [101,330], инактивации регуляторных протеинов, контролирующих апоптоз [316]. Роль всех этих факторов для прогноза новообразований ПЖ изучена еще не достаточно, имеющиеся данные противоречивы и дальнейшие исследования в этом направлении позволят пролить свет на молекулярно-биологические механизмы, лежащие в основе неопластической трансформации клеток ПЖ. Актуальной также является проблема изучения фоновых и предраковых изменений в ткани ПЖ. Таких работ пока мало и они во многом противоречат друг другу.
Важным направлением современной онкологии является разработка оптимальных схем лечения онкологических больных. Использование достаточно широкого спектра специфических ИГХ маркеров для определения фенотипа клеток опухолей ПЖ позволит разработать объективные критерии прогнозирования инвазивного потенциала клеток опухолей, а на их основе рекомендовать адекватный объем операции и тактику лечения пациентов.
Цели и задачи исследования.
Цель настоящей работы - изучить особенности фенотипа клеток различных опухолей ПЖ, которые отличают доброкачественные новообразования от инвазивных злокачественных и которые могут служить факторами прогноза этих новообразований.
7 Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
изучить фенотип клеток различных эпителиальных опухолей ПЖ;
определить экспрессию протеинов, участвующих в регуляции клеточного цикла клеток новообразований ПЖ;
сравнить особенности экспрессии в клетках опухолей ПЖ адгезивных молекул и определить их связь с инвазивным потенциалом клеток;
изучить роль межклеточных взаимодействий и компонентов ЕСМ и определить их связь с инвазивным потенциалом клеток;
исследовать характер изменений во внеопухолевой ткани ПЖ, которые предшествуют и/или сопутствуют неопластической трансформации клеток;
разработать критерии прогноза инвазивного потенциала новообразований ПЖ на основе определения их фенотипических особенностей и степени дифференцировки опухолевых клеток.
Научная новизна исследования.
Изучены некоторые молекулярно-биологические механизмы, которые лежат в основе инвазии и прогрессирования различных новообразований ПЖ.
На основе ИГХ исследования фенотипа клеток опухолей ПЖ, межклеточных и клеточно-матриксных взаимодействий в работе впервые:
показана роль полилотентньгх клеток поджелудочной железы в неопластической трансформации;
определены основные фенотипические характеристики клеток опухолей поджелудочной железы и разработан алгоритм для определения степени дифференцировки и злокачественного потенциала этих опухолей;
установлена уникальность фенотипа клеток гастрином поджелудочной железы, что позволило выделить эти опухоли в отдельную группу экзо-эндокринных новообразований;
доказана непосредственная связь экспрессии в клетках опухолей поджелудочной железы хорионического гонадотропина человека с низкой степенью дифференцировки и протоковым фенотипом этих клеток;
выявлена прямая связь между пролиферативной активностью клеток доброкачественных и злокачественных опухолей поджелудочной железы и экспрессией в их клетках ингибитора апоптоза BclX и обратная связь - с экспрессией в них индуктора апоптоза ВАХ;
показано значение нормальных и аномальных типов экспрессии некоторых адгезивных молекул как критериев прогноза инвазивного потенциала клеток опухолей поджелудочной железы;
получены данные, свидетельствующие о важной роли компонентов экстрацеллюлярного матрикса и базальных мембран в инвазии опухолей;
установлено, что быстрая инвазия наиболее злокачественных протоковых новообразований поджелудочной железы обеспечивается способностью их клеток продуцировать металлопротеиназы матриксного типа, разрушающие компоненты экстрацеллюлярного матрикса;
доказано, что полипотентными свойствами и пластичным фенотипом обладают не только протоковые, но и ацинарные клетки поджелудочной железы, способные к изменению фенотипа в зависимости от микроокружения. Именно такие изменения в ткани поджелудочной железы могут быть пусковьм механизмом неопластической трансформации.
Научно-практическая значимость.
Работа открывает новое научное направление в изучении молекулярно-клеточных механизмов, лежащих в основе неопластической трансформации и прогрессирования опухолей поджелудочной железы эпителиального происхождения.
Полученные в работе данные могут быть использованы при верификации диагноза, для более точной и объективной оценки инвазивного потенциала и прогноза новообразований поджелудочной железы и оптимизации их лечения.
Практическая ценность работы определяется предложенным нами алгоритмом исследования фенотипа опухолевых клеток, позволяющим использовать его в практике морфологической диагностики опухолей ПЖ.
Результаты работы могут быть использованы научно-исследовательскими и педагогическими учреждениями Москвы, Московской области и РФ (ГУ научно-исследовательским институтом морфологии человека РАМН, ГУ Российским онкологическим научным центром им. Н.Н.Блохина РАМН, Московской медицинской академией им. И.М. Сеченова, Институтом хирургии им. А.В. Вишневского РАМН), хирургическими и терапевтическими отделениями онкологической направленности, кафедрами биологии, гистологии, патологической анатомии человека и онкологии. На основе полученных данных могут быть разработаны оптимальные схемы терапевтического и хирургического лечения пациентов с новообразованиями поджелудочной железы.
Основные положения, выносимые на защиту.
В поджелудочной железе всегда имеются популяции клеток с пластичным фенотипом и полипотентными свойствами, которые способны к разнонаправленной диффренцировке.
Дифференцировка полипотентных клеток складывается из многих этапов, которым соответствует изменение фенотипа клеток и чему соответствует фенотип и уровень дифференцировки клеток различных новообразований поджелудочной железы.
Определение фенотипа клеток новообразований поджелудочной железы позволяет определить степень их дифференцировки и прогноз новообразований.
Апробация диссертационного материала.
Результаты работы доложены на 2 и 3 Всероссийских школах по иммуногистохимической диагностике опухолей человека (Казань, 2000, 2002), на IV Российском симпозиуме: "Хирургия эндокринных желез" (Уфа, 26-28 сентября 1995), на III Всероссийском съезде эндокринологов "Актуальные проблемы эндокринологии" (Москва, 4-7 июня 1996); на 1 съезде онкологов стран СНГ (Москва, 3-6 декабря 1996); на 5-ай Общеевропейской неделе гастроэнтерологии (5-th UEGW) (Париж, 2-6 ноября 1996); на Национальном Всероссийском съезде по клинической и лабораторной диагностике (Москва, 1997); на IV научной конференции "Новые методы и разработки в онкоморфологии" (Москва, 4-6 февраля 1998); на 2-м конгрессе ассоциации хирургов им. Н.И. Пирогова (Санкт-Петербург, 1998); на VII (IX) Российском Симпозиуме по хирург, эндокринологии: "Современные аспекты хирургической эндокринологии" (Липецк, 16-18 сентября 1998); на Юбилейной конференции, посвященной 60-летию эндокрин. службы республики Беларусь "Актуальные вопросы эндокринологии" (Минск, 1999); на 3-й Всероссийской конференции "Актуальные проблемы эндокринологии" (Пермь, 2000); на IX (XI) Российском симпозиуме по хирургической эндокринологии: «Современные аспекты хирургической эндокринологии" (Челябинск, 2000), на Научной конференции по патологической анатомии, посвященной памяти И.К. Есиповой и В.Н. Таланкина (Москва, 2001); на VI Съезде эндокринологов Украины (Киев, 23-25 мая 2001); на IV Всероссийском Конгрессе эндокринологов «Актуальные проблемы современной эндокринологии" (Санкт-Петербург, 2001), на Конференции "Новые направления и разработки в онкоморфологии", РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН (Москва, 25-27 апреля 2001); на Науково-практичной концеренціі "Проблеми онкогенетики: наукові та прикладні аспекти" (Киев, 2002); на X (XII) Российском симпозиуме по хирургической эндокринологии: "Современные аспекты хирургической эндокринологии" (Смоленск, 2002); на IX конференции "Новые направления и разработки в онкоморфологии" в рамках Российско-американского общества онкологов, РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН (Москва, 16-18 апреля 2003); на XI (XIII) Российском симпозиуме с международным участием по хирургической эндокринологии (Санкт-Петербург, 15-18 июля, 2003), на 11-ой Общеевропейской неделе гастроэнтерологии (11-th UEGW) (Мадрид, 1-5 ноября 2003).
10 Публикации.
Результаты исследований по теме диссертации опубликованы в 43 печатных работах, включающих главы в 2 монографиях и 13 работ в центральной печати, в том числе 5 за рубежом.
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 218 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, общей характеристики материалов и методов исследования, пяти глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 22 таблицами, 45 рисунками, из которых 40 монтажей из 198 микрофотографий. Библиография включает 51 отечественный и 317 зарубежных источников.
/
Клетки - предшественницы экзокринной ткани поджелудочной железы
В норме ацинарные (как и островковые клетки) являются специализированными и высокодифференцированными клетками, которые легко идентифицируются по морфологическому типу и способности формировать типичные гистологические структуры -ацинусы и островки. По экспрессии цитокератинов удается визуализировать клетки мелких внуридольковых протоков и центроацинарные, которые при окрашивании гематоксилином и эозимом обычно неразличимы, хотя именно они составляют основную массу протоковых клеток. Поскольку мелкие протоки обычно не имеют микроскопически видимого просвета и рассеяны в паренхиме, истинное число протоковых клеток в ПЖ раньше значительно занижалось.
Показано, что ацинарная ткань ПЖ способна к быстрой регенерации. При хирургическом удалении части ПЖ, полного восстановления размеров органа и количества В-клеток не происходит [87]. Наличие выраженной пластичности экзокринных ацинарных клеток также предполагает наличие у них свойств полипотентных стволовых клеток. Важным механизмом цитодифференцировки является феномен дедифференцировки клеток (ретродифференцировки, трансдифференцировки) [81,86,333,353]. Доказано, что дедифференцировка ацинарных клеток в протоковые происходит в ПЖ человека и млекопитающих. Этот феномен удалось воспроизвести у трансгенных мышей при индукции у них хронического панкреатита и рака ПЖ [353]. Ацинарные клетки у таких животных постепенно уменьшались в размерах, зимогенные гранулы исчезали, а фенотип менялся на фенотип характерный для клеток протокового эпителия. Наличие дедифференцировки клеток ПЖ было доказано также в экспериментах in vitro, что позволяет предположить, что популяция клеток ПЖ с протоковым фенотипом динамична и может значительно меняться под воздействием различных факторов. В культуре ткани в течение 4-х дней фенотип ацинарных клеток ПЖ человека, для которых характерна экспрессия амилазы и отсутствие экспрессии ЦК 19, менялся на амилазо-негативный и ЦК 19-позитивный, т.е. клетки приобретали фенотип клеток протокового эпителия [299]. Следовательно, ацинарные клетки, как и протоковые, являются пластичными, обладают свойством полипотентности и способны к дедифференцировке [353]. Полагают, что именно ЦК19 является цитокератином -«периключателем" (swith), экспрессия которого характеризует клетки с пластичным, способным к дифференцировке фенотипом [85], а клетки, одновременно экспрессирующие протоковые цитокератины ЦК 7 и 19 (у крыс 7 и 20) являются низко дифференцированными и потенциально полипотентными клетками.
Формирование и развитие тканей ПЖ, как и в других тканях организма находится под контролем различных факторов. Одним из факторов, регулирующих пролиферацию протоковых клеток, является эпидермальный фактор роста (EGF) и рецепторы к нему, а также его гомолог - трансформирующий фактор роста альфа (TGFa), которые экспрессируют протоковые и ацинарные клетки ПЖ. Сверхэкспрессия TGFa в ПЖ мышей вызывает протоковую гиперплазию и выраженный интестинальный фиброз (хотя не ведет к увеличению массы ацинарной ткани), индуцирует метаплазию мелких протоков - дуктул, что выявляется по экспрессии в клетках амилазы - специфического продукта ацинарных клеток [174]. Это подтверждается и на ультраструктурном уровне наличием в клетках гранул 2-х типов -зимогена и муцина. Следовательно, TGFa обладает способностью индуцировать трансдифференцировку ацинарных клеток в протоковые. К пептидам, регулирующим рост ПЖ и стимулирующим пролиферацию ацинарных клеток ПЖ in vivo, относят также гормон -холецистокинин (ССК). Протоковая метаплазия, индуцированная TGFa, регулируется геном, который в островковых и ацинарных клетках ПЖ взрослых мышей в норме инактивирован. Трансгенная экспрессия гастрина, напротив, ингибирует метаплазию протоковых клеток, индуцированную TGFa, препятствуя дедифференцировке ацинарных клеток [353].
TGF-pi, основным источником которого являются примитивные ацинарные клетки, считают одним из основных супрессоров пролиферативной активности клеток ПЖ, [143,237,291,360]. У эмбрионов мышей CD-1 в ткани ПЖ в разные сроки гестации (12,5, 15,5 и 18,5 дней) изучали экспрессию TGF-pi. До 12,5 дня гестации TGF-pi экспрессировали клетки протокового эпителия ПЖ, а в более поздние сроки - еще и клетки примитивных ацинусов [113,114]. При сверхэкспрессии TGF-pl у трансгенных мышей ПЖ состоит преимущественно из экстрацеллюлярного матрикса с единичными ацинарными дольками и эндокринными островками, а при его ингибиции - напротив, количества ацинусов, хотя и атипичных, увеличивается [291]. Эндокринная ткань ПЖ млекопитающих представляет собой прекрасную модель для изучения онтогенетического развития и дифференцировки клеток в разные типы, поскольку их можно определить по секреции определенных гормонов. Поэтому начальная стадия дифференцировки островковых клеток привлекает к себе особое внимание. В эмбриогенезе потомство стволовых клеток направляется по пути специфической дифференцировки и эндокринно-клеточная дифференцировка начинается с того момента, когда предшественники выходят за пределы протоков ПЖ [78,332,333].
Хорошо изучена последовательность этапов дифференцировки эндокринных клеток из плюрипотентных клеток-предшественниц. Главное, в чем сходится большинство исследователей, это то, что островковые клетки происходят из эпителия протоков (схема 1). Это подтверждается и тем фактом, что у некоторых млекопитающих низших видов, островковые клетки находятся либо вблизи протоков, либо в самих протоках. Механизм морфогенеза островков описан как "отпочкование", или незидиобластоз эндокринных клеток (незидиобластов) от эпителиальной выстилки протоков, их аккумуляция между протоками и экзокринными ацинусами, а затем формирование островков. Такие полипотентные клетки, или незидиобласты, даже в ПЖ взрослого организма можно индуцировать к пролиферации и дифференцировке в высокодифференцированные эндокринные клетки, способные продуцировать различные пептидные гормоны.ЦК 20 является специфическим маркером протоковых клеток ПЖ взрослых крыс [68] и не встречается в островковых клетках взрослых крыс, как и коэкспрессия ЦК 20, Ин и Гл. В фетальной ПЖ с 17 дня гестации и позже можно видеть гнезда протоковых клеток, которые крупнее экзокринных ацинусов и зрелых островков и интенсивно экспрессируют СК 20. В центре этих структур располагаются группы Ин- и Гл-экспрессирующих клеток, а интенсивность СК20-ПОЗИТИВНОСТИ уменьшается и полностью исчезает к моменту рождения [68].
Эти наблюдения доказывают наличие переходных форм между протоковыми и В- и А-клетками. Сверхэкспрессия эпидермального фактора роста и его рецепторов (EGF и EGFR), трансформирующего фактора роста альфа (TGFoc) показана в протоковых новообразованиях ПЖ, что свидетельствует об их роли в стимуляции протоковой пролиферации ПЖ. Сверхэкспрессию гена TGF-pi, характерную для поздних сроков гестации, связывают с формированием островков, когда он способствует дальнейшей дифференцировке плюрипотентных клеток пролиферации, а умеренно выраженную экспрессию характерную для середины гестации - с активной ацинарно-клеточной дифференцировки [87,113,114].
В эксперименте на мышах было показано [317,333], что, в отличие от дифференцированных эндокринных клеток взрослых животных, синтезирующих только один гормон, эндокринные клетки-предшественницы являются мультигормональными и в них активированы все гормон-специфические гены. Подобные клетки, способные одновременно продуцировать несколько островковых гормонов, были выявлены и в эмбриональной ПЖ человека [332,333]. Это удалось подтвердить и на уровне электронной иммуногистохимии [225]. Было показано, что эмбриональным протодиференцированным эндокринным клеткам ПЖ человека и свиньи свойственны полигормональность, и они могут синтезировать и хранить в одних и тех или разных гранулах несколько гормонов, например, инсулин и глюкагон. В клетках ПЖ 10-дневного мышиного эмбриона впервые выявляются глюкагон, инсулин, а также энзим, характерный для клеток нервной ткани - тирозин гидроксилаза (ТН) или нейропептид Y (NPY). Более того, удалось показать наличие клеток с фенотипом "инсулин+ТН" и "инсулин+NPY", число которых постепенно уменьшалось вплоть до появления зрелых дифференцированных моногормональных клеток. Эти данные свидетельствуют о том, что в эндокринных клетках-предшественницах активированы, как минимум, два типа генов: ответственные за синтез гормонов и за синтез энзимов, свойственных нервной ткани.
До недавнего времени было принято считать, что фенотип дифференцированных островковых клеток остается неизменным. G. Teitelman [333] удалось опровергнуть это мнение и доказать, что высокодифференцированные эндокринные клетки, каковыми являются В-клетки островков, не являются конечной, терминальной стадией дифференцировки. Напротив, фенотип островковых клеток остается пластичным и, при определенных условиях и под воздействием специфических стимулов, таких, как стимуляция к пролиферации, гипергликемия или разрыв клеточных контактов, в них опять могут быть активированы гены, ответственные за экспрессию маркеров, свойственных полипотентным клеткам.Показано, что у эмбрионов мышей большинство островково-клеточных предшественниц характеризовались коэкспрессией глюкагона и инсулина, а клетки, локализованные в эмбриональных протоках ПЖ, содержали одновременно ТН и один из гормонов, а Ин- и/или Гл-позитивные клетки, локализованные вне протоков ПЖ, невральных энзимов не содержали, то есть ТН, возможно, является маркером островково-клеточных предшественников. Исследование островков у диабетических мышей-мутантов (C57B16Ks) с наследственным диабетом показало, что при развитии у них болезни пропорция клеток с коэкспрессией глюкагона и инсулина значительно увеличивается. Эти данные подтверждают точку зрения, что зрелые В-клетки способны реэкспрессировать не только ТН, но и глюкагон, и инсулин, а также
Факторы, участвующие в регуляции клеточного цикла
Апоптоз в норме является основным механизмом, который регулирует тканевой гомеостаз и поддерживает баланс между физиологически необходимой пролиферацией и гибелью клеток [115,239,328.316], Апоптоз, как и многие другие физиологические процессы, находится под контролем положительных и отрицательных стимулов. В регуляции апоптоза выделяют два основных этапа: фазу индукции (принятие решения) и фазу экзекуции (исполнение приговора). Приговоры исполняются с помощью активации цистеиновых протеиназ - каспаз, которые по остаткам аспартатовои кислоты расщепляют соответствующие субстраты. Каспазы содержатся в цитоплазме клеток в виде функционально неактивных проэнзимов и при их расщеплении на большую и малую субъединицы с дальнейшим отщеплением от них N-концевых доменов превращаются в активные энзимы.Апоптоз ведет к увеличению популяции гибнущих клеток [281,328]. Активация каспаз происходит, по крайней мере, двумя способами: при связывании молекул с соответствующими рецепторами с последующей активацией каспазы 8, а затем каспазы 3, 6 и 7; при активации каспазы 9, которая стимулирует выход из митохондрий протеазы AIF (Apoptosis Inducing Factor) и/или цитохрома С. Проницаемость мембран митохондрий для AIF и цитохрома С зависит от характера взаимодействий и функциональной активности протеинов семейства bcl-2.
Семейство протеинов bcl-2 в настоящее время является наиболее изученными факторами, вовлеченными в регуляцию апоптоза [328]. Это семейство структурно подобных протеинов, включающее более 2-х десятков членов, в том числе такие, как bcl-2, mcl-1, Bcl-X, ВАХ, Bad, ВАК и некоторые другие [148,235]. Некоторые из членов этого семейства - bcl-2, ВСІ-XL, Mcl-1 блокируют апоптоз (являются ингибиторами), а другие - ВАХ, Bcl-XSi ВАК являются индукторами (промоторами) апоптоза [80]. Несмотря на то, что все члены семейства отличаются большим структурным подобием, их биологические функции различны.Ген, кодирующий протеин bcl-2, локализован на хромосоме 18q21 [235]. Bcl-2 является протоонкогеном, который функционирует как ингибитор апоптоза [104,235,254,281]. В период активного островкового морфогенеза (17-20 день гестации) в островковых клетках мышей отмечена слабая экспрессия bcl-2, а в постнатальный период она наблюдается только в клетках с протоковой дифференцировкой - большинстве центроацинарных, клетках междольковых и внутридольковых протоков. Локализация иммунореактивности к bcl-2 в цитоплазме в норме соответствует локализации митохондрий [162]. Экспрессия bcl-2 удлиняет срок жизни клеток и увеличивает риск возникновения в них хромосомных аномалий, а сверхэкспрессия этого протеина может быть одним из ранних признаков злокачественной трансформации клеток эпителия. Так, сверхэкспрессия bcl-2 в клетках эпителия наблюдается при дисплазии и гиперплазии клеток протокового эпителия, а также в клетках локализованных на границе с опухолью (которая при этом может быть bcl-2-негативной). В эпителии bcl-2 экспрессируют гормонально-чувствительные клетки (например, в ЩЖ) или стволовые клетки (например, пролиферирующие клетки кишечных крипт) [125,162]. В ПЖ человека экспрессия bcl-2 наблюдается в клетках пролиферирующих протоков на фоне регенерации или различных патологических процессах в ПЖ [104]. В печени, аналогично ПЖ, bcl-2 экспрессируют клетки протоков, которые, как полагают, являются стволовьми клетками печени.
Существуют две изоформы Вс1-Х: длинная - Bcl-XL, которая функционирует в качестве ингибитора апоптоза, и короткая - Bcl-Xs, функционирующая как индуктор апоптоза [80]. Молекулы, обладающие свойством ингибировать апоптоз - Ьс12 и BclX, локализуются на мембранах митохондрий, закрывая каналы сквозь которые выходят цитохром С и/или AIF. Протеин ВАХ, функционирующий как индуктор апоптоза, в норме локализуются в цитоплазме, но после получения соответствующих регуляторних сигналов перемещается к мембранам митохондрий, где вступают в реакцию с белком наружной мембраны митохондрии - VDAC, что в свою очередь является сигналом, активирующим секрецию цитохрома С. Экспрессия ВАХ контролируется многими факторами, в том числе регуляторным протеином гена-супрессора опухолей р53 [235,37]. Изменение соотношения продукции протеинов bcl-2/BAX влияет на баланс в ткани популяций пролиферирующих и гибнущих клеток. Существует гипотеза, что именно ВАХ является тем "ключом", который запускает механизм апоптоза [104,235,328]. Показано, что ВАХ и bcl-2 могут формировать устойчивые связи в виде гомо - и/или гетеродимеров.Возникновение мутаций различных генов является причиной неопластической трансформации клеток, а апоптоз способствует элиминации популяций генетически модифицированных и дефектных клеток, что предотвращает их неопластическую трансформацию.
Полагают, что Bcl-XL обладает более сильным антиапоптозным действием, чем другие члены семейства bcl-2 [148]. Более того, некоторые данные свидетельствуют о том, что Bcl-XL и bcl-2 существенно различаются по своим биологическим функциям [341]. Так в нормальных тканях человека, за исключением лимфатических узлов, уровень экспрессии Bcl-XL обычно выше, чем bcl-2, что свидетельствует о доминантной роли Bcl-XL в регуляции апоптоза и способности этого протеина функционировать в качестве независимого регулятора апоптоза [148,183,235]. Экспрессия Bcl-XL изучалась во многих злокачественных опухолях - при лейкемиях, раке молочной железы, аденомах и карциномах желудка, колоректальных карциномах, нейробластомах [125]. В некоторых исследованиях показано, что сверхэкспрессия в опухолевых клетках Bcl-xL способствует приобретению ими мультиформной резистентности к химиотерапевтическим воздействиям и облучению [104]. Сверхэкспрессия протеинов
Исследование фенотипа нейроэндокринных новообразований
Существует много работ, в которых предпринимались попытки разработать критерии злокачественности НЭОПЖ [171,190,200,266,312]. Мы верифицировали НЭОПЖ в соответствии с последней классификацией ВОЗ, разработанной в 2000 г [312]. Классификация нейроэндокринных опухолей поджелудочной железы. 1. Высокодифференцированные эндокринные опухоли 1.1. Доброкачественные: локализованы в пределах поджелудочной железы, сосудистая инвазия отсутствует, размер 2 и менее см , число митозов 0-2 на 10 на РПЗ, КИ67-позитивных клеток 0-2%. 1.1.1. Функционирующие - инсулиномы 1.1.2. Нефункционирующие 1.2. Опухоли неопределенной степени злокачественности: локализованы в пределах поджелудочной железы, сосудистая инвазия отсутствует, опухоли размером более 2 см или с эктопическим синдромом, более 2 митозов 10 на РПЗ и более 2% Кі67-позитивньгх клеток. 1.2.1. Функционирующие - гастринома, инсулинома, випома, глюкагонома, соматостатинома или с эктопическим синдромом . 1.2.2. Нефункционирующие 2. Высокодифференцированные эндокринные карциномы: опухоли низкой степени злокачественности с выраженной локальной инвазией и/или метастазами. 2.1. Функционирующие - гастринома, инсулинома, глюкагонома, випома, соматостатинома или с эктопическим синдромом . 2.2. Нефункционирующие 3.
Низкодифференцированные эндокринные карциномы - мелкоклеточные карциномы высокой степени злокачественности. Примечание: - опухоли размером менее 2 см доброкачественны почти в 100% случаев, менее 3 см -почти в 90%.сл.; - эктопические синдромы: синдром Кушинга (АКТГ), акромегалии или гигантизма (гормон роста), гиперкальциемии и т.д. НЭОПЖ обычно построены их характерных трабекулярных, альвеолярных, солидных, железистых, ангиоматозных, криброзных и других гистологических структур, которые часто встречаются в одной и той же опухоли. Большинство НЭОПЖ относятся к группе доброкачественных опухолей, но имеется большая группа новообразований неопределенной и низкой степени злокачественности, определение биологического потенциала которых до сих пор является сложной диагностической проблемой и обычно основывается на таких критериях, как наличие метастазов, васкулярной или капсулярной инвазии [1,2,6,8,-10,12-15,17,18-20,22,31,32,37,38,48,215,311 и др.]. Однако, как показывает практика, во время операции не всегда удается обнаружить микрометастазы, а при микроскопическом исследовании -микроинвазию сосудов и нервов [10,14,15,26,34,41,46]. Это требует разработки дополнительных морфологических критериев определения степени злокачественности НЭО, в том числе основанных на определении фенотипических и ультраструктурных характеристик опухолевых клеток, которые отражают степень их дифференцировки [26,33-37,43,311]. Иммуногистохимическое исследование. Для уточнения диагноза НЭОПЖ использовались ИГХ маркеры нейроэндокринной дифференцировки - хромогранин А, синаптофизин и CD56, значительно реже - NSE, а верификацию типа опухоли проводили с помощью антител к соответствующим гормонам - инсулину, глюкагону, соматостатину, гастрину, панкреатическому полипептиду, серотонину, кальцитонину, АКТГ (табл. 4). Максимальные сложности возникали при постановке диагноза так называемых, "нефункционирующих" или клинически "немых" НЭО ПЖ, т.к. они не имеют специфического синдрома гормональной гиперфункции и гормон-зависимых симптомов. Для этой цели очень полезным оказался маркер молекул нейроадгезии - CD56, поскольку из-за минимального числа гранул в клетках нефункционирующих НЭОПЖ они могут не реагировать с остальными нейроэндокринньми маркерами. Все НЭОПЖ давали позитивную реакцию с нейроэндокринными маркерами - ХрА, Син, NSE, а также CD56. Для уточнения гистогенеза и определения злокачественного потенциала НЭОПЖ мы дополнительно использовали КЭА и ЭМА, ХГ, цитокератины 7,19 и 20 и маркеры пролиферации - PCNA, КІ67 (рис.22 В) и протеин р53. НЭОПЖ были выявлены у 123 пациентов, из которых в 88 случаях (71,5%) опухоли проявлялись синдромом гипогликемии (инсулиномы), в 19 случаях (15,5%) были клинически нефункционирующими, в 13 случаях (10,6%) проявлялись синдромом Золлингера-Эллиссона (гастриномы) и в 1 случае - синдромом Вернера-Моррисона (випомы) (табл. 14). Из 123 наблюдений у 13 пациентов (10,6%) имелись множественные опухоли, число которых варьировало у одного пациента от 2 до 5. Всего, с учетом множественных опухолей, были обнаружены 143 НЭОПЖ. Из них в 4 случаях опухоли были верифицированы по метастазам (поскольку первичные опухоли были неоперабельными), а в 14 случаях (11,3),ухоли возникли на фоне синдрома множественной эндокринной неоплазии 1 типа - МЭН-1. Из 143 опухолей ИГХ по положительной реакции с инсулином были верифицированы 92 инсулиномы (64,4%) (рис. 12 А-Г, рис. 13 А-Г), 31 бессиндромная, клинически "немая" или нефункционирующая опухоль (НФ) (21,7%) (рис. 14 А, Б, Д, Е), 13 гастрином (9,1%), 6 опухолей, в клетках которых наблюдалась коэкспрессия нескольких гормонов (4,2%)(рис. 14 В, Г) и 1 випома (0,6%). К доброкачественным НЭОПЖ (1 группа) относились 46 опухолей (32,2% от всех), большинство из которых были инсулиномами или 91,3% опухолей этой группы. К НЭОПЖ с неопределенным потенциалом злокачественности (2 группа) отнесены 65 опухолей (45,4% от всех), из которых 46 бьши инсулиномами, что составило 70,8% опухолей этой группы. К НЭОПЖ низкой степени злокачественности (3 группа - опухоли с метастазами и явными морфологическими признаками злокачественности) отнесены 24 опухоли (16,8% от всех), из которых было только 4 инсулиномы (рис. 13 А-Г), что составило только 16,4% опухолей этой группы.
В группу НЭОПЖ - опухолей высокой степени злокачественности отнесены 8 новообразований (6%) с множественными метастазами (в том числе в отдаленные органы) и с быстрым и агрессивным ростом. В 4 группе числе которых не было опухолей с выраженными гиперфункциональными синдромами. В 22 наблюдениях (17,9%) опухоли были злокачественными на момент операции и дали метастазы в региональные лимфатические узлы, печень или другие органы, еще в _ наблюдениях имелись морфологические признаки злокачественности - резко выраженный ядерный полиморфизм, сосудистая и/или нейроинвазия. При отнесении опухолей ко 2 группе (с неопределенным потенциалом злокачественности), принималось во внимание наличие целого комплекса морфологических признаков: размеры опухоли более 3 см; наличие участков, подозрительных на микроинвазию кровеносных и лимфатических сосудов; нейроинвазия (рис. 14 В); мультифокальный рост с инвазией паренхимы ПЖ; выраженный ядерный полиморфизм, наличие зон некроза и индекс пролиферации 5% (рис. 13 А). В 6 опухолях бьши выявлены .х 125. значительные (от 50 до 80% всех клеток опухоли) популяции клеток, продуцировавшие сразу несколько гормонов - инсулина и соматостатина (рис. 14 В, Г) инсулина и гастрина, соматостатина, кальцитонина и инсулина, что явилось косвенным свидетельством наличия коэкспрессии этих гормонов в одних и тех опухолевых клетках опухоли. В 5 из 6 случаев это сочеталось с наличием метастазов, микроинвазии сосудов и нейроинвазии.
В 22 опухолях (15,4 3%) наблюдалась ассоциация эндокринного и протокового компонентов, что выявлялось по экспрессии ЦК 19 и/или ЭМА и обычно сочеталось с наличием плотной фиброзной стромы, содержащей с коллаген IV типа, который определялся ИГХ (раздел 6). В части НЭОПЖ низкой степени злокачественности наблюдалась коэкспрессия в клетках опухолей ЦК19 (рис. 13 Б), но не ЦК7 и ЭМА (рис. 13 В) с нейроэндокринными маркерами (рис. 10 Б). Фенотип клеток 3 из 8 карцином высокой . степени злокачественности был смешанным, экзо-эндокринным, что соответствует низкой степени их дифференцировки. Клетки этих опухолей одновременно экспрессировали и протоковые, и эндокринные маркеры -ХрА, Син, а также ЦК 19 и/или ЭМА, красились на слизь по Лизону, не давали гиперфункциональных синдромов и не продуцировали гормонов, которые имелись в нашем распоряжении. Исследование фенотипа клеток гастрином ПЖ показало, что он значительно отличается от фенотипа остальных НЭО ПЖ, поэтому мы выделили эти опухоли ПЖ в отдельную группу, а результаты исследования приводятся в разделе 3.4. В настоящем разделе результаты исследования фенотипа гастрином будут использованы исключительно для сравнения их с другими НЭОПЖ (табл. 16). Для подтверждения верности концепции о наличии полипотентных свойств у клеток-предшественниц, особый интерес представляло исследование злокачественной НЭОПЖ, в которой определяли фенотип не только клеток первичной опухоли, но и 9 метастазов в печень.
Первичная опухоль представляла собой А-клеточную опухоль - глюкагоному, поскольку ее клетки продуцировали только глюкагон. Клетки 3-х метастазов этой опухоли продуцировали инсулин и глюкагон, 2-х - преимущественно глюкагон, 1-го - глюкагон и панкреатический полипептид, 2-х - инсулин, глюкагон и гастрин, а клетки 1 метастаза вообще не синтезировали ни одного из перечисленных гормонов. Все это является важным аргументом, свидетельствующем о полипотентных свойствах клеток первичной опухоли, способных к разнонаправленной дифференцировке, в результате чего в каждом метастазе они ведут себя как клоны клеток с разным фенотипом. На ультраструктурном уровне в цитоплазме клеток большинства злокачественных опухолей обычно находят полиморфные, часто недифференцируемые гранулы эндокринного типа или гранулы разных типов, в том числе и экзокринные (зимогенные).
Экспрессия N-кадхерина
В нормальной ткани ПЖ молекулы Е-кадхерина экспрессировали все клетки эпителиального происхождения. Особенно интенсивная мембранная экспрессия Е-кадхерина наблюдалась в ацинарных клетках, что придавало ацинарным долькам вид пчелиных сот (рис. 24 А), в протоковых клетках экспрессия была менее выраженной, а в клетках эндокринных островков - совсем слабой. В клетках эндокринных островков реакция с Е-кадхерином была слабой и мембранной. Компоненты ЕСМ и все структуры, производные от мезенхимы и нервной ткани (компоненты стромы, сосуды, нервы) к этому маркеру негативны. Тип экспрессии
Е-кадхерина и локализация иммунореактивности в клетках опухолей ПЖ разного типа варьировали в очень широких пределах. Для унификации оценки особенностей экспрессии этого маркера, мы разработали следующие критерии: мембранный, или нормальный тип экспрессии - равномерное распределение иммунореактивности по всей клеточной мембране (рис. 24 А, В); мембранно-редуцированный тип экспрессии - распределение иммунореактивности только на отдельных участках клеточной мембраны (рис. 25 Б, В); смешанный мембранно-цитоплазматический тип экспрессии - сочетание цитоплазматического и мембранного типов экспрессии (рис. 24Д, 25 Г, Е); мелко - и крупно-гранулярный цитоплазматический - экспрессия Е-кадхерина в виде гранул, рассеянных в цитоплазме клеток (рис. 26 А); комковатый - экспрессия в цитоплазме клеток виде хаотично локализованных крупных комочков и конгломератов иммунореактивного материала (рис. 26 Г, 27 Б); отсутствие иммунореактивности (рис. 26 Б, Е). Для оценки прогностического значения описанных типов экспрессии Е-кадхерина в клетках опухолей ПЖ была разработана следующая шкала: мембранный (1 и 2 типы экспрессии) -1 балл; цитоплазматический (2 и 3 типы экспрессии) - 2 балла; редуцированный (4 и 5 типы экспрессии) - 3 балла. Экспрессия Е-кадхерина в клетках МКО. В клетках 5 исследованных доброкачественных МКО экспрессия Е-кадхерина бьша нормальной мембранной, но варьирующей по интенсивности в различных участках опухоли (рис. 24 Б, В). В одной из двух злокачественных МКО экспрессия Е-кадхерина была смешанной - мембранно-цитоплазматической, особенно в клетках метастазов. Экспрессия Е-кадхерина в клетках ВПО.
В большинстве структур ВПО экспрессия Е-кадхерина была преимущественно мембранной (и мембранно-редуцированной), реже -смешанной и цитоплазматической, а в зоне инвазии - исключительно цитоплазматической (мелко-гранулярной) (рис.24 Г, Д). 250; и 400. В зоне инвазии ВПО, где в строме располагались мелкие протоко-подобные и тубулярные структуры и солидные гнезда опухолевых клеток, экспрессия Е-кадхерина обычно была мембранно-редуцированной или циоплазматической (мелко-гранулярной) (табл. 19). Из табл. 19 видно, что в среднем для 71,7% клеток ВПО характерны мембранный или мембранно-редуцированный типы экспрессии Е-кадхерина, для 28,3% - цитоплазматический (преимущественно мелко- гранулярный), а редуцированный (комковатый или отсутствие экспрессии) вообще не встречался.
Экспрессия Е-кадхерина в АК. Наиболее гетерогенными по типу экспрессии Е-кадхерина были аденокарциноми (табл. 20). Для высокодифференцированных участков АК были характерны мембранный и мембранно-редуцированный (рис. 25 А, Б, В), реже - цитоплазматический (рис. 25 Д, Е) и комковатый типы экспрессии (рис. 25 А, Б, В). Во всех ВДАК (100%) имелись участки клеток с мембранной экспрессией Е-кадхерина (1 тип) В умеренно дифференцированных структурах АК преобладающими были цитоплазматический и комковатый типы экспрессии или их сочетание (рис. 26 А-Г). 2 и 3 типы экспрессии в виде очагов встречались в 88,8% и 55,5% опухолей этой группы. Часто, особенно в зоне инвазии, где располагались участки умеренно и низкодифференцированных клеток, экспрессия Е-кадхерина вообще отсутствовала или выявлялась в цитоплазме в виде крупных конгломератов (рис. 26 А, Б, Г). В НДАК экспрессия Е-кадхерина была очаговой, слабой, преимущественно цитоплазматической, мелко- и крупно-гранулярной или вообще отсутствовала (рис. 26 Д, Е), а мембранный и мембранно-редуцированный типы экспрессии практически не встречались. Процентное отношение компонентов с 1, 2 и 3 типами экспрессии в ВДАК было 48,9%, 32,2% и 30% , в УДАК - 12,7%, 20,9% и 58,2%, а в НДАК - 11,7%, 16,7% и 73,3% соответственно. Для сравнения: в ВПО 3 тип экспрессии не наблюдался, в ВДАК встречался в 30% опухолевых клеток, в УДАК - в 58,2% , в НДАК - в 73,3% соответственно. Экспрессия Е-кадхерина в АПО. В одной из двух исследованных АПО экспрессия Е-кадхерина отсутствовала, а в другой наблюдалась очаговая, комковато-цитоплазматическая экспрессия этих адгезивных молекул (рис. 27 А, Б). Экспрессия Е-кадхерина в СППО. Во всех СППО экспрессия Е-кадхерина отсутствовала.
Экспрессия Е-кадхерина в НЭОПЖ. В клетках доброкачественных НЭОПЖ всех типов экспрессия Е-кадхерина была мембранной, слабо выраженной и менее интенсивной, чем в клетках нормальных протоков и ацинарных долек ПЖ (рис. 28 А, Б, Д, Е). Интенсивность экспрессии Е-кадхерина слегка варьировала от опухоли к опухоли и в различных участках одной и той же опухоли, но в целом она была более слабой, чем в клетках нормальных протоков ПЖ и ацинарных долек, а также опухолей ПЖ протокового типа - МКО, ВПО и ВДАК. В клетках НЭОПЖ низкой степени злокачественности и разной функциональной активности, а также в гастриномах ПЖ (рис. 28 В, Г) экспрессия Е-кадхерина была мембранной, но интенсивность ее варьировала в различных участках опухолей. Увеличение интенсивности экспрессии было связано с наличием в опухоли участков с экзокринной и протоковой дифференцировкой клеток, что выявлялось по экспрессии в них ЦК7, 19 и 20 или ЭМА (рис.13 А-Г и та же опухоль - рис. 28 Г). В клетках НЭОПЖ высокой степени злокачественности встречались участки не только мембранной, но и цитоплазматической экспрессии Е-кадхерина, а также очаги клеток, в которых экспрессия вообще отсутствовала. Экспрессия Е-кадхерина в гастриномах. В большинстве гастрином экспрессия Е-кадхерина была мембранной, но варьирующей по интенсивности (рис. 29 А, В, Д, Е). Реже
