Введение к работе
Актуальность темы. В последние годы многие исследователи (Воронин S.C., Шишков В.П., Старцева Л.Я. и др., I989J Куриленко А.Н., Крупа-іьник В.Л.; 1992, Соколова Н.Л., 1993,' J., Riche. Н-, 1968) юобщаэт об изменении микробного пейзажа вопбудителей диарейных ки-зечных инфекций. На смену сальмонеллам, эитеропатогенным эшрихияы ірипии такие представители условно-патогенной микрофлоры как протей, слебсиелла, вдтробакт.ер, стафилококк и повсеместно стали регистриро-зать наличие заболеваний вирусной этиологии (рота- и коронавируаные шфэкции и гастроэнтериты).
Наиболее важной задачей является всестороннее изучение антигенной :труктуры возбудителей кишечных заболеваний человека и животных, в тврвув очередь <-энтеробактериозов, изучение механизмов иммунитета и 20верззнствование' методов выявления антигенов и антител при этих за-їолеваниях, приемлемых для практической работы.
Существущий бактерйолопгаеский метод диагностики заболеваний, зызываеаых зитерсбаотвриями у телят, трудоемкий а длительный; на ус-рановяенио диагноза требуется не менее 6-7 суток (Антонов Б.И.,1986). При массовых серологических исследованиях наиболее доступной является реакция агглютинации, в то*, не время из-за отсутствия стандартных антигенов к оызоротоя вне наборов или вообще при ряде энтероба-хтерий, осуществить постановку РА часто не представляетсявозможным, і реакция имеет лишь подсобное диагностическое значение. Другие серологические реакции пока не находят применения в практике лабораторных исследований.
Поэтому разработка ускоренных методов диагностики этих заболеваний по установлению фимбриального или других специфических антигенов является актуально^ проблемой (Hanson**И. ы ai ., 1971/ Ahesiedts. Єї A3-/ 1972,1973, Ah*sieJi s. c4 л7.,1975, Белая O.C., 1966; Степа-коваЛ.К., I960; Баркус U.U., Бондаренко В.Н., ЭлуерФ.С, 1986).
На основании изложенного попытка изучить перспективы использования РДП и ЕИЭФ для уточнения антигенного родства и выявления антигенов и антител у животных в силу повсеместного распространения заг-5олевпний, вызываемых энтеробактерйяш, является актуальной задачей,
Цель и задачи исследований. Учитывая недостаточную разработан
ность юшунохимических методов для выявления антигенов и антител,
з гакз'е неясность перспектив их применения для уточнения межродовых,
иеавидовых и внутривидовых перекрестных реакций у энтеробактерий,
перед нами была поставлена цель: '
- отработать простой и надежный метод выявления антител и анти- .
1-№ .''' . '
-г -
-генов на основе диффузионной преципитации в геле (включая встречный
иыыуноэлектррфарез); ,г
-' уточнить с использованием этого метода антигенные взаимоотношения у основных родов энтеробактерий, являющихся возбудителями кии чных заболеваний.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие
конкретные задачи: '.,*". -
выделить 0-, К- и' Н- антигены некоторых видов патогенных и уст ловнопатогенных энтеробактерий;
приготовить сыворотку на антигены сальмонелл {S'typhtmartum) эшерихий (Е. coll ), клебсиеял ІКХ- рі*шгчюіа), протей (fa vulgaris и цитробактера (C-^r«/ndii }{,
отработать методики РДП и БИЭФ, обеспечивающие выявление в им сиыальных титрах подученных антигенов и антител в сыворотках;
изучить в сравнительном аспекте антигенные взаимоотношения эн теробактерий в реакциях -агглютинации, диффузионной преципитации (РДП) и"встречного иымуноэлектрофореза (ВИЭФ).
Научная новизна. Изучены условия осаждения антигена жгутиков
$.*31>Ц|"лнтипполиэтиленгликолем (6000) и разработана методика полу
чения ПЭГ-Н-анткгена. Установлены оптимальные режимы постановки РД
и ВИЭФ для выявления специфических антител и антигенов энтеробакте
рий".' '."./-...-
Получены дополнительные данные, свидетельствующие об отсутстви
антигенного родства протея и цитробактера с S. typh',mur\um
Е. coJi и Kl. pntumon\a* и наличии такового между структурными
антигенами у последних (РА, РДП, ВИЭФ). '. \
Показана возможность.выявления в РДП и ВИЭФ антител в сыворотк и молозиве и антигенов в органах экспериментально зараженных лабор торных животных и естественно инфицированных телят.' j." л
Праятическая значимость. Разработанный метод получения ПЭГ-Й-в тигена s. typhi murium может применяться в исследованиях для полі чения жгутиковых антигенов подвижных бактерий. Предложенные метод* ки постановки РДП и ВИЭФ могут быть использованы в ветеринарных ле бораториях для массовых серологических исследований с целы» выявле ния поствакцинальных и лостинфекциональных антител, а т^»ас с Делі прямого выявления антигенов в органах животных,инфищ!6й^й|:^ теробактериями. Полученные активные антигены и сыворотки могут Sir. основой создания для практики комплексных диагноет|ичв^жю; жаізофбв для РДП и ВЙЭ5 с целью, дїіффвренциации наиболее ч&отй-вотрпащихс. заболеваний крупного .рогатого скота; (колкбактериоз,-_.сальмшаялег»,:
протеоз, клебсиеллеэ, рота- и коронавирусныз болезни и др.).
Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены и >добрены на отчетной научной конференции Йосковской ветеринарной академии в 1992 г. .
По теме диссертации опубликованы две статьи в сборнике научных рудов (межведомственный) Московской ветеринарной академии им. К.И. Ікрябина - "Опыт подготовки кадров для сельского хозяйства зарубеж-ых стран", П., 1992.-
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 50 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора ли-зрзтуры, собственных,исследований, обсуждения, выводов и рекоменда-лй по использованию научных выводов. Список использованной литера-рря включает,-205 публикаций по тематике исследований, из них 95 рус-jkx и 105 эарубеяных. Материалы иллюстрированы 32 таблицами, 3 фото-зафаяши-6 рисунками,
