Содержание к диссертации
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
Нормальная микрофлора, как фактор гомеостаза макроорганизма 11
Дисбактериоз кишечника: определение понятия, причины возникновения, диагностика, принципы коррекции 19
Значение свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы в физиологических процессах макроорганизма и при некоторых заболеваниях органов пищеварения 27
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 42
Постановка эксперимента 42
Объекты и сроки исследований 44
Методы исследований 44
Биологические методы 44
Микробиологические методы 45
Биохимические методы 46
Статистические методы 48
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 49
ГЛАВА 3. СОСТАВ МИКРОФЛОРЫ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА
ЖИВОТНЫХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИСБАКТЕРИОЗЕ, ОБУСЛОВЛЕННОМ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИБИОТИКА ШИРОКОГО
СПЕКТРА ДЕЙСТВИЯ 49
ГЛАВА 4. ПОКАЗАТЕЛИ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ
ОРГАНИЗМА В ДИНАМИКЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО
ДИСБАКТЕРИОЗА, ОБУСЛОВЛЕННОГО
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИБИОТИКА 59
Показатели антиоксидантной защиты в эритроцитах животных при экспериментальном дисбактериозе кишечника 59
Показатели антиоксидантной защиты в колоноцитах животных при экспериментальном дисбактериозе кишечника 65
Содержание ТБК-активных продуктов в плазме крови, копрофильтратах и колоноцитах животных при экспериментальном дисбактериозе кишечника 74
ГЛАВА 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА «НАРИНЭ» ПРИ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИСБАКТЕРИОЗЕ
КИШЕЧНИКА 85
5.1. Состав микрофлоры толстого кишечника животных
в динамике экспериментального дисбактериоза
при использовании кисломолочного продукта «Наринэ» 85
Показатели антиоксидантной защиты в эритроцитах и колоноцитах животных в динамике экспериментального дисбактериоза при использовании кисломолочного продукта «Наринэ» 91
Содержание ТБК-активных продуктов в плазме и копрофильтратах животных в динамике экспериментального дисбактериоза при использовании кисломолочного продукта «Наринэ» 112
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 117
ВЫВОДЫ 131
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ 133
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АОЗ - антиоксидантная защита
АОС - антиоксидантная система
АФК - активные формы кислорода
ГПО - глутатионпероксидаза
ГР - глутатионредуктаза
МДА - малоновый диальдегид
НФА - нормальная ферментативная активность
ПОЛ - перекисное окисление липидов
СОД - супероксиддисмутаза
СФА - сниженная ферментативная активность
УПМ - условно-патогенные микроорганизмы
ЭД - экспериментальный дисбактериоз
GSH - восстановленный глутатион
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ Организм человека и населяющая его микрофлора представляют единую экологическую систему, находящуюся в состоянии динамического равновесия (Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., 1997; Шендеров Б.А., 1998, 1999; Gorbach S.L., 1986; Gorbach S.L. et al. 1988; Lloid D„ 1999). Достигнутые в последнее время успехи в изучении нормальной микрофлоры позволили сформулировать положение, что нормальная микрофлора организма человека является своеобразным экстракорпоральным органом «регулирующим биохимические реакции и физиологические функции макроорганизма в естественных условиях его обитания» (Воробьев А.А., Лыкова Е.А., 1999; Gibson G.R., Roberfroid М.В., 1999; Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В., 2003). Загрязнение окружающей среды, накопление в ней разнообразных по механизму действия ксенобиотиков, широкое применение антибиотических препаратов приводят к нарушению эволюционно сложившегося равновесия между организмом и населяющей его микрофлорой, к изменению эндоэкологического статуса, включая состав и функциональную активность микрофлоры (Куваева И.Б., 1976; Голошва Е.В., 2003, 2005; Захарченко М.П., Гриневич В.Б., 2003; Захарченко М.П. с соавт., 2004). Изменение качественно-количественного состава и функциональной активности микрофлоры, населяющей сообщающиеся с внешней средой полости организма человека, определяются понятием дисбактериоз (Красноголовец В.Н., 1989; Барановский А.Ю., Кондрашина Э.А., 2002). Дисбактериозы, особенно дисбактериоз кишечника, в последнее время стал широко распространенным состоянием и регистрируется практически у 65-90% населения (Шендеров Б.А., 1988; Воробьев А.А., 1995; Воробьев А.А., Лыкова Е.А., 1999; Куваева И.Б., Ладодо К.С., 1991). Опасность этого состояния заключается в том, что нарушения состава и
функциональной активности микрофлоры провоцируют возникновение и развитие в организме человека многочисленных и разнообразных по проявлению патологических процессов, снижающих качество и продолжительность жизни населения (Билибин А.Ф., 1970; Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А., 1997; Haudberger Н., Nilsson L.F., 1996; Краснов В.В., 2003).
Достаточно полно освещены вопросы изменения характера микрофлоры при дисбактериозах разных отделов кишечника (Крамарь О.Г.,1984; Крамарь B.C., 1990; Коваленко А.Д. с соавт., 1991; Шендеров Б.А., 1998; Бондаренко В.М., Боев Б.В., Лыкова Е.А., Воробьев А.А., 1999; Коршунов В.М. с соавт., 1980, 1994, 1995, 1999), широко представлены работы о биологических свойствах условно-патогенной микрофлоры (Захарченко СМ., 2001; Леванова Л.А., Алешкин В.А., Воробьев А.А., 2002), предложены различные методы коррекции данного состояния (Горская Е.М., 1994, 1995; Боссарт В., Барзашка-Попова С.Н., 1990; Барзашка-Попова С.Н., 1990; Бондаренко В.М. с соавт., 1992, 1994; Златкина А.Р., 1999; Алешукина А.В., Патрушева Е.В., Голошва Е.В., 2000; Голошва Е.В., Алешукина А.В., Терновская Л.Н., 2000; Запруднов A.M., Мазанкова Л.Н., 2001; Гриневич В.Б., Захарченко М.М., 2003; Звягинцева Т.Д., Сергиенко Е.И., 2003; Хавкин А.И., 2004). Однако механизмы, приводящие к нарушению состава кишечной микрофлоры при действии на организм различных ксенобиотиков, в том числе и антибиотических препаратов до конца не ясны (Горская Е.М., 1994; Алиева Э.А., 2002). Остается неизвестным, нарушение состава микрофлоры является следствием или причиной изменений гомеостаза непосредственно в месте контакта микро- и макроорганизма (в эпителиоидных клетках кишечника) и организма в целом (Гуторова Л.Д.,1991; Ардатская М.Д. с соавт., 2001).
Известно, что одним из пусковых механизмов патологических состояний являются нарушения антиоксидантнои защиты организма, которая регулирует уровень активных форм кислорода, которые при чрезмерной генерации являются повреждающими факторами (Белинский Б.Ф. с соавт.,
7 1992; Абрамченко В.В., 2001; Дубинина Е.Е., 2001; Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.В., 2001; Fridovich I., 1986). Однако в литературных источниках нет сведений о состоянии антиоксидантной защиты эпителиоидных клеток кишечника при таком широко распространенном состоянии, как дисбактериоз кишечника, обусловленный применением антибиотических препаратов.
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ Целью настоящего исследования явилось определение состояния антиоксидантной защиты макроорганизма в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия (гентамицина).
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
1. Исследовать качественный и количественный состав микрофлоры
кишечника в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного
введением гентамицина.
2. Исследовать состояние антиоксидантной защиты крови и колоноцитов
в динамике экспериментального дисбактериоза.
Установить связь между состоянием микрофлоры кишечника и состоянием антиоксидантной защиты эритроцитов и колоноцитов при экспериментальном дисбактериозе.
Изучить влияние продукта функционального питания «Наринэ» на состояние микрофлоры и на некоторые показатели антиоксидантной защиты эритроцитов, колоноцитов в динамике экспериментального дисбактериоза.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА
Впервые установлена взаимосвязь между нарушениями антиоксидантной защиты и нарушением микроэкологического равновесия в кишечном биоценозе.
8 Впервые установлено, что при дисбактериозе кишечника более выражены нарушения в состоянии антиоксидантной защиты эпителиоидных клеток кишечника.
Впервые показано, что увеличение содержания условно-патогенной микрофлоры сочетается с повышенным содержанием ТБК-продуктов в копрофильтратах, что может свидетельствовать о повышенной агрессивности местной среды и являться дополнительным диагностическим тестом.
Экспериментально обоснованы пути коррекции дисбактериоза кишечника и нарушений антиоксидантной защиты организма кисломолочным продуктом «Наринэ».
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
При экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением антибиотика широкого спектра действия (гентамицина), происходят изменения в составе микрофлоры кишечника, выражающиеся в изменении состава эшерихии и увеличении содержания условно-патогенных микроорганизмов, при умеренном снижении численности нормальных эубионтов.
При экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением гентамицина, развивается дисбаланс всех звеньев АОЗ. Выявляется связь между состоянием антиоксидантной защиты макроорганизма, содержанием ТБК-активных продуктов в копрофильтратах и характером микрофлоры в динамике дисбактериоза.
Кисломолочный продукт функционального питания «Наринэ» можно расценивать как препарат профилактического действия. Использование «Наринэ» одновременно с применением антибиотика предотвращает выраженные изменения состава микрофлоры, способствует стабилизации окислительно-восстановительного гомеостаза макроорганизма.
9 ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
В теоретическом плане работа расширяет представления о механизмах развития дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия. Работа выполнена в рамках договора № 034/201/003 (2001-2005 г.г.) в соответствии с планом научно-исследовательских работ Ростов НИИМП по теме «Отношение паразит-хозяин в биотопах кишечника при лекарственном дисбактериозе».
Материалы диссертационной работы представлены в медицинской технологии «Технология диагностики местных метаболических и иммунологических нарушений при дисбактериозе», утвержденной Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (2006).
Полученные результаты позволили обосновать новые подходы к диагностике и профилактике дисбактериоза кишечника и использованы в аналитическом обзоре «Новые подходы к коррекции и профилактике дисбактериозов» (2004), получившем положительную оценку Департамента организации медицинской помощи населению и профилактики неинфекционных заболеваний Минздрава России и рекомендованном для использования практическими врачами.
Результаты экспериментальной работы используются в лекционном курсе по дисбактериозу кишечника на факультете усовершенствования врачей в Ростовском-на-Дону государственном медицинском университете.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные положения диссертационной работы доложены на:
Международной конференции «Пробиотики, пребиотики, симбиотики и функциональные продукты питания: Современное состояние и перспективы» (Москва, 2004);
69-ой итоговой научной сессии КГМУ (Курск, 2004);
10 4-ой межвузовской международной биохимической научно-практической конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» Рост ГМУ (Ростов-на-Дону, 2005);
- Всероссийской научной конференции с международным участием,
посвященной 100-летию со дня основания филиала «Иммунопрепарат»
ФГУП НПО «Микроген» МЗ и СР РФ (Уфа, 2005);
71-ой итоговой научной конференции сотрудников КГМУ и Центрально-Черноземного научного Центра РАМН (Курск, 2006);
1-ой научно-практической конференции по рациональному и лечебному питанию Южного Федерального Округа. Теоретические основы рационального и лечебного питания. Рост ГМУ и МЗРО (Ростов-на-Дону, 2006).
ПУБЛИКАЦИИ По материалам диссертации опубликовано 8 научных публикаций, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК - 2. Получен патент на изобретение «Питательная среда для выделения лактобактерий» № 2202609 от 20.04.2003 г.
