Введение к работе
Актуальность пгаблямьт, В последние годы все больше внимание исследователей привлекает взаимосвязь между возникновением злокачественных опухолей и аутоиммунным состоянием организма. Замечено, что у пациентов с аутоиммунными патологиями значительно чаще по сравнению с другими заболеваниями появляются опухоли СГогичадзй Г.К., 1992).. Известны случаи, когда при органоспецифических аутоиммунных патологиях рак возникает в пораженном органе, а при неорганоспецифических заболеваниях, таких,как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, синдром Шегрена и др., развиваются злокачественные опухоли лимфоидного. часто В-клеточного происхождения CBatallle R. et al., 1989).
Одновременно было замечено, что у больных со злокачественными опухолями появляются признаки, характерные для аутоиммунного состояния: дисбаланс иммунорегуляторных клеток -Т-хелперов и Т-супрессоров CPeller S. and Kaufman S., 1991), появление в сыворотке крови аутоантител к различным тканевым антигенам СЧернушенко Е.Ф. и др., 1985: Fairley С.Y., 1972: Nelson D.S., 1977: Whltehause J.M.A. and Holborou E. J., 1971: Гриневич Ю.А. и Алферов А. Н.. 1981). Взаимосвязь между аутоиммунным состоянием и злокачественным ростом, очевидно, носит не случайный характер, поскольку показано, что противотканевые антитела являются важным компонентом в противоопухолевой защите организма. Введение противотканевых антител мышам, имеющим спонтанные злокачественные новообразования, приостанавливает развитие последующих опухолей и замедляет рост уже существую-, щих новообразований С Терещенко И.П. и Сараєва З.М., 1983). С другой стороны, существует мнение, что при злокачественном росте иммунные комплексы осуществляют блокировку противоопухолевого иммунитета С Белохвостое А. С, 1978).
Аутоантитела к собственным антигенам обнаруживаются и у клинически здоровых людей, но содержание их незначительно. Полагают, что они ответственны за утилизацию продуктов метаболизма и деструкции клеток. Такой аутоиммунитет был назван Физиологическим CGrabar Р., 1965). В случае аутоиммунных заболеваний в сыворотке крови наблюдается значительно повышенный уровень циркулирующих аутоантител, которые вызывают нарушение функций многих жизненно важных органов и тканей.
Ирпт, м чапаим мгг-прпппянмд Целью работы явилось определение уровня аутоантител к ядерным антигенам в сыворотке крови здоровых людей, опухоленосителей и при аутоиммунных заболеваниях.
В задачу исследований входило:
разработка тест-системы на основе иммуноферментного анализа для определения аутоантител к нативной и денатурированной ДНК и дезоксирибонуклеопротеиду:
определение содержания исследуемых аутоантител в сыворотке крови здоровых доноров и установление порогового уровня аутоантител к нативной и денатурированной ДНК и дезоксирибонуклеопротеиду в норме:
определение содержания исследуемых аутоантител при аутоиммунном заболевании - системной красной волчанке, и при инфекционных процессах, сопровождающихся распадом тканей - туберкулез и стрептококковая инфекция;
определение концентрации ДНК в плазме крови здоровых людей и онкологических больных:-
-определение содержания аутоантител к ядерным антигенам в сыворотке крови онкологических больных с различной локализацией опухолевого процесса.
Научная нгтигчна, В результате проведенных исследований разработана тест-система на основе иммуноферментного анализа СИФА) для определения содержания ' аутоантител к нативной СнДНЮ, денатурированной ДНК СдДНЮ и дезоксирибонуклеопротеиду (ДНГО в сыворотке крови человека. Проведен сравнительный анализ аутоантител к ядерным антигенам в сыворотке крови здоровых людей и при различных заболеваниях. ' Установлен пороговый уровень содержания аутоантител к нДНК, дДНК и ДНП в сыворотке крови здоровых доноров. Впервые обнаружены повышенные уровни аутоантител к ДНП при лимфопролиферативных заболеваниях и аутоантител к нДНК и дДНК при раке молочной железы, раке легкого и желудочно-кишечного тракта.
Прак-тицргаая гчнаиимпгугь. Практическая значимость исследований заключается в расширении возможности лабораторной диагностики аутоиммунных реакций при различных заболеваниях. Разработанная иммуноферментная тест-система используется для массового клинического обследования больных в городской инфекционной больнице N і, в ГИДУВе и в детской городской больнице N 1 г.Казани. Определение содержания антиядерных аутоантител в
сыворотке крови здоровых людей и аутоиммунных больных позволило установить пороговый уровень содержания этих аутоантител в норме. Показано, что превышение этого порогового уровня свидетельствует о наличии в организме аутоиммунных реакций. Повышение содержания аутоантител к ядерным антигенам при отсутствии аутоиммунных заболеваний может указывать на развитие злокачественных опухолей, что следует учитывать при постановке диагноза.
Гтпук-тура и пб^м работы. Диссертация. состоит из введения, обзора литературы, описания собственных исследований, обсуждения и выводов. Работа изложена на 206 страницах, содержит 22 таблицы и 32 рисунка. Список литературы включает 180 наименований.
Апрпбания оабпты. Основные результаты работы были доложены на итоговых научных конференциях Казанского государственного университета С1991, 1992, 1993, 1994 гг.), на Международной конференции "XVI European Congress of Allergology and Clinical Immunology ЕСАСГ95" С Spain, Madrid).
. Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 4 опубликованных работах.
Матрпиады и мртппы иссдрдгтания. В работе использована венозная кровь от 60 здоровых доноров С50 женщин и 10 мужчин): 122 больных гематологического отделения городской больницы N 5 г. Казани: 166 больных Республиканского онкологического диспансера г. Казани: 20 больных системной красной волчанкой С СКВ) терапевтического отделения клиники ГИДУВа г. Казани: 14 больных со стрептококковой инфекцией из инфекционной больницы N 1 г. Казани: 20 больных с костной и легочной Формой туберкулеза из Казанской городской туберкулезной больницы С п. Каменка).
Определение содержания ДНК в плазме крови проводили спек-трофлюорометрическим методом с красителем Hoechst 33258 CServa, ФРГ).
Оптимальные длины волн возбуждения флюоресценции Hoechst определяли при изучении спектров, записанных" в области длин волн Флюоресценции Слал) 410-510 нм с шагом 10 нм с непрерывным автоматическим изменением длин волн возбуждения СЗв), начиная с длины волны 280 нм.
Определение аутоантител СААТ) к ядерным антигенам проводили с использованием созданной нами тест-системы на основе
- б -
иммуноферментпого анаїиза. Для этого были выделены из тиыуса крупного рогатого скота и очищены следующие ядерные антигены: нДНК. дДНК и ДНП.
Статистическую обработку полученных результатов проводили по общепринятым методам (Лакин Г.Ф.. 1990: Тейлор Д.,1985).
