Введение к работе
Актуальность темы. Развитие современной аналитической химт характеризуется значительным возрастанием роли физических и физи ко-химических методов при определении качественного и количественного состава исследуемых объектов. Ведущее место среди таки» методов занимает хроматография, которой присуща высокая экспресс ность и селективность разделения, а также возможность осуществле ния анализа при наличии небольших количеств анализируемых образцов. Следует отметить, что современная хроматография является гибридным методом анализа, поскольку включает не только стадию разделения, но и стадию количественного определения разделенных компонентов.
Среди хроматографических методов особое место занимает тонкослойная хроматография (7СХ), которая благодаря своей простоте, чувствительности и высокой разрешающей способности стала одним из самых распространенных методов при анализе биологических объектов, в частности, в скрининге мочи на наличие в ней наркотиков и им сопутствующих веществ. Проводя разделение при исследовании большого числа проб, можно очень быстро отсортировать пробы не содержащие наркотиков и получить представление о составе проб, давших положительные результаты. В последнее время все шире и шире для анализа лекарственных препаратов в судебно-химических и химико-токсикологических лабораториях используются новые виды хроматографии: высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ) и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Эти виды хроматографического анализа постоянно совершенствуются, возрастает эффективность разделения, изыскиваются возможности для анализа новых веществ и получения большого объема информации об исследуемых образцах.
К наркотическим веществам относятся строго определенные средства и вещества, а именно: опий, морфин, кодеин, промедол, эфедрон, метадон, гашиш, омнопон, амфетамин, метиламфетамин,, фен-циклидин. ЛСД и другие.
Со времени введения в клиническую практику наркотических анальгетиков (морфин, кодеин, промедол, омнопон) эта группа препаратов характеризуется неуклонно возрастающим уровнем потребле-
ния и злоупотребления. Злоупотребление лекарственными препаратами, а также их дериватами, например героином, эфедроном или мети-ламфетамином широко распространено , а международный характер подпольной торговли наркотиками означает, что любая лаборатория, занимающаяся определением лекарственных и наркотических веществ в биологических пробах организма человека в своей работе может столкнуться с широким спектром этих соединений. Кроме того, в случае злоупотребления наркотическими анальгетиками они часто встречаются в смеси с другими лекарственными веществами или антидотами, т. е. возникает сложная аналитическая задача по выделению и идентификации специфических наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ.
Техническая база химико-токсикологических лабораторий активно пополняется современной аналитической техникой, однако отсутствие методического обеспечения вызывает значительные трудности при выполнении конкретных экспертиз и исследований.
Одним из путей решения этой задачи по нашему мнению является разработка комплекса хроматографйческих методов анализа наркотических средств и им сопутствующих веществ.
Для данного исследования выбраны некоторые наркотические анальгетики и им сопутствующие вещества, являющиеся в последние годы наиболее распространенным объектом анализа химико-токсикологических лабораториях г. Москвы; их структурные формулы приведены на рис. 1
При разработке методов анализа наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ для медицинских и правовых целей необходимо, чтобы отдельная методика не требовала больших затрат времени, использовала минимальное количество исследуемых объектов и давала хорошо воспроизводимые результаты, согласующиеся с данными контрольного анализа объекта другим методом.
Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы является разработка комплекса хроматографйческих методов идентификации и количественного определения наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ в биологических жидкостях при токсикологических исследованиях. Мы остановились на комплексировании методов тонкослойной и жидкостной хроматографии.
Для выполнения поставленной цели необходимо было решить
следующие основные задачи:
установить оптимальные условия выделения к разделения наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ в режиме прямо-фазовой ТСХ;
изучить хроыатографическую подвижность наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ методом обра-щенно-фаэовой ТСХ для разработки методики их идентификации в биологических жидкостях;
разработать методики количественного определения наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ в биологических жидкостях;
оптимизировать условия выделения и разделения наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ в биологических жидкостях методом ВЗХХ;
разработать методики определения наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ в биологических жидкостях методом ВЭЯХ;
разработать комплексный метод определения распространенных наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ на основе гибридизации методов ТСХ ( адсорбционный и распределительный- варианты на отечественных пластинах Сорбтон RP2 и Сорбтон - Диол) и ОФ-ВЗЖХ, позволяющий
> надежно идентифицировать- и количественно определить исследуемые вещества в биологических жидкостях.- ~ Научно -' техническая новизна. --,-
Впервые в России на пластинах отечественного производства -(Сорбтон RP2 и Сорбтон - Диол), полученных плазмохимическим методом, проведено комплексное исследование закономерностей хроматог-рафического удерживания некоторых наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ как в чистом виде, так и в модельных смесях и в биологических жидкостях в условиях ТСХ и ВЭЯХ. Проведены сравнительные исследования отечественных пластин на основе сили-кагеля с привитыми фазами, полученными плазмохимическим методом, и пластин фирмы Merck.
Установлено, что пластины отечественного производства Сорбтон RPZ и Сорбтон - Диол обеспечивают высокое качество проводимых анализов, в отличие от пластин фирмы Merck слой сорбента RP2 пол-
чостью смачивается водой, что позволяет использовать для разделения элюирующие системы с любым содержанием воды.
, Предложена новая унифицированная элюирующая система для ТСХ. обеспечивающая эффективное разделение всех исследуемых соединений и их количественную оценку.
Впервые предложены унифицированные методики идентификации нескольких наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ методом ТСХ на отечественных пластинах с различной химией поверхности - Сорбтон RP2 ( они могут быть использованы одновременно как в нормально - фазовом, так и в обращенно - фазовом вариантах ТСХ) и Сорбтон - Диол с привитой пропандиольной фазой.
Показана возможность переноса данных при разделении алкалоидов группы опия методом ОФ-ВЗЖХ на ОФ-ТСХ при использовании пластин Сорбтон RP2.
Показана перспективность использования методов ОФ-ВЗЖХ и ОФ-ТСХ для количественной оценки наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществе биологических жидкостях. Практическая значимость работы.
Предложение методики гибридизации методов ОФ-ВЗЖХ и ТСХ на
отечественных пластинах с различной химией поверхности, позволяют
надежно идентифицировать и количественно определять наркотические
анальгетики и им сопутствующие вещества в биологических жидкостях
используются в практике различных хииико-токсикологических лабо
раторий. ".".'
Методики анализа наиболее распространенных наркотических
анальгетиков и им сопутствующих веществ, разработанные на оте
чественных пластинах с различной химией поверхности, внедрены в
практику химико-токсикологических, лабораторий и судебно-химичес-
них отделов Бюро судебно-медицинских экспертиз, занимающихся ана
лизом этих соединений в биологических объектах.
На защиту выносятся:
- результаты теоретических исследований по изучению влияния подвижной фазы и сорбента на основе силикагеля с привитыми плазмохимическим путем фазами на воспроизводимость результатов анализа объектов исследования и разработки методик определения некоторых наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ в
биологических жидкостях.
Апробация работы. Основные реэультать работы докладывались и обсуждались на Республиканской научно-техническо'і конференции по использованию современных методов при проведении экспертных исследований (Москва, 1995), на конференции секции сорбентов Научного Совета по хроматографии РАН по сорбентам, колонкам и методам хро-матографического анализа ( Москва, 1995), на VII Всероссийском симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии ( Москва 1996). Результаты работы испытаны и внедрены в практику химико-токсикологических лабораторий и судебно-химических отделов Боро судебно-медицинских экспертиз.
Публикация материалов диссертации. По теме диссертации опубликовано 3 статьи.
Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части в составе двух глав, посвященных соответственно разработке ТСХ - анализа наркотических анальгетиков и им сопутствующих веществ и комбинированию ТСХ и ВЭЖХ методов, общего обсуждения итогов работы и выводов. Диссертация завершается списком использованной литературы ( 129 литературных источников, из них 37 отечественных и 92 иностранных). Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и включает 27 таблиц, 10 рисунков и 4 схемы анализа.
