Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Изменчивость кариотипа
1.1.1. Полиморфизм по добавочным (или В-) хромосомам
1.2. К вопросу о происхождении и механизмах возникновения В-хромосом млекопитающих
1.3. Краткая характеристика объекта исследования
1.3.1. Географическая изменчивость и подвиды
1.3.2. Генетическая изменчивость Apodemuspeninsulas
Глава 2. Материал и методы
2.1. Материал
2.2. Методы исследования
2.2.1. Метод отлова животных
2.2.2. Методика приготовления хромосомных препаратов
2.2.3. Методы окрашивания хромосомных препаратов и применение
2.2.3.1. Методики рутинной окраски
2.2.3.2. Дифференциальное окрашивание хромосом
2.2.4. Анализ хромосомных препаратов
2.2.5. Кариотипирование
2.2.5.1. Выявление и анализ добавочных хромосом
2.2.5.2. Выделение особей-мозаиков
2.2.6. Особенности построения графиков и таблиц
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Структура кариотипа A. peninsulae Thomas, 1906
3.1.1. Дифференциальное окрашивание А- и В-хромосом
3.1.2. Система В-хромосом материковых популяций
3.1,2.1. Хромосомные характеристики А p. nigritalus HolHster, 1913
3.1.2.1.1. Западная Сибирь
3.1.2.1.2. Республика Тыва
3.1.2.1.3. Забайкалье (Читинская область)
3.1.2.2. Хромосомные характеристики популяций А. p. praetor Miller, 1914 Дальнего Востока
3.1.2.2.1. Магаданская область 90
3.1.2.2.2. Амурская область 90
3.1.2.2.3. Еврейская Автономная область 93
3.1.2.2.4. Хабаровский край 94
3.1.2.2.5. Приморский край 97
3.1.2.3. Хромосомные характеристики А. p. peninsulae Thomas, 1906 116
3.1.3. Хромосомные характеристики островных популяций А.peninsulae
3.1.3.1. остров Русский {А. p. praetor) 117
3.1.3.2. остров Стенина {А. p. praetor) 118
3.1.3.3. остров Сахалин {А. p. giliacus Thomas, 1901) 119
3.1.3.4. остров Хоккайдо (А. p. giliacus) 119
3.2. Анализ хромосомных параметров A. peninsulae 121
3.2.1. Анализ числовых характеристик В-хромосом по полу 121
3.2.2. Полиморфизм кариотипов по размерам и морфологии В- хромосом
3.2.3. Анализ числовых вариаций хромосомных чисел 128
3.2.3.1. Анализ вариаций числа макро имикро В-хромосом 135
3.2.4. Частота встречаемости особей с В-хромосомами 140
3.2.5. Исследование мозаицизма у восточно азиатской мыши 142
3.2.5.1. Частота встречаемости особей-мозаиков 143
3.2.5.2. Анализ варьирования хромосомных чисел у особей-мозаиков и мыгаей со стабильными кариотипами
3.2.5.3. Характер мозаицизма 153
3.2.6. Общая кариологическая характеристика^. peninsulae на основе некоторых частотных параметров В-хромосом
3.3. Происхождение и эволюция В-хромосом Apodemuspeninsulae 166
Выводы 180
Литература 182
Приложение 212
- К вопросу о происхождении и механизмах возникновения В-хромосом млекопитающих
- Методы исследования
- Амурская область
- Хромосомные характеристики А. p. peninsulae Thomas, 1906
К вопросу о происхождении и механизмах возникновения В-хромосом млекопитающих
Изучение В-хромосом у различных видов эукариот привело к многочисленным гипотезам об их происхождении и механизмах возникновения (см. обзор: Camacho et al, 2000). В литературе наиболее распространены две гипотетические модели, объясняющие происхождение В-хромосом у эукариот: «паразитическая» ("parasitic model", Ostergren, 1945) и « гетерозисная» ("heterotic model", White, 1973). Согласно наиболее распространенным представлениям, В-хромосомы млекопитающих возникли из А-хромосом в результате различных хромосомных перестроек - транслокаций, инверсий, делеций, фрагментации (Patton, 1972; 1977; Jones, Rees, 1982; Green, 1990; Jones, Houben, 2003 и др.). При неравной реципрокной транслокации, так же, как при робертсоновских транслокациях, из А-хромосом могут возникать маленькие центрические фрагменты, содержащие центромерный гетерохроматин (BattagHa, 1964; White, 1973; Волобуев, 1978; Camacho et al., 2000 и др.). Исследования политенных хромосом у кровососущих мошек дополнили представления о происхождении В-хромосом от А-хромосом путем хромосомных перестроек. В-хромосомы представляют частично инактивированный, гетерохроматизированный материал эухроматических районов хромосом. Различное содержание в В-хромосомах эу- и гетерохроматина определяет многообразие их типов. Полученные данные позволяют предполагать адаптивное значение системы дополнительных хромосом (Чубарева, Петрова, 1984). Более того, данные о составе ДНК некоторых В-хромосом одного и того же вида указывают на их происхождение из разных А-хромосом (Cabrera et al., 2003). Источником В-хромосом могут быть также мелкие аутосомы. В механизме появления В-хромосом и в изменчивости их числа большую роль играет их нерасхождение в митозе или мейозе (Hewitt, 1973). У кузнечиков В-хромосомы иногда спаривались в мейозе с А-хромосомами, и этот факт был одним из аргументов в пользу происхождения их из А-хромосом.
Имеются также сведения о происхождении В-хромосом из половых хромосом (Lopez-Leon et al., 1994; Sharbel et al., 1998). У большинства кузнечиков источником образования В-хромосом явились делеций в Х-хромосоме (Hewitt. 1973). Эти В-хромосомы могут преобразовываться в изохромосомы. Изо В-хромосомы описаны, например, у двух видов кузнечиков (Fletcher, Hewitt, 1988), рыб рода Astycmax (Mestriner et al., 2000), восточноазиатской мыши (Рубцов и др. 2005).
Возможно, в пользу предположения происхождения В-хромосом из А-хромосом могут послулшть следующие доводы: а) добавочные структуры чаще встречаются в группах, где процесс видообразования связан с хромосомными перестройками; б) В-хромосомы могут образовывать биваленты с А-хромосомами; в) рядом исследователей отмечается сходство размеров, морфологии, характера флюоресценции и/или рисунка G- и С-окраски В-хромосом и У-хромосомы - для американских хомячков (Yonenaga et al., 1974), восточноазиатских мышей (Волобуев, 1980а; Тимина и др., 1980), а иногда - и с В-хромосомами и аутосомами, как показано для желтогорлой мыши (Tanic et al., 2005), Эти авторы придают основное значение в образовании добавочных элементов процессам полисомии и дупликациям.
Имеются и иные данные. К примеру, на крысовидных хомячках не показано сходства рисунка G-окраски между В- и какой-либо из А-хромосом (Картавцева и др., 1980),
В ряде работ показано, что В-хромосомы происходят из аутосом видов хозяина (Jamilena et al., 1994; 1995; Houben et al., 1996; 1997; Peppers et al., 1997 и др.). Существуют предположения, согласно которым источником В-хромосом могут быть не только А-хромосомы соответствующего вида, но и ДНК близкородственных видов (Schartl et al., 1995; McAllister et al., 1997 и др.).
Практически все предложенные гипотезы базируются на сравнительном анализе морфологии и состава ДНК А- и В-хромосом, сведениях о формировании хромосомных фрагментов и микрохромосом при межвидовых скрещиваниях, а также на филогенетическом анализе ДНК мобильных элементов близкородственных видов. Большинство вопросов, связанных с происхождением В-хромосом, их молекулярной эволюцией, частотой встречаемости, влиянием на фенотип носителя, а также с передачей в поколениях и ролью в эволюции генома требуют в каждом конкретном случае специального анализа.
Методы исследования
Отлов мышей производили с помощью живоловок, которые выставляли на ночь в типичных для вида биотопах и проверяли в утреннее и вечернее время. В качестве наживки применяли жареные в масле кусочки хлеба. Далее живых зверьков доставляли в виварий института. Затем временно (от недели до нескольких месяцев) передерживали животных в виварии и забивали. Часто (начиная с 1992 года) мышей забивали на месте отлова, в полевых условиях, либо в лаборатории (в течение 1-3 недель с момента отлова) с целью исключить изменение картины по варьированию В-хромосом. После забоя проводили стандартные зоологические промеры тела для каждой особи и определяли ее возрастное состояние: ad - взрослое животное, sad - молодое, половозрелое животное, juv - молодая, ювепильная особь (см. табл. 2,1-2.3, приложение). Затем каждому животному присваивали индивидуальный коллекционный номер.
Препараты метафазных хромосом готовили в лабораторных условиях прямым способом из красного костного мозга животных по общепринятой методике (Ford, Hamerton, 1956). Использовали клетки костного мозга, т.к. они активно делятся in vivo, их просто и быстро получить без предварительного культивирования ткани. К тому же, при таком способе взятия материала не происходит спонтанных изменений хромосомных наборов, в отличие от длительно культивируемых клеточных линий, где случаются подобные мутации.
В работе использовали способ стимуляции митотического деления клеток с помощью раствора пекарских дрожжей (Lee, Elder, 1980). Для этого смешивали 2-3 г сухих дрожжей и 5-6 г D-глюкозы в 25 мл теплой воды. Смесь инкубировали при температуре 37С в течение 20-40 минут. За сутки до забоя мышам подкожно, в область бедра, инъецировали суспензию дрожжей (в расчете: 0,5 мл суспензии на 25 г живого веса животного).
Примерно за 30 мин - 1 час до забоя мышам внутрибрюшинно вводили 0,04%-ньтй раствор колхицина из расчета: 1 мл раствора на 100 г веса особи. Колхицин - это токсичный алкалоид, получаемый из растений рода Colchicum. Он является ингибитором образования веретена деления и используется для накопления клеток на стадии метафазы митоза. Колхицин разрушает микротрубочки веретена и препятствует расхождению хромосом, поэтому клетки останавливаются на стадии метафазы митоза. Кроме того, хромосомы уже не располагаются в экваториальной плоскости и после фиксации легко отделяются друг от друга. Время воздействия и концентрация алкалоида подбираются эмпирически в каждом конкретном случае, При длительном воздействии ингибиторов веретена наблюдается чрезмерное сокращение и уплотнение метафазных хромосом.
Мышей забивали методом цервикалы-гой дислокации. После забоя у животного быстро извлекали бедренную кость, очищали ее от остатков мышечной ткани и отрезали эпифизы. Костный мозг вымывали теплым (нагретым до 37С) гипотоническим раствором в центрифужную пробирку при помощи медицинского шприца. Для гипотонии использовали 0,56%-й раствор хлористого калия (КС1) в дистиллированной воде. Костный мозг тщательно суспензировали с помощью пастеровской пипетки. Затем суспензию клеток в гипотонической среде инкубировали 20-25 минут при 37С. Процедура обработки клеточной суспензии гипотоническим раствором играет важную роль в получении высококачественных хромосомных препаратов млекопитающих. В процессе гипотонической обработки клетки и ядра значительно увеличиваются в размерах (набухают) и происходит разрушение мел«ромосомных связей, что способствует отделению хромосом друг от друга. Важно выбрать оптимальные условия гипотонической обработки, т.к. при сильном разбухании клеток происходит потеря отдельных хромосом, а при недостаточном разбухании хромосомы плохо отделяются друг от друга (слипаются), что затрудняет анализ кариотипа,
Осадок ресуспеизировали в небольшом объеме гипотонического раствора, а затем клетки осаждали центрифугированием в течение 5 мин при 800-1000 об/мин. После этого приступали к процедуре фиксирования. Надосадочную жидкость осторожно сливали, а клеточный осадок фиксировали смесью метилового (или этилового) спирта и ледяной уксусной кислоты (3:1). Для фиксации рекомендуется использовать метанол, т.к. этанол часто содержит значительное количество воды и нежелательных примесей. Мы использовали вторую фракцию очищенного этанола, полученную после его перегонки. Всегда применяли только свежеприготовленный фиксатор, поскольку при хранении в его смеси образуется метил ацетат, который снижает качество фиксации клеток. Фиксатор (около 2 мл) приливали по стенке пробирки осторожно, чтобы не разбить осадок. Смену фиксатора производили не менее трех раз, через каждые 15 минут. Можно проводить смену фиксатора, каждый раз ресуспензируя и центрифугируя осадок в течение 5 минут. Общее время фиксации - не менее 40 минут. В последней порции фиксатора суспензию клеток оставляли в холодильнике для хранения при температуре 4С. Перед раскапыванием на стекла после хранения клетки промывали свежеприготовленным фиксатором (ресуспензировали). Наливали фиксатора около 0,5 мл, чтобы получилась молочного цвета опалесцирующая.взвесь.
Амурская область
Исследовано пять особей из двух популяций мышей. У них обнаружены сходные варианты системы В-хромосом. Размах изменчивости был незначительным в обеих популяциях. Почти половина особей имела стабильные кариотипы.
Кариотипы мышей из окрестностей г. Биракана (№ 15, n=3: lc?, 2$$; изучено 38 метафаз) были стабильными у одной особи (33,3%), а две другие (66,7%) были мозаиками. Самка со стабильным кариотипом имела две мелкие двуплечие В-хромосомы (2п=50, В=2, формула: 0.0.2.0.0). У каждой из особей-мозаиков индивидуальные вариации 2п были незначительные: от 48 до 49 (см. табл. 2.2 и 3.2, приложение). Они обусловлены наличием 0-1 мелкой метацентрической В-хромосомы 3-го класса (см. табл. 3.2, приложение). Модальными были 48 и 49 хромосом, но преобладали клетки с 2п=49, В=1 (рис. 12а), Индекс хВ составил I (табл. 2). Оба мозаика имели по два клеточных клона (рис. 126).
Изучены два самца из окрестностей г. Биробиджана (№ 16; исследовано 98 метафаз). Один - имел стабильный кариотип с 2п=50, где содержалось 2 В-хромосомы, по одному метацентрику средних и мелких размеров (0.1.1.0.0). Другой оказался мозаиком. Вариации диплоидных чисел у него были весьма незначительными: 49-50, за счет наличия 1-2 В-хромосом, представленных в сочетаниях 2-го и 3-го классов: 0-1 среднего и 0-1 мелкого метацентриков (см. табл. 2.2 и 3.2, приложение). Мозаик имел 3 клеточных клона по размерно-морфологическим типам В-хромосом (рис. 126). По числу же В-хромосом выделено только 2 клона (см. табл. 3.2, приложение). В популяции несущественно преобладали клетки с 49-ю хромосомами, В=1 (рис. 12а). Индекс хВ составил 1,5 (табл. 2). У обоих животных выявлены по две тетраплоидные клетки (см. табл. 2.2 . приложение).
Изучено 67 мышей, из восьми локалитетов (№№ 17-24), большинство особей оказались мозаиками. Во многих популяциях (всех, кроме №№ 21 и 24) встречены мыши, не имеющие в своих кариотипах В-хромосом (табл. 1). Кариотипы мышей из популяции пос. Красное (№ 17, п=16: 8(Усь 8??; изучено 254 метафазы) имели вариации 2п от 48 до 51 за счет 0-3 В-хромосом 1-го, 2-го и 3-го классов (табл. 1). Основная часть животных - 10 особей (или 62,6%) имела стабильные кариотипы (табл. 1, рис. 12г). Среди мышей со стабильными кариотииами семь особей (43,8%) составили животные без В-хромосом. Три особи (18,8%о) - это мыши с 2п-50, у двух из них выявлено по 2 мелких метацентрических В-хромосомы (формула 0.0.2.0.0), а у одной особи (колл. № 109-96) - 1 мелкая метацентрическая В-хромосома и 1 точечная В-хромосома 5-го класса (0,0.1.0.1), редкий вариант для животных Хабаровского края. У шести особей-мозаиков (37,5%) индивидуальные вариации 2п были: 48-49 (п=3), 48-50, 49-51, 49-50 (см. табл. 2.2 и 3.2, приложение). Сочетания В-хромосом у мозаиков составили: 0-1 крупные метацентрики (у одной особи), 0-1 средние метацентрики и 0-2 мелкие метацентрики. Модальными были: 48, 49 и 50 хромосом. В популяции чаще отмечены клетки с 2п=48, В=0. Их доля составила 60% от всех изученных метафаз (рис. 12в), Среднее число В-хромосом на особь было 0,75, но для выборок животных разных годов отлова (1980-1982 и 1986) индекс хВ изменялся от 0 до 1,4 (табл. 2). Были встречены двух- и трехклоновые мозаики, а преобладали -двухклоновые животные (рис. 12г).
Мыши из окрестностей оз, Эворон (№ 18, п=18: 11$с?, 7??; изучено 563 метафазы) преимущественно были особями-мозаиками (77,8%). Среди четырех особей со стабильными кариотипами были встречены мыши с 2п=48, 50 (п=2), 52 (табл. 1). В-хромосомы у них были представлены 1-2 метацентриками 2-го и 1-3 метацентриками 3-го классов. Индивидуальные вариации 2п у особей-мозаиков были: 49-51 (п=5), 50-51 (п-4), 48-49 (п=2), 49-50 (п=2), 50-52, 53-55, т.е. в целом составили: от 48 до 55 (см. табл. 2.2 и 3.2, приложение). Числа В-хромосом изменялись от 0 до 7. Систему В-хромосом особей-мозаиков составили 1-3 классы, т.е. сочетания 0-1 крупных, 0-4 средних и 0-2 мелких метацентрических В-хромосом (табл. 3.2 , приложение). У одного самца-мозаика (колл. № 1507) был выявлен 0-1 мелкий мини В-метацентрик, который первоначально был отнесен нами к микро В-хромосомам (Kartavtseva, Roslik 2004). Затем, ввиду наличия у него распознаваемой двуплечей морфологии (см. рис. 7в) и вследствие отсутствия в составе его ДНК повторов, характерных для типичных микро В-хромосом, наблюдаемых у сибирских мышей, он был отнесен к 3-му классу В-хромосом (Rubtsov et al. 2004). Максимальное число хромосом (55) отмечено только у одного самца (колл. № 1510), причем клон клеток именно с этим числом составлял наибольший процент (38,2%) от изученных метафаз для данной особи. В популяции модальные числа были: 48-52 и 55. Чаще всего отмечены клетки с 50-го хромосомами, где В=2 (рис. 12в). Были изучены 2 выборки данной популяции. Интересно, что в 2001 году все животные (п=12) имели стабильные кариотипы, а в 2002 году (п=6) встречены только осо би-мозаики. Отлов мышей в оба года проводился в осенний период (конец августа - начало сентября). Среднее число В хромосом на особь в 2001 году было 2.25, а в 2002 году - 2,67, в целом лее индекс хВ составил для популяции 2,39 (табл. 2). Выявлены двух - и трехклоновые особи-мозаики, но преобладали трехклоновые (рис. 12г). У двух самок (колл. №№ 1402 и 1403) по числу В-хромосом выявлено по 2 клона, а с учетом размеров и морфологии В-хромосом, число клонов у обеих особей составило 3 (табл. 3.2 , приложение). Выявлено пять животных (колл. Ке№ 1378, 1404, 1506, 1507, 1508), имеющих по одной-две тетраплоидных клетки (см. табл. 2.2, приложение).
Хромосомные характеристики А. p. peninsulae Thomas, 1906
Изучено 4 мыши из популяции № 54 Корейского полуострова (табл. 1). Эти животные - из окрестностей г. Чёнгжу (№ 54, п=4: З б1, 12; исследована 131 метафаза) оказались мозаиками с разбросом хромосомных чисел: от 48 до 51. вследствие наличия 0-3 В-хромосом. Индивидуальные вариации 2п составили: 49-51 (п=2), 48-49, 50-51 (см. табл. 2.2 и 3.2, приложение). В-хромосомы были встречены в сочетаниях 2-го (от 0 до 2) и 3-го (от 0 до 3) классов. Отмечены модальные числа с 49-ю и 50-ю хромосомами. В популяции преобладали клетки с 2п=49, В=1 (рис, 16д). Индекс хВ составил 1,5 (табл. 2). С равной частотой отмечены двух- и трехклоновые мозаики (рис. 16е). Мозаицизм для корейских мышей описан нами впервые. У трех особей (колл. №№ 1603, 1604. 1605) выявлено от 1 до 5 тетраплоидных клеток (см. табл. 2.2, приложение).
Итак, животные А. p. peninsulae оказались сходными по числу, морфологии, типам В-хромосом, характеру мозаицизма, индексу хВ со многими материковыми дальневосточными популяциями мышей А. p. praetor. По преобладанию в выборке хромосомных чисел (49 и 50) наиболее сходными они оказались с Приморскими мышами.
Исследовано два подвида мышей, отловленных на четырех дальневосточных островах, где обитает A. peninsulae (№»№ 54-63, п=93). На островах Русский и Стенина изучен подвид А. p. praetor Miller, 1914, а на островах Сахалин и Хоккайдо (Япония) - А. p. giliacus Thomas, 1907 (Kartavtseva, Roslik, 1993; Sawaguchi et al., 1998a, b; Kartavtseva et al., 1999; Картавцева, Рослик, Павленко, 2000; Kartavtseva, Roslik et al., 2000; Roslik, Kartavtseva, 2001; Рослик. Картавцева, 20036; Рослик и др., 2003; 2004; Kartavtseva, Roslik, 2004; Roslik et al, 2005). Bee островные популяции имели свои кариотипические особенности.
Кариотипы мышей-мозаиков А. p. praetor о-ва Русский (№ 55, п=15: 8с?сь 7$ $; изучено 238 метафаз) включали от 48 до 52 хромосом, в том числе - от 0 до 4 В-хромосом. У пяти особей со стабильными кариотипами (33,3%) отмечены числа с 49, 51 (п=2) и 53 (п=2) хромосомами. Встречались сочетания 0-2 средних и 1-4 мелких В-хромосом. У одной особи (колл. № 125-98, 2п=53, В=5, формула клона: 0.0.4.0.1) выявлена также 1 микрохромосома. Мозаиками были десять (66,7%) особей. Индивидуальные вариации 2п были у них: 48-50 (п=3), 48-49 (п=2), 48-51 (n=2), 49-52, 49-51, 49-50 (см. табл. 2.3 и 3.3, приложение). Числа В-хромосом у них также варьировали от 0 до 4. Основной вклад в изменчивость внесли В-хромосомы 2-го и 3-го классов (см. табл. 3.3, приложение). Это были сочетания 0-2 средних и 0-3 мелких В-хромосом. Чаще всего в популяции отмечен класс клеток с 48-ю хромосомами (рис. 17а). Были изучены 2 выборки мышей: 1985 и 1998 годов отлова. Все лшвотные 1985 года отлова оказались особями-мозаиками с тремя -пятью клонами. Более половины мышей 1998 года отлова имели стабильные кариотипы, а особи-мозаики были с 2-мя и 3-мя клонами клеток. Индекс хВ был у мышей 0,83 - в 1985 году, 2,67 - в 1998 году, а в целом составил 1,93 (табл. 2). Выявлены двух-, трех-, четырех- и пятиклоновые мозаики, но с равной частотой встречены как животные с одним клоном, так и трехклоновые особи-мозаики (рис. 176). В популяции обнаружена одна самка (колл. № 133-85), у которой по
Распределение чисел В-хромосом (а - для №№ 55 и 63) и количество клеточных клонов (б) у A. peninsulae из островных локалитетов Дальнего Востока. Для мышей островов Стенина (№ 56) и Сахалин (№№ 57-62) 2п не показаны, поскольку все они имеют стабильный кариотип - 2п=48, В=0. Для графиков (а): по оси абсцисс (х) приведено - число В-хромосом, по оси ординат (у) - процент встречаемости клеток у особей с определенным числом В-хромосом. Для гистограмм (б): по оси х - количество клеточных клонов; а по оси z - процент встречаемости особей с данным клоном клеток. В легендах к рисункам даны названия локалитетов. числу В-хромосом обнаружено 4, а по морфологии 5 клонов. Как клоны были расценены оба варианта с числом хромосом 49 - с 1 средним (0.1.0.0.0) и 1 мелким (0.0.1.0.0) метацентриками (см. табл. 3.3, приложение).
С небольшого о-ва Стенина (№ 56) было изучено 2 выборки мышей 1999 и 2000 годов отлова (п=16: ПсТсь 5$$). В кариотипах этих особей А. p. praetor не найдено В-хромосом (2п=48, В=0, изучено 446 метафаз). Популяция оказалась мономорфной по этому признаку (табл. 1). Доля единственного клона клеток с 48-ю хромосомами составила для каждой особи не менее 80% от всех исследованных клеток (рис. 176 и см. табл. 3.3, приложение). Отклонения от модального значения преимущественно носили гипоплоидный характер, и классы встреченных гипоплоидных и гиперплоидных клеток не являлись клонами на основании применяемого при выделении клонов критерия, описанного ранее. У двух особей (колл. №№ 213-99 и 1269) обнаружена 1 и 2 тетраплоидные клетки (см. табл. 2.3, приложение).
С крупного о-ва Сахалин (Сахалинская область) нами были исследованы особи А. p. giliacus из шести точек отлова (№№ 57-62, 0=55: 33 $ $, 22$$) на протяжении ряда лет: в 1979, 1980, 1982, 1990, 1994, 1998, 2000, 2003 годах (табл. 1 , приложение). Мы не описываем каждую популяцию и выборку мышей отдельно, поскольку кариотипы всех сахалинских мышей оказались идентичны. Несмотря на тщательные исследования их кариотипов (посчитано 774 метафазиые пластинки), не было выявлено никаких В-хромосом в их наборах, ни в одной из выборок животных и ни в одном из локалитетов! Клеточный клон с 48-ю хромосомами составил не менее 76% от изученных клеток для каждой особи (рис. 176 и см. табл. 3.3, приложение). Отклонения от модального числа были смещены в основном в сторону класса гипоплоидных клеток. У трех особей из пос. Тымовск (№ 59) выявлено по одной клетке с тетраплоидным набором хромосом (см. табл, 2.3, приложение). Таким образом, нами был подтвержден мономорфизм популяции о-ва Сахалина по числу хромосом, ранее обнаруженный Т.С. Бекасовой (1978; 1980а, б; Bekasova et al, 1980).
