Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 14
1.1 Современное состояние проблемы аттестации стандартных образцов в
нашей стране и за рубежом 14
1.1.1 Стандартные образцы в системе обеспечения единства измерений 14
1.1.2 Стандартные образцы как средство обеспечения качества при производстве и контроле иммунобиологических лекарственных препаратов 33
1.2 Особенности технологии производства и аттестации стандартного
образца мутности бактериальных взвесей 38
1.2.1 Типы стандартных образцов мутности 39
1.2.2 Стандартный образец мутности в Российской Федерации 43
2 Собственные исследования 52
2.1 Материалы и методы исследований 52
2.2 Результаты исследований 64
2.2.1 Теоретическое и экспериментальное обоснование усовершенствованной технологии производства отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей 64
2.2.1.1 Оптимизация технологического процесса производства отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей 68
2.2.1.2 Совершенствование способов стандартизации материала отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей 78
2.2.1.3 Схема технологического процесса производства отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей 84
2.2.2 Оптимизация процедуры аттестации отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей 87
2.2.2.1 Валидация методики измерения оптической плотности материала отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей.. 87
2.2.2.2 Определение метрологических характеристик и установление прослеживаемости результатов испытаний материала отраслевого 95
стандартного образца мутности бактериальных взвесей
2.2.2.3 Определение общей концентрации микроорганизмов 109
2.2.3 Оценка неопределенности и установление прослеживаемости результатов испытаний биологических стандартных образцов для оценки 125
качества иммунобиологических лекарственных препаратов .
2.2.4 Изучение биологической активности отраслевого стандартного образца активности лейкоцитарного интерферона альфа типа 129
3 Обсуждение результатов 133
4 Выводы 143
5 Практическое использование научных результатов 145
6 Рекомендации по использованию научных выводов
Список использованной литературы 147
- Стандартные образцы как средство обеспечения качества при производстве и контроле иммунобиологических лекарственных препаратов
- Теоретическое и экспериментальное обоснование усовершенствованной технологии производства отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей
- Совершенствование способов стандартизации материала отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей
- Определение метрологических характеристик и установление прослеживаемости результатов испытаний материала отраслевого
Стандартные образцы как средство обеспечения качества при производстве и контроле иммунобиологических лекарственных препаратов
Стандартные образцы, характеризующие состав и свойства веществ и материалов, занимают ключевое место в системе обеспечения единства измерений не только при определении различных показателей, но и при проведении градуировки, поверки, калибровки средств измерений, валидации и аттестации методик измерений/испытаний, внутрилабораторного контроля качества аналитических работ, а так же при оценке компетентности лабораторий в межлабораторных испытаниях [65].
Госстандарт СССР в 1978 г организовал систему ГССО, которая объединяла ведомственные организации, а в 1982 г был сформирован «Перечень головных и базовых организаций по стандартным образцам» [33;64].
Приказом Минздрава СССР в 1983 г головной организацией метрологической службы по стандартизации ИЛП был назначен ГИСК им. Л.А. Тарасевича [81], функции которого были определены в соответствии с «Положением о службе стандартизации в системе здравоохранения СССР [80].
В дальнейшем была создана Метрологическая служба Министерства здравоохранения СССР, в перечень базовых организаций которой так же был включен ГИСК им. Л.А. Тарасевича [82].
C распадом СССР в 1991 г часть «головных» и «базовых» организаций прекратила свое существование. Однако ГИСК им. Л.А. Тарасевича продолжал выполнять возложенные на него функции в пределах своей компетенции и в 2010 г был включен в перечень организаций, назначенных в структуру участников ГССО для организации и координации работ по стандартным образцам, с учетом направления свой деятельности [64;78]. На основании распоряжения Правительства Российской Федерации от 17 ноября 2010 г № 2058-р и приказа Минздравсоцразвития России от 13 декабря 2010 г № 1102 ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России с 18 августа 2011 г. реорганизован в форме присоединения к Федеральному государственному бюджетному учреждению «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации (далее – НЦЭСМП) [84;85].
В составе НЦЭСМП ГИСК им. Л.А. Тарасевича преобразован в Центр экспертизы и контроля МИБП и продолжает выполнять задачи по обеспечению необходимой номенклатурой стандартных образцов, применяемых при производстве и контроле качества ИЛП. В соответствии с законом «О ветеринарии» [37] государственную политику в области обеспечения качества, эффективности и безопасности лекарственных средств для животных и кормов, а также безопасности продукции животного происхождения обеспечивает Федеральное государственное бюджетное учреждение «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» Россельхознадзора (ВГНКИ). В настоящее время деятельность ГССО регламентирует Федеральный закон РФ № 102-ФЗ от 26 июня 2008 г «Об обеспечении единства измерений» и подзаконные нормативно-правовые акты [118;80]. Особое внимание в настоящее время уделяется восстановлению деятельности отраслевых служб стандартных образцов, в качестве которых выступают организации, назначенные федеральными органами исполнительной власти в состав организационной структуры системы ГССО [64]. Необходимо отметить, что до настоящего времени не определен порядок разработки, аттестации и утверждения отраслевых стандартных образцов ИЛП. Анализ требований нормативных документов в области разработки и аттестации стандартных образцов
В настоящее время международные требования к стандартным образцам определены в системе документов Комитета по стандартным образцам (РЕМКО, REMCO) Международной организации по стандартизации (ИСО, ISO). В Российской Федерации в системе обеспечения единства измерений существует ряд подзаконных актов и нормативно-методических документов, определяющих порядок работ по созданию и аттестации стандартных образцов. Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) сформулированы рекомендации по созданию биологических стандартных образцов. Кроме того, при производстве и контроле качества лекарственных средств, в том числе ИЛП, применяют фармакопейные методы анализы, которые предусматривают использование стандартных образцов, которые в настоящее время предложено называть фармакопейными.
Анализ международных рекомендации Комитета по стандартным образцам Международной организации по стандартизации
Документы, в которых впервые была затронута проблема стандартных образцов, относятся к 27-му заседанию Совета ISO (International Organization for Standardization) в 1973 году в Вашингтоне, на котором была учреждена специальная группа для дальнейшего изучения предложений по созданию Комитета по стандартным образцам. Решение о преобразовании специальной рабочей группы в Комитет Совета по стандартным образцам – RЕМСО (Reference Matherial Committee of ISO) состоялось в сентябре 1975 г [34].
Требования к порядку аттестации и статистическим принципам расчета метрологических характеристик стандартных образцов сформулированы в Руководствах ИСО РЕМКО: ISO Guide 30, 31, 33, 34, 35, которые в настоящее время обновлены [143-147].
В Руководстве ИСО 30 Термины и определения, используемые в области стандартных образцов (ISO Guide 30:1992 Reference materials - Terms and definitions used in connection with reference materials) приведены определения СО, их классификация (CRM, RM) и иерархия (первичный, вторичный) [143].
Более подробно термины и определения, применяемые в области разработки стандартных образцов, приведены в Международном словаре основных и общих терминов по метрологии (International vocabulary of metrology — Basic and general concepts and associated terms,VIM) [142].
Руководство ИСО 31 Стандартные образцы – Содержание сертификатов и этикеток (ISO Guide 31:2000 Reference materials – Contents of certificates and labels) устанавливает международные требования к содержанию сопроводительной документации, подтверждающей качество и условия применения стандартного образца. Руководство ИСО 31 рекомендует включать в сертификат (паспорт) расширенный объём информации и дополнительно указывать сведения о методиках и методах измерения, примененных при установлении значений метрологических характеристик СО, утверждение о прослеживаемости результатов измерений, сведения о компетентности производителя СО [144].
Руководство ИСО 33 (ISO Guide 33:2000 Uses of certified reference materials) регламентирует применение стандартных образцов по его метрологическому назначению в строгом соответствии с инструкцией: для калибровки, градуировки средств измерений, контроля качества результатов анализа, валидации методик измерений, установления прослеживаемости к единицам системы СИ или другим узаконенным внесистемным единицам [145].
В руководстве ИСО 34 (ISO Guide 34:2009 General requirements for the competence of reference material producer) изложены общие требования, в соответствии с которыми производитель стандартных образцов должен продемонстрировать свою компетентность, необходимую для эффективной деятельности при производстве стандартных образцов [146].
Руководство ИСО 35 (ISO Guide 35:2006 Reference Material – General and statistical principles for certification) устанавливает общие принципы составления программы испытаний стандартных образцов; статистические принципы, используемые при аттестации стандартных образцов с целью установления их метрологических характеристик; предлагает модели проведения исследований неоднородности, стабильности и установления значения их аттестуемых характеристик; способы оценки результатов и учет всех составляющих неопределенности при расчете расширенной неопределенности аттестованного значения стандартного образца [147].
Перечисленные стандарты приняты в РФ как аутентичные переводы [24,25,27,104]. Однако международные рекомендации, изложенные в документах ИСО РЕМКО, носят общий характер и не в полной мере учитывают особенности аттестации стандартных образцов для каждой конкретной отрасли. Поэтому актуальна разработка общих принципов проведения испытаний и расчета метрологических характеристик СО для оценки качества ИЛП (аттестованного значения, неопределенности результатов испытаний), учитывающих особенности аттестации СО ИЛП и методических рекомендаций ГССО.
Анализ российских нормативно-методических документов по стандартным образцам Основные положения по порядку изготовления, аттестации и применения стандартных образцов в Российской Федерации изложены в системе нормативных документов Государственной системы обеспечения единства измерений (ГСИ), которая регламентирует: - основные положения о стандартных образцах: ГОСТ Р 8.753-2011 «Стандартные образцы (материалов)», ГОСТ 8.315-97 «Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения» и др. [20;26;93;94;97;99]; - порядок определения метрологических характеристик стандартных образцов: ГОСТ 8.532-2002 «Межлабораторная метрологическая аттестация. Содержание и порядок проведения работ», ГОСТ 8.563-96 «Методики выполнения измерений», ГОСТ 8.531-2002 «Способы оценивания однородности», РМГ 93-2009 «Оценивание метрологических характеристик стандартных образцов», ГОСТ 8.694-2010 «Стандартные образцы материалов (веществ). Общие и статистические принципы определения метрологических характеристик стандартных образцов» и др. [21-23;25;50;51;92;95;100;102];
Теоретическое и экспериментальное обоснование усовершенствованной технологии производства отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей
На первом заседании РЕМКО было достигнуто соглашение по двум основным определениям стандартного образца, которые приведены в ст. 6.14 Международного словаря основных и общих терминов по метрологии: референтного материала (reference material, RM) и сертифицированного референтного материала (certified reference material, CRM) [141]. В отечественной литературе CRM и RM переведены, соответственно, как аттестованный стандартный образец и стандартный образец [45].
Стандартный образец (reference material, RM) – материал или вещество, одно или несколько значений свойств которого достаточно однородны и установлены достаточно хорошо для того, чтобы использовать их для градуировки прибора, оценки метода измерения или приписывания значений материалам [45;141].
Аттестованный стандартный образец (certified reference material; CRM) – стандартный образец, к которому прилагается сертификат (свидетельство, паспорт), и одно или несколько значений свойств которого установлены при аттестации по методике, обеспечивающей метрологическую прослеживаемость единицы значения свойства, а каждое аттестованное значение сопровождается значением неопределенности с заданной доверительной вероятностью [45;141].
Практически во всех анализируемых источниках использован общий термин «стандартный образец», который объединяет, как правило, различные материалы и для которого приводятся неоднозначные характеристики, например: - согласно ГФ СССР ХI изд.: «Стандартные образцы подразделяются на Государственные стандартные образцы (ГСО), рабочие стандартные образцы (РСО) и стандартные образцы веществ-свидетелей)», а ОФС 42-0031-07 ГФ РФ ХII изд. указывает, что в качестве стандартных образцов должны быть предусмотрены фармакопейные стандартные образцы, введенные в действие уполномоченным фармакопейным органом, а также допускается использовать стандартные образцы серийных субстанций [16;17], - Европейская фармакопея и гармонизированные с ней Государственные фармакопеи Украины и Республики Белоруссии указывают, что термин «стандартный образец» является общим термином, включающим СО веществ (стандартные вещества, СО), СО препаратов (стандартные препараты) и эталонные спектры [4;18;19;137], - Британская фармакопея уточняет, что понятие «стандартный образец» относится к химической стандартной субстанции, биологическому стандартному препарату и стандартному спектру [131], - в Японской фармакопее указано, что: «стандартный образец представляют собой стандартные субстанции, качество которых отвечает необходимым требованиям, заложенным при изготовлении, с учетом их предполагаемого использования, как указано в монографиях фармакопеи» [155] и т.д.
Таким образом, анализ научной и специальной литературы в области разработки и аттестации стандартных образцов показал, что нет единого определения стандартного образца [46;140]. Классификация стандартных образцов В Российской Федерации в соответствии с ГОСТ 8.315-97 [20] в зависимости от уровня признания и области применения различают следующие категории стандартных образцов: государственные (ГСО), отраслевые стандартные образцы (ОСО) или стандартные образцы предприятий (СОП). Однако в связи с введением закона «О единстве измерений» [118] данный ГОСТ был пересмотрен и разработан ГОСТ Р 8.753-2011 [26], в котором введены новые понятия и классификационные признаки: - первичный СО – это стандартный образец, аттестованное значение которого получено с использованием первичного метода; - вторичный СО – это стандартный образец, аттестованное значение которого получено с использованием первичного СО; - первичный метод – это метод, используемый для получения результата измерений без сравнения с эталоном величины того же рода; - стандартные образцы утвержденного типа (ГСО) – стандартные образцы, которые применяют в сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений и типы которых утверждает Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии. Для таких стандартных образцов сохранилась аббревиатура ГСО.
В соответствии с ГОСТ 8.753-2011 порядок разработки, испытаний, применения, а также утверждения ОСО устанавливает соответствующее ведомство с учетом рекомендаций ГСИ, действующей с учетом закона «О единстве измерений» [26,118].
Стандартный образец предприятия (СОП) – утверждает руководитель предприятия. СОП может применяться только на одном, утвердившем его предприятии.
В соответствии с руководствами ВОЗ основными классами биологических стандартных орбразцов являются: биологический МСО (international biological measurement standard) – это препарат биологического или синтетического происхождения, используемый для количественного определения специфической активности биологических препаратов, международный реагент (а reference reagent) – биологические диагностические реагенты, биологические материалы или высокоспецифические сыворотки, используемые для идентификации микроорганизмов или диагностики болезней [40].
Биологические МСО ВОЗ являются первичными стандартными образцами, а национальные стандартные образцы, калиброванные относительно МБСО ВОЗ, вторичными. В соответствии с ГОСТ 8.315-97 различают стандартные образцы состава и свойств веществ. Анализ СО, зарегистрированных в Реестре отраслевых стандартных образцов медицинских иммунобиологических препаратов [86], показал, что классификация биологических СО в зависимости от метода, используемого для установления значения аттестуемой характеристики, более информативна.
Работа России в рамках таможенного союза, вхождение России в ВТО ставит задачи создания условий, обеспечивающих сопоставимость отечественных и зарубежных результатов измерений показателей качества и безопасности продукции. Для этого необходимо использовать стандартные образцы, созданные с учетом международных требований, обеспечивая тем самым признание результатов испытаний, проведенных в разных странах.
Современные требования к метрологическим характеристикам стандартных образцов Метрологическими характеристиками стандартного образца являются характеристики, предназначенные для определения результатов измерений/испытаний, выполненных с применением стандартного образца: аттестованная характеристика и интервал значений, который она принимает.
Согласно современным требованиям [26;147], при установлении значений аттестуемых характеристик стандартных образцов вместо оцениваемого ранее значения погрешности измеряемой величины, необходимо рассчитывать такой параметр как неопределенность [103;105].
Международный словарь основных и общих терминов в метрологии приводит следующую формулировку: «неопределенность измерения (measurement uncertainty) – параметр, характеризующий рассеяние (разброс) значений, которые могли бы быть обоснованно приписаны измеряемой величине» [45].
В соответствии с «Руководством по выражению неопределенности в измерении» понятие неопределенности предполагает, что значение измеряемой величины находится в интервале, установленном с определенной вероятностью, т.е. на современном уровне знаний невозможно установить истинное значение измеряемой величины.
Поскольку истинное значение величины не может быть определено [136], рекомендуется использовать понятие «опорное значение величины» (reference quantity value), результаты измерений которого в большинстве случаев характеризуются разбросом значений. Общепринятые оценки стандартного отклонения характеризуют диапазон значений приписываемых измеряемой величине, т.е. неопределенность.
Совершенствование способов стандартизации материала отраслевого стандартного образца мутности бактериальных взвесей
Определение общей концентрации микробных клеток в бактериальных взвесях является ключевым этапом стандартизации биологических препаратов на всем протяжении их жизненного цикла [1]. Наряду с инструментальными методами (турбидиметрия, нефелометрия) [31], широкое распространение получил метод стандартизации бактериальных взвесей, основанный на визуальном сравнении мутности исследуемой взвеси со стандартным образцом мутности. Это обусловлено его практическими преимуществами в сравнении с другими количественными методами. Основными из них являются – простота, возможность проведения анализа за короткий промежуток времени, удовлетворительная точность, безопасность. Это обстоятельство приобретает исключительное значение при некоторых специальных исследованиях, где необходимы многократные периодические исследования одного и того же образца (изучение динамики роста и размножения культуры, действие антибиотиков и др.) [119].
Отраслевой стандартный образец мутности бактериальных взвесей (далее – ОСО мутности) широко применяют на начальном этапе стандартизации бактериальных взвесей для определении общей концентрации микроорганизмов при производстве и экспертизе качества ИЛП для человека и животных [55;56;107], при аттестации других ОСО ИЛП, а также пищевых продуктов [29;54], контроле качества бактериологических питательных сред [57], воды [53], определении чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций для человека и животных (чума, сибирская язва, холера, туляремия, бруцеллез, сап, мелиоидоз) к антибактериальным препаратам [58;59].
Возможность применения визуальных методов основана на том, что мутность как эффект оптической неоднородности среды является обязательным и постоянным свойством любой бактерийной взвеси. Мутность микробных взвесей обусловлена рассеянием света на микробных клетках и является оптическим эквивалентом концентрации содержащейся в них микробной массы.
Мутность зависит как от концентрации микроорганизмов, так и от их свойств (размер, показатель преломления). Числовым эквивалентом мутности является оптическая плотность, безразмерная величина [119].
Визуальный метод оптической стандартизации бактериальных взвесей основан на принципе установления равенства мутности двух сред – исследуемой взвеси и материала стандартного образца. Для этого исследуемую бактерийную взвесь и стандартный образец сравнивают между собой в проходящем или отраженном свете на фоне специальной сравнительной таблицы с графическим рисунком. Если видимость элементов сравнительной таблицы одинакова, то считают, что мутность исследуемой взвеси равна мутности стандартного образца. Зная мутность стандартного образца и его числовой микробный эквивалент, определяют общую концентрацию микробных клеток в исследуемой взвеси.
Таким образом, от качества (стабильности значений его характеристик) стандартного образца зависит точность (правильность) и воспроизводимость результатов анализа, объективность оценки общей концентрации микроорганизмов при производстве и контроле качества иммунобиологических препаратов для человека и животных.
Технология изготовления и методы контроля должны обеспечивать возможность воспроизведения стандартного образца с заданными показателями мутности (оптической плотности) в пределах установленного диапазона в течение установленного срока годности.
Начиная с 1907 г в качестве материала для изготовления стандартного образца мутности были испытано большое количество различных минеральных и органических суспензий (бактерийные взвеси, каолин, взвеси из частиц стекла, сернокислый барий), а также твердые материалы (пробирки с матированной поверхностью). Однако только некоторые из них получили широкое распространение: жидкие химические, жидкие из частиц стекла, твердые полимерные.
Мак Фарланд предложил использовать взвеси из частиц сернокислого бария в качестве материала для изготовления стандартного образца мутности [149]. Однако, как отмечал сам автор, большим недостатком этих взвесей являлось то, что даже при самом точном соблюдении объемных и весовых соотношений ингредиентов не всегда получаются взвеси одинаковой мутности. Кроме того, стандартные образцы из сернокислого бария со временем становились более мутными почти на 100 % вследствие коагуляции частиц. Это приводило к значительно завышенным данным по концентрации микробных клеток в препаратах [119].
Броуном и Кирваном была усовершенствована методика изготовления этих стандартных образцов, разработана шкала мутности, таблица соотношений значений мутности, концентрации хлористого бария, серной кислоты и количества микроорганизмов [129].
В настоящее время стандартные образцы мутности по шкале Мак Фарланда продолжают использовать. Их получают путем смешивания растворов серной кислоты и хлористого бария в определенной концентрации. В зависимости от соотношения объемов этих двух растворов получают взвеси различной мутности.
Этот тип стандартных образцов имеет, по нашему мнению, следующие недостатки: - отсутствие калибровки по Международному стандартному образцу мутности ВОЗ; - необходимость использования специального прибора (денситометра); - зависимость оптических свойств новых серий стандартных образцов от условий приготовления, в частности: точности отбора объемов ингредиентов и их концентрации; - непродолжительный срок хранения – 6 мес.; - работа с токсическими веществами (BaCl2, H2SO4).
Принципиально новый путь получения устойчивых взвесей из минеральных частиц был предложен Бревером и Куком в 1939 году [130]. Они обнаружили, что взвесь из мельчайших частиц стекла Пирекс, сохраняла свою мутность в течение длительного времени, а после оседания частиц снова возвращалась в исходное состояние после взбалтывания. С 1946 г стандартные образцы, изготовленные из частиц стекла, стали применяться в Национальном институте здоровья США для стандартизации противококлюшной вакцины [151]. Данные, представленные этим институтом, послужили основанием для принятия Комитетом экспертов по биологической стандартизации Всемирной организации здравоохранения в 1951 году (WHO TRS 56) решения об изучении возможности использования взвесей из частиц стекла в качестве международного стандартного образца мутности [158]. С этой целью серия образцов была разослана в лаборатории различных стран для практических испытаний: Листеровский институт профилактической медицины (Лондон, Англия), Контрольная биологическая лаборатория (США), Национальный микробиологический институт (США), Государственный серологический институт (Копенгаген, Дания), Южно-Африканский научно-исследовательский медицинский институт (Иоханнесбург, ЮАР).
Определение метрологических характеристик и установление прослеживаемости результатов испытаний материала отраслевого
Аттестуемой метрологической характеристикой ОСО мутности бактериальных взвесей является аттестованное значение оптической плотности материала и неопределенность аттестованного значения.
Аттестованное значение оптической плотности материала ОСО мутности устанавливали в соответствии с Рекомендациями по метрологии Р 50.2.058-2007 «Оценивание неопределенности аттестованных значений стандартных образцов» [95].
Экспериментальное установление значения оптической плотности материала ОСО, статистическую обработку экспериментальных данных и определение значения аттестуемых характеристик ОСО проводили в соответствии с разработанной программой испытаний и методикой аттестации [88].
В рамках настоящих испытаний измерения выполнены с применением МСО мутности ВОЗ (5th IRP, 76/522) и валидированной методики измерения оптической плотности материала ОСО мутности фотометрическим методом на фотометре фотоэлектрическом «КФК-3-ЗОМЗ» (Россия).
Применение метода оптической стандартизации бактериальных взвесей основано на том, что одним из их основных физических свойств, является их способность рассеивать падающий на них свет, что проявляется как эффект мутности. Как известно, мутность (г) - это оптическая плотность (OD) рассеивающей среды, приведенная к единице длины оптического пути (L) т OD/L. В связи с этим, в качестве аттестуемой характеристикой ОСО мутности была принята оптическая плотность, безразмерная величина.
Для установления значения аттестуемой характеристики проводили многократные измерения оптической плотности: 10 групп измерений (р=10) в условиях промежуточной прецизионности (по фактору «время»). На каждом уровне промежуточной прецизионности выполнялось по 3 измерения (п=3) в условиях повторяемости (Р 50.2.058-2007, п. 7.3.3.2) [95].
Результаты исследований по определению оптической плотности материала опытной партии ОСО мутности, полученные в условиях промежуточной прецизионности по фактору «время», представлены для ОСО 10 МЕ в таблице 17.
В соответствии с алгоритмом обработки результатов измерений, представленным в Программе испытаний ОСО мутности [88], рассчитывали аттестованное значение ОСО мутности бактериальных взвесей и стандартную неопределенность аттестованного значения . В таблице 19 приведены результаты статистической обработки данных, полученных при установлении аттестованного значения ОСО мутности (10 МЕ, 5 МЕ) в условиях промежуточной прецизионности по фактору «время».
Наименование образца Число уровнейпромежуточнойпрецизионности,р Число измеренийв условияхповторяемости,n Стандартноеотклонениеповторяемости,Sr (Sr,отн, %) Стандартное отклонениепромежуточнойпрецизионности,SR(T)(SR(T), отн,%)
Приемлемость результатов измерения значения аттестуемой характеристики для ОСО 10 МЕ и 5 МЕ, полученных с использованием валидированной методики, оценивали с помощью критерия хи-квадрат, проверяя выполнение неравенств (12) и (13). В случае их выполнения к расчетам принимали все результаты измерения.
Таким образом, критерий выполняется. Следовательно, повторяемость результатов для всех уровней промежуточной прецизионности считали удовлетворительной и для дальнейшей обработки принимали результаты, полученные на всех уровнях. Таким образом, критерий выполняется. Следовательно, повторяемость результатов для всех уровней промежуточной прецизионности считали удовлетворительной и для дальнейшей обработки принимали результаты, полученные на всех уровнях.
Значения критерия хи-квадрат, рассчитанные по экспериментальным данным, не превышали табличные как для измерений в условиях повторяемости, так и для измерений в условиях промежуточной прецизионности. Следовательно, все полученные результаты измерений приемлемы по критерию хи-квадрат. Таким образом, аттестованные значения ОСО мутности оценивали как среднее арифметическое по всем результатам. Аттестованное значение оптической плотности материала экземпляра ОСО мутности 10 МЕ равно 0,46; аттестованное значение оптической плотности материала экземпляра ОСО мутности 5 МЕ равно 0,23.
Оценка составляющих расширенной неопределенности значения аттестуемой характеристики ОСО мутности
В соответствии с ИСО 35, РМГ 93-2009, ГОСТ 8.694-2010 основными составляющими неопределенности значения аттестованной характеристики являются способ установления значения, неоднородность и нестабильность материала стандартных образцов [25;102;147]. Оценка неопределенности от способа установления значения аттестованной характеристики
Неопределенность от способа установления аттестованного значения включает составляющие неопределенности используемой валидированной методики и МСО ВОЗ ( ). В соответствии с РМГ 93-2009, значение неопределенности от способа установления аттестованного значения с использованием эталона, рассчитывают по формуле:
Для этого необходимо знать «значения расширенной неопределенности U() с указанием коэффициента охвата k для исключенных систематических эффектов и стандартного отклонения результатов измерений в условиях повторяемости(r» (п. 8.3.2.1) [102]. МСО мутности ВОЗ, который использовали при аттестации ОСО мутности, сопровождается сертификатом без указания неопределенности. Срок годности его не ограничен, данная серия МСО мутности ВОЗ используется с 1975 г.
Поэтому воспользоваться алгоритмом РМГ 93-2009 и оценить неопределенность от использования эталона по формуле (54) нет возможности.
Мы оценили неопределенность, обусловленную МСО мутности ВОЗ по разбросу значений оптической плотности 5 образцов взвесей, приготовленных в визуальном сравнении с МСО мутности ВОЗ. Это косвенная оценка, так как по инструкции МСО мутности ВОЗ можно использовать только визуально, и напрямую измерить оптическую плотность МСО мутности ВОЗ нет возможности. Результаты приведены в таблице 20.
