Введение к работе
Актуальность проблемы, несмотря на интенсивные исследования
структуры хромосом, изучение их морфологии с помощью электронной микроскопии, определение белкового состава хромосом, структурной организации их остова - скэффолда, митотического аппарата, топография хромосомных белков остается малоизученной. При этом определение наружных белков оставалось практически не изученным. Также слабо изученным является вопрос о взаимодействии белков в составе хромосом клеточными ферментами - протеинкиназами и фосфатаэами. Поэтому применение нового метода в исследовании структуры хромосом - метода тритиевой планиграфии, позволяющего детектировать компоненты наружной поверхности, расположенные в слое толщиной 3-5 Кис разрешением около 1 Д, представляется весьма перспективным. При этом исследование поверхности этим методом возможно только для выделенных и очищенных метафазных хромосом. Исследование поверхности метафазных хромосом также представляется весьма актуальным в связи с широким применением выделенных хромосом в модельных исследованиях а системах in vitro.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Целью настоящей работы явилось исследование наружной поверхности метафазных хромосом, выделенных различными методами, определение белков, локализованных на их поверхности, исследование наружных белков конденсированных и ЭДТА-деконденсированных хромосом, а также исследование наружных фосфобепков конденсированных и ЭДТА-деконденсированных хромосом и определение их взаимодействия с казе-инкинаэой 2 и щелочной фосфатаэой.
Научная новизна и практическая ценность.
Впервые применен метод тритиевой планиграфии в исследованиях хромосом. Исследованы возможности применения этого метода для получения хромосом, меченных по поверхности без нарушения морфологической структуры и с сохраненной протеинкинаэной активностью.
Обнаружено, что белки фракции скэффолда составляют наружную поверхность полиаминных и Са-хромосом, как в конденсированном, так и в ЭДТА-деконденсированном состояниях. Идентифицированы полипептиды, лежащие на поверхности хромосом, в том числе и фосфополипептиды. Показано взаимодействие наружных фосфополипептидов с каэеинкиназой 2 и щелочной фосфатазой.
Настоящая работа дополняет и уточняет современные представления о структуре хромосом и скэффолда хромосом в частности. Показана возможность получения хромосом с меченными наружными белками для дальнейшего использования их в исследованиях in vitro для определения
взаимодействия структурированных хромосомных белков с растворимыми цитоплаэматическими ферментами - фосфатазами и киназами.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста, включая 17 рисунков и 1 таблицу, список использованной литературы (210 ссылок). Работа состоит из следующих разделов: Введение, Литературный обзор, Материалы и методы, Результаты и их обсуждение, Выводы, Список литературы.
