Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 8
2.1. Механизмы герпесвирусных цитопатий 9
2.2. Биохимические аспекты патогенеза опухолевого роста 21
2.2.1. Некоторые структурно-функциональные особенности обмена нуклеиновых кислот и белка в опухолевой ткани 22
2.2.2. Метаболизм нуклеиновых кислот и белка в лимфо-идных органах опухолевого организма 29
2.3. Иммунологические основы онкогенеза болезни Марека 37
3. Собственные исследований 43
3.1. Материал и методики 43
3.2. Результаты исследований 52
3.2.1. Интенсивность биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, зараженных вирусом болезни Марека 52
3.2.2. Обмен белков и нуклеиновых кислот в органах и тканях кур, пораженных лимфомой Марека 67
3.2.2.1. Интенсивность биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, пораженных злокачественным ростом 67
3.2.2.2. Содержание свободных аминокислот в плазме крови цыплят-опухоленосителей 87
3.2.2.3. Аминокислотный и электрофоретический анализ различных фракций сывороточных белков цыплят-опухоленосителей 91
3.2.3. Исследование обмена белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, иммунизированных против болезни Марека 117
3.2.3.1. Интенсивность биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, иммунизированных разными вакцинами против болезни Марека 117
3.2.3.2. Интенсивность синтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах вакцинированных цыплят при заражении их вирусом болезни Марека 140
4. Обсуждение результатов исследований 154
4.1. Биохимические аспекты патогенеза болезни Марека 154
4.2. Биохимические основы злокачественного роста при болезни Марека 168
4.3. Биохимические особенности иммунизаторного процесса у вакцинированных цыплят 175
4.4. Биохимическая характеристика инфекционного процесса в организме вакцинированных цыплят 182
5. Выводы 186
6. Рекомендации для внедрения в практику
Список литературы 190
- Механизмы герпесвирусных цитопатий
- Интенсивность биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, зараженных вирусом болезни Марека
- Интенсивность биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, иммунизированных разными вакцинами против болезни Марека
- Биохимические основы злокачественного роста при болезни Марека
Введение к работе
Актуальность проблемы. В. решении онкологических проблем большое значение придаётся выяснению молекулярных механизмов и объективных количественных закономерностей развития неоплазм /1-4/« Для подобного рода исследований наиболее приемлемы системы естественного онкогенеза, к категории которых относится и болезнь Марека - злокачественный лимфоматоз кур. Важно также, что производственные потери от болезни Марека наносят значительный экономический ущерб промышленному птицеводству /5,6/. Основным методом борьбы с этим заболеванием является специфическая вакцинопрофилактика птиц /7/. Несмотря на успехи последних лет, достигнутые в решении практических задач, болезнь Марека все ещё представляет серьёзную проблему в птицеводстве /7,8/. Кроме того, результаты углубленных исследований лимфомогенеза Марека приобретают всё большее значение в теоретической онковирусологии. Полагают, что комплексный анализ процессов реализации онкогенного потенциала вируса болезни Марека приблизит науку к пониманию сущности вирусного онкогенеза /5/. По мнению ряда авторов /9,10/, болезнь Марека является адекватной моделью для изучения основных этапов лимфомогенеза Бёркита человека. С другой стороны, системы природного онкогенеза используются для скрининга противоопухолевых препаратов. В этом аспекте перспективность разработки модели лимфомогенеза Марека связана ещё и с тем, что в организме восприимчивых цыплят инфекционный процесс и вирогенная трансформация клеток разграничены во времени /II/.
Таким образом, представляется возможным в условиях целостного организма, находящегося-на разных стадиях злокачествен-
5 ного лимфомогенеза, дифференцированно оценить эффективность противовирусных и противоопухолевых воздействий. По данным литературы объективным критерием, позволяющим сопоставить основные этапы онкогенеза с характером действия герпесвирусов, может быть уровень биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в клетках--мишенях /12-17/. Однако такие исследования применительно к лимфомогенезу Марека не проводились. Отсутствуют сведения об обмене белков и нуклеиновых кислот в лимфомах Марека и организме--опухоленосителе. Важно также изучить биосинтез указанных макромолекул в лимфоидных органах цыплят, иммунизированных разными вакцинами против болезни Марека, и при заражении вакцинированных птиц онкогенными штаммами вируса. Вполне понятно, что биохимический анализ лимфомогенеза Марека в свете изложенных задач будет способствовать дальнейшему прогрессу в решении теоретических и практических проблем онкологии и ветеринарии.
Цель и задачи исследования. Целью нашей работы явилось изучение биохимических аспектов онкогенеза и иммуногенеза болезни Марека у кур.
В задачи исследования входило:
изучить интенсивность синтеза ДНК, РНК и белков в лимфоидных органах цыплят, зараженных вирусом болезни Марека;
исследовать некоторые показатели обмена белков и нуклеиновых кислот в лимфонах Марека и организме-опухоленоситепе;
определить интенсивность биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, иммунизированных разными вакцинами против болезни Марека;
изучить интенсивность синтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах вакцинированных цыплят при заражении их
вирусом болезни Марека.
Научная новизна работы. Впервые определены закономерности биосинтеза ДНК, РНК и белка в лимфоидных органах и злокачественных опухолях на разных стадиях лимфомогенеза Марека у кур. Сведения о биосинтезе иммуноглобулинов М и G в динамике онкогенеза, результаты аминокислотного анализа белков лимфом и белковых фракций сыворотки крови, данные о содержании в плазме крови опухоленосителей свободных аминокислот и электрофореграм-мы белков рибосом из клеток опухоли также приводятся впервые. Оригинальные закономерности биосинтеза органных белков, нуклеиновых кислот и сывороточных иммуноглобулинов выявлены нами при изучении поствакционалъного иммуногенеза и при заражении вирусом болезни Марека вакцинированных цыплят.
Практическая ценность работы. Уровни биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, инфицированных вирусом болезни Марека, можно использовать в качестве объективных количественных критериев при скрининге противовирусных препаратов, специфических вакцин и сывороток. Характерные изменения биосинтеза ДНК, РНК и белка в лимфомах Марека или лимфоидных органах цыплят на стадии лимфопролиферации вполне пригодны для оценки эффективности противоопухолевых соединений. На основании указанных биохимических критериев представляется возможным дифференцированно оценивать in vivo эффективность противовирусных и противоопухолевых препаратов (или их сочетаний) применительно к конкретной фазе злокачественного лимфомогенеза. Результаты биохимических исследований поствакционального периода можно взять за основу при усовершенствовании методов и схем вакцинации выяснении механизма протективного действия вакцин и изыскании
способов стимуляции иммунизаторного процесса.Данные аминокислот-
ного и электрофоретического анализа иммуно- М -, иммуно- Q -
р и алъбумин-трансфериновой сывороточных фракций позволили разработать простой вариант дополнительной очистки иммуноглобулинов и целенаправленно применять меченые аминокислоты для радиоизотопного изучения обмена различных классов сывороточных белков У кур.
Биохимический подход к исследованию онкогенеза и иммуногенеза болезни Марека имеет и теоретическое значение. Обнаруженные нами закономерности в обмене белков и нуклеиновых кислот можно использовать при разработке теоретических представлений о механизмах малигнизации тканей организма в процессе вирусного онкогенеза. В настоящее время выводы и заключения, основанные на результатах наших экспериментов, вошли в лекционный материал учебного процесса на курсах повышения квалификации ветеринарных и медицинских врачей.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на научно-производственной конференции по диагностике, терапии и профилактике болезней птиц и задачам ветеринарной науки в условиях интенсивного птицеводства (Ленинград, 1974); на УШ конференции молодых ученых Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения (Ленинград, 1976); на заседании Ленинградского отделения Всероссийского научного общества микробиологов и эпидемиологов и Ленинградского отделения Всесоюзного общества инфекционистов (Ленинград, 1979); на отчетной научной конференции сотрудников Всесоюзного научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения (Ленинград, 1980); на заседании методического совета отдела биохимии Всесоюзного научно-исследователь-
8 ского ветеринарного института птицеводства (Ленинград, 1983); на заседании кафедры биохимии Ленинградского ветеринарного института (Ленинград, 1984).
Публикация результатов. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, в которых изложено основное её содержание.
Объём и структура диссертации. Диссертационная работа представлена в виде рукописи на 219 страницах машинописного текста, включает 44 таблицы, 9 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, методической части, результатов исследования, их обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, который содержит 131 и 122 наименований работ отечественных и иностранных авторов.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Болезнь Марека - злокачественный лимфомогенез птиц, этиологическим агентом которого является онкогенный вирус герпеса. Установлено, что продуктивная инфекция и трансформация клеток под действием ДНК-содержащих онковирусов взаимоисключают друг друга. Однако в организме птиц, заражённых вирусом болезни Марека, острая продуктивная инфекция лимфоидных органов предшествует злокачественному перерождению Т- и В-лимфоцитов. На стадии опухолевого роста системное действие лимфомы проявляется комплексом клинических признаков, в том числе у поражённых ддзиц усугубляется специфическая супрессия иммунной системы. Таким образом, прогрессия лимфомогенеза при болезни Марека обусловлена, с одной стороны, своеобразной цитопатией и малигнизацией клеток-мишеней, а с другой - метаболическими особенностями злокачественного узла.
Механизмы герпесвирусных цитопатий
При всём разнообразии форм и видов цитопатий, вызываемых герпесвирусами, все же можно охарактеризовать некоторые общие закономерности ферментативных механизмов, лежащих в основе "микропатогенеза" клетки. Репродукция вирусов герпеса протекает при чётко выраженном угнетении биосинтеза клеточных макромолекул /12,13,18/. По-видимому, центральным моментом этого процесса является наработка в продуктивно инфицированных клетках вируеспе-цифического белка-ингибитора клеточной ДНК-зависимой РНК-поли-меразы I /19/. При этом наблюдается блокирование транскрипции клеточной ДНК, в то время как РНК-полимеразы Ни Ш осуществляют считывание информации, закодированной в вирусном геноме /20/. Предлагается универсальный механизм продуктивного действия вирусов на клеточный метаболизм /18,21/. Полагают, что подавление биосинтеза клеточных макромолекул может быть связано с вирус-индуцированной модификацией ДНК-зависимых РНК-полимераз. Образование модифицированной транскриптазы в результате подстановки вирусспецифического -фактора в клеточный энзим обеспечивает преимущественную транскрипцию вирусной ДНК, а угнетение транскрипции клеточной ДНК рассматривается как побочный эффект этого события. Вероятно, такая же ситуация складывается при репродукции вирусов герпеса. Кооперация вирусспецифических протеинов с клеточной РНК-полимеразой Я, необходимая для эффективной транскрипции вирусного генома /22/, является веским аргументом в пользу изложенного. Определенный вклад в ингибирование биосинтеза клеточных макромолекул вносит и увеличение внутриклеточной ДНК-аз-ной активности /23/. Известно, что вирусный геном содержит информацию для синтеза вирусспецифической ДНК-азы. Однако образование хромосомных мостиков, наблюдаемое при герпетической ин 10 фекции, монет быть следствием активирования собственно клеточной ДНК-азы. Характерно, что в этих условиях.активиость вирусной ДНК-полимеразы сохраняется на высоком уровне, в то время как активность клеточного фермента значительно снижается /24/« Другим существенным моментом вирусной цитопатии является прямое действие вирусов герпеса на полисомный аппарат клеток пермиссив-ных систем, согласно данным О Sydiskis, Б. Roizman /25/ подавление биосинтеза клеточных белков под действием герпесвиру-сов коррелирует с распадом цитоплазматических полисом. В экспериментах б. RoiziTian и соавт./2б/ показано, что герпетическая инфекция ингибирует биосинтез клеточной РНК на Ъ%, При этом ядерный предшественник рибосомальной РНК, представленный 45 S - полинуклеотидом, синтезируется с пониженной скоростью, а фрагментация его до цитоплазматических 18 S - и 28 S - РНК не происходит /26,27/. Обработка клеток циклогексимидом, по времени предшествующая заражению, предохраняет биосинтез РНК от вирусиндуцированных воздействий. Однако ингибирование процессин-га 45 S -РНК в таких клетках указывает, что, наряду с вируссле-цифическим белком, метаболические изменения при герпетической инфекции опосредуются какими-то неидентифицированными в настоящее время механизмами /28/. Очевидно, блокирование транскрипции клеточной ДНК и трансляции клеточных белков приводит к падению уровня биосинтеза ДНК, ингибированию репликации клеточного генома и приостановке клеточного деления. Непосредственным же инструментом клеточной деструкции, вероятнее всего, являются лизо-сомалъные энзимы, выходящие за пределы дезорганизованных лизо-сомальных мембран на заключительных этапах взаимодействия вируса и клетки /29-31/. Повышение активности ферментов лизосом связано, по-видимому, с увеличением проницаемости органоидных мембран."
В активности ферментов гликолиза, нитратного цикла, лактатде-гидрогеназы, щелочной фосфатазы, фосфатизомеразы, глицерофосфат-дегидрогеназы, альдолази, малатдегидрогеназы, сукцинатдегидрогеназы, НАД- и НАДФ-диафораз также обнаружены фазные сдвиги, вызываемые продуктивной герпетической инфекцией /31/. Показано, что для полноценного синтеза вирионов необходимы макроэргиче-ские нуклеозидтрифосфаты и дезоксинуклеозидтрифосфаты. Именно поэтому разобщение дыхания и окислительного фосфорилирования 2,4-динитрофенолом, а также ингибирование митохондриальной сукцинатдегидрогеназы малонатом, оказывает резко выраженный противовирусный эффект /32,33/, Уменьшение содержания в зараженных клетках АТФ и ДАТФ, помимо расходования нуклеотидов в реакциях биосинтеза вирусспецифических нуклеиновых кислот и белка, может быть связано с нарушением работы митохондриального аппарата. Ответная реакция митохондриальных мембран на дегенеративное действие вирусов герпеса заключается, по-видимому, в нарушении трансформации и аккумуляции энергии в макроэргических связях АТФ, Ингибирование маркерных митохондриальных энзимов глутаматдегидро-геназы, сукцинатдегидрогеназы, малонатдегидрогеназы, четко выраженное в разгар инфекционного процесса, является веским аргументом в пользу изложенного, В рамках этих же представлений лежат данные об угнетении образования кардиолипина и биосинтеза митохондриальной ДНК, регистрируемые в заключительный период репродукции герпесвирусов /34,35/. Патогенетически измененные вирусами герпеса клеточные мембраны создают основу для протекания вторичных энзиматических процессов. Так, в продуктивно пораженные клетки проникает экзогенная ДНК-аза.
Интенсивность биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, зараженных вирусом болезни Марека
Учитывая своеобразие лимфомогенеза Марека и специфичность действия герпесвирусов на органный метаболизм, мы изучили в латентный период онкогенеза: - биосинтез белков и нуклеиновых кислот в тимусе, фабри-циевой сумке и селезёнке цыплят, зараженных вирусом болезни Марека; - биосинтез белков субклеточных структур лимфоидных органов цыплят на 2, 4, 20 и 25 дни инфекционного процесса; - биосинтез сывороточных иммуноглобулинов ( Ig li и IgG ) у цыплят, зараженных вирусом болезни Марека. Моделировали инфекционный процесс путем двукратного введения вирусной суспензии в брюшную полость интактных цыплят. Сроки исследований соответствовали 2, 4, б, 10, 15, 20, 25, 30 и 40 дням после заключительного введения вирусного инокулята. Для изучения биосинтеза белков и нуклеиновых кислот применяли метод меченых атомов. Указанные макромолекулы метили радиоактивными предшественниками: х-глицин, л)-оротовая кислота, -С-тимидин, которые вводили внутрибрюшинно из расчета 5-Ю мккюри на 100 г массы за 2 часа до убоя. Результаты исследований представлены в таблицах 3.2.І.І.-3.2.І.7. Оказалось, что в тимусе на 2 и 4 дни после заражения имело место уменьшение скорости включения меченых предшественников в белки соответственно на 27 и 30% (Р 0,05-0,02), РНК на 33 и 35% (Р =С 0,01), ДНК на 25 и 26% (Р - 0,05-0,02). Аналогичные биохимические изменения происходили и в фабрициевой сумке.Угне-тение биосинтеза белка на 30, 34% (Р 0,02-0,01), ДНК на 25, 26, (Р 0,02-0,01), РНК на 34, 38$ (Р 0,01) отмечалось в группе подопытных цыплят на 2 и 4 сутки исследований. В то же время в селезёнке инфицированных птиц наблюдалась тенденция к активированию биосинтеза органных макромолекул, К 10 и 15 дням экспериментального периода интенсивность обменных процессов в лимфоидных органах нормализовалась. Однако на 20 и 25 дни после заражения в группе инфицированных цыплят наблюдалась активация синтеза белка и нуклеиновых кислот в тимусе, фабрициевой сумке и селезёнке, В центральных органах иммунной системы этот процесс был наиболее выражен. Так, в тимусе и фабрициевой сумке возрастали скорости включения ч)-глицина в органные белки на 30% (Р С 0,02-0,01), -оротовой кислоты и Ч -тимидина в РНК и ДНК соответственно на 35, 30% и 25% (Р -с 0,01-0,05). В те же сроки в селезёнке зараженных цыплят биосинтез белков увеличивался на 25 (Р 0,02) и 20%. Повышалось также включение Т--оротовой кислоты в органную РНК на 27, 25% (Р С0,05). Достоверная стимуляция биосинтеза ДНК селезёнки подопытных птиц обнаружена только на 20 день наблюдений. При этом интенсивность включения - ъ-тимидина в ДНК органа превышала контрольные данные на 25%. К 25 дню наблюдений уровень биосинтеза ДНК селезёнки подопытных птиц хотя и превышал таковой в контроле на 18%, однако, эти различия носили недостоверный характер. Через 30 дней после заражения различий в интенсивности биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах у подопытных и контрольных цыплят нами не обнаружено. Анализ биосинтеза белков субклеточных структур (табл.3.2.1Л.-3.2.1.6.) показывает, что в центральных органах иммунной системы (тимусе и фабрициевой сумке) параллельно ингибированию синтеза макромолекул имело место четко выраженное подавление интенсивности включения чЗ-глицина в белки рибосом и постри/босомного супернатанта. На 2 и 4 дни эксперимента скорости включения - -глицина в белки указанных фракций уменьшались по сравнению с контролем в тимусе на 40$ (Р : 0,01), в фабрициевой сумке на 30-47$ (Р 0,01-0,001). Усиление биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в тимусе, селезёнке и фабрициевой сумке зарегистрировано нами в предварительных опытах на 20, 25 дни инфекционного процесса. Исследование биосинтеза белков субклеточных структур в этот период выявило, что в группе подопытных цыплят включение л)-глицина в белки рибосом и пострибосомного супернатанта тимуса и фабрициевой сумки превышает контрольные показатели на 35-43$ (Р 0,02-0,01). Сходные изменения у зараженных цыплят обнаружены также в селезёнке, где повышение уровня биосинтеза исследуемых белков составило в среднем 30$ (Р - 0,05). При изучении биосинтеза сывороточных белков (табл.3.2.1.7.) установлено, что в ранние сроки исследований (2-6 сутки) имела место тенденция к увеличению включения ъ-глицина в иммуно-М- и иммуно- G -фракции. Однако в это время и до 20 дня различия между опытом и контролем носили недостоверный характер. На 20 день после заражения происходила одновременная стимуляция включения ъ-глицина в сывороточные белки обеих фракций. При этом удельная радиоактивность подопытных образцов была выше контрольных данных в среднем на 30$ (Р - 0,05).
Интенсивность биосинтеза белков и нуклеиновых кислот в лимфоидных органах цыплят, иммунизированных разными вакцинами против болезни Марека
В настоящее время следует считать крайне недостаточным проведение оценки тех или иных вакцин только методом биопробы без выяснения участия отдельных систем в формировании иммунологической реакции /211/. Показано, что использование в иммунологии биохимических и изотопных методов позволяет ближе понять молекулярные механизмы выработки иммунитета и на основе полученных знаний разработать теоретические предпосылки к изысканию новых высокоэффективных биопрепаратов /212, 213/, С другой стороны, выяснение биохимических особенностей формирования иммунитета представляет определенный теоретический и практический интерес для разработки методов и схем вакцинации, а также в плане стимуляции иммунизаторного процесса. Иммунобиологическое состояние птиц после вакцинации в значительной степени определяется имму-ногенными свойствами введенного антигена. Учитывая это обстоятельство, мы провели изучение в сравнительном аспекте действия нативных вирус-вакцин против болезни Марека на биосинтез белка и нуклеиновых кислот в селезёнке, тимусе и фабрициевой сумке подопытных цыплят.
Полученные нами данные (табл.3.2.3.1.І.- 3.2.3ЇІ.З.) показали, что вакцинация птиц оказывает неоднозначный эффект на биосинтез макромолекул в исследуемых органах. В группе цыплят, иммунизированных против болезни Марека вакциной Риме, имела место стимуляция включения 1л!-глицина, Х-оротовой кислоты и лї-тимидина в белок и нуклеиновые кислоты тимуса на 15 и 20 дни иммунизаторного процесса. Перечисленные показатели органного метаболизма превышали контрольные величины по белку на 25-30% (Р 0,05); по РНК на 30-35% (Р 0,02-0,05); по ДНК на 25% (Р С 0,05). При введении цыплятам отечественной вакцины повышение включения -глицина (25%; Р С 0,05); IZC-оротовой кислоты (30%; Р г 0,05); - -тимидина (20%; Р : 0,05) в соответствующие молекулы тимуса зарегистрировано только на 20-й день эксперимента. В то же время под действием отечественной вакцины в фабрициевой сумке подопытных цыплят повышался биосинтез белка (30%; Р Z 0,05), РНК и ДНК (33%; P C 0,05 и 25%; P 0,05)« Тенденция к повышению биосинтеза макромолекул бурсы выявлена нами и при иммунизации птиц вакциной Риме, однако, различия между опытом и контролем носили недостоверный характер. Показано также, что на 20 день после вакцинации у цыплят из обеих подопытных групп происходит увеличение включения меченых предшественников в макромолекулы селезёнки. Так, под влиянием вакцины Риме возрастает биосинтез белка на 34% (Р : 0,01), биосинтез РНК и ДНК соответственно на 36 и 25% (Р 0,05), Отечественная вакцина оказывает менее выраженный стимулирующий эффект на биосинтез органных макромолекул. Исследуемые показатели превышали данные контроля по включению в соответствующие макромолекулы селезёнки -глицина на 30% (Р 0,05), -оротовой кислоты и Ї С-тимидина на 32% и 25% (Р 0,05).
Наряду с увеличением биосинтеза органных макромолекул, в сыворотке крови вакцинированных цыплят возрастала удельная радиоактивность белков, сходных по молекулярной массе с иммуноглобулинами М и G (табл.3.2.3 1.4-.). У цыплят, иммунизированных вакциной Риме, удельная радиоактивность сывороточных белков, сконцентрированных в элюате первой фракции, превышала таковую контроля на 25% (Р с 0,05). На 30% увеличилось вклга 14 чение Х-глицина и в белки сыворотки, обогащенные условиями фракционирования!"! иммуноглобулинами G . в группе цыплят, иммунизированных отечественной вакциной, биосинтез сывороточных белков первой и второй фракций был на 25% выше уровня контроля. При этом в исследуемых органах, особенно в селезёнке, активировался биосинтез белков рибосом и пострибосомного супер-натанта (табл.3.2.З.І.5.- 3.2.3.1.7.). Под действием вакцины Риме уровень биосинтеза рибосомальных белков Селезёнки, тимуса и фабрициевой сумки повышался по сравнению с контролем соответственно на 38, 36 и 25% (Р 0,02-0,05) Увеличивалось также включение меченой аминокислоты в белки пострибосомного супер-натанта селезёнки на ОД (Р 0,01), тимуса на 35% (Р ; 0,05--0,01, фабрициевой сумки на 23$ (Р 0,05). При введении отечественной вакцины включение " -глицина в белки субклеточных структур органов возрастала по сравнению с контролем на 20-30%. Однако в наибольшей степени стимуляции биосинтетических реакций зарегистрирована в селезенке подопытных птиц, где радиоактивность белков рибосом и пострибосомного супернатанта более чем на 35% (Р 0,02-0,01) превышала таковую контроля.
Биохимические основы злокачественного роста при болезни Марека
Однако в селезёнке инфицированных птиц указанные метаболические изменения не происходят. Сразу же после заражения биосинтез органных макромолекул имеет тенденцию к активированию. Сходные данные получены и при исследовании биосинтеза тотальных белков селезёнки цыплят, подвергнутых ложному заражению иноку-пядией крови интактных кур. Считается, что антигены гистосов-местимости, представленные на эритроцитах линейных птиц, идентичны. Однако массовый гемолиз клеток инокулята в брюшной поло і сти подопытных цыплят способствует, вероятно, освобождению раз-личных антигенных детерминант, маскируемых прежде ограничениями, накладываемыми организацией организма. Примерами подобной ситуации могут служить результаты исследований D.Simmons, P. Perlman и Е.Field, И. Mugbes , , приведённые в монографии В.С.Шапота /81/. Маловероятно, что активирование биосинтеза органных и сывороточных макромолекул на 2-4- дни после заражения отражает в своей основе иммунную реакцию организма инфицированных птиц на вирусспецифические антигены. Б этой связи следует напомнить, что виремия у цыплят, инфицированных ВБМ, регистрируется только на второй неделе после заражения и резко возрастает к 20 дню исследований /178/. Указанное обстоятельство связано, по-видимому, с биологическими особенностями пара-зитирования вирусов герпеса - отсутствием вирусных частиц в межклеточных пространствах на ранних этапах процесса /12, 215/. Таким образом, создаются условия, при которых в первые моменты герпетической инфекции заражённый организм получает информацию о чужеродном объекте в минимальном объеме. Следствием такой ситуации может быть неадекватная реакция иммунной системы на реализацию инфекционного потенциала вируса. В поздние сроки, когда в связи с цитолизом поражённых клеток наблюдается масси І рованное инфицирование вирусными частицами органов и тканей, имеет место стимуляция иммунной системы!организма структурными вирусными антигенами. Полученные нами данные свидетельствуют об увеличении биосинтеза макромолекул в тимусе, фабрициевой сумке и селезёнке инфицированных птиц на 20-25 сутки эксперимента. Важно отметить, что в те же сроки фазы лимфопролифера-ции мы наблюдали стимуляцию включения f С-глицина в сывороточные белки, сконцентрированные хроматографией с иммуноглобулинами М или G . Природа механизмов, лежащих в основе проли-феративных стимулов, до конца не установлена. Полагают, что гиперпролиферация лимфоидной ткани может быть ответной иммунной реакцией организма на длительное персистирование вируса бо-лезни Марека в продуктивно поражённых клетках /216/. Вместе с тем вирусиндуцированная стимуляция митотической активности инфицированных клеток рассматривается в литературе как проявление ранних симптомов злокачественной трансформации /4, 80/. Аналогичным образом реагируют на генетически чужеродную информацию лимфоидные клетки организма /217/. Многократно показано, что в индуктивную фазу иммуногенеза и на ранних этапах злока-чественной трансформации в эффекторных клетках и клетках-мишенях имеет место усиление биосинтеза белков и нуклеиновых кислот /77, 78, 218, 219/. В полном соответствии с изложенным находят-ся результаты наших экспериментов, свидетельствующие о чётко выраженном активировании биосинтеза рибосомных белков, белков пострибосомного супернатанта и РНК-фракции тимуса, селезёнки и фабрициевой сумки. Вполне понятно, что развитие иммунных реакций или вирогенная малигнизация клеток будут сопровождать 158 j ся увеличением значений перечисленных выше показателей органного метаболизма. Вместе с тем повышение удельной оадиоактив І ности фракционированных сывороточных белков, обогащенных различными классами иммуноглобулинов, указывает на иммунологический характер фазы лимфопролиферации. Однако; в связи с особенностя-ми онкогенеза болезни Марека, однозначно интерпретировать эти данные мы не можем. Именно в случае лимфомогенеза Марека клет-ки-мишени одновременно являются эффекторными элементами иммунных реакций /8, 173, 177, 180, 183/. Не исключено также, что иммунная компонента пролиферации лимфоцитов создаёт наиболее благоприятные условия для проявления онкогенных потенций ВБМ. Установлено, что в процессе вирусного онкогенеза повышение биосинтеза ДНК и митотической активности клеток увеличивает эффективность трансформации за счёт количественного возрастания интегративных генетических взаимодействий, в том числе и специфических, опосредующих экспрессию злокачественного фенотипа /3, 220, 221/. Понятно, что онковирусы герпеса, используя собственные механизмы, способны индуцировать интенсивный синтез клеточной ДНК и стимулировать митоз в инфицированных клетках /80/. Наши представления не исключают вирусспецифический механизм малигнизирующего действия ВБМ. Однако своеобразие инфек І ционного процесса лимфомогенеза Марека наводит на мысль, что иммуностимуляция лимфоидных клеток и их!злокачественное перерождение находятся в определённой связи! С этих позиций активная пролиферация лимфоцитов, являясь, по существу, иммуниза-торным процессом, будет повышать эффективность вирогенной трансформации Т-клеток.
