Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоящее время алкоголизм как медико-социальная проблема приобрёл характер национального бедствия (Медведев Д.А., 2009). Статистика свидетельствует об ухудшении и без того серьёзного положения по заболеваемости алкоголизмом у мужчин. Ещё более тяжёлыми выглядят статистические данные, касающиеся распространённости алкоголизма среди женщин: в последнее десятилетие отмечается неуклонный ежегодный рост количества таких больных (Альтшулер В.Б., 2010). При этом у детей, рождённых от женщин, употребляющих алкоголь, в 25%-45% случаев может проявляться симптомокомплекс известный как «фетальный алкогольный синдром» или другие, так называемые «нарушения фетального алкогольного спектра». На протяжении достаточно длительного периода времени проводятся исследования, раскрывающие патогенетические механизмы и клинические проявления фетального алкогольного синдрома (Таболин В.А., Урывчиков Г.А., 1986; Скосырева А.М. и др., 1987; Тимошенко Л.В. и др., 1987; Таболин В.А. и др., 1988; Карелина Н.Р. и соавт., 2010; Курч Н.М. и соавт., 2011; Lemoine P. et al., 1968; Clarren S.K. et al., 1978; ., ., 1983; Sherwin B.T. et al., 1979; Sreenathan R.N., Padmanabhan R., Singh S., 1982, 1983; ., 1984; Padmanabhan R., Hameed M.S., 1988; Ponappa B.C., Rubin E., 2000; Burd L. et al., 2008). В тоже время, данные об изменениях структуры иммунных органов в результате пренатальной алкогольной интоксикации до сих пор остаются отрывочными и противоречивыми (Надыров Н.А., 1991; Торбек В.Э., 1995, 1999, 2010; Свирин С.В., 2010; Ewald S. et al., 1987, 1988, 1991 1993; Wong C.M. et al., 1992; Chiapelli F. et al., 1992; Budec M. et al., 1992, 1996).
Тимус – первичный орган лимфоидной [иммунной] системы. Его основное функциональной назначение в структуре иммунной системы заключается в обеспечении созревания и дифференцировки Т-лимфоцитов, в том числе и в периферических иммунных органах, а также интеграции различных популяций Т-лимфоцитов и макрофагов для реализации иммунных ответов (Агеев А.К., 1973; Кемилева З., 1984; Вершигора А.Е., 1990; Сапин, М.Р., Этинген Л.Е., 1996; Фёдорова О.В., 2005; Шилко В.И. и соавт., 2009, 2010, 2011; Дьячкова И.М., 2010; Кузнецов А.В., 2011; Anderson G. et al., 1999; Lio C.W., Hsieh C.S., 2011 и мн. др.). От состояния и активности тимуса во многом зависит выраженность защитных реакций всего организма (Труфакин В.А., 1984; Сапин М.Р., Никитюк Д.Б., 2000; Gota В.В., 1984). Изучение иммунной системы в целом и, в частности тимуса, сопряжено со значительными трудностями из-за высокой лабильности структуры, особенно в период их активного функционирования (Ивановская Т.И. и др., 1996; Самусев Р.П и соавт., 1998; Сапин МР., Этинген Л.Е., 1996; Сапин М.Р. и соавт. 1994, 1999; Сапин М.Р., Никитюк Д.Б., 2000; Забродин В.А., 1994, 2002; Ерофеева Л.М., 1998, 2002; Лебединская О.В., с соавт, 2005; Мillег J., 1961; Мillег J., Dukor Р., 1967; Вurnet F., 1971; Gota В.В., 1984). В то же время любое стрессороное воздействие может вызвать значительные структурно-функциональные изменения в иммунных органах, особенно в период их становления (Сапин М.Р., Никитюк Д.Б., 2000; Selye H., 1974).
Лимфатические узлы (ЛУ), и брыжеечные в частности, являются вторичными органами лимфоидной [иммунной] системы. Различные структурно-функциональные зоны ЛУ обеспечивают выполнение основных функций – иммунологической, барьерной и транспортной (Сапин М.Р. и соавт., 1978, 1982, 1996, 2000; Бородин Ю.И. и соавт., 1992) Брыжеечные ЛУ являются самой многочисленной группой, имеющей сложную топографию, в них осуществляется лимфоотток от тонкой и бльшей части толстой кишок. Однако данные о структурной организации этой группы ЛУ у новорождённых крыс до сих пор остаются малоизученными и противоречивыми (Савицкая Т.Н., 1985; Морозова Е.В., 1996; Свирин С.В., 2010). В связи с началом энтерального питания, у новорождённых крыс эта группа ЛУ одной из первых подвергается мощной функциональной нагрузке, что приводит к их структурной перестройке, которая в результате возможных нарушений в пренатальном периоде онтогенеза не всегда может быть адекватной.
Одним из первых, Э.А. Надыров (1991) с применением современных методов исследования предпринял детальное изучение влияния пренатальной алкогольной интоксикации на тимус. Автором показано, что тимус потомства алкоголизированных во время беременности крыс характеризуется комплексом структурных и реактивных изменений, проявляющихся на органном, клеточном и субклеточном уровнях. В то же время отсутствуют данные об особенностях строения тимуса новорождённых крыс, в зависимости от длительности прегравидарной этаноловой интоксикации самок.
Изучению строения краниальных брыжеечных лимфатических узлов (КБЛУ) новорождённых крыс при воздействии этанола на самок во время беременности и на протяжении различных сроков до её наступления, посвящено исследование С.В. Свирина (2010). В работе показано, что различная длительность прегравидарной этаноловой интоксикации приводит к изменению количества, площади, формы и степени зрелости КБЛУ, а так же вызывает ряд патоморфологических нарушений в их сосудистом русле. Однако вопрос о степени выраженности изменений в лимфатических узлах в сопоставлении с нарушениях в тимусе у новорождённых крыс при алкогольной интоксикации матери не ставился и до сих нерешён.
В связи с вышеизложенным представляется в высшей степени актуальным провести комплексное исследование особенностей строения первичного (тимус) и вторичных (брыжеечные ЛУ) органов иммунной системы новорождённых крыс, развивавшихся в условиях воздействия этанола на организм матери в различные сроки до наступления беременности и на её протяжении.
Цель исследования – изучить на новорождённых крысах закономерности пренатального влияния этанола в иммуноморфологическом аспекте в зависимости от длительности прегравидарной алкогольной интоксикации самок .
Задачи исследования:
-
Определить особенности адаптации к этанолу и продолжительность беременности самок, внутриутробную и раннюю постнатальную смертность потомства крыс, а также массу новорождённых животных, в зависимости от длительности прегравидарного этанолового воздействия.
-
Установить особенности морфометрических параметров и междолевой асимметрии тимуса новорождённых крыс, в зависимости от длительности воздействия этанола на самок.
-
Изучить закономерности изменений паренхимного и соединительнотканного компонентов тимуса новорождённых крыс, в зависимости от длительности воздействия этанола на самок.
-
Определить структурные особенности тимуса новорождённых крыс, в зависимости от длительности воздействия этанола на самок.
-
Выявить основные патоморфологические изменения тимуса новорождённых крыс, в зависимости от длительности воздействия этанола на самок.
-
Установить особенности топографии, морфометрических параметров и вариантов организации паренхимы по степени её зрелости краниальных брыжеечных лимфатических узлов новорождённых крыс, в зависимости от длительности воздействия этанола на самок.
-
Выявить основные структурные изменения в краниальных брыжеечных лимфатических узлах новорождённых крыс, в зависимости от длительности воздействия этанола на самок.
-
Определить на основе полученных данных корреляционные связи морфометрических и структурных изменений в тимусе, краниальных брыжеечных лимфатических узлах, а также между ними у новорождённых крыс, в зависимости от длительности воздействия этанола на самок.
Научная новизна исследования
Впервые показано, что воздействие этанола самок крыс до наступления беременности может изменять её продолжительность. Наиболее значительное удлинение сроков беременности (на 5 дней) выявляется у самок, находившихся под воздействием этанола в течение шести месяцев до её наступления. У крыс, подвергавшихся влиянию этанола только во время беременности, а также на протяжении трёх и пяти месяцев до её наступления, роды наступали на 3 дня позже. В остальные сроки эксперимента продолжительность беременности увеличивалась на 1 день.
Впервые установлено, что показатели внутриутробной смертности в зависимости от длительности алкоголизации самок до наступления беременности изменяются. В структуре общей внутриутробной смертности преобладает доимплантационная смертность, наиболее высокие показатели которой отмечаются у крыс, получавших этанол только во время беременности, а также в течение двух и шести месяцев до её наступления. Максимальная постимплантационная смертность регистрируется у самок, подвергавшихся воздействию алкоголя на протяжении пяти месяцев до наступления беременности.
Установлено, что смертность потомства в раннем постнатальном периоде также зависит от длительности влияния этанола на организм самок. Этот показатель постепенно растёт и достигает 100% у потомства самок, получавших этанол в течение трёх месяцев до наступления беременности и на её протяжении. Затем снижается и к концу эксперимента становится минимальным.
Впервые показано, что воздействие этанола на организм самок крыс не всегда сопряжено с уменьшением массы тела их потомства: так, воздействие этанола только во время беременности, а также в течение двух и четырёх месяцев до её наступления приводит к уменьшению массы тела новорождённых крыс. Однако, у самок, получавших этанол в течение трёх и пяти месяцев до беременности, потомство имеет массу тела даже бльшую, чем у контрольных животных.
Впервые установлено, что показатели абсолютной и относительной масс тимуса новорождённых крыс также зависят от длительности прегравидарной алкоголизации самок, но при этом их изменения не всегда однонаправленные. Но вследствие длительного воздействия этанола на самок до наступления беременности показатели и абсолютной и относительной масс тимуса новорождённых крыс лежат в очень широких пределах, что позволяет выделить 2 группы животных: 1) с низкими показателями и 2) с высокими показателями масс тимуса.
Показано, что у контрольных животных тимус может состоять как из двух, так и из трёх долей. Трёхдолевая организация органа может наблюдаться и у экспериментальных животных, но только на небольших сроках эксперимента. Установлена асимметрия долей тимуса новорождённых крыс по морфометрическим показателям и клеточному составу, изменяющаяся в зависимости от длительности воздействия этанола на организм самок.
Впервые выявлены патоморфологические преобразования паренхимы тимуса новорождённых крыс, заключающиеся в появлении кровоизлияний различной степени выраженности, некрозов, железистоподобных структур и лимфоидных узелков, количественном и качественном изменении клеточного состава.
Пренатальное воздействие этанола оказывает неоднозначное влияние на развитие КБЛУ и приводит к изменениям в их количестве, форме и строении паренхимы у новорождённых крыс. Степень выраженности изменений в лимфатических узлах новорождённых крыс зависит от длительности догравидарного воздействия 15% раствора этанола на самок, но не коррелирует с ней. Наибольшие изменения в количестве, площади и степени выраженности изменений отмечаются у потомства самок, получавших этанол на протяжении трёх месяцев до наступления беременности и во время неё, наименьшие – на протяжении четырёх месяцев.
Впервые описана специфическая для пренатального воздействия этанола, морфологическая картина а изменений в тимусе.
Выявлено, что степень выраженности количественных и качественных изменений тимуса новорождённых крыс сопряжена с такими же нарушениями в КБЛУ, а так же с длительностью беременности, показателями смертности и массой тела потомства.
Впервые описаны особенности распределения CD3+ клеток у новорождённых крыс в тимусе и КБЛУ, а так же его изменение в зависимости от длительности прегравидарной этаноловой интоксикации самок.
Теоретическая и практическая значимость исследования. Полученные оригинальные данные могут служить моделью для дальнейших экспериментальных исследований о влиянии этанола на течение беременности, пре- и раннюю постнатальную смертность.
Результаты исследования значительно расширяют и дополняют существующие представления о строении тимуса и брыжеечных лимфатических узлов у новорождённых крыс, развивавшихся в условиях нормы и при воздействии этанола на организм матери.
Сведения, полученные о пренатальном влиянии этанола на тимус и краниальные брыжеечные лимфатические узлы развивающегося организма, имеют важное теоретическое значение при исследовании становления других иммунных органов в онтогенезе.
Экспериментальные данные об особенностях строения тимуса и краниальных брыжеечных лимфатических узлов новорождённых крыс, развивавшихся в условиях различной длительности этаноловой интоксикации самок до наступления беременности и на её протяжении, представляют интерес для акушерства и педиатрии, поскольку в клинической практике, как правило, не учитывается длительность употребления женщинами алкоголя.
Внедрение результатов исследования в практику. По теме диссертации опубликовано 24 научные работы, в том числе 14 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ. Основные результаты диссертационного исследования включены в учебную программу кафедр анатомии человека и гигиены окружающей среды с курсом гигиены труда, детской гинекологии и женской репродуктологии факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России; кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Минздравсоцразвития России; кафедр анатомии человека и гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Минздравсоцразвития России.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
-
Продолжительность беременности, показатели внутриутробной и ранней постнатальной смертности, количество и масса тела новорождённых крыс изменяются в зависимости от длительности прегравидарной алкоголизации самок.
-
У крыс, развивавшихся в физиологических условиях, встречается тимус, состоящий из двух, а в 21,8% случаев – из трёх долей. В строении долей наблюдается выраженная асимметрия по морфометрическим параметрам и клеточному составу. Трёхдолевая организация тимуса сохраняется и у новорождённых крыс на небольших сроках экспериментального воздействия этанола.
-
Абсолютная и относительная массы тимуса новорождённых крыс, его линейные размеры меняются, в зависимости от длительности прегравидарной алкоголизации самок, но при этом их изменения не всегда бывают однонаправленными.
-
Пренатальное воздействие этанола изменяет общее количество, форму, суммарную площадь на срезах и структуру паренхимы краниальных брыжеечных лимфатических узлов у новорождённых крыс в зависимости от длительности догравидарного этанолового воздействия на самок, но эти изменения не являются хронозависимыми.
-
В тимусе новорождённых крыс экспериментальных групп могут определяться структурные преобразования его паренхимы в виде появления некрозов, псевдогландулярных структур и лимфоидных узелков. Их обнаружение не зависит от длительности воздействия этанола на организм самок до наступления беременности. Общим патоморфологическим признаком для тимуса и краниальных брыжеечных лимфатических узлов являются количественные и качественные изменения клеточного состава и сосудистая реакция, проявляющаяся в виде кровоизлияний различной степени выраженности.
-
У потомства крыс, подвергавшихся шестимесячной прегравидарной алкоголизации определяются разнонаправленные изменения со стороны тимуса и краниальных брыжеечных лимфатических узлов, что проявляется либо в значительном увеличении показателей определяемых параметров, либо резком уменьшении их.
-
Применение многомерных методов статистического анализа для исследования структуры и силы связи между морфологическими признаками в тимусе и краниальных брыжеечных лимфатических узлах показало наличие корреляционных связей между ними.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения Д.А. Жданова (Москва, 2008 г.); VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ. (Санкт-Петербург, 2009 г.); VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009 г.); X конгрессе международной ассоциации морфологов (Ярославль, 2010 г.); конференции «Мечниковские чтения -2011» (Санкт-Петербург, 2011 г); конференции, посвящённой 70-летию со дня рождения А.К. Косоурова (Санкт-Петербург, 2011г); Joint Meeting of Anatomical Societies (Bursa, Turkey, 2011); 5 Всероссийском конгрессе «Человек и проблемы зависимостей: междисциплинарные аспекты» (Санкт-Петербург, 2011 г).
Личный вклад соискателя в разработку проблемы. Личный вклад соискателя в разработку проблемы оценивается в 80%. Автором лично произведены: разработка идеи исследования, поставлен эксперимент, анализ результатов морфометрического, гистологического и иммуногистохимического и статистического исследования, составление таблиц и построение диаграмм. В разработке проблемы принимали участие сотрудники кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития РФ: доцент С.В. Круглов, аспирант С.В. Свирин под общим консультативным руководством профессора Н.Р. Карелиной
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 367 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материал и методы исследования, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы, список литературы, приложения. Список литературы содержит 407 источников, в том числе 224 отечественных и 183 иностранных. Работа иллюстрирована 69 микрофотографиями, 194 диаграммами и снабжена 62 таблицами.
![Сравнительное исследование влияния на ткани зуба и пародонта пломбировочных материалов для устранения дефектов корня (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс]](/i/i/4287/203356.png "Сравнительное исследование влияния на ткани зуба и пародонта пломбировочных материалов для устранения дефектов корня (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс] Бойков Михаил Игоревич")