Содержание к диссертации
Введение
1. Литературный обзор 7
1.1. Нейтронозахватная терапия 8
1.1.1. Бор-нейтронозахватная терапия 11
1.1.2. Препараты для БНЗТ 12
1.1.3. Основные типы полиэдрических соединений бора 13
1.1.4 Додекагидро-клозо-додекаборат и его производные 14
1.1.5 Бис(дикарболлид) кобальта и его производные 18
1.1.6 Молекулы-транспортеры для атомов 10В 20
1.2. Фото- радиосенсибилизаторы для ФД-БНЗ терапии рака на основе порфиринов 22
1.2.1. Конъюгаты синтетических ди- и тетрагидропорфиринов с полиэдрическими соединениями бора 22
1.2.2. Конъюгаты природных порфиринов и хлоринов с полиэдрическими соединениями бора 35
1.2.3 Конъюгаты природных порфиринов с борными полиэдрами 35
1.2.4 Конъюгаты природных хлоринов с борными полиэдрами 40
1.3. Заключение, 44,
2. Обсуждение результатов 45
2.1 Синтез производных хлорина еб с борными полиэдрами 47
2.1.1 Синтез борированных хлоринов с использованием реакции Соногаширы .49
2.1.2. Синтез борсодержащих конъюгатов с использованием Си(1)-катализируемой реакции 1,3-диполярного циклоприсоединения 52
2.1.3. Синтез борсодержащих конъюгатов с использованием реакции нуклеофильного замещения в оксониевых производных бис(дикарболлида) кобальта 53
2.2. Синтез борсодержащих циклических имидов хлоринового и бактериохлоринового рядов 55
2.2.1. Синтез борированных конъюгатов на основе аминозамещенных циклоимидов хлоринового ряда 56
3.3. Оценка биологической активности синтезированных конъюгатов 62
3. Экспериментальная часть 64
Выводы 85
- Фото- радиосенсибилизаторы для ФД-БНЗ терапии рака на основе порфиринов
- Конъюгаты природных хлоринов с борными полиэдрами
- Синтез борсодержащих циклических имидов хлоринового и бактериохлоринового рядов
- Оценка биологической активности синтезированных конъюгатов
Введение к работе
Бор-нейтронозахватная терапия (БНЗТ) рака - перспективный метод лечения онкологических заболеваний. Метод основан на способности изотопа 10В, при поглощении медленных нейтронов, распадаться на частицы с высокой энергией, которые избирательно поражают лишь те клетки, которые содержат достаточное количество борсодержащего вещества. К сожалению, соединения бора не обладают высокой селективностью накопления в опухоли. Идея создания новых препаратов для БНЗТ рака заключается в синтезе конъюгатов борных кластеров с различными биологически активными соединениями, которые способны хорошо проникать в опухолевые клетки и удерживаться в них. В связи с этим, большой интерес представляют порфирины и их производные, которые, помимо возможности селективного накопления в раковых клетках, могут при облучении светом вызывать фотодинамическое повреждение опухоли. Этот факт открывает дополнительные возможности в использовании порфирин-борных конъюгатов для комбинированной фотодинамической (ФДТ) и бор-нейтронозахватной терапии рака. Перспективными компонентами для этих целей могут служить производные хлорофилла а и бактериохлорофилла а в связи с их интенсивным поглощением в длинноволновой области электронного спектра, возможностью химической модификации боковых заместителей, низким уровнем токсичности и быстрым выведением из организма.
Таким образом, разработка методов получения подобных конъюгатов является актуальным научным исследованием в области ФДТ-БНЗТ рака.
Фото- радиосенсибилизаторы для ФД-БНЗ терапии рака на основе порфиринов
С целью повышения селективности доставки вещества в опухоль, аналогичным образом был синтезирован несимметричный аналог, несущий три кобальткарборановых полиэдра и свободную алкинильную группу 68 (рис. 20). Авторы отмечают, что к последней, используя «click» реакцию, можно присоединить различные маркеры, тройные к опухолям. Для проверки этого факта, был синтезирован конъюгат содержащий пептид активатора транскрипции ВИЧ 69. Биологические испытания на клетках НЕр2 показали, что конъюгаты 63 - 65 не проявляют темновую токсичность при изученных концентрациях ( 10тМ) [47], а благодаря направленному транспорту за счет пептида активатора транскрипции ВИЧ концентрация бора в опухолевых клетках для соединения 69 увеличилась почти в 4 раза без изменения темповой токсичности. Гидрирование одной из двух кросс-сопряженых двойных связей в порфириновом макроцикле приводит к сдвигу максимума поглощения в ближнюю инфракрасную область спектра. Известно, что именно в этой области поглощают современные фотосенсибилизаторы для ФД и ФДТ рака. Создание борных конъюгатов с хлоринами позволяет совместить ФДТ и БНЗТ, что значительно повысит эффективность противораковой терапии. Несмотря на то, что основные работы по синтезу длинноволновых фотосенсибилизаторов проводятся в ряду природного хлорофилла а имеется несколько работ по синтезу подобных коньюгатов на основе синтетических дигидропорфиринов. Схема 12. Синтез борсодержащих хлоринов. Так, из известного карборанилпорфирина 52 (рис. 13) были получены хлорины 72 и 73, несущие 4 югозо-карборановых или 4 ныдо-карборановых полиэдра, соответственно (Схема 12) [48, 49]. Водорастворимый хлорин 73 прглощает при 642 нм (е=29300), имеет низкую темновую токсичность, но обладает ярко выраженной световой токсичностью.
Биологические испытания показали, что карборанилхлорин 73 локализиется в лизосомах и захватывается опухолевыми клетками глиомы в значительно большей степени, чем хлорин Основываясь на положительных результатах, полученных при использовании синтетического хлорина 73, был синтезирован хлорин 75 с общим выходом 48% (Схема 13) [50]. Реакция фторированного ТФП 74 с CH3NHCH2COOH (JV-метилглицин) и параформальдегидом в толуоле приводила к соответствующему хлорину, который реагировал с избытком І-меркстто-о-карборана и К2СО3 в диметилформамиде при комнатной температуре, давая смесь частично деборонированного тетра(о-карборанилтио)хлорина. Для полной деборонизации использовался KF. Конъюгат 75 хорошо растворяется в полярных органических растворителях, таких как метанолу этилацетат, ТГФ, ДМСО и ДМФА, и ограниченно растворим в воде. Установлено, что препарат не имеет темновой токсичности (до 100 тМ) и обладает ярко выраженной ФДТ активностью в экспериментах и in vitro и in vivo. Несмотря на большое количество работ по синтезу борсодержащих коньюгатов в ряду синтетических тетрапиррольных соединений, многие исследователи отдают предпочтение природным порфиринам, из-за их более низкой токсичности, высокой биодеградируемости и доступности исходного материала. В 90-х годах были синтезированы первые борсодержащие аналоги природных порфиринов ВОРР 76 [51] и VCDP 77 [52], полученные функционализациеи протопорфирина IX (рис. 21). Биологические испытания показали, что ВОРР селективно локализуется в опухолях, достигая концентраций препарата «опухоль.-кровь» 400:1. С помощью конфокальной микроскопии было установлено, что конъюгат 76 преимущественно локализуется в митохондриях, а не в лизосомах, как большинство синтетических порфиринов. Однако, он проявлял сильную темновую токсичность, в связи с чем его использование ограничено [53]. Несмотря на это ВОРР остается одним из самых исследуемых препаратов в БНЗТ для различных типов опухолей, а его структура является основой для синтеза новых конъюгатов. Другой способ снизить действующую дозу вещества — заставить клетку сконцентрировать его в максимально уязвимом месте — ядре. Для обеспечения проникновения вещества в ядро клетки было предложено ввести в молекулу карборансодержащего порфирина пептид.
Для этого диметиловый эфир ВОРР 76 гидролизовался в мягких условиях с образованием двух изомеров, которые, не разделяя, вводили в реакцию образования пептидной связи. Антиген SV40 Т был присоединен к порфирину через амидный линкер между остатком пропионовой кислоты и остатком глицина в пептиде. Биологические испытания на клетках показали, что конечный порфирин 79 преимущественно связывается с липопротеинами низкой плотности и потенциально был способен проникать в ядро (рис. 23) [55]. Опыт в области ФДТ рака показывает, что димерные фотосенсибилизат оры являются более эффективными по сравнению с мономерами. В случае борированньгх сенсибилизаторов был синтезирован ряд порфириновых димеров 80, 81 (рис. 24) [56]. Два борсодержащих протопорфирина IX были связаны в положении 8 макроцикла простой эфирной или углерод-углеродную связями. В работе авторы отмечают, что 80 оказался неустойчивым в условиях кислого гидролиза, а использование основания было недопустимо, ввиду образования нидо-формы карборана, которая, как отмечается, хотя и дает хорошую растворимость в воде, однако сильно увеличивает токсичность вещества. Внимание исследователей привлекают и металл окомплексы природных порфиринов. Например, в группе Матсумуры (Япония) синтезировали марганецсодержащий борированный природный порфирин - STA-BX909 82 реакцией додекаборанил [10Ві2]-тиопропионил хлорида и 8-аминоамидинометил-13,17-бискарбокси-этил-3-винил-2,7,12,18-тетраметил-порфирината марганца (III) (рис. 26). Полученный конъюгат 82 не только имеет минимальную фотоцитотоксичность, но и перспективен как агент в магнитно-резонансной томографии. В испытаниях in vivo концентрационное отношение бора «опухолыкровь» составляло 6:1 при общей дозе 45 мг/кг опухоли, при этом концентрация атомов бора в опухоли достигала 3.5 мкг/г [58].
Конъюгаты природных хлоринов с борными полиэдрами
Как было сказано выше, основное количество работ в области конъюгатов «хлорин-борный полиэдр» основывается на использовании производных хлорофилла а. Действительно, природные хлорины и бактерихлорины обладают рядом достоинств, необходимых для создания высокоэффективных радиофотосенсибилизаторов, а именно, максимум поглощения у них лежит в области 650 - 850 нм, что соответствует окну максимальной прозрачности тканей для света. Другое достоинство заключается в доступности исходного сырья: биосинтез данных пигментов составляет миллионы тонн в год, а методы выделения и очистки достаточно оптимизированы. Активация пропионового остатка пирофеофорбида а оксолилхлоридом позволила получить ряд клозо-додекаборатсодержащих производных. Для регулирования амфифильности соединения в положение 3 макроцикла вводились насыщенные; углеводородные заместители с углеродной цепью, содержащей от 3 до 9 атомов 88а-е (Схема 15). Биологические свойства полученных хлоринов изучены на клетках V79. Конденсацией пирофеофорбида а 89 с различными функциональными производными карборана получены новые карборанилхлорины 90a-d (Схема 16) [60]. Активацию карбоксильной группы проводили Вос-ангидридом в системе хлористьш метилен - пиридин с добавлением ДМАП. Изучение цитотоксичности соединений проводилось на неопухолевых клетках - фибробластах человеческой кожи и на клетках рака толстой кишки. Соединения не показали цитотоксичности по отношению к неопухолевым клеткам. Для раковых клеток наиболее токсичным оказалось нидо-производные 90Ь и 90а, которые обладали умеренной токсичностью, а для соединений 90с и 90d цитотоксические эффекты не наблюдались. Для исследования зависимостей «структура-активность» был синтезирован ряд борированных производных хлорина еб и их металлокомплексов (Схема 17). Синтез заключался во взаимодействии феофорбида а 91 с диаминоалканами и аминоспиртами, к которым в дальнейшем присоединялся активированный монокарборан.
Все металлокомплексы оказались водорастворимыми, показали низкую темновую токсичность ( 10 мкМ), кроме комплекса с цинком, для него токсичность составила 6,5 мкМ. Отмечается, что соединения накапливаются в цитоплазме, не проникая в ядро, имеют хорошие спектральные характеристики и могут использоваться как эффективные препараты для ФДТ [62]. В продолжении работы этими же авторами были синтезированы производные хлорина еб, несущие два ортокарборановых фрагмента. Как отмечается, это позволит увеличить эффективность комбинированной ФДТ-БНЗТ. Стадии синтеза включали раскрытие циклопентанонового кольца диаминоэтаном, удлинение цепи с помощью янтарного ангидрида и последующую активацию карбоксильной группы ДЦК. К активированной кислоте присоединяли ортокарборанамин. Далее проводили мягкий кислотный гидролиз метилпропионатного фрагмента в положении 17 макроцикла, с последующим присоединением еще одной молекулы карборана (Схема 18). Общий выход продукта, однако, не превысил 5% [63]. Обзор литературных данных последних лет показывает, что синтез и изучение карборанилсодержащих тетрапиррольных соединений представляет собой развивающуюся область биоорганической химии. Однако, количество работ, связанных с созданием конъюгатов на основе порфиринов и хлоринов, невелико, а описания производных пурпуринимидов и бактериопурпуринимидов с полиэдрическими соединениями бора отсутствуют. Обладая полосой поглощения в ближней ИК области спектра, подобные конъюгаты наиболее полно раскроют возможности совмещенной ФДТ-БНЗТ. Исходя из этого, работы в области синтеза препаратов для комбинированной ФДТ -БНЗТ рака актуальны в настоящее время. В настоящее время активно развиваются два бинарных метода лечения рака - ФДТ и БНЗТ. Преимуществом ФДТ является высокая селективность поражения новообразования, основанная на том, что фотосенсибилизатор накапливается преимущественно в опухоли, а его активация происходит только при облучении светом с определенной длиной волны.
Основное ограничение ФДТ заключается в невысокой глубине проникновения света в ткань. Для распространенных препаратов на основе протопорфирина IX глубина воздействия на опухоль не превышает нескольких миллиметров. Использование в качестве фотосенсибилизаторов производных природных хлоринов и бактериохлоринов позволяет расширить этот диапазон до двух сантиметров, Являясь, как и ФДТ, бинарным методом, БНЗТ полностью снимает ограничение на глубину терапии, но соединения бора обладают низкой селективностью по отношению к опухоли. Синтез конъюгатов производных хлорофилла а и бактериохлорофилла а с полиэдрическими соединениями бора позволяет не только увеличить селективность БНЗТ, но и осуществить комбинированную фотодинамическую и бор-нейтронозахватную терапию рака. Важным требованием к подобным конъюгатам является их способность к проникновению в клетку. В настоящей работе для установления структурно-функциональных зависимостей были синтезированы соединения, отличающиеся типом борного полиэдра, спейсером, а также макроциклом (Рисунок 1). В качестве борного компонента использовались два типа полиэдрических гидридов бора: /с/7озо-докекаборат и бис(дикарболлид) кобальта. Преимущество первого заключается в большей гидрофильности, что позволяет, в перспективе, создавать водорастворимые препараты, а 18 атомов бора в бис(дикарболлиде) позволят значительно увеличить эффективность БНЗТ. Важно отметить, что получение и химические модификации данных борных кластеров доступны и отработаны в ИНЭОС РАН в группе проф. Брегадзе В.И. Известно, что тип и длина спейсера между компонентами молекулы значительно влияют на биологическую активность последней. В связи с этим в настоящей работе были использованы методы синтеза, позволившие получить нам линкеры с различным типом, длиной и жесткостью.
Синтез борсодержащих циклических имидов хлоринового и бактериохлоринового рядов
Использование в качестве хлоринового компонента пурпуринимида и бактериопурпуринимида может увеличить эффективность комбинированной ФДТ-БНЗТ, поскольку максимумы поглощения данных макроциклов смещены в ближнюю ИК-область спектра, что повышает эффективность ФДТ рака. В качестве исходных соединений были использованы два аминозамещенных циклоимида 18 и 19. В первом случае аминогруппа находится на удалении от имидного цикла, во втором непосредственно при атоме азота циклоимида (схема 7). Исходным соединением в синтезе циклоимидов являлся пурпурин 18 17, который получали алломеризацией хлорофилла а Обработка ангидрида 17 этилендиамином или гидразином с последующей циклизацией в кислых условия или при нагревании приводила к искомым циклоимидам 18 и 19, соответственно. В качестве метода синтеза была использована реакция нуклеофильного замещения с раскрытием диоксанового кольца в соединении 14. Количество присоединенных к амину 18 борных кластеров так же, как и было отмечено ранее (раздел 1.3), зависит от условий проведения реакции. В присутствии DIPEA происходит присоединение двух борных кластеров с образованием конъюгата 20. В отсутствии основания образуется только монозамещенный циклоимид 21. В случае N-аминоциклоимида 19 роль основания на характер протекания реакции и состав продуктов еще больше возрастает (Схема 8). В отсутствии основания, соединения 14 и 19 не реагируют с образованием конъюгата 23. В тоже время, при добавлении DIPEA, реакция успешно проходит, давая дизамещенный продукт 22 с выходом 71%. Обнаруженные различия в реакционной способности хлоринов 18 и 19, по-видимому, связаны с меньшей нуклеофильностью аминогруппы, которая в соединении 19 непосредственно присоединена к циклическому имиду. Подобный характер протекания реакции алкилирования экзоциклической аминогруппы в пурпуринимиде 19 бьш отмечен в наших ранних работах: в результате взаимодействия с йодметаном нам удавалось выделить только моно- и диметиламинопурпуринимиды, образование четвертичной аммониевой соли нами не наблюдалось.
Наиболее перспективными для комбинированной ФДТ-БНЗТ являются борсодержащие сенсибилизаторы на основе циклоимидов бактериохлорина. Эти макроциклы поглощают в области 800 - 830 нм (Рисунок 6). Для этого диапазона света прозрачность биологической ткани достигает максимума, что позволяет воздействовать на опухоль расположенную на глубине до 2 см. Еще одна возможность использования, , фотосенсибилизаторов с длинноволновым максимумом поглощения — лечение сильно пигментированных новообразований, таких как меланома. Нами был осуществлен синтез борсодержащих конъюгатов бактериохлорина, с использованием в качестве ключевого соединения JV-аминоциклоимида бактериохлорина 28 (Схема 10). Последний синтезировали исходя из бактериопурпурина 27, который получали алломеризацией бактериохлорофилла а 26, выделенного экстракцией из биомассы пурпурных бактерий Rhodobacter capsulatus. Синтез конъюгатов с амидной связью между iV-аминобактериопуринимидом и борсодержащими карбоновыми кислотами был осуществлен с использованием различных методов активации карбоксильной группы. Конъюгат 30 получали, действуя на исходный амин 28 хлорангидридом додекаборатсодержащей карбоновой кислоты 29 в присутствии триэтиламина, в то время как конъюгат 32 был получен в результате взаимодействия того же циклоимида с кислотой 31, активированной дициклогексилкарбодиимидом. Однако эти подходы оказались малоэффективными из-за низких выходов целевых продуктов (не более 20%). Это, по-видимому, связано как со стерическими факторами, так и с меньшей нуклеофильностью экзоциклической аминогруппы. Более эффективным оказался метод, ранее хорошо зарекомендовавший себя при получении борированных хлоринов и пурпуринимидов (разделы 1.3. и 2.1.). При кипячении циклоимида 28 с диоксониевым производным бис(дикарболлида) кобальта в ацетонитриле с добавлением DIPEA был получен конъюгат 33 с двумя борными кластерами с выходом 64% (схема 11).
Максимум поглощения в электронном спектре конъюгата 33 совпадал с максимумом поглощения исходного циклоимида 28 и находился в области 830 нм. Биологические испытания проводились на клетках аденокарциномы легкого человека А549, используя в качестве растворителя эмульсию 5% кремофора (CrEL) в воде. Все исследованные вещества проникают сквозь клеточную мембрану и накапливаются в цитоплазме и потенциально могут использоваться как БНЗТ-ФДТ агенты. Однако, для повышения эффективности препаратов требуется, чтобы отношение концентрации вещества в клетке к концентрации в межклеточнойл среде бьшо максимальным, данное отношение называется коэффициентом накопления. Цель биологических исследований -поиск соединения с максимальным значением последнего, а также выявление зависимостей «структура-активность». Результаты исследований приведены в таблице 1. Растворители были очищены и подготовлены по стандартным методикам. Все реакции с производными хлоринов проходили при защите от прямого света. Электронные спектры получены на спектрофотометре Jasco - UV 7800 в хлороформе. Спектры ЯМР сняты в CDCb и ацетоне-Бб на спектрометре Bruker DPX300. Масс-спектры получены на Bruker Ultraflex TOF/TOF методом MALDI с использованием в качестве матрицы 2,5-дигидрокисибензойная кислота (DHB), на спектрометре Mcromass Quattro micro с ионизацией в электронном спрее и на Bruker Daltonics Autoflex II методом MALDI с использованием в качестве матрицы транс-2-[3-(4-трет-бутилфенил)-2-метил-2-пропилиден]малононитрил (DCTB). Для колоночной хроматографии применяли силикагель 40/60 (Merk). Для препаративной ТСХ использовали силикагель 60 (Merck) на пластинах 20x20 с толщиной слоя 1 мм. Аналитическую ТСХ проводили на пластинах Kieselgel 60 F245 (Merck). Феофорбид а (2), пурпурин 18 (17), бактериопурпурин (27), получали по известным методикам [64-66]. Соединения 5, 7, 8, 14, 29 и 31 синтезированы в ИНЭОС РАН в лаборатории д.х.н. проф. Брегадзе В.И.
Оценка биологической активности синтезированных конъюгатов
К раствору 40 мг (0.07 ммоль) пурпурина 18 в 50 мл смеси хлороформ-метанол (1: 1) добавляют 12 мкл (0.24 ммоль) гидразингидрата. Полученный раствор перемешивают в течение 48 ч при комнатной температуре. Реакция контролируется спектрофотометрически, конечное смещение полосы Q в область 703 нм соответствует завершению реакции. В реакционную массу добавляют 50 мл IN раствор НС1 и перемешивают в течение 2 ч. Смесь переносят в делительную воронку. Нижний хлороформный слой интенсивно-пурпуриного цвета отделяют. Верхний водный слой коричнево-зеленого цвета экстрагируют хлороформом до полного обесцвечивания (5x10 мл). Объединенные хлороформные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают до объема 10 мл, после чего добавляют 5 мл эфирного раствора диазометана и перемешивают 40 мин при комнатной температуре. От избытка диазометана избавляются, добавляя уксусную кислоту в ловушку роторного испарителя при отгонке растворителя в вакууме. Продукт очищают с помощью препаративной ТСХ на силикагеле в системе хлороформ-метанол 25:1. Выход: 28 мг (70%). Н ЯМР, 6: 9.48 (с, 10-Н), 9.1 (с, 5-Н), 8.42 (с, 20-Н), 5.7 (с, NH2), 5.28 (д, J= 8 Гц, 17-Н), 4.32 (м, 18-Н), 3.72 (м, 12-СН3 и З -СНг), 3.6 (м, 175-СН3 и %1-СЩ, 3.25 (с, 2-СН3), 3.18 (с, 7-СНз), 2.78 (м, 17 -СН2), 2.48 (м, 172-СН2), 1.72 (д, J= 8 Гц, 18-СН3), 1.55 (д, J= 8 Гц, 82-СН3), 0.4 (с, NH), 0.2 (с, NH). Электронный спектр (СНС13), Ятах, нм (є, M W1): 420 (133800), 549 (21100), 640 (7700), 700 (41000). Метиловый эфир N-аминобактериопурпуринимида (28) К раствору. 30 мг (0.05 ммоль) бактериопурпурина (27) в 10 мл пиридина добавляют раствор 250 мкл (5,14 ммоль) гидразингидрата в 1 мл пиридина и перемешивают в течение 10 мин. при 20С. Ход реакции контролируют спектрофотометрически. Гипсохромное смещение основной полосы поглощения в область 770 нм соответствует раскрытию ангидридного цикла и образованию гидразида. Затем, в реакционную массу добавляют 50 мл хлороформа, разбавляют 50 мл IN раствора НС1 и перемешивают в течение 10 мин. Реакционную смесь переносят в делительную воронку и экстрагируют хлороформом (3x30 мл).
Хлороформные экстракты объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают под вакуумом. Остаток растворяют в 10 мл смеси хлористый метилен/метанол 50:1, прибавляют 5 мл эфирного раствора диазометана и перемешивают в течение 15 минут при комнатной температуре. От избытка диазометана избавляются, добавляя уксусную кислоту в ловушку роторного испарителя при отгонке растворителя в вакууме. Продукт очищают с помощью препаративной ТСХ на силикагеле в системе хлороформ-метанол 25:1. Выход 25 мг (82%) Н ЯМР (8, м.д.): 9.2 (Н, с, 5-Н), 8.78 (Н, с, 10-Н), 8.60 (Н, с, 20-Н), 5.20 (Н, м, 17-Н), 4.30 (Н, к, J= 8 Гц, 18-Н), 4.1 (Н, м, 7-Н), 3.95 (Н, м, 8-Н), 3.70 (ЗН, с, 12-СНЗ), 3.62 (ЗН, с, 175-СНЗ), 3.58 (ЗН, с, 2-СНЗ), 3.20 (ЗН, с, 32-СНЗ), 2.75 (2Н, м, 81-СН2), 2.4 (2Н, м, 172-СН2), 2.0 (2Н, м, 171-СН2), 1.85 (ЗН, д, J=l Гц, 7-СНЗ), 1.70 (ЗН, д, J=8 Гц, 18-СНЗ), 1.12 (ЗН, т, J=l Гц, 82-СНЗ), -0.25 (Н, с, NH), -0.5 (Н, с, NH). Электронный спектр (СНСІз), w, нм (є, M"W): 364 (35000), 416 (18000), 552 (13800),834(51400). Спектр (MALDI), m/z: 610 (ІУҐ). Триазолсвязанный конъюгат хлорина Єб с клозо-додекаборат анионом (9) К раствору 10 мг (0.015 ммоль) цинкового комплекса (ЗЬ) в 5 мл ацетонитрила добавляют 8 мг азида клозо-додекабората (7) (0.016 ммоль), 10 мол. % йодида одновалентной меди и 20 мкл диизопропилэтиламина. Время реакции составляет 4 часа. Контроль над ходом реакции ведется при помощи ТСХ. Для удаления атома цинка раствор выливают в делительную воронку с 50 мл IN водного раствора НС1, встряхивают, разбавляют 300 мл воды и экстрагируют хлороформом (3x20 мл). Органическую фазу отделяют, высушивают над сернокислым натрием, растворитель отгоняют под вакуумом. Продукт очищают с помощью препаративной ТСХ на силикагеле в системе хлороформ-метанол 25:1. Выход составил 10 мг (60%). Н ЯМР (CDC13, 5, м.д.): 9.67 (Н, с, 5-Н), 9.62 (Н, с, 10-Н), 8.81 (Н, с, Тг), 8.40 (Н, с, 20-Н), 8.07 (Н, дд, /=18 Hz, /=12 Hz, З -Н), 7,42 (Н, уш. с, 132-NH), 6.33 (Н, дд, /=18 Hz, 1.5 Hz, Е-32-Н), 6.12 (Н, дд, /=12 Hz, 1.5 Hz, Z-32-H), 5.53 (H, д., J=19 Hz, 15,a-CH2), 5.25 (H, д., /=19 Hz, 151а-СН2), 5.03 (2Н, дд, 133-СН2), 4.71 (2Н, т, J=4.5Hz, 137-СН2), 4.47 (Н, м, 18-Н), 4.39 (Н, д, J= 10 Hz, 17-Н), 3.99 (2Н, т, J=4.5Hz, 138-СН2), 3.79 (2Н, т, J=8Hz, 1310-СН2), 3.75 (2Н, т, /=8Hz, 13П-СН2), 3.72 (ЗН, с, 152-СООСН3), 3.70 (2Н, м, 8 0). 3.63 (ЗН, с, 12-СНз), 3.51 (ЗН, с, 173-СООСН3), 3.49 (ЗН, с, 2-СН3), 3.31 (ЗН, с, 7-СН3), 3.04 (16Н, м, Т СНгСНгСНгСНз), 2.55 (Н, м, \1Х-СЯ2), 2.20 (ЗН, м, 17 -CH2, 172-СН2), 1.72 (ЗН, д, 18-СНз), 1.71 (ЗН, т, /=8 Hz, 82-СН3), 1.46 (16Н, м, ІчҐСНгСЩСНгСНз), 1,29 (16Н, м, І СНгСНзСНзСНз), 0.88 (24Н, м, Ы\;Н2СН2СН2СНз), -1.64 (Н, с, NH), -1,90(Н, с, NH). ЭлеКТрОННЫЙ СПеКТр (СНСІз), max, НМ (є, NT CM"1): 400, 525, 607, 665 (1:0.15:0.06:0.36) Масс-спектр (ESI), m/z: 1175 ([M2 ")- ИК (КВг, см-1): 2484 (В-Н), 1734 (С=0 эфир), 1650 (амид-1), 1520 (амид-П). Триазолсвязанный конъюгат хлорина Єб с анионом бис(дикарболлид) кобальта (10) К раствору 20 мг (0.03 ммоль) цинкового комплекса (ЗЬ) в 5 мл ацетонитриле добавляли 15 мг азида кобальт бис-дикарболлида (8) (0.03 ммоль), 10 мол. % йодида одновалентной меди и 50 мкл диизопропилэтиламина. Реакцию проводили в течение трех часов.
Контроль над ходом реакции ведется при помощи ТСХ. Для удаления атома цинка раствор выпивают в делительную воронку с 50 мл IN водного раствора НС1, встряхивают, разбавляют 300 мл воды и экстрагируют хлороформом (3x20 мл). Органическую фазу отделяют, высушивают над сернокислым натрием, растворитель отгоняют под вакуумом. Продукт очищают с помощью препаративной ТСХ на силикагеле в системе хлороформ-метанол 25:1. Выход 23 мг (68%). Н ЯМР (CDC13, 5, м.д.): 9.60 (Н, с, 5-Н), 9.58 (Н, с, 10-Н), 8.80 (Н, с, Тг), 8.35 (Н, уш. с, (СНз)зШ), 8.05 (Н, дд, J=18 Hz, 12 Hz, З -Н), 7.99 (Н, с, 20-Н), 7.70 (Н, уш. т, 132-NH), 6.34 (Н, дд, J=18 Hz, 1.5 Hz, Е-32-Н), 6.14 (Н, дд, J=\2 Hz, 1.5 Hz, Z-32-H), 5.30 (H, д., ./=19 Hz, 151а-СН2), 5.05 (Н, д., J=19 Hz, 151а-СН2), 5.02 (2Н, уш. дд, 133-СН2), 4.58 (2Н, уш. т, 137-СН2), 4.47 (Н, к, 18-Н), 4,35 (Н, д, J= 10 Hz, 17-Н), 4,01 (4Н, с, СН карб.), 4.88 (2Н, уш. т, 138-СН2), 3.75 (ЗН, с, 152-СООСН3), 3.76 (2Н, м, Sl-CU2), 3.65 (2Н, уш. т, 1310-СН2), 3.60 (ЗН, с, 12-СНз), 3.49 (ЗН, с, 173-СООСН3), 3.43 (ЗН, с, 2-СН3), 3.35 (2Н, т, 13й-СН2), 3.26 (ЗН, с, 7-СНз), 2.91 (9Н, д, ШЩіІЯН), 2.78 (Н, м, 17 -СН2) 2.58 - 2.91 (ЗН, м, П -СНз, 172-СН2), 1.70 (ЗН, д, 18-СН3), 1.02 (ЗН, т, J= 8 Hz, 82-СН3), -1.52 (Н, с, NH), -1,70 , (H,c,NH). Электронный спектр (СНСЬ), Xmax, нм (є, M W1): 401, 527, 604, 665 (1:0.15:0.06:0.36). Масс-спектр (ESI), m/z: 1115 (М"). ИК (КВг, см"1): 2550 (В-Н), 1732 (ОО эфир), 1653 (амид-1), 1534 (амид-П). Алкинсвязанный конъюгат хлорина ее с анионом бис(дикарболлид) кобальта (6) Смесь 22 мг (0,025 ммоль) (4) и 23 мг (0.05 ммоль) (5), 8 мг (0.03 ммоль) трифенилфосфина и 3 мг (0,03 ммоль) Pd2(dba)3 в смеси бензол:В1РЕА 5:1 нагревают до 60С в течение 48 часов. Ход реакции контролируют с помощью ТСХ. По окончании реакции растворитель отгоняют под вакуумом.
