Зависимость гемостатических сдвигов при разных тиреоидных состояниях от интенсивности процессов перекисного окисления липидов Мысник Ольга Федоровна

Содержание к диссертации

1. ВВЕДЕНИЕ 3

1. Коагуляционный, тромбоцитарный гемостаз и ПОЛ при экспериментально измененной функции щитовидной железы 43

1. Гемостаз и ПОЛ при гипотиреозе, вызванном мерказоли- лом 43

2. Гемостаз и ПОЛ при глубоком гипотиреоидном состоянии, вызванном введением 6-метилтиоурацила /6-МТУ/ 45

3. Гемостаз и ПОЛ при гипертиреозе и тиреотоксикозе 51

4. Зависимость интенсивности изменений ПОЛ в плазме и тромбоцитах и гемостатических сдвигов от дозы тироксина 56 при однократном введении

Толерантность к тромбину при разных тиреоидных состояниях Ч 64

Гемостаз и ПОЛ при введении тироксина в дозах, вызывающих гипертиреоз и тиреотоксикоз, на фоне модификации ПОЛ в 66 тромбоцитах

Введение к работе

Актуальность проблемы. Согласно клиническим наблюдениям дисфункция щитовидной железы сопровождается гемостатическими сдвигами, в частности, гипокоагулемией, особенно при гипертиреои- дизме. [Б.П.Трач, 1971; В.А.Шелег, 1972; В.М.Панченко, А.В.Анто- нидзе, 1973; Г.З.Химич, 1973, 1979; М.И.Неймарк, 1977; Т.М.Ка- лишевская, 1982; А.П.Ковалев, 1985, 1990; В.В.Янголенко, 1991; Кгашапп е.а., 1997; Masunaga е.а., 1997; МопвЬка е.а., 1998]. Есть и обратная связь: гемокоагуляционные сдвиги разного происхождения сопровождаются изменением функции щитовидной железы [Г.В.Коршунов и др., 1973; В.Ф.Киричук, 1973; С.А.Георгиева, 1973, 1975].

Изменения активности некоторых факторов свертывания при ги-

пер- и гипотиреозе найдены и в эксперименте [В.Ф.Киричук, 1975а,б; К.И.Мышкин и др., 1975; Ск^егот е.а., 1976; МезБеп е.а., 1995, 1996].

Однако однозначное представление о характере и механизме гемо- статических нарушений при дистиреозах отсутствует. В частности, не решен важный с позиций теории и практики вопрос: является ли гипо- коагулемия при гипертиреозе прямым следствием влияния гормонов щитовидной железы или она вторична, т.е. носит характер гипокоагу- лемии потребления.

Кроме того, в последние годы появились указания на связь пере- кисного окисления липидов /ПОЛ/ с гемостазом [В.П.Мищенко, 1981; А.Ш.Бышевский, 1994; А.Ш.Бышевский и др., 1995а,б,в; А.А.Нелаева, 1997; А.А.Нелаева и др., 1998, 1999; М.В.Дурова, 1999; Л.И.Рейхерт, 1999; Э.А.Шабанов, 2000; П.Я.Шаповалов, 1999, 2000а,б,в; П.Я.Шаповалов и др., 1999,а,б; Bishevski е.а., 1995]. Обнаружены сдвиги ПОЛ, зависящие от функционального состояния щитовидной железы [Badmaev е.а., 1996; Fitch е.а., 1999]: 1) у генетически гипертиреоидных крыс изменена пероксидазная активность фолликулярных клеток щитовидной железы [Gomba е.а., 1976], 2) показано, что трийодтиронин /Т₃/ угнетает пероксидацию в микросомальной фракции гепатоцитов [Suwa, Nakano, 1975]; 3) что для гипертиреоза характерна активация ПОЛ, в частности, ускоренная пероксидация липопротеинов [Constantini е.а., 1998]; 4) что прооксидант вызывает дисфункцщр щитовидной железы, а антиоксидант препятствует этому [Chaurasia, Kar, 1997]. Показано также, что селенпротеины являются компонентами антиоксидантной защиты щитовидной железы [Badmaev е.а., 1996] и что гормон щитовидной железы (in vitro) тормозит дозазависимое окисление ЛПНП [Sundaram е.а., 1997]. Есть и противоречия: тиреоидные гормоны в малых дозах тормозят ПОЛ в тканях, а в больших - активируют [Bozhko е.а., 1990].

Несмотря на противоречивость сведения, ясно, что ПОЛ - один из общих механизмов адаптации - взаимосвязан q функцией щитовидной железы, и что эта связь неодинакова при разных патологических процессах [В.И.Николаев и др., 1995; Н.В.Шакаришвили и др., 1989]. Неодинаковы и эффекты тиреоидных гормонов на ПОЛ в разных тканях [А.И.Марзоев и др., 1983], варьируют сдвиги пероксидации при различных нарушениях функции железы [А.И.Марзоев и др., 1985; С.Н.Вадзюк, 1992; Е.С.Ром-Бугославская и др., 1997; И.Е.Попова, И.А.Мухачева, 1998; И.Е.Попова, 1999].

Есть указания на то, что при тиреопатиях в крови активировано

ПОЛ и угнетена антиоксидантная защита [Bech е.а., 1996; Durak е.а., 1996; Rom-Bugoslavskaia е.а., 1998], что антиоксиданты, в противоположность прооксидантам, в эксперименте улучшают функцию щитовидной железы [Gupta, Каг, 1998; Mutaki е.а., 1998].

Пероксидаза щитовидной железы, являющаяся мишенью антити- реоидных средств [Orgiazzi, Millot, 1994], имеет отношение не только к использованию щитовидной железой йода, но и к продукции перекисей. Тиролиберин, контролирующий продукцию тиреотропина, тормозит липид-пероксидазную активность в щитовидной железе - еще одно указание на связь ПОЛ с ее функционированием.

Есть и косвенные признаки существования такой связи: 1) ингибиторы пероксидазы щитовидной железы изменяют процессы ПОЛ в ней [Pommier е.а., 1976; Davidson е.а., 1979; Chauntsia, е.а., 1996а, 19966, 1997, 1998]; 2) тиролиберин ограничивает накопление продуктов ПОЛ в тканях [Koz, Akdemir, Kurtsoy, 1995].

В совокупности все это свидетельствует, что щитовидная железа занимает важное место в регуляции процессов ПОЛ, а ее функционирование в свою очередь зависит от состояния этих процессов.

Выявлены признаки связи ПОЛ и гемостаза. Так, установлена возможность ограничивать антиоксидантами нарушения гемостаза при ряде патологических состояний, протекающих с гипероксидацией, и снижать угрозу тромбоэмболических осложнений, а также увеличивать толерантность к тромбину. Показано, например, что комбинация витами- нов-антиоксидантов (А, Е, С и Р) при тромбинемии уменьшает глубину гипокоагулемии потребления [И.В.Селиванова, 1994; С.Л.Галян, 1993; В.Г.Соловьев, 1991, 1997; И.А.Зарубина, 1998; Л.С.Лошкарева, 1999;

Э.А.Шабанов, 2000], ограничивает активацию тромбоцитов проокси- дантами [И.В.Ральченко, 1998], усиливает эффекты антитромбоцитар- ных средств [И.А.Дементьева, 1998; А.А.Вакулин, 1998; Д.С.Марченко, 1998; Л.С.Лошкарева, 1999], предупреждает гемокоагуляционные сдвиги при оперативных вмешательствах [В.М.Шафер, 1989; А.А.Вакулин, 1994; Т.П.Шевлюкова, 1996; Т.П.Шевлюкова и др., 1998; К.В.Горба- тиков, 1998], при гестозе [В.А.Полякова, 1994, Ю.И.Цирук, 1998; А.В.Соловьева, 1999; Е.А.Винокурова, 1999; Т.П.Шевлюкова, 2000а,б], инсультах [М.В.Дурова, 1999; Л.И.Рейхерт, 1999], введении стероидных гормонов [П.Я.Шаповалов, Э.А.Шабанов, 1999]. Еще заметнее эффект селенсодержащего антиоксиданта селмевита [А.А.Нелаева, 1997; Ю.Ф.Удалов и др., 1997; Ю.И.Цирук, 1998; А.В.Соловьева. 1999].

Зависимость между состоянием щитовидной железы и гемостазом, двусторонняя связь ПОЛ-гемостаз [С.Л.Галян, 1993; И.А.Дементьева, 1998], положительное влияние антиоксидантов на интенсивность постоянного внутрисосудистого свертывания крови [И.А.Зарубина, 1998] и на толерантность к тромбину [А.Ш.Бышевский, 1994] определили направление предпринятых нами исследований.

Цель исследования. Изучить гемостатические изменения и интенсивность процессов перекисного окисления липидов, а также толерантность к тромбину при разных тиреоидных состояниях.

Задачи исследования:

Изучить динамику изменений коагуляционного и тромбоцитар- ного гемостаза при гипо-, гипертиреозе и тиреотоксикозе у экспериментальных животных на фоне обычного рациона питания.

Изучить динамику изменения коагуляционного и тромбоцитар- ного гемостаза при гипо-, гипертиреозе и тиреотоксикозе на фоне угнетения и активации ПОЛ (на фоне дополнительного введения проокси- дантов или антиоксидантов).

Изучить толерантность животных к тромбину при гипо-, гипертиреозе и тиреотоксикозе.

Изучить зависимость толерантности к тромбину от интенсивности ПОЛ.

Научная новизна.

Впервые экспериментально показано, что в ранние сроки введения тетрайодтиронина растет прокоагулянтная активность тромбоцитов (агрегационные свойства, высвобождающая способность, общая коагулирующая активность) и общая свертывающая активность крови.

Установлено, что степень увеличения прокоагулянтных свойств тромбоцитов, степень активации ПОЛ и снижения антиоксидантной активности пропорциональны дозам тетрайодтиронина.

Впервые экспериментально показано, что при длительном введении тетрайодтиронина общая свертывающая активность крови снижается, в то время как продолжает нарастать интенсивность постоянного внутрисосудистого свертывания крови (или тромбиногенеза).

С помощью экспериментальных моделей, которые ранее не использовались (гипо-, гипертиреоз и тиреотоксикоз) подтверждена зависимость между степенью активации ПОЛ в тромбоцитах и ростом их прокоагулянтных свойств; показано, что торможение и стимуляция процессов ПОЛ антиоксидантами или прооксидантами соответственно уменьшает или повышает их прокоагулянтную активность.

Впервые показано, что селмевит, содержащий в своем составе ловушки свободных радикалов, протектор сульфгидрильных групп и компонент ферментов антиоксидантной защиты, ограничивает процессы ПОЛ в тромбоцитах и их активацию.

Практическое значение работы. Полученные данные определяют целесообразность изучения влияния селмевита (или других антиокси- дантов) в качестве неспецифического средства коррекции гемостатиче- ских сдвигов при гипертиреозе или тиреотоксикозе. На этом основании

выполнено соответствующее исследование (эндокринологический центр г. Тюмени)

Разработаны методические рекомендации «Обоснование целесообразности профилактики гемостазиологических сдвигов при назначении эстроген-гестагенных препаратов витаминами-антиоксидантами» Тюмень, 2000. - 12 с.

Наши данные использованы при разработке методических рекомендаций по применению селмевита в профилактике гиперкоагуляци- онных состояний, а также при написании обзоров «К механизму связи перекисного окисления липидов и гемостаза» // Научный вестник ТГМА, 1999. - 1. - С.38-43., а также при составлении заявки на патент «Способ количественного определения толерантности животных к тромбину» (приоритетная справка № 2000111139 от 4.05. 2000 г).

Апробация и публикация. Основные положения диссертации доложены на Международном симпозиуме «Медицина и охрана здоровья», Тюмень, 1998, 1999, Республиканской научно-практической конференции «Современные методы диагностики и лечения заболеваний щитовидной железы» (Тюмень, 1997), на конференции по гемостазу (Барнаул, 1999), заседании Урало-Западносибирского отделения ВБО, (Челябинск, 1999), заседании Тюменского регионального отделения ВБО и регионального отделения Академии Естествознания РФ (2000).

По материалам диссертации опубликовано 14 работ.

Основные положения, выносимые на защиту.

Тетрайодтиронин при оральном введении животным в дозах, вызывающих гипертиреоидное состояние, вызывает дозазависимый рост обшей коагулирующей и агрегационной активности тромбоцитов, усиленное высвобождение факторов Рз и Р4, интенсифицирует ПОЛ и снижает антиоксидантный потенциал тромбоцитов.

Степень активации тромбоцитов растет с увеличением продолжительности введения гормона, этому сопутствует активация коагуля- ционного гемостаза, сменяющаяся гипокоагулемией потребления при продолжающемся нарастании признаков ускоренного тромбиногенеза.

Степень активации тромбоцитов и общей свертывающей активности крови в ранние сроки введения гормона коррелирует со степенью нарастания уровня первичных и вторичных продуктов ПОЛ в тромбоцитах и находится в обратной зависимости от уровня антиоксидантного потенциала в них.

При экспериментальном тиреотоксикозе наблюдаются те же явления, отличающиеся большей глубиной и скоррстью возникновения.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Разнообразие решавшихся экспериментаторами и клиницистами задач при изучении гемостаза в связи с функциональным состоянием щитовидной железы, различия в методических подходах, затрудняют систематизацию данных, однако, ясно, что наиболее важный теоретический аспект, имеющий практическое значение - это изменения гемостаза при гиперфункции щитовидной железы.

2.1. Гипертиреоз и гемостаз

Пристальное внимание на роль эндокринной системы в регуляции свертывания крови исследователи обратили в конце 60-х гг. К этому времени наряду с физиологическими (длительность кровотечения, время свертывания цельной крови и др.) шире стали использовать биохимические приемы оценки свертывания крови. С.А.Георгиева и соавт. [1969], придавая значение изменениям при гипертиреозе, выявили, что внутривенное введение тироксина снижает уровень гепарина в крови, оттекающей от печени, и в крови воротной вены. При гипотиреозе, вызываемом введением 6-метилтиоурацила /6-МТУ/, напротив, уровень гепарина увеличивался, в том числе и в периферической крови.

Более детальное исследование позволило установить, что при введении тироксина вначале выявляется наклонность к гиперкоагулемии, сменяющаяся снижением свертываемости кровли. Эту фазу изменений автор [В.Ф.Киричук, 1969] связывает с угнетением протромбинсин- тезирующей способности печени, наступающей спустя 5-6 ч после инъекции тироксина. Оказалось, что тироксин изменяет концентрацию и акцелераторов, и ингибиторов свертывания дрови. Особо отмечена необычная дозазависимость эффекта тироксина: при малых дозах активность антитромбинов увеличивалась, а при больших - снижалась.

М.И.Мамиконян и др.[1969], а также Рапё е.а.[1976] показали, что при еще большем увеличении дозы тироксина развивалось претром- ботическое состояние (рост фибриногенемии, концентрации фактора VIII, снижение уровня гепарина и ускорение свертывания). Одновременно активировался фибринолиз .

В тот же период выполнены наблюдения за эффектом орального введения тиреоидина: через 2 недели от начала опытов у кроликов наблюдали рост общей свертываемости, уровня свободного гепарина и фибринолиза, снижение фибриногенемии, антиплазминовой активности. После 4-х недель снизилась также общая свертывающая активность и еще более усилился фибринолиз. Автор [К.Ф.Селиванова, 1969] считает это следствием активации противосвертывающего аппарата.

Фазность сдвигов отмечена также в наблюдениях Р.Д.Хубецовой [1969] и Г.З.Химич [1973].

Позднее оказалось, что гормоны щитовидной железы могут активировать фибринолиз и непосредственно, активируя Хагеман-зависи- мые системы крови, в частности, плазминовую [Ьипта, НопсИаг, 1995]. Известно также существование двусторонней обратной связи: гепари- немия угнетает способность щитовидной железы накапливать йод [Ф.В.Киричук, 1973], а тиреоидэктомия сопровождается фазными изменениями уровня гепарина [С.А.Георгиева, 1973].

Обратим внимание на казалось бы парадоксальный эффект, найденный при инъекции тироксина в область заднего гипоталамуса. В этом случае наблюдается гипокоагулемия (по данным биохимических тестов и данным тромбоэластографии [М.А.Степанян, 1969]). Это на первый взгляд противоречит эффекту тироксина, введенного в общий кровоток, когда наблюдается активация свертывания. Дело, однако, в том, что рост концентрации тироксина в зоне,' контролирующей продукцию тиролиберина снижает уровень тироксина на периферии, следовательно, вызывает явления гипотиреодизма, а при гипотиреозе свертываемость ослабляется. Так, при экспериментальном гипо- и ати- реозе находили гипокоагулемию (снижение концентрации факторов I, V и VII, рост гепаринемии) [С.А.Георгиева и др., 1969; А.И.Гурьянов, 1969, 1973].

Тканевые факторы свертывания в связи с экспериментальной ти- роксиновой интоксикацией изучены сравнительно мало. Так, находили снижение общего коагулирующего потенциала тканей (головного мозга, печени, аорты, сердца, легких и селезенки здоровых кроликов после введения тироксина), повышение антикоагулянтных свойств тканевых экстрактов, падение титра тканевого тромбопластина и уменьшение антигепариновых свойств тканей, тканевые компоненты фибринолити- ческой системы, напротив, активировались [Э.А.Каряева, 1975].

Сходные изменения описала ранее С.А.Георгиева [1975], а В.Ф.Ки- ричук [1975а, 19756] наблюдал, кроме того, обеднение тканей гепарином.

Подтверждены данные о значительной активации компонентов фибринолитической системы в тканях [Р.Д.Хубецова, К.Х.Мильдзи- хов,1975].

Выявлена роль тироксина и в регуляции кининовой системы. Известно, что калликреин - один из регуляторов внутреннего пути образования активной протромбиназы и активации фибринолиза. Так, В.А.Трушутин [1982] показал, что экспериментальный гипертиреоз ведет к снижению уровня прекалликреина из-за ускоренного превращения в калликреин. Это обусловлено снижением активности ингибитора калликреина, точнее, снижением способности ингибитора образовывать неактивный комплекс с прекалликреином. Поэтому нельзя исключить, что активация фибринолиза при тироксиновой интоксикации - следствие активации калликреина.

Установлено, что гипо- или атиреоз в эксперименте сопровождаются фазными сдвигами антикоагулянтной активности тканей. Это следует из того, что антитромбиновая активность экстрактов большинства органов растет, затем падает; антигепариновая активность растет в течение всего срока наблюдений, фибринолиз усиливается за счет активации активаторов плазминогена, активируются и тучные клетки [А.И.Гурьянов, 1984].

Экстракты ткани щитовидных желез больных тиреотоксикозом повышают in vitro толерантность плазмы к гепарину и степень тромбо- теста, сокращают время рекальцификации, отличаются высокими фиб- ринстабилизирующими и фибринолитическими свойствами [А.Н.Люлька, А.П.Ковалев, 1975]. Обнаружены в тканях щитовидной железы больных с тиреотоксикозом высокие уровни тромбопластической, ан- тифибринолитической, антитромбиновой, гепариновой и антигепариновой активности [А.П.Ковалев, 1985]. Это обосновало предположение о том, что высокая прокоагулянтная активность тканей щитовидной железы - причина гипокоагулемии потребления после оперативного вмешательства [Е.Г.Гуменецкий, 1995].

Данные, полученные в клинике, таковы: у большей части больных с тиреотоксикозом находят только гипопротромбинемию, у меньшей - еще и снижение уровня факторов I, V и VII, числа тромбоцитов, их функциональной активности, удлинение времени рекальцификации, активацию фибринолиза, снижение концентрации фибронектина [Н.Н.Высоцкий, Г.В.Зиновьев, 1969; Р.М.Гланц, В.Т.Чхаидзе, 1969; Т.М.Огоновский, 1969; Watzcke е.а., 1987; Klein е.а., 1993; Ford, Carter, 1988а, 19886].

Перечисленные сдвиги рассматриваются как признаки ослабления гемостатического потенциала при избытке тиреоидных гормонов. Это согласуется с обнаружением при токсическом зобе гипокоагулемии, сменяющейся нормализацией под влиянием антитиреоидных препаратов [В.М.Панченко, А.В.Антонидзе, 1973].' Однако нельзя исключить развитие гипокоагулемии потребления, так как в упомянутых работах, к сожалению, не определяли степень тромбинемии ни прямыми, ни косвенными приемами.

Тот факт, что викасол (синтетический аналог витамина К) отчасти устраняет гипопротромбинемию при тиреотоксикозе [Е.Г.Гуменецкий, 1969] нельзя считать доказательством связи гипопротромбинемии со снижением биосинтеза протромбина.

Наблюдения за больными с гипертиреозом [М.М.Ковалева и

С.Н.Вакуленко, 1969] выявили у них снижение общей свертывающей активности, гипопротромбинемию и активацию фибринолиза, тромбо- цитопению и гипофибриногенемию. Это позволяет утверждать с большей долей уверенности, что тиреотоксикоз вызывает гипокоагулемию потребления, а не гипокоагулемию, обусловленную активацией проти- восвертывающих механизмов.

Активация противосвертывающих механизмов является чаще следствие первичной активации свертывания, т.е. тромбиногенеза [Б.А.Кудряшов, 1975]. Такое толкование согласуется с тем, что в экспериментальных условиях введение тироксина сопровождается вначале активацией свертывания, а затем гипокоагулемией потребления, или согласно современной терминологии, тироксин вызывает гипер- коагулемию, переходящую в гипокоагулемию потребления.

Обратим внимание также на то, что все исследователи обнаруживали рас согласованность показателей состояния общей свертывающей активности крови при гипертиреоидизме. Это, наряду с активацией неферментативного фибринолиза [А.В.Антонидзе и др., 1973], также свидетельствует в пользу предположения о вторичности гипокоагулемии.

Подтверждается представление о вторичности гипокоагулемии и тем, что гипергепаринемия при тиреотоксикозе - следствие увеличения числа тучных клеток-продуцентов гепарина [В.А.Шелег, 1972], а также тем, что ударные дозы тироксина вызывают в первые дни гиперкоагу- лемию, а активация фибринолиза выявляется лишь к концу 3-й недели [Г.З.Химич, 1979]. На роль гиперфибринолиза в гипокоагулемии при тиреотоксикозе косвенно указывает и эффективность применения комплекса человеческого фибриногена и тромбина [Оюгепко, 1998].

При обследовании большой группы больных с тиреотоксикозом нашли удлиненное время рекальцификации, снижение толерантности плазмы к гепарину, удлиненное время кровотечения и протромбиновое время, снижение числа тромбоцитов и активацию фибринолиза [Б.П.Трач, 1971]. В данном наблюдении присутствуют признаки снижения свертываемости и активации противосвертывающей системы.

Отметим также, что снижение числа тромбоцитов согласуется с данными об их повышенной агрегации при гипертиреозе [Masunaga

е.а., 1997] и с данными о снижении агрегационной активности при гипотиреозе. Кроме того, показано, что по достижении эутиреоза восстанавливается агрегабельность тромбоцитов [Silberbauer е.а., 1977] - это прямое указание на роль тиреоидных гормонов в их активации.

Вместе с тем, не всегда находили изменения активности тромбоцитов при увеличении уровня тиреоидных гормонов в крови [Kuhn е.а., 1984], как не находили и изменений активности тромбоцитарной моно- аминооксидазы в этом случае [Wong е.а., 1981].

На IV Всесоюзной конференции (1975 г, Саратов) доложено боль-

шое число сообщений, посвященных состоянию гемостаза при зобной болезни. В частности, в результате обследования большой группе больных показали, что тиреотоксикоз I степени сопровождается значительным удлинением времени свертывания и небольшим снижением фиб- риногенемии. При II степени время свертывания крови удлинено значительнее, выше степень гипофибриногенемии, появляются гипопрот- ромбинемия и гепаринемия. При тиреотоксикозе III степени эти сдвиги еще значительнее. Ограничение или полное устранение явлений тиреотоксикоза (медикаментозная терапия) нормализует или приближает по-

казатели гемостаза к физиологическим значениям, а после проведенной затем операции появляются признаки активации свертывания крови, сохраняющиеся до 1-3 месяцев. Нормализация наступает спустя 6-12 месяцев. [З.Салахидинов, И.Ю.Ибадов, 1975].

То же отмечают и другие исследователи [А.Н Люлька, А.П.Ковалев, 1975], указывая еще и на активацию фибринолиза [К.И.Мышкин и др., 1975] и повышенную вязкость крови при гипертиреозе [Ош1еп- Гаэз, 1976].

Во всех упомянутых работах отмечают активацию свертывания после оперативного вмешательства по поводу тиреотоксического зоба.

К сходным результатам привели исследования С.И.Мицкевича [1975], который кроме гемокоагуляционных сдвигов отметил у больных с тиреотоксикозом средней тяжести ускорение тромбопластино- и тромбинообразования в капиллярной крови (данные тромбоэластогра- фии), хотя этому противоречит наличие отрицательной корреляции между уровнем тироксина и Э-димеров фибриногена, выявленная недавно [С1ш(1агеу1ап е.а., 1998].

Снижение и исчезновение упомянутых сдвигов при достижении эутиреоидного состояния или при гипотиреозе Ри^е^аББ, 1976] подтверждает связь этих сдвигов с уровнем тиреоидных гормонов.

Многолетние исследования гемокоагуляцйи у больных тиреотоксикозом до и после операции позволили прийти к следующим выводам [А.П.Ковалев, 1990]:

- в предоперационном периоде у большей части больных гиперти- реозом гипокоагулемия пропорциональна степени интоксикации и проявляется снижением общей свертываемости, снижением концентрации протромбина, активацией фибринолиза и снижением активности тром- боцитарного звена;

1. у меньшей части больных наблюдаются нормо- или гиперкоагу- лемия и угнетение фибринолиза;

2. у большей части больных в 1 -2 сутки после операции повышается свертываемость крови (гиперфибриногенемия, гипофибринолиз, появление фибриногена В), а при средней и тяжелой степени наблюдается еще и укорочение показателей АВР и АЧТВ, более выраженные изменения других индикаторов гиперкоагулемии.

3. на 3-4 сутки гиперкоагулемия усугубляется, растет активность фибриназы.

Эти изменения сопровождаются нарушениями микроциркуляции (спазм артериол, образование тромбоцитарных агрегатов, рост проницаемости капилляров).

После медикаментозного достижения эутиреоидного состояния все изменения исчезают.

Отметим, что устранению сдвигов в послеоперационном периоде способствует включение в лечебный комплекс витаминов С и Р [М.Н.Неймарк, 1977], что при гипотиреоидном зобе отмечали гипокоа- гулемию на фоне нормального фибринолиза, а при диффузном токсическом зобе - ускоренное свертывание наряду с активацией ПОЛ в клетках крови [И.П.Кайдашев и др., 1995].

Как казуистический случай, описана при гипотиреозе гипокоагу- лемия, напоминающая болезнь Виллебранда [Мугир е.а., 1995]. Её проявление - снижение ристоцетин-агрегации, уровня УШФВ-антигена.

Заканчивая изложение сведений о состоянии гемостаза в условиях гипертиреоза, рассмотрим результаты немногочисленных исследований, авторы которых пытались установить механизмы влияния тироксина на гемостаз. В одном из этих исследований измеряли скорость ис-

чезновения факторов I, VII и X у крыс после блокады синтеза прокоа- гулянтов варфарином (антивитамин К), оценивая их синтез, индуцированный витамином Кь Различий в исчезновении и скорости синтеза трех названных прокоагулянтов у здоровых, эутиреоидных, гипо- или гипертиреоидных крыс не нашли [Oosterom е.а., 1976]. Видимо, синтез неактивных предшественников витамин K-зависимых факторов в условиях дефицита витамина К не изменен при разных нарушениях функции щитовидной железы - после восстановления уровня витамина К у- карбоксилирование прокоагулянтов происходит с нормальной скоростью независимо от уровня тироксина.

Тиреогормоны повышают выход антитромбина III, протеинов С и S, факторов I, II и X в среду культивирования гепатоцитов [Nissen е.а., 1995]. В то же время введение тиреоидных гормонов животным снижает уровень антитромбина III и фибриногена [Cuzick е.а., 1992].

Данные о влиянии тироксина на синтез антитромбина III были уточнены: оказалось, что гормон обеспечивает экспрессию гена антитромбина III [Nissen е.а., 1996].

Упомянем недавнее сообщение: концентрация ингибитора тканевого фактора у больных с гипертиреозом растет (152 нг/мл против 124 нг/мл у эутиреоидных пациентов), коррелируя с концентрацией трийо- дитиронина (в плазме) и нормализуясь при достижении эутиреоза [Morishita е.а., 1998].

Интересно и сообщение о том, что гормон щитовидной железы ускоряет некоагуляционный катаболизм фибриногена, стимулируя одновременно его синтез. В связи с этим растет фибриногенемия, уменьшается отношение фибриноген тканей/фибриноген плазмы. При дефиците тироксина наблюдаются противоположные сдвиги [Chen, Reeve, 1977].

Заключая рассмотрение относительно малочисленных данных о состоянии гемостаза при гипертиреозе, можно прийти к следующим основным утверждениям.

У большей части больных с тиреотоксикозом снижена свертывающая активность, что сильнее выражено при большей степени токсикоза. Проявляется это снижением уровня протромбина, активности факторов V, VII и активацией фибринолиза (эти сдвиги воспроизводятся чаще других). Реже находят еще и тромбоцитопению, рост агрегаци- онной и адгезивной активности тромбоцитов.

При гипотиреозе обнаруживаются сдвиги противоположной направленности.

В прошедшие десятилетия (70-80 гг.) исследователи рассматривали гипокоагулемию при токсическом зобе как следствие активации противосвертывающих механизмов под действием тиреоидных гормонов. Наблюдения в ранние сроки развития гипертиреоза, что можно было осуществить лишь в условиях эксперимента, выявляли гиперкоа- гулемию, сменяющуюся развитием гипокоагулемического состояния. Это позволяет предположить, что снижение общей свертывающей активности при гипертиреозе (тиреотоксикозе) - следствие ускоренного потребления факторов свертывания в кровотоке, возникшего в силу первичной активации свертывания крови.

В пользу сказанного свидетельствуют: 1) то, что в опытах на животных выявлена способность тироксина ускорять некоагуляционный катаболизм фибриногена; 2) то, что тироксин не влияет на катаболизм и синтез факторов II, VII и X; 3); что при тиреотоксикозе обнаружены признаки усиленного тромбиногенеза при сниженной общей свертываемости крови.

О первичности активации свертывания крови свидетельствует запаздывающая во времени активация фибринолиза - компенсаторная реакция на усиленную фибринацию на ранних этапах тиреотоксикоза.

О том, что избыток тироксина первоначально вызывает гиперкоа- гулемию, свидетельствуют и данные, согласно которым ткани под влиянием тиреоидных гормонов обедневают гепарином, несмотря на его усиленную продукцию тучными клетками (видимо, защитная реакция на гиперкоагуляцию).

Причины активации свертывания после оперативного вмешательства по поводу гипертиреодного зоба таковы: в кровоток в ходе операции проникают богатые тромбопластическим материалом фрагменты клеточных мембран ткани щитовидной железы, что вызывает кратковременную активацию свертывания, сменяющуюся гипокоагулемией потребления, как это наблюдается при механической травме практически любой ткани, тем более ткани щитовидной железы, особенно богатой тромбопластическими веществами и компонентами плазминовой системы. Это представление нуждается в экспериментальной проверке, которое укрепит или опровергнет его.

В соответствии с целью наших исследований далее мы обращаемся к литературе, посвященной состоянию перекисного окисления липидов /ПОЛ/ при гипертиреозе.

2.2. Гипертиреоз и перекисное окисление липидов

Исследование связи щитовидной железы и ПОЛ начато сравнительно недавно: в 1975 г описаны способность тироксина тормозить пероксидацию липидов (в субмикросомальной системе, содержащей НАДФН+, Fe³⁺, НАДФН¹" -зависимую цитохромредуктазу С) и ускоряющее влияние продуктов липопероксидация на дейодирование тироксина [Suwa, Nakano, 1975]. Тогда же сообщили, что свободный ди- йодтирозин конкурентно тормозит не только йодирование тиреоглобу-

лина, но и пероксидацию йодида [Dume е.а., 1975], что щитовидная железа генетически гипертиреоидных гомозиготных крыс, отличающихся высоким содержанием в крови тироксина, повышенным содержанием тиреотропного гормона и сниженным содержанием трийодтиронина, характеризуется умеренной пероксидазной активностью [Gomba е.а., 1976]. Вскоре клиницисты подтвердили наличие связи между состоянием щитовидной железы, появлением признаков нарушения ее функций и скоростью пероксидации йодида [Pommier е.а., 1976].

Уже спустя несколько лет было достоверно установлено, что от-

дельные этапы биосинтеза тиреогормонов (переокисление йодидов в йодаты, йодирование тиреоглобулина и ускорение реакции формирования трийодтиронина и тетрайодтиронина (реакция бигемении) сопряжены с активностью пероксидазы щитовидной железы [Fragu, 1981].

Сейчас нет сомнений в том, что функция щитовидной железы зависит от интенсивности процессов ПОЛ в ее ткани. В частности, показано, что под действием прооксидантов падает концентрация трийодтиронина и тетрайодтиронина /Тз и Т4 соответственно/ в сыворотке крови. Происходит это из-за активации реакций переокисления, которые ведут к деструкции мембран [Chaurasia е.а., 1996а]. Активирование этих реакций в ткани щитовидной железы при одновременной активации супероксиддисмутазы и уменьшении активности каталазы (эффект, развивающийся после введения рицины, указывающий на недостаточность антиоксидантной защиты), сопровождается разрушением фолликулов. Следствие - падение на 50% уровня тиреоидных гормонов в кровотоке [Sadani е.а., 1996, 1997а, б].

Концентрация энзимов-антиоксидантов (каталазы, ксантиноксида- зы и глутатионпероксидазы) изменяется в ткани щитовидной железы (относительно нормальной железы) при разного рода поражениях, сопровождаясь ростом уровня свободных радикалов и накоплением МДА [Mano е.а., 1997]. В злокачественных тканях щитовидной железы особенно заметно снижение антиоксидантного потенциала и накопление продуктов ПОЛ [Durak е.а., 1996; Sadani, Nadkarni, 1996, 1997а, б].

Сведения о роли тиреоидных гормонов в поддержании ПОЛ появились позднее. Так, было установлено, что гормоны щитовидной железы, взаимодействуя с эритроцитами (ассоциация с гликофорином - главным мембранным гликопротеином), увеличивают их осмотическую резистентность,. Это сопровождается усиленным переокислением мембранных липидов и ростом проницаемости мембран для катионов [Wong, Hochstein, 1981]. При избытке тиреоидных гормонов активируется эндогенная фосфолипаза митохондрий и ускоряется перекисное окисление мембранных фосфосфолипидов [Marzoev е.а., 1983].

Оценивая уровень МДА (индикатор интенсивности ПОЛ), а также церулоплазмина (белок антиоксидантной защиты), установили, что у лиц с гипертиреозом и гипотиреозом интенсивность ПОЛ выше, чем у здоровых, что при гипотиреозе (тиреоидэктомия) ПОЛ ускоряется, не сопровождаясь ростом содержания церулоплазмина. При гипертиреозе рост уровня МДА сопровождается компенсаторным (по мнению авторов) повышением уровня церулоплазмина [Бшпйпи е.а., 1988]. Далее обнаружили, что добавление Тз к печеночной микросомальной фракции стимулирует поглощение О2 и активирует ПОЛ [РегпЫпёег е.а., 1985]. При добавлении НАД ФИГ*" (индуктор ПОЛ) в микросомальную

фракцию печени гипертиреоидных крыс наблюдается увеличение (в 3 раза) концентрации гидроперекисей. В микросомах же гипотиреоидных крыс наблюдается снижение их концентрации. Аналогично изменялась и активность НАДФН⁺-зависимого цитохрома Р450: активация на фоне гипертиреоза и угнетение при гипотиреозе [Ьапёпзсша е.а., 1988].

С другой стороны, гипербарический кислород, активирующий процессы ПОЛ, благоприятно влияет на функциональное состояние щитовидной железы [ЗЬакагазЬр/Ш е.а., 1989]. Количественная оценка этого эффекта показала, что при стандартных условиях в печеночных

микросомах гипертиреоидных крыс НАДФРГ-зависимая пероксидация липидов протекает интенсивнее (на 56%), чем в микросомах эутирео- идных крыс, что ускорение ПОЛ сопровождается активацией антиокси- дантных ферментов [Мопш е.а., 1991].

Четко иллюстрируют роль щитовидной железы в поддержании высокого уровня пероксидации наблюдения Негташку е.а. [1987]: ди- оксан у здоровых животных, увеличивает содержание МДА в печеночной ткани (на 220%), предварительное угнетение функции железы ти- реостатиками лишь в малой степени ограничивает этот эффект диокса-

на и только хирургическая тиреоидэктомия способна частично предотвратить влияние диоксана на ПОЛ.

При гипероксидации, вызываемой тироксином в дозах, проявляющихся калоригенным эффектом, наблюдали вызываемое активацией ПОЛ разрушение мембранных структур гепатоцитов [Videla, Fernandez, 1988], а лучевая терапия, сопровождающаяся активацией ПОЛ, усугубляла сдвиги ПОЛ и на фоне тиреодэктомии [Bartoc е.а., 1993].

Активацию ПОЛ (прирост уровня липоперекисей, снижение активности СОД и повышение активности глутатионпероксидазы) на фоне угнетения щитовидной железы радиойодом объясняют возникновением свободных радикалов О2 [Sadani, Nadkarni, 1997]. То же находили

при медикаментозном подавлении функции щитовидной железы, соч

провождающемся снижением уровня тиреоидных гормонов в кровотоке [Maiti е.а., 1996, 1997, 1998].

Видимо, воздействия, активирующие ПОЛ, проявляются и в отсутствие тиреоидных гормонов. Следовательно, регуляторная роль щитовидной железы в отношении ПОЛ не всеобъемлюща, как это представляется на основании работ Hermansky е.а. [1987], хотя и велика. Об этом свидетельствует то, что при гипертиреозе печеночные депо глута- тиона опустошены и усилена продукция супероксиданиона (при гипотиреозе его продукция снижена, а запасы глутатиона увеличены) [Теаге

е.а., 1993].

Уместно отметить, что калоригенный эффект гормонов щитовидной железы коррелирует со скоростями потребления О2 тканью печени, с интенсивностью образования вторичных продуктов ПОЛ, а также с темпами истощения запасов глутатиона [Tapia е.а., 1997]. По мнению авторов, повышая функциональную активность печеночных клеток, щитовидная железа способствует развитию гипероксидационного стресса. Это подтверждено наблюдениями Chaurasia е.а. [1996а,б].

Оценка влияния гормона щитовидной железы на метаболизм и окисление липопротеинов низкой плотности /ЛПНП/ у пациентов с гипер- и гипотиреозом, показала, что гипертиреозу сопутствует более высокая концентрация продуктов ПОЛ в липопротеинах и более высокая скорость их окисления (сдвиг достоверен по отношению к здоровым и к лицам с гипотиреозом) [Соп^апйш е.а., 1998; Вепуег^а, 1998].

При экспериментальном гипертиреозе ПОЛ активировано и в мышечных клетках, что считают причиной тиреотоксической миопатии и кардиопатии, сопутствующих гипертиреозу [ Аэауата, КаШ, 1990].

Обнаружена и парадоксальная дозазависимость эффекта тиреоидина на пероксидацию: малые дозы у крыс значительно (на 55-118%) ограничивали рост концентрации продуктов ПОЛ в миокарде и плазме крови, повышая активность антиоксидантной системы в тех же объектах [ВогМсо е.а., 1990; ВогЬко, Оогос^кша, 1994]. У гипертиреоидных пациентов находили признаки активации ПОЛ (рост потребления Ог эритроцитами, их повышенная хемилюминисценция, укорочение периода индукции после внесения инициатора пероксидации, повышенный уровень ТБК-продуктов в плазме и моче). Все эти сдвиги исчезали после восстановления эутиреоидного состояния [У1с1е1а е.а., 1988].

Есть и противоположные данные: хемилюминесцентные свойства сыворотки крови кроликов с гипо- и гипертиреозом ниже, чем у эути- реоидных животных, а способность к окислению важнейшего субстрата пероксидации (липопротеин, содержащий апо-В) заметно не отличается при разных состояниях щитовидной железы. Однако и в этих опытах уровень антиоксиданта в крови гипертиреоидных животных снижен [Маггоеу е.а., 1985]. В то же время у больных с тиреопатиями, независимо от активности железы (гипо- и гипертиреоз), находили в эритроцитах повышенное содержание продуктов ПОЛ (диеновые конъюгаты и ТБК-активные продукты), а также повышенную хемилю- минисценцию плазмы крови [Кот-В^шЬуБкша е.а., 1998].

Высокий уровень пероксидов в крови находили при гипо- и гипер- тиреозе (наряду с уменьшением уровня антиоксидантов), у больных раком щитовидной железы [ОНпезси е.а., 1992]. В одном исследовании одновременно обнаруживали повышенный уровень МДА и глутатиона, рост активности глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы после тиреоидэктомии (сравнение со здоровыми). Введение гормонов выравнивало значения всех показателей с нормальными [Ьи е.а., 1998].

При экспериментальном гипер- и гипотиреозе наблюдали повышенное содержание липоперекисей в лимфоидных органах крыс, несмотря на высокую активность Си- и Мп-зависимых СОД при малой активности каталазы и глутатионпероксидазы в этих тканях. Гипотиреоз снижал интенсивность ПОЛ наряду со снижением активности обоих видов СОД [Регеиа е.а., 1994].

В эксперименте же выявилось, что дородовая стимуляция щитовидной железы тиреотропным гормоном ведет к уменьшению активности антиоксидантных энзимов в легочной ткани и снижению выживаемости плодов. У последних наблюдаются признаки нарастания индуцированного Ог повреждения легких [Яос1пие8-Р1егсе е.а., 1994].

Пытаясь выяснить, может ли скорость пероксидации липидов биомембран и состояние антиоксидантной системы меняться в ходе окислительного метаболизма, индуцированного дисфункцией щитовидной железы, Азауата е.а. [1987], определяли в печени и поперечнополосатой мышце содержание Си- и Mn-зависимой супероксиддисму- тазы, глутатионпероксидазы и каталазы, цитохромоксидазы, фумаразы и липопероксидов. При гипертиреозе наблюдалось увеличение уровня пероксидов наряду с ростом активности СОД и снижением активности глутатионпероксидазы. Гипотиреоз индуцировал снижение уровня окислительных маркеров. Вместе с тем, введение тиролиберина, т.е. увеличение продукции тиреоидных гормонов, тормозит активность процессов ПОЛ в предстательной железе [Joseph е.а., 1989].

Таким образом, интенсивность ПОЛ в организме, несомненно, зависит от функционального состояния щитовидной железы, однако эта зависимость не может быть определена однозначно, поскольку находили как активацию, так и торможение ПОЛ при гиперфункции щитовидной железы и столь же противоположные сдвиги при угнетении ее активности, что подтверждено в одной из последних работ [Guerrero е.а., 1999]. Связано это, по-видимому, с тем, что эффект тиреоидных гормонов зависит от дозы с одной стороны, и от объекта, в котором проводится определение интенсивности ПОЛ, - с другой.

Видимо, велико значение состояния других систем, участвующих в регуляции важного физиологического процесса, каким является свободно-радикальное окисление. Это следует, в частности, из того факта, что эффекты тиреогормонов на ПОЛ неодинаковы, например, в зависимости от гиперлипидемии [Tsimihodimos е.а., 1999], нарушений обмена глюкозы [Bech е.а., 1996], диетических факторов [Pehowich, 1999] и обеспеченности биомембран холестеролом [Chehn е.а., 1999].

На вопрос о том, являются ли при гипертиреозе изменения активности процессов ПОЛ санирующей реакцией, или фактором, требующим коррекции, отчасти можно судить по результатам небольшого числа наблюдений, появившихся в 90-е годы.

Так, В.В.Янголенко [1991] обследованы 104 больных разного возраста и пола с диффузным токсическим зобом легкой, среднетяжелой и тяжелой форм (давность заболевания - от 1 месяца до 2 лет). Оказалось, что при любой степени тяжести диффузного токсического зоба активность ПОЛ в эритроцитах повышена.

При достижении эутиреоидного состояния наибольшее снижение активности ПОЛ в эритроцитах достигалось при сочетанном применении тиреостатических средств, ноотропила и тималина. Стабильно высокой оставалось ПОЛ при использовании только антитиреоидных средств. Спаду активности ПОЛ соответствовал более заметный терапевтический эффект, выражающийся нормализацией уровня Т₃ и Т₄.

В.В.Янголенко и А.Н. Окороков [1991] показали, что у пациентов с диффузным токсическим зобом разных степеней тяжести имеется корреляция между уровнем в крови продуктов ПОЛ и интенсивностью поглощения йода щитовидной железой.

На основании двух последних работ складывается впечатление, что активация ПОЛ - один из компонентов токсических проявлений гипертиреоза, а ограничение продукции тиреоидных гормонов сопровождается одновременно снижением интенсивности пероксидации.

Такая точка зрения имеет немногочисленные, но интересные подтверждения. Так, И.В.Баран и соавт. [1993] показали, что терапевтический комплекс, включающий антиоксидант эмоксипин, ведет к более быстрой нормализации свободно-радикального окисления, и это сопровождается значительным улучшением клинических показателей состояния больных с токсическим зобом.

Позитивное влияние антиоксиданта (в данном наблюдении - кон- вафлавина) выявилось и в опытах на белых красах с экспериментальным тиреотоксикозом [Vadziuk, 1992]. В экспериментах использование комбинации трав (Liv-52) снизило интенсивность ПОЛ (контроль по уровню в сыворотке крови диеновых конъюгат) и сопровождалось нормализацией сывороточного уровня Т₃ [Dhawan, Goel, 1994].

Косвенные свидетельства взаимосвязи ПОЛ<->щитовидная железа представлены и в единичных работах последних лет.

Venditti е.а. [1997, 1998] пытались установить, связана ли модификация электрической деятельности миокарда, индуцированная тирео- идными гормонами, с активацией ПОЛ. Опытщ проведены на эутирео- идных, гипертиреоидных и гипотиреоидных крысах. Показано, что ги- пертиреоз, вызываемый введением (в течение 10 дней) Тз, индуцировал повышение активности ПОЛ, не изменяя уровня антиоксидантов. Ин- трапериотонеальное введение гипертиреоидным крысам витамина Е ограничивало ПОЛ и незначительно повышало уровень антиоксидантов. Состояние гипертиреоза сопровождалось также увеличением частоты сердечных сокращений и уменьшением продолжительности желудочкового потенциала действия (первое регистрировали in vivo, второе - in vitro). Введение витамина Е уменьшало изменение индуцированной тиреогормонами частоты сердечных сокращений и продолжительности потенциала действия, хотя оба показателя и сохраняли отличия от их значений у эутиреоидных крыс, служивших контролем.

Авторы полагают, что витамин Е защищает «гипертиреоидное сердце» от действия продуктов ПОЛ, считая, вместе с тем, что механизмы действия гормонов могут не зависеть от изменений в антиокси- дантных системах.

Нельзя, однако, исключить, что ограничение витамином Е влияния трийодтиронина на электрофизиологические свойства сердца реализуются, хотя бы отчасти, через модификацию мембран, связанную с активацией ПОЛ.

Chaurasia and Car [1997] изучали защитное влияние витамина Е при дисфункции щитовидной железы мышей, < индуцированной свинцом. Контролировали активность йодтиронин-5-монодейодиназы. Ежедневное интраперитонеальное введение прооксиданта (ацетат свинца, 0,5 мг/кг массы тела) в течение 30 дней снизило в сыворотке концентрацию Тз и активность йодтиронин-5-монодейодиназы, значительно увеличило пероксидацию липидов мембранных компонентов гепатоци- та, в то время как активность СОД и каталазы уменьшились. Одновременное со свинцом введение витамина Е (5 мг/кг массы тела) поддерживало нормальную активность йодтиронин-5-монодейодиназы печени и нормальные сывороточные концентрации Т₃,< а также предотвратило активацию ПОЛ и изменения активности антиоксидантных ферментов.

Это свидетельствует, что применение витамина Е может предотвращать вызываемую свинцом (прооксидантом) дисфункцию щитовидной железы, способствуя сохранению мембранных структур.

Аналогичные данные получены и в экспериментах на мышах, у которых дисфункцию щитовидной железы провоцировали кадмием [Gupta, Kar, 1998]. В этих опытах как антиоксидант использовали аскорбиновую кислоту. Часть мышей получала только кадмий, часть - кадмий в комбинации с аскорбиновой кислотой (1,0 и ImM на кг массы тела ежедневно в течение 15 дней). Введение кадмия приводило к снижению в сыворотке уровня гормонов щитовидной железы и к снижению активности печеночной йодтиронин-5-монодейодиназы, одновременно нарастало содержание продуктов ПОЛ в крови. Индуцированное кадмием снижение в печени активности йодтиронин-5-моноде- йодиназы и уровня Т₃ в сыворотке предотвращалось аскорбиновой кислотой, хотя уровень Т4 не восстанавливался. Одновременно приближался к норме уровень процессов ПОЛ.

Авторы с известным основанием полагают, что защитный (относительно щитовидной железы) эффект аскорбиновой кислоты реализуется за счет антиоксидантного действия через нормализацию ПОЛ.

В экспериментах с эутиреоидными и гипертиреоидными крысами при гипертиреозе, вызываемом введением Тз (10 мкг/100 г массы ежедневно в течение 10 дней), витамин Е (20 мг/100 г массы тела) в комбинации с N-ацетилцистеином (100 мг/100 г массы тела) ограничивал активацию ПОЛ и снижение антиоксидантной активности. Уменьшались при этом и индуцируемые гипертиреозом изменения в щитовидной железе, а также изменения электрической деятельности миокарда [Venditti, De Leo, Di Meo, 1998].

Результаты рассмотренных выше экспериментальных наблюдений свидетельствуют о двух моментах: 1) гипертиреоз сопровождается активацией ПОЛ и изменениями в миокарде, а также в печеночных клетках, как и в клетках щитовидной железы, 2) применение природных ан- тиоксидантов способно ограничить эти последствия гипертиреоза.

Тот факт, что реализация некоторых отрицательных эффектов избыточной продукции экзогенных тиреоидных гормонов связана с активацией ПОЛ подтверждается следующим. На фоне гипотиреоза анти- оксиданты оказываются неэффективными. Так, при изучении влияния а-токоферола, аскорбиновой кислоты и (3-каротина (радикальные ловушки и ингибиторы ПОЛ) на линейных крысах с зобом, вызванным низкойодным рационом (содержание йода ниже 20 мкг/кг) обнаружено следующее. Контрольным и «зобным» крысам вводили в составе рациона токоферол (0,6%), витамин С (1,2%) и каротин (0,48%) или смесь

этих витаминов (то же процентное содержание в рационе). «Витаминизация» вела к приросту концентрации витамина Е в щитовидной железе примерно в 5 раз, в печени - в 24 раза, в плазме - в 2-3 раза. Смесь витаминов или только витамин Е уменьшил скорость прироста массы щитовидной железы, но не скорость включения [³Н]тимидин-меченных фолликулярных клеток. Процент некротических клеток под влиянием витаминов не изменился [Ми1а1а е.а., 1998].

Видимо, эффект антиоксидантов может проявиться лишь на фоне повышенной интенсивности ПОЛ, которая характерна, как показано

выше, для гипертиреоза.

Заключая обзор данных о связи гипертиреоза, гемостаза и пере- кисного окисления липидов, выделим основное.

При избыточной продукции тиреоидных гормонов в большинстве клинических наблюдений находят снижение общей свертываемости, в то время как в эксперименте находят вначале гиперкоагулемию, а затем снижение общей свертывающей активности крови и признаки появления гипертромбинемии. Поэтому можно полагать, что и у больных с тиреотоксикозом вначале имеет место стадия гиперкоагулемии в пери-

од, когда больные еще не обращаются за врачебной помощью, а при обращении (при появлении субъективных причин для обращения) врач вероятнее встречается уже со следствием первоначально ускоренного постоянного внутрисосудистого свертывания крови - с той фазой, которая граничит с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием /ДВС/ крови. Однако необходимо предположение подкрепить экспериментально, варьируя как функциональное состояние щитовидной железы, так и интенсивность ПОЛ

Возможно, один из патогенетических механизмов, обусловливающих сдвиги при тиреотоксикозе, - активация ПОЛ. Исходя из этого, а также из данных, свидетельствующих о позитивном эффекте антиокси- дантов на развитие некоторых изменений, сопутствующих гипертирео-

'А

зу, можно ожидать, что введение компонентов с антиоксидантными свойствами в комплекс обычной медикаментозной терапии тиреотоксикоза окажется целесообразным. Такое предположение оправдано и данными о позитивном эффекте антиоксидантов при ряде заболеваний, сопровождающихся тромбогеморрагическими осложнениями [П.Я.Шаповалов, Э.А.Шабанов, И.А.Карпова, 1999а,б], а также экспериментальными наблюдениями, установившими, что гипероксидация вызывает активацию тромбиногенеза, а избыточное тромбинообразование по обратной положительной связи приводит к активации ПОЛ пре-

имущественно через тромбоциты, нейтрофильные лейкоциты и моноциты [И.В.Ральченко, 1998; Л.С.Лошкарева, 1999].

На этом основании мы запланировали исследование, цель которого сформулирована в разделе "Введение".

3. МЕТОДЫ И ОБЪЕМ ИССЛЕДОВАНИЙ

Все экспериментальные исследования проведены на белых крысах-самцах (всего особей - 263, 150±15 г). Животных содержали до включения в опыт на обычном смешанном рационе вивариума, а за не-

делю до начала эксперимента переводили на рацион вязкой консистенции, приготовляемый в виде кашицы (смесь ячменной и овсяной круп с добавлением растительного масла). Такой рацион позволяет вводить добавки, эффект которых необходимо изучить. Для обеспечения полного потребления добавок их вносили в 1/2 суточной порции рациона в ранние утренние часы, после потребления этой части рациона в клетку вносили оставшуюся часть (всего - 10 г/100 г массы тела).

Пробы крови для исследований брали из яремной вены, усыпляя животное (наркоз - диэтиловый эфир) и фиксируя его на препаровальном столике. Вену обнажали линейным разрезом, кровь брали в шприц, содержащий стабилизирующий раствор (3,8% лимоннокислый натрий, 1;10), затем накладывали кетгутовые швы. Сроки отбора проб определялись задачами отдельного эксперимента (приводятся в описании опытов).

Для оценки коагуляционного гемостаза изучали совокупность показателей, которые позволяют судить об интенсивности постоянного внутрисосудистого свертывания крови:

1. Активированное время свертывания рекальцифицированной

плазмы /АВР/ определяли, применяя каолин в качестве активатора контактной фазы.

1. Активированное частичное тромбопластиновое время свертывания плазмы /АЧТВ/ определяли в бестромбоцитной плазме в условиях стандартизированной контактной активации (каолин) и активации фос- фолипидами внутреннего механизма свертывания крови (эритрофос- фатид).

Для определения АВР и АЧТВ использована процедура, описанная ранее [В.П.Балуда и др., 1980]. Тесты, использованные в пунктах 1 и 2, позволяют оценить со сравнительно малой степенью ошибки состояние общей свертывающей активности в отличие от таких ранее широко использовавшихся тестов как "Время рекальцификации" и "Тромбопластиновое время". Достигается повышение точности определений за счет стандартизации контактной активации каолином и активации свертывания по внутреннему механизму эритроцитарным тромбопластином (эритрофосфатидом).

Для оценки интенсивности внутрисосудистого свертывания (или интенсивности тромбиногенеза) определяли:

2. Концентрацию общего фибриногена в плазме крови - спектро- фотометрически, используя сгусток фибрина, образующийся в пробе АВР [А.Ш.Бышевский, В.Мохнатов, 1969].

3. Содержание ПДФ - по Кап1^а-Ьиез1 [1967] в модификации

А.Ш.Бышевского и др. [1996].

4. Содержание РКМФ - с помощью количественного варианта фе- натролинового теста [А.П.Момот и др., 1999].

5. Содержание тромбоцитов в периферической крови - унифицированным методом (подсчет в камере с использованием 3.8% раствора лимоннокислого натрия) [В.В.Меньшиков, 1987].

Для оценки тромбоцитарного звена гемостаза определяли:

6. Спонтанную агрегацию - в модификации Н.И.Тарасовой согласно описанию [В.П.Балуда и др., 1980].

7. АДФ-индуцированную агрегацию с помощью агрегометра "Био- мак". При расшифровке агрегатограмм устанавливали значения максимальной агрегации (МА),. в качестве индуктора агрегации пользовались АДФ в конечной концентрации 10 ммоль/л [В.П.Балуда и др., 1980].

8. Содержание фактора Рз в плазме устанавливали по разнице показателей АВР плазмы до и после удаления тромбоцитов из нее по Ra- biner, Groder [В.П.Балуда и др. 1980]. Высвобождение фактора Рз оценивали по разнице показателей АВР в плазме после АДФ-агрегации до и после удаления тромбоцитов [В.П.Балуда и др. 1980].

9. Содержание фактора Р4 плазмы оценивали по действию прогретой бедной ТЦ плазмы (такая плазма рассматривается как источник Р₄, являющегося термостабильным) на тромбин-гепариновое время свертывания субстратной плазмы (используется как источник фибриногена и антитромбина III). Степень укорочение - мера активности фактора Р4. Разница во времени между свертыванием в системе «нормальная обедненная тромбоцитами плазма+0,14М NaCl+rena- рин+тромбин» и системе «нормальная обедненная тромбоцитами плаз- ма+такая же прогретая исследуемая плазма+гепарин+тромбин» характеризует активность свободного фактора Р4 в плазме.

Высвобождение фактора Р4 в процессе агрёгации ТЦ оценивали по уровню фактора Р₄ устанавливаемому как описано выше в плазме после проведения АДФ-агрегации и центрифугирования (т.е. до удаление

тромбоцитов).

11. Общую коагулирующую активность тромбоцитов /ОКАТ/ определяли по их способности сокращать АВР [А.Ш.Бышевский и др., 1996].

Определение толерантности к тромбину. В части опытов животным внутривенно вводили тромбин (0,1 мл/100 г, активность по времени свертывания 0,2% раствора фибриногена 25 с), оценивая степень реакции на экзогенную тромбинемию по изменению (через 0.5 ч после инъекции) АВР, АЧТВ (показатели состояния общей свертывающей активности крови), концентрации фибриногена, ПДФ и РКМФ в плазме, а также по содержанию тромбоцитов. Совокупность этих показателей позволяет определить степень выраженности гипокоагулемии потребления.

Для оценки состояния ПОЛ и антиоксидантной активности в плазме и в тромбоцитах определяли содержание первичных (диеновых конъюгат - ДК) и вторичных (ТБК-активных, т.е. реагирующих с тио- барбитуровой кислотой) продуктов ПОЛ, а также периода индукции /ПИ/ и скорости окисления /СО/. Как субстрат для оценки интенсивности ПОЛ использовали плазму (коллектор всех образующихся клетками крови и эндотелиоцитами продуктов) и тромбоциты - клетки, которые раньше других компонентов крови реагируют на про- и антиокси- данты, являясь важным источником липопероксидов в плазме крови [С.Н.Ельдецова, 1990; И.В.Селиванова, 1994; В.Г.Соловьев, 1997].

Липиды экстрагировали 100-кратным избытком смеси растворителей гептан-изопропиловый спирт (равные объемы). Содержание ДК устанавливали по оптической плотности гептановой фазы при X 232 нм.

Содержание продуктов окисления липидов, реагирующих с тиобар- битуровой кислотой /ТБК/, определяли в гептановом экстракте флуоро- метрически в модификации В.Н.Ушкаловой и др. [1987], интенсивность флуоресценции - при длине волны возбуждения 510у и волне флуоресценции 535 нм (флуориметр «Биан 130»),

Период индукции, отражающий, наряду со скоростью окисления, антиоксидантную активность липидов, оценивали по времени поглощения пробой 25 мм³ Ог. Использован метод прямого тестирования кинетическим способом [В.Н.Ушкалова, Н.В.Ионидис, 1986].

В качестве инициатора окисления использован динитрилазобиси- зомасляной кислоты.

Гормоны щитовидной железы определяли иммуноферментным методом (радиоиммунный метод с набором рио-ЕЗ-ПГ и рио-Т4-ПГ), выражая содержание общего трийодтиронина /Т₃/ в нмоль/л, содержание свободного тетрайодтиронина ЛУ в пмоль/л.

Щитовидную железу извлекали у животных в состоянии глубокого наркоза. На предметном столике с помощью лупы отделяли прилежащие к железе ткани. После тщательной и быстрой сепаровки обе дольки взвешивали на торзионных весах и помещали в жидкость Буэна. (не менее, чем на 24 ч). После проведения через спирты производили заливку желез в парафин. Толщина срезов - 7 микрон. Окраска - азаном.

При извлечении отмечали окраску, размеры и плотность желез. Микроскопическую структуру срезов изучали при увеличении в 400^х (иммерсионная система).

Результаты исследований, имеющие количественное выражение, обрабатывали методом вариационной статистики для малых рядов наблюдений с вычислением средней арифметической (М), средней ошибки средней арифметической (т), среднеквадратического отклонения (а). Для определения достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стьюдента (t) и величину вероятности (р). При сопоставлении интенсивных показателей использовали прием альтернативного варьирования с определением тех же величин. Различия оценивали как достоверные при значениях степени вероятности (Р) < 0/05.

Графический анализ с построением аппроксимационных кривых и нахождением коэффициентов достоверности аппроксимации (R ) про-

'S

водили в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 97).

Использовавшиеся в работе реагенты: Тромбин (Каунас)

Тромбопластин (Киров) Фибриноген (Каунас) Гепарин (Москва)

Набор для определения РКМФ (Барнаул) Эритрофосфатид (Минск) Димефосфон (Казань) Компливит (Уфа) АДФ («Reanal»)

Тетрайодтиронин в форме Ь-тироксина-Ыа (Берлин-Хеми) Уксуснокислый свинец

Гептан ч. - после дополнительной очистки серной кислотой с последующим отмыванием до нейтральной реакции дистиллированной водой и перегонкой при стандартной температуре и обсушиванием кальцием безводным.

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Коагуляционный, тромбоцитарный гемостаз и ПОЛ при экспериментально измененной функции щитовидной железы

У больных диффузным токсическим зобом находили прямую зависимость между уровнем Т₃ и Т4 в крови и гемокоагуляционными сдвигами [И.Е.Попова, И.А.Мухачева, 1998; И.Е.Попова, 1999; А.И.Волков, 2000]. Характеристики гемостатических сдвигов позволяют трактовать их как признаки гипокоагулемии потребления. Однако это возможно лишь в случае, если сдвигам предшествуют изменения гиперкоагуля- ционного характера в ранние стадии гипертиреоза.

Естественно, клиницисты не имеют возможности оценить ранние стадии тиреотоксикоза, так как больные обращаются за врачебной по-

мощью лишь после заметного развития заболевания - после появления субъективных причин обращения..

В этой части работы мы экспериментально изучали последовательность развития гемостатических сдвигов при экзогенном повышении или медикаментозном снижении уровня тиреоидных гормонов в кровотоке. Одновременно оценивали связь гемостатических сдвигов с изменениями ПОЛ в плазме и тромбоцитах. Тромбоциты изучали как клетки, обеспечивающие в значительной степени связь между гемостазом и свободно-радикальными процессами [И.В.Селиванова, 1994;

И.А.Дементьева, 1998; И.В.Ральченко, 1998], а также потому, что установлена роль тиреоидных гормонов в регуляции процессов свободно- радикального окисления [Tapia е.а., 1997; Venditti е.а., 1998].

4.1.1. Гемостаз и ПОЛ при гипотиреозе, вызванном мерказолилом

В опытах использованы крысы-самцы массой 150±15 г. Гипоти- реоидное состояние (гипотиреоз) в первой группе экспериментов вызывали ежедневным введением мерказолила в утренние часы в составе суточной порции рациона - 12 мг/кг. В этой дозе мерказолил, обладающий антитиреоидными свойствами, по данным экспериментальных наблюдений на крысах (внутрижелудочное введение зондом) вызывает к 14 дню угнетение функции щитовидной железы [А.П.Божко и др., 1994]: снижение концентрации в крови Т₃ (До 0,65±0,13) и Т₄ (до 24,7±3,1). Уровень Т₃ у контрольных крыс составил 1,54+0,21 нмоль/л, Т₄ - 62,0±6,2 нмоль/л.

В наших наблюдениях пробы крови брали на 3-й, 5-й 10-й и 15-й дни (6 особей на этапе). Для оценки ПОЛ определяли в плазме и тромбоцитах содержание диеновых конъюгат, ТБК-продуктов, длительность периода индукции и скорость окисления. В этой серии исследований устанавливали число тромбоцитов, интенсивность спонтанной и АДФ-индуцированной агрегации, высвобождение факторов Р₃ и Р₄, общую коагуляционную активность тромбоцитов /ОКАТ/, а также показатели общей свертывающей активности (АВР и АЧТВ) и показатели интенсивности тромбиногенеза (ПДФ, РКМФ и концентрацию фибриногена в плазме). Определяли также уровень Т₃ и Т₄.

Как видно из данных табл. 1, при введении мерказолила непод- тверждаемый статистически сдвиг всех изучавшихся показателей выявляется уже в ранние сроки от начала опыта. Степень этих изменений

растет с увеличением продолжительности введения тиреостатика, но лишь к 15-му дню наблюдений изменения оказываются достоверными. Так как в ранние сроки все показатели изменяются хотя и недостоверно, но однонаправлено (падают интенсивность ЛОЛ, активность тромбоцитов и гемокоагуляционный потенциал, растет антиоксидантная активность), можно говорить о выраженной тенденции с начальных этапов эксперимента, тем более, что к 15-у дню опыта все изменения (исключая ф. Р₃) подтвердились статистически.

Таблица 1. ПОЛ в тромбоцитах (верхняя строка) и плазме (нижняя строка), тром- боцитарный и коагуляционный гемостаз, содержание Тз и Т₄ в крови при гипоти- реозе (п = 6 на этапе, всего - 30 особей)

Обозначения здесь и далее: ДК - диеновые конъюгаты, ТБК - ТБК-активные продукты, ПИ - период индукции, СО - скорость окисления, ОКАТ - общая коагу- ляционная активность тромбоцитов; СА - спонтанная агрегация, АДФ-АГ - АДФ-

индуцированная агрегация, * - достоверные отличия от контроля.

(для удобства все принятые сокращения приведены перед оглавлением)

Рассмотрим изменения подробнее. В конце опыта (после достаточно продолжительного введения мерказолила) интенсивность ПОЛ в плазме и тромбоцитах снижена, а антиоксидантная активность увеличилась. Снизились ОКАТ, спонтанная и АДФ-агрегация, уменьшился уровень фактора Р4 и снизилась общая свертываемость (удлинение АВР

и АЧТВ), появились признаки ослабления тромбиногенеза (снижение содержания ПДФ и РКМФ, рост числа тромбоцитов и концентрации фибриногена).

Наряду с этим упало содержание тиреоидных гормонов в крови: Т₃ на 40 и Т₄ - на 56% относительно контроля.

4.1.2. Гемостаз и ПОЛ при глубоком гипотиреоидном состоянии, вызванном введением 6-метилтиоурацила /6-МТУ/

Глубина гипотиреоза, вызванного мерказолилом, оказалась сравнительно слабо выраженной (снижение уровня Т₄ на 40%). В связи с

этим провели дополнительные исследования, чтобы иметь возможность сопоставить глубину гипотиреоза (по уровню Т₄ в крови) с интенсивностью сдвигов ПОЛ и гемостатических изменений. С этой целью использовали 6-МТУ - препарат, вызывающий при введении крысам или морским свинкам практически полную блокаду функции щитовидной железы при оральном введении в дозе 300 мг/кг. Этот тирео- статик (6-МТУ) уже на 15 и особенно - на 30-й день вызывает существенный прирост массы щитовидной железы даже у морских свинок, менее чувствительных к нему по сравнению с крысами [С.Г.Аптекарь, 1952; А.Ш.Бышевский, 1960].

Вначале мы изучили морфологию щитовидной железы после 15 и 30 дней введения 6-МТУ (по 7 крыс массой 150-160 г на 1-м и 2-м этапах, контроль - 6). Всего - 20 особей.

Контролировали изменения массы тела, массы железы (на 100 г массы тела), её микроскопическую структуру и содержание Т₄в крови.

По данным микроскопии структура щитовидной железы контрольных крыс (микрофото 1) оказалась обычной для здорового животного: фолликулы овальной формы, близки по размерам, выполнены гомогенным коллоидом, интенсивно окрашенным в голубой цвет и за-

полняющим просветы фолликулов.

Микрофото 1. Щитовидная железа контрольной крысы на 30-й день наблюдений.

Увеличение 500^х

Клетки секреторного эпителия имеют кубическую форму, невысоки, промежуточная соединительная ткань слабо выражена.

На 15-й день введения 6-МТУ при микроскопии (микрофото 2) выявлены нарушения формы фолликулов: границы изломаны, встречаются фолликулы без коллоида, местами коллоид имеет розоватую окраску, клетки фолликулярного эпителия выше, чем в контроле, призматической формы. Утолщены соединительно-тканные прослойки, расширена капиллярная сеть.

Микрофото 2. Щитовидная железа крысы, получавшей 6-МТУ 15 дней. Увеличение 500^х

На 30-й день введения 6-МТУ щитовидные железы у крыс асимметричны, дольки желез увеличены, уплотнены, темно-красного цвета, легко вылущиваются из прилежащих тканей, не требуя дополнительной сепаровки.

На типичной микрофотографии (3) видно, что фолликулы деформированы, со спавшимися стенками, что придает им щелевидную форму. Коллоид сохранен лишь в некоторых фолликулах, не заполняя просветов. Клетки фолликулярного эпителия удлиненные, набухшие, содержат зернистость. Местами - папиллярные разрастания эпителия, выпяченные в полость фолликулов. Полости отдельных фолликулов заполнены эпителиальной массой. Соединительная ткань сильно развита, капиллярная сеть расширена, сосуды переполнены клетками крови. В интерстициальной соединительной ткани встречаются островки фолликулярного эпителия, заполненные многочисленными вакуолями с содержимым голубого цвета.

Микрофото 3. Щитовидная железа крысы, получавшей 6-МТУ 30 дней. Увеличение 500^х

Прирост массы тела, масса щитовидной железы, а также уровень Т4 у этих животных значительно изменился при введении 6-МТУ (табл. 2).

Таблица 2. Изменения массы тела, щитовидной железы и уровня Т4 при введении

Содержание Т₄ в крови снижалось быстро и уже к 15-му дню оказалось ниже контрольного на 78%, что намного заметнее, чем при введении мерказолила в течение такого же времени (сравнить с табл. 1).

К 30-му дню уровень Т4 уменьшился по сравнению с контрольным уже на 90%.

Эти данные определили сроки оценки состояния ПОЛ и гемостаза при введении 6-МТУ и это позволило сопоставить изменения исследовавшихся систем с изменением уровня Т4.

Для этого в очередной (аналогичной по постановке) серии опытов на 15-й и 30-й дни введения 6-МТУ отбирали пробы крови у крыс, определяя показатели состояния ПОЛ и гемостаза (использована прежняя доза 6-МТУ - 300 мг/кг ежедневно в составе рациона).

Представленные в табл. 3 данные свидетельствуют о следующем.

Таблица 3. ПОЛ в тромбоцитах (верхняя строка) и в плазме (нижняя строка), тром- боцитарный и коагуляционный гемостаз на 15-й и 30-й дни введения 6-МТУ в дозе 300 мг/кг (п = 6 всего - 18 особей)

Примечание: так как показатели уровня ДК и ТБК, здесь существенно уменьшились, мы приводим их значения до третьего знака. Обозначения - как в табл. 1

Интенсивность ПОЛ достаточно заметно уменьшилась к 15 дню наблюдений: уровень ДК в тромбоцитах упал на 73%, а в плазме на 70%, уровень ТБК - на 30% и 38% соответственно; период индукции удлинился в тромбоцитах на 15, в плазме на 25 %, а скорость окисления снизилась соответственно на 15 и 21%. Число тромбоцитов увеличилось на 17%, ОКАТ снизилась на 15, спонтанная агрегация - на 33, АДФ-агрегация - на 25 %. Содержание факторов Р₃ и Р₄ - на 20 и 44 % соответственно.

Изменилась общая свертывающая активность крови: АРВ и АЧТВ удлинились соответственно на 13 и 10 %, фибриногенемия увеличена на 26 %, а уровни ПДФ и РКМФ упали соответственно на 18 и 27 %.

Таким образом, наряду со снижением интенсивности ПОЛ и повышением антиоксидантной активности, падает общая свертывающая активность крови и интенсивность внутрисосудистого тромбинообра- зования.

На 30-й день эти изменения еще более выражены: в большей степени упал уровень продуктов ПОЛ в тромбоцитах и плазме (содержание ДК снизилось в тромбоцитах на 82 % и в плазме - на 72 %, а содержание ТБК - соответственно на 49 % и 65%). Заметнее увеличилась антиоксидантная активность (период индукции в тромбоцитах и плазме удлинился на 56 и 57 %, а скорость окисления уменьшилась соответственно на 58 и 53%).

Содержание тромбоцитов оказалось на 21% выше (относительно контроля), чем на 15-й день (различие недостоверно). ОКАТ снизилась на 29, спонтанная агрегация - на 51, АДФ-агрегация - на 43 %. Содержание факторов Р₃ и Р₄ снизилось соответственно на 28 и 59 %.

Удлинились АВР и АЧТВ (несущественно по сравнению с 15-м днем, но достоверно против контроля).

На 26% вырос уровень фибриногена, снизилось содержание ПДФ и РКМФ на 26 и 31 %, т.е. значительнее, чем на 15-й день.

В итоге подтвердилось, что снижению функции щитовидной железы (т.е. снижению скорости ПОЛ и нарастаник» антиоксидантной активности) соответствует наклонность к гипокоагулемии - удлинение показателей общей свертывающей активности, снижение активности тромбоцитов и постоянного внутрисосудистого свертывания.

Чтобы уточнить, связано ли снижение свертывающей активности со снижением уровня ПОЛ мы экспериментально изучали одновременно гемостаз и перекисное окисление липидов при гипертиреоидных состояниях, создаваемых прямым повышением уровня экзогенного тироксина.

4.1.3. Гемостаз и ПОЛ при гипертиреозе и тиреотоксикозе

Планируя эту часть работы, мы исходили из следующих данных. Признаки гипертиреоза в экспериментальных условиях описаны при ежедневном внутрибрюшинном введении тироксина (1,5 - 2,0 мг/кг) экспериментальным животным [А.И.Марзоев и др., 1983, 1985; С.Н.Вадзюк, 1992]. Изменения включали снижение массы тела (к 7-8 дням на 28% от исходного) и активацию ПОЛ в миокарде.

Мы начали исследования с оценки эффективности тироксина при введении его в составе рациона питания. Остановились на нижней границе дозы, обозначенной для тироксина выше (1.5 мг/кг), предполагая более длительное введение (до 15-го дня), так как необходимо было изучить динамику развития изменений.

Крысы (10 особей) с массой тела 150±10,2 г получали в течение 15 дней тироксин (1,5 мг/кг). На 15-й день масса тела у них оказалась ниже, чем в начале эксперимента на 37,4+2,0%: конечная масса составила 93,7±8.3 г (р<0.02). Среднесуточная потеря массы равнялась 3,7±0,04 г [(150-93,7)/15].

Животные контрольной группы (8 особей) за тот же период прибавили в весе (конечная масса - 172±11,3 г, среднесуточная прибавка составила 1.54±0,03 г на особь).

Такие выраженные сдвиги массы тела при введении тироксина в

составе рациона позволили использовать выбранную дозу для изучения динамики сдвигов ПОЛ и гемостаза в процессе развития гипертиреоза.

При моделировании тиреотоксикоза, мы исходили из данных литературы, согласно которым доза гормона увеличивается примерно в 10 раз против той, которая вызывает гипертиреоидное состояние [А.И.Марзоев и др., 1983]. В экспериментах мы использовали, как и ранее, введение тироксина в составе рациона (доза -15 мг/кг).

На 15-й день средняя масса тела крыс (8 особей) снизилась на 48±3,2% (со 150±10.2 г до 78±9,8 г - среднесуточная потеря составила

4.8±0,05). Относительно потери массы тела при гипертиреозе это отличие было достоверным (р < 0.05 ).

Предварительные опыты определили условия, в которых затем мы изучали ПОЛ и гемостаз на фоне гипертиреоза и тиреотоксикоза.

Схема эксперимента: контрольная группа (5 крыс) - не подвергалась воздействиям, подопытная группа (20 крыс) получала в составе рациона 1.5 мг/кг тироксина ежедневно. Отбор проб в подопытной группе проводили на 3-й, 5-й, 10-й и 15-й дни. Результаты определений

приведены в (табл. 4).

Здесь видно, что при гипертиреозе динамика изменений отличается от той, которая была выявлена при гипотиреозе. Уже на 3-й день обнаружена активация ПОЛ в плазме и особенно в тромбоцитах. Остальные показатели к этому сроку существенно "не изменились.

На 5-й день выявилась активация тромбоцитов (повышение ОКАТ, усиление спонтанной и АДФ-агрегации, реакции высвобождения факторов Р₃ и Р₄). Повысилась к этому сроку и общая свертываемость (укорочение АВР и АЧТВ), выявились также признаки ускоренного тромбиногенеза (рост уровня ПДФ и РКМФ).

Таблица 4. ПОЛ в тромбоцитах (верхняя строка) и в плазме (нижняя строка), тром- боцитарный и коагуляционный гемостаз при моделировании гипертиреоза введе- нием тироксина в дозе 1.5 мг/кг в день (п = 5, всего - 25)

Обозначения: как в табл. 1

На 10-й день все перечисленные изменения заметно усилились, и наряду с ними, обнаружилось снижение числа тромбоцитов.

К 15-му дню еще заметнее активировалось ПОЛ, усилились признаки активации тромбоцитов (дальнейший рост ОКАТ, спонтанной и индуцированной агрегации), заметнее стала тромбоцитопения. Общая свертывающая активность, напротив, понизилась (удлинились АВР и АЧТВ) при одновременном усилении признаков активации тромбино- генеза (рост уровня ПДФ и РКМФ).

Содержание фибриногена, как и число тромбоцитов, достоверно уменьшилось лишь к последнему дню наблюдений, хотя сдвиг в этом направлении наблюдался уже на 5-й и на 10-й дни.

В следующей серии опытов моделировали тиреотоксикоз, вводя тироксин (15 мг/кг ежедневно) в течение 15 дней: контроль тот же, что в табл. 4, опыт - по 5 особей на каждом этапе, т.е. 20 особей.

Как следует из приведенных в табл. 5 данных, при тиреотоксикозе изменения сходны с найденными у животных с гипертиреозом. Отличия касаются динамики их появления и степени выраженности.

Так, уже на 5-й день введения тироксина в высокой дозе обнаружились выраженные признаки гиперкоагулемии (укорочение АВР и АЧТВ), а на 10-й день появились изменения, свидетельствующие о снижении общей свертывающей активности (удлинение АВР и АЧТВ). К этому сроку заметнее, чем на фоне дозы тироксина в 1.5 мг/кг активировалось ПОЛ, столь же заметнее повысилась прокоагулянтная активность тромбоцитов (ОКАТ, спонтанная и АФД-индуцированная агрегация, а также степень высвобождения факторов Рз и РД

На 15-й день выявились признаки развившейся гипокоагулемии потребления (значительное удлинение показателей общей свертываемости - АВР и АЧТВ, рост содержания ПДФ и РКМФ, снижение числа

тромбоцитов, гипофибриногенемия).

Таблица 5. ПОЛ в тромбоцитах (верхняя строка) и в плазме (нижняя строка), тромбоцитарный и коагуляционный гемостаз при тиреотоксикозе (п = 5, всего 20, контроль из предыдущего эксперимента)

Обозначения как в табл. 1

Таким образом повторяющееся введение тироксина сопровождается появлением признаков ускорения постоянного внутрисосудистого свертывания крови, которому сопутствуют на ранних этапах признаки гиперкоагулемии, а позднее - признаки гипокоагулемии (снижение общей свертывающей активности). Все эти изменения нарастают с увеличением продолжительности воздействия и протекают наряду с активацией процессов перекисного окисления липидов. Активация ПОЛ становится заметнее раньше, чем активация гемостаза.

Интенсивность всех перечисленных изменений с увеличением дозы тироксина нарастает и это объясняет продемонстрированное выше снижение интенсивности процессов при гипотиреоидизме.

4.1.4. Зависимость интенсивности изменений ПОЛ в плазме и тромбоцитах и гемостатических сдвигов от дозы тироксина при однократном введении

Чтобы уточнить характер зависимости сдвигов ПОЛ и гемостатических изменений от дозы тироксина провели эксперименты с однократным введением тироксина в нарастающих дозах. В качестве минимальной дозы (15 мг/кг) использована та, которая уже на 3-й день вызывала активацию ПОЛ в тромбоцитах и признаки активации свертывания крови (в виде тенденции, табл. 5): повышено содержание в тромбоцитах ДК и ТБК-продуктов, укорочен ПИ, и повышена скорость окисления; тенденция к укорочению АВР и АЧТВ, повышена спонтанная агрегация, тенденция к повышению других признаков активации тромбоцитов, тенденция к росту уровня ПДФ и РКМФ.

Схема опытов: контроль - без воздействий, крысы подопытных групп получали тироксин в составе рациона в дозах 15, 20, 25, 30 или 35 мг/кг. Пробы брали на 3-й день. Рассматривая эту серию опытов, как ориентировочную, мы определяли только диеновые конъюгаты, спонтанную агрегацию, АВР и уровень ПДФ (табл. 6).

Из данных, приведенных в табл. 6 видно, что при увеличении дозы против минимальной (15 мг/кг) изменения, которые на 3-й день имели характер тенденции, стали статистически достоверными: вырос уровень ДК, повысились спонтанная агрегация и уровень ПДФ (чем выше доза, тем заметнее сдвиг).

Показатель общей свертываемости (АВР) сокращается при увеличении дозы до 20 мг/кг, и еще заметнее при её увеличении до 25 мг/кг. Дальнейшее увеличение дозы также сопровождается удлинением этого показателя.

Таблица 6. Уровень ДК в тромбоцитах, их спонтанная агрегация, АВР и уровень

ПДФ у крыс на 3-й день введения тироксина

Обозначения: как в табл. 1

Этим подтверждено, что гипокоагулемии, которая сопровождается появлением признаков ускорения постоянного внутрисосудистого свертывания (рост ПДФ и РКМФ), при тироксиновой интоксикации, предшествует гиперкоагулемия. Так, при высоких дозах тироксина гипокоагулемии сопутствуют признаки ускоренного внутрисосудистого тромбиногенеза, что мы наблюдали при введении наименьшей из доз в течение более продолжительного срока.

Уточнить полученные данные можно было с помощью экспериментов, сопровождающихся более частым отбором проб крови при введении наибольшей из использовавшихся выше доз - 35 мг/кг.

Схема опытов: контрольные крысы дополнений к рациону не получали, подопытным вводили в составе рациона тироксин (35 мг/кг массы тела), пробы брали через 6, 12, 24 и 72 ч, определяя полный набор показателей состояния ПОЛ и гемостаза.

Как видно из данных табл. 7, уровень ДК в тромбоцитах и в плазме повысился через 6 ч (на 40% и на 25% соответственно), т.е. активировалось ПОЛ; одновременно выявилась и тенденция к укорочению периода индукции, росту скорости окисления (признаки снижения ан- тиоксидантного потенциала).

Показатели состояния тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза в этот период наблюдений достоверно не изменились.

Через 12 ч усугубилась активация ПОЛ: уровень ДК в тромбоцитах вырос на 260% (Р<0.05), в плазме - на 125% (Р>0.05), уровень ТБК вырос в тромбоцитах на 23 (Р<0.05), в плазме - на 18% (Р<0.05), период индукции сократился в тромбоцитах на 15.0% (Р<0.05), а в плазме - на 7.5% (Р<0.05), скорость окисления увеличилась в тромбоцитах и плазме соответственно на 32 и 37% (Р<0.05 для обоих сравниваемых величин).

Повысилась к 12 ч и общая коагуляционная активность тромбоцитов /ОКАТ/ - на 7% (Р<0.05), спонтанная агрегация - на 31.0% (Р<0.05), АДФ-агрегация - на 11% (Р<0.05), высвободилось фактора Р₃ - на 5.5% (Р<0.05), а фактора Р₄ - на 35.5% (Р<0.05) больше, чем в контроле. Одновременно сократились АВР (на 12.5%) и АЧТВ (на 17.2%). Повысилась концентрация ПДФ (на 35.6%) и РКМФ (на 21.4%).

В целом все эти изменения можно охарактеризовать, как выраженные признаки гиперкоагулемии, сопровождающиеся ростом про- коагулянтной активности тромбоцитов и ускорением тромбинообразо-

вания.

Через 24 ч процессы ПОЛ стали еще интенсивнее: увеличился уровень ДК и ТБК в тромбоцитах и в плазме (360 и 200%, 34 и 23% соответственно); период индукции сократился в тромбоцитах и плазме на 24 и 23% соответственно, скорость окисления увеличилась на 41 и 121% (в тромбоцитах и плазме соответственно). ОКАТ увеличилась на 11, спонтанная агрегация - на 27, АДФ-агрегация - на 18, высвобождение Р₃ - на 9, Р₄ - на 55%, АВР и АЧТВ удлинились на 7 и 14%, уровень ПДФ и РКМА увеличился на 57 и 45%). Все изменения достоверны - Р<0.05.

Таблица 7. Гемостаз и перекисное окисление липидов в разные сроки после введения тироксина (35 мг/кг), п - 5, всего 25 (Показатели ПОЛ: верхняя строка - тром- боциты, нижняя - плазма)⁴

Обозначения: как в табл. 1

Сдвиги стали еще заметнее к 72 ч: приросла интенсивность ПОЛ (уровень ДК увеличился против контроля на 480 и 250%, ТБК-

продуктов - на 77 и 56% соответственно, ПИ сократился в тромбоцитах и плазме на 41 и 23%, а скорость окисления увеличилась на 63 и 62% соответственно). На 35 % увеличилась ОКДТ, на 45 % - СА, на 26 - высвобождение фактора Рз, на 71 - фактора Р4. Признаки гипокоагу- лемии также стали еще более явными - снижение общей свертываемости (удлинение АВР и АЧТВ на 34 и 40% соответственно). Уровень ПДФ и РКМФ увеличился на 83 и 46% соответственно. Все изменения достоверны (Р < 0.05).

Графическое представление этих данных (рис. 1) выявляет:

1. Уже через 6 ч после введения Т₄ в дозе, вызывающей при повторном введении тиреотоксикоз, обнаруживается тенденция к увеличению интенсивности ПОЛ и к снижению антиоксидантного потенциала. Показатели тромбоцитарного и коагуляционного компонентов гемостаза отличаются от контроля на 5-6%. 2. Еще заметнее активация ПОЛ и снижение антиоксидантного потенциала, наряду с небольшими, но достоверными признаками гиперкоагулемии (укорочение АВР и АЧТВ), признаками активации тромбоцитов (рост ОКАТ, спонтанной и индуцированной агрегации, ускоренное высвобождение факторов Рз и Р₄) и признаки ускоренного внутрисосудистого тромбинообразования (рост уровня ПДФ и РКМФ) обнаруживаются через 12 ч. 3. Дальнейший рост интенсивности ПОЛ и снижение антиоксидантной активности обнаруживался и через 24 ч. То же относится к состоянию тромбоцитов (дальнейшее увеличение ОКАТ, СА, АДФ- агрегации и реакции высвобождения). 4. Через 72 ч) при продолжающемся нарастании интенсивности ПОЛ, активации тромбоцитов (рост ОКАТ, СА и высвобождения) и внутрисосудистого тромбинообразования, выявляются

признаки гипокоагулемии (удлинение АВР и АЧТВ).

Рисунок 1. Изменения показателей в % к контролю в разные сроки после однократного введения тироксина (35 мг/кг). Столбики слева направо: ДК, ТБК-продукты, ПИ и СО в тромбоцитах, ОКАТ, СА, АДФ-агрегация, Р₃, Р_4> АВР, АЧТВ, ПДФ и

РКМФ

Здесь видно, что содержание и тромбоцитов, и фибриногена уже через 12 ч после введения тироксина заметно снижается, и степень снижения прогрессирует с увеличением времени, прошедшего после введения гормона.

Анализ рисунков 1 и 2 позволяет заключить, что гипокоагулемия, выявляющаяся к концу наблюдений, является вторичной - появление ее признаков во времени запаздывает относительно признаков гиперкоагуляции.

На рис. 2 представлены данные о фибриногене и числе тромбоцитов в тех же экспериментах.

Рисунок 2. Изменения показателей (в % к контролю) в разные сроки после однократного введения тироксина (35 мг/кг). Темные столбики - тромбоциты, светлые - фибриноген. Ось абсцисс - время отбора проб, ч

о-

Кроме того, можно утверждать, что тироксин поддерживает процессы пероксидации липидов в крови, как это отмечалось ранее относительно печеночных клеток [Баёаш е.а., 1^96, 1997] и миокарда [Ф.З.Меерсон, 1981].


С позиций задач, которые мы ставили перед собой, важно, что снижение функциональной активности щитовидной железы сопровождается уменьшением интенсивности постоянного внутрисосудистого свертывания крови. При гипертиреозе интенсивность ПОЛ прогрессивно увеличивается (с удлинением продолжительности введения тироксина), нарастает и активность свертывания крови, причем, раньше активируются тромбоциты и позднее наблюдаются сдвиги гемокоагуля- ции.

Гемокоагуляционные сдвиги первоначально отражают гиперкоа- гулемию, а к концу наблюдений - гипокоагулемию. Так как гипокоагу- лемия при избытке тироксина развивается одновременно с нарастанием признаков активации тромбиногенеза (рост уровня ПДФ и РКМФ), можно утверждать, что она может рассматриваться как гипокоагулемия потребления. Это подтверждается снижением числа тромбоцитов и содержания фибриногена к концу наблюдений. Подкрепляется предположение и тем, что при тиреотоксикозе, вызванном увеличением дозы тироксина, обнаруживались такие же, но ярче выраженные изменения.

Кроме того, зависимость между интенсивностью ПОЛ в тромбоцитах и их активацией подтверждает ранее установленные данные [С.Н.Ельдецова, 1990; С.Л.Галян, 1993; И.В.Селиванова, 1994], согласно которым тромбоциты участвуют в реализации связи между процессами пероксидации и гемостазом по циклу: "Активация ПОЛ —> активация превращений арахидоновой кислоты —» активация синтеза тром- боксанов —> активация агрегации и реакции высвобождения —» активация тромбиногенеза —»активация ПОЛ и т.д."

Похожие диссертации на Зависимость гемостатических сдвигов при разных тиреоидных состояниях от интенсивности процессов перекисного окисления липидов

Влияние ароматических аминов на интенсивность процессов перекисного окисления липидов и некоторые компоненты антиоксидантной системы печени крысЛомоносова, Елена Евгеньевна



Интенсивность процессов перекисного окисления липидов тканей сусликов в динамике зимней спячкиАбдуллаев Вагаб Рафикович

Влияние процессов перекисного окисления липидов на качестве препарата иммуноглобулина при его получении и храненииДмитриева, Нина Александровна

Некоторые показатели перекисного окисления липидов в процессе модифицирующего влияния питания на токсическое и канцерогенное действие афлатоксина В1Колесникова, Любовь Георгиевна

Состояние процессов перекисного окисления липидов и антиокислительной активности при острых кишечных инфекциях у детейГромова, Ольга Александровна



Влияние каптоприла на процессы перекисного окисления липидов в норме и при аллоксановом диабете, особенности фармакокинетики препаратаЕременко Наталья Николаевна



Перекисное окисление липидов при иммобилизационном стрессе и влияние некоторых гормонов на этот процессАраратян, Эвелина Арамовна

Роль эритроцитов и лейкоцитов в поддержании активности тромбоцитов в зависимости от состояния перекисного окисления липидовВакулин, Андрей Анатольевич

Влияние ингибиторов превращения арахидоновой кислоты на гемостаз в зависимости от интенсивности перекисного окисления липидов в тромбоцитахАлборов Робинзон Григорьевич



Влияние ретинола на показатели перекисного окисления липидов и особенности его распределения в зависимости от дозы в норме и при экспериментальном гепатозогепатитеПравкин Сергей Константинович